禁用偶氮染料及其检测标准 2014.pdf

禁用偶氮染料及其检测标准禁用偶氮染料及其检测标准 纺织服装在使用了含有禁用芳香胺的偶氮染料之后，在与人体的长期接触中可能被皮肤吸收，并在人体内扩散。这些染料在人体正常代谢所发生的生化反应条件下，可能发生还原反应，进而分解出致癌芳香胺。致癌芳香胺经过活化作用，改变人体的 DNA 的结构，最终引起人体病变和诱发癌症。1994 年 7 月，德国政府首次以立法的形式，禁止生产、使用和销售可还原出致癌芳香胺的偶氮染料以及使用这些染料的产品，随后，荷兰政府和奥地利政府也发布了相应的法令。我国于 2003 年发布了 GB18401-2003国家纺织产品基本安全技术规范，正式将禁用偶氮染料列入其中。目前，禁用偶氮染料的监控已成为国际纺织品服装贸易中最重要的品质控制项目之一，也是生态纺织品最基本的质量指标之一。1.偶氮染料概述偶氮染料概述 1.1 发展历史发展历史 早在 l834 年Mitseherlich 就用氢氧化钾与硝基苯在乙醇溶液中作用，制备了偶氮苯。但是偶氮染料的产生并使用还是在 1858 年之后，经过重氮化反应制备出了偶氮染料。1863 年，首例商品化偶氮染料 Bismark Brown 问世之后偶氮染料开始了工业化生产。1884 年，刚果红的合成，可以说是偶氮染料发展史上的一个里程碑。第一，用刚果红作为染料，可以不用加入触媒，印染工艺被大大简化；第二，这类偶氮染料可以通过它的不同结构得到不同的颜色；第三，它的合成工艺更为简单，成本更加低廉，染色的性能也更为优越。1.2 偶氮染料的致癌问题偶氮染料的致癌问题 20 世纪 30 年代，日本人 Yoshida 发现溶剂黄可以引起老鼠的肝细胞癌变后人们才意识到偶氮染料及其中间体在生产与使用过程中的危险性。实际上，1905 年德国卫生部门已经从染料品红、金胺和萘胺中确认了一些芳香胺的致癌作用。随着染料化工的高速发展，这种情况进一步恶化。据不完全统计，到 20 世纪 60 年代，世界各国因从事染料化工工作而患上膀胱癌的病例超过了 3000 例。自 20 世纪 70 年代开始世界上主要的染料制造商自发地签订议，停止在市场上销售联苯胺及以联苯胺为母体的偶氮染料。德国政府在 1958 年成立了 MAK（Maximum Arbeitplaz Konzentrations 已知对人体健康构成威胁的化学物质在工作场所的最大允许浓度）委员会，从此开始每年发 l 份 MAK 表。根据对人体致癌性的不同，MAK 表分为三个不同的级别：MAK（）Al：按经验，这类物质可引起人类恶性肿瘤。MAK（）A2：迄今为止，已得到这类物质引起癌症的确切证明，但这些证明是通过模拟人类工作场所条件，对动物实验得到的。MAK（）A3：被怀疑极具潜在致癌倾向的物质，并急需进行进一步调研；并且指出用这些致癌芳香胺合成的偶氮染料受到人体肠道细菌以及偶氮还原酶的作用而易于发生偶氮还原裂解，重新释放出致癌芳香胺，从而产生致癌作用。目前市场上大部分(约占 60)的合成染料是以偶氮化学为基础的。所渭致癌性问题，是人们经过长期研究和临床试验证明某些偶氮染料中可还原出的芳香胺对人体或动物有潜在的致癌性。纺织品上的偶氮染料在与皮肤的长期接触中，在某些特殊的条件下，特别是在染色牢度不佳时，会从纺织上转移到人的皮肤上。经人体的正常代谢过程，在分泌物的生物催化作用下发生分解还原，并释放出某些有致癌性的芳香胺，这些芳香胺被人体皮肤吸收后，在体内通过代谢作用而使细胞的脱氧核糖核酸(DNA)发生变化，具有潜在的致癌致敏性。1.3 偶氮染料的分类偶氮染料的分类 偶氮染料是指分子结构中含有偶氮基（-N=N-）的染料，是品种最多、应用最广的一类合成染料。根据含有偶氮基的数目不同可分为：(1)单偶氮染料，如酸性大红 G；(2)双偶氮染料，如直接大红 4B；(3)多偶氯染料，如直接黑 BN。根据溶解度的不同可分为：(1)可溶性偶氮染料，指一般能溶解在水中的染料；(2)不溶性偶氮染料，包括冰染染料和其他不溶于水的偶氮染料。偶氮染料用于各种纤维的染色和印花，并用于皮革、纸张、肥皂、蜡烛、木材、麦秆、羽毛等的染色以及油漆、油墨、塑料、橡胶、食品等的着色。2 禁用偶氮染料的检测标准禁用偶氮染料的检测标准 近年来，欧盟对纺织品实施了严格的保护措施，提出越来越严格的生态要求和社会责任问题，陆续发布的包括禁用染料和其他化学品的法规已形成欧盟所有成员的统一行动。欧盟是我国纺织品出口的主要市场之一，为此，有必要对欧盟有关生态纺织品法规及技术标准的信息有个全面的了解。欧盟 67/648/EC 指令。欧盟发布的 67/648/EC 指令，是一个欧盟国家禁止在纺织品和皮革制品中使用可裂解并释放出某些致癌芳香胺的偶氮染料的法令。与当时德国政府的法规不同的是增加了邻氨基苯甲醚和氨基偶氮苯，共 22 个致癌芳香胺。欧盟 2001/C96E/18 指令。欧盟发布的 2001/C96E/18 指令，进一步明确规定了列入控制范围的纺织品。该指令还规定了 3 个禁用染料的测试方法，致癌芳香胺的检出量不得超出 30mg/kg。三个检测方法为：35LMBGB82.02-2-1998（纺织日用品），B82.02-3-1997（皮革），B82.02-4-1998（聚酯）。该指令列入的致癌芳香胺中减去对氨基偶氮苯，只有 21 种。欧盟欧盟 2002/61/EC 指令指令。欧盟发布的 2002/61/EC 指令，对氨基偶氮苯重新列入致癌芳香胺，并对它的测试方法进行了评估，重申致癌芳香胺的最大限量为 30mg/kg，并对禁用偶氮染料在所有成员国中开始实施。欧盟 2003/3/EC 指令。欧盟发布的 2003/3/EC 指令，重申了 67/648/EC 及 2001/C96E/18 法令，并禁用一种蓝色着色剂的纺织品及皮革制品，该蓝色着色剂是两种酸性金属络合染料的混合物，分为：611-070-00-2 及 EC.NO.405-665-4，前者为 CAS.NO.118685-33-0。欧盟关于因致癌芳香胺而涉嫌禁用染料的法令滞后德国政府法规和 Oeko-Tex standard 100标准。根据目前情况，全面禁用涉嫌染料已在国际纺织品贸易中全面展开，因此，禁用含致癌芳香胺的偶氮染料已成为一个全球性的行动。Oeko-Tex Standard 100生态纺织品标准 100是 1992 年德国 Hohenstein 研究协会和维也纳-奥地利纺织品研究协会制定的，此后每年进行修订。现在是使用最为广泛的纺织品生态标志，规定的标准是根据最新的科学知识，对纱线、纤维以及各类纺织品的有害物质含量规定限度。欧盟的生态标签欧盟的生态标签 Eco-Label。欧盟的生态标签是由欧盟执法委员会根据 880/92 法令建立的。申请该标签纯属自愿行为，企业希望借此提高公众的环保意识，从而培育自己的市场，也有的是为了提高企业产品的知名度。最早的纺织品标准 Eco-Label 是根据 1992 年 2 月 17 日欧盟委员会 1999/178/EC 法令而建立的。2002 年 5 月 15 日公布了欧盟判定纺织品生态标准的新标准。它分为 3 个主要类目，即纺织纤维标准、纺织加工和化学品标准、使用标准的适用性。新标准对禁用和限制使用的纺织化学品，即纺织染料和纺织助剂做出了明确的新规定，其禁止使用和限制使用的面比老标准宽，要求也比 Oeko-Tex standard1 100 标准更严。REACH 法规限制的内容即 REACH 法规附件法规附件 XVII，是对某些危险物质、配制品和物品制造、投放市场和使用的限制。2009 年6 月1 日，欧盟关于限制物质旧的监管条例76/769/EEC 指令废除，所有相关条例被归入 REACH 法规统一执行。任何物质，不管是其本身或含在配制品、物品中，只要该物质的使用对人类健康和环境具有不可接受的风险，都必须在欧盟范围内进行限制。自 REACH 法规附件 XVII 生效以来，已取代偶氮染料 2002/61/EC 指令。Oeko-Tex Standard 100生态纺织品标准 l00中规定了有 24 种禁用芳香胺化合物，详见表 1；REACH法规附件XVII（原名称2002/61/EC指令）与Eco-label（生态纺织品标签2002/371/EC Eco-label）中有 22 种禁用芳香胺化合物，比 Oeko-Tex Standard 100 少了 2，4-二甲基苯胺和 2，6-二甲基苯胺；GB/T 18885-2009 生态纺织品技术要求 中规定了有 24 种禁用芳香胺化合物，与 Oeko-Tex Standard 100 一致；GB 18401-2003国家纺织产品基本安全技术规范中有 23 种禁用芳香胺化合物，比 GB/T 18885-2009 少 4-氨基偶氮苯；而 GB18401-2010（2011 年 8 月 1 日施行）中增加了 4-氨基偶氮苯。REACH 附录 XVII（欧盟 2002/61/EC 指令）指令限量值为 30 mg/kg，Eco-label 的限量值为 30 mg/kg，GB/T 18885-2009 与 Oeko-Tex Standard 100 的限量值都为 20 mg/kg，GB 18401-2003 的限量值也为 20 mg/kg。表 1 Oeko-Tex Standard 100 规定的 24 种禁用偶氮染料 禁用偶氮染料的主要检测方法标准如下：禁用偶氮染料的主要检测方法标准如下：（1）GB/T 17592-2006 纺织品禁用偶氮染料的测定；（2）GB/T 23344-2009 纺织品 4-氨基偶氮苯的测定；（3）GB/T 19942-2005 皮革和毛皮 禁用偶氮染料的测定；（4）GB 19601-2004 染料产品中 23 种禁用偶氮的限量和检测方法；（5）GB/T 24101-2009染料产品中 4-氨基偶氮苯的限量及测定（6）EN 14362-1：2012关于偶氮染料的特定芳香胺的检测 第 1 部分 通过/不通过萃取法获得使用某些偶氮着色剂的检测 （7）EN 14362-3：2012关于偶氮染料的特定芳香胺的检测 第 3 部分 4-氨基偶氮苯的测定 （8）ISO 17234-1：2010皮革中某些偶氮染料的测定；（9）ISO 17234-2：2011皮革中 4-氨基偶氮苯的测定；（10）德国标准35 LMBG82.02-2日用品分析纺织日用品上使用某些偶氮染料的检测；（11）德国标准35 LMBG82.02-3日用品测试皮革上禁用偶氮染料的检测；（12）德国标准35 LMBG82.02-4日用品分析聚酯纤维上使用某些偶氮染料的检测；（13）德国标准 DIN 53316：1997皮革检验皮革某些偶氮染料的测定。序号序号 中文名中文名 英文名英文名 CAS 号号 1 4-氨基联苯 4-Aminobiphenyl 92-67-1 2 联苯胺 Benzidine 92-87-5 3 4-氯-2-甲基苯胺 4-Chloro-2-methylaniline 95-69-2 4 2-萘胺 2-Naphthylamine 91-59-8 5 4-氨基-3,2-二甲基偶氮苯(邻氨基偶氮甲苯)4-Amino-2,3-dimethylazobenzene（o-Aminoazotoluene)97-56-3 6 2-氨基-4-硝基甲苯 2-Amino-4-nitrotoluene 99-55-8 7 2,4-二氨基苯甲醚 2,4-Diaminoanisole 615-05-4 8 4-氯苯胺 4-Chloroaniline 106-47-8 9 4,4-二氨基二苯甲烷 4,4-Diaminodiphenylmethane 101-77-9 10 3,3-二氯联苯胺 3,3-Dichlorobenzidine 91-94-1 11 3,3-二甲氧基联苯胺 3,3-Dimethoxybenzidine 119-90-4 12 3,3-二甲基联苯胺 3,3-Dimethylbenzidine 119-93-7 13 3,3-二甲基-4,4-二氨基二苯甲烷4,4-Diamino-3,3-dimethyldiphenylmethane 838-88-0 14 2-甲氧基-5-甲基苯胺 2-Methoxy-5-methylaniline 120-71-8 15 4,4-亚甲基-二(2-氯苯胺)4,4-Methylene-bis(2-chloroaniline)101-14-4 16 4,4-二氨基二苯醚 4,4-Oxydianiline 101-80-4 17 4,4-二氨基二苯硫醚 4,4-Thiodianiline 139-65-1 18 2-甲基苯胺 o-Toluidine 95-53-4 19 2,4-二氨基甲苯 2,4-Diaminotoluene 95-80-7 20 2,4,5-三甲基苯胺 2,4,5-Trimethylaniline 137-17-7 21 2-甲氧基苯胺 o-Anisidine(2-Methoxyaniline)90-04-0 22 4-氨基偶氮苯 4-Aminoazobenzene 60-09-3 23 2,4-二甲基苯胺 2,4-Dimethylaniline 95-68-1 24 2,6-二甲基苯胺 2,6-Dimethylaniline 87-62-7 EN14362-1：2012 欧盟偶氮测试新标准解读欧盟偶氮测试新标准解读 含有禁用偶氮染料的纺织品在与人体长期接触的过程中，染料可能被皮肤吸收，并在人体内扩散，这些染料在人体正常代谢所发生的生化反应条件下，可能发生还原反应分解出致癌芳香胺，并经过活化作用改变人体的 DNA 结构，引起人体病变或诱发癌症。检测纺织品中是否含有可还原致癌芳香胺的偶氮染料，是目前纺织品服装国际贸易中最基本的安全技术要求。欧盟委员会已于 2002 年颁布第 2002/61/EC 号指令，禁止使用一类含有“芳族胺”（aromatic amines）的偶氮染料。欧洲标准化委员会制定了如下标准：EN l4362-1：2003纺织品检验由偶氮染料释出的芳族胺 第一部分：在无须提取的情况下测试产品是否含有某类偶氮染料；EN l4362-2：2003纺织品检验由偶氮染料释出的芳族胺 第二部分：提取纤维以测试产品是否含有某类偶氮染料。欧盟各国必须采用这些标准检验进口纺织品、皮革产品以及含有纺织品和皮革产品的其他产品（如玩具）是否含有被禁的偶氮染料。新的欧盟偶氮染料检测方法 EN 14362-1:2012 纺织品关于偶氮染料的特定芳香胺的检测方法-第一部分将于 2012 年 8 月生效，届时将撤回已实施 8 年的 EN 14362:2003。EN 14362-1:2012 整合了原 EN 14362-2003 的 part 1 和 part2，并提供了更清晰的样品准备指引，修改了部分测试程序。与上一版相比的改动如下：1.新旧标准主要的区别新旧标准主要的区别 新标准 旧标准 标准号 EN 14362-1:2012 EN 14362-1:2003 EN 14362-2:2003 方法选择依据 纤维的种类和分散染料是否使用 纤维的种类 直接法 萃取法 混合法 直接法 萃取法 天然纤维 人造纤维 方法 选择 未使用分散染料染色的天然纤维和人造纤维 使用分散染料染色的纺织品 纺织品使用氯苯萃取后未完全褪色 复合人造纤维 具体如下：?新标准将原 EN 14362-2003 中的直接法和萃取法整合在一个标准中，即 EN 14362-1:2012。?对于测试方法的选择，旧标准是依据纤维的种类进行选择，新标准则基于纤维的性质及分散染料是否使用，即只有用到分散染料的纺织品，才用萃取法。实际情况中一些合成材料，氯苯萃取后是不完全褪色的，新标准则对此种情况，采用混合分析方法。?关于新标准中混合法：先对样品进行萃取，把萃取后的样品用适当溶剂（如：正戊烷或 MTBE）冲洗并使其干燥后剪成小碎片，加入到用甲醇溶解的萃取液中一起还原裂解。2.关于取样关于取样：?若产品某些部分（如标签，缝纫线，小尺寸刺绣）的质量达不到测试质量（1g），尽可能的收集相同部分。若总质量低于 0.5g，这种材料被次要成分，具有很大不确定度。?质量低于 0.2g 的样品不需要分析。?印花可以连同底部一起称重，即印花不需要从基材中分离。?白不表示颜色，故白色的样品不需要测试。3.颜色混测原则：颜色混测原则：允许最多三种颜色的混测，纺织品相同部位三混，相同种类纤维三混或纺织品相同工序的部分三混，每种颜色质量要求大致相等并使样品总质量为 1g。如果混测结果介于 5mg/kg30mg/kg 之间，则各颜色要分开测试，因为单独一种颜色测试样品的结果可能超过 30mg/kg。4.测试方法的微调：测试方法的微调：?新标准中规定，氯苯回流好后，萃取液需冷却到室温后，再从萃取装置中分离，其目的在于防止偶氮染料的损失。?新标准应用直接法进行操作时，需先在样品加入甲醇，旧标准则无规定。?新标准在过硅藻土柱前，需加入 10%的 NaOH 溶液并用力振荡，其目的在于提高回收率，因为裂解的芳香胺在碱性条件下更稳定。?新标准在过柱时，叔丁基甲醚的加入方式略有不同，叔丁基甲醚加入的次序是 10，10，60，旧标准则是 10，10，20，40。5.影响胺的检测和定量的原因影响胺的检测和定量的原因 u 新标准在条歀 9.4 中特别说明了影响胺的检测和定量的重要原因，若将叔丁基甲醚萃取液蒸干可能导致胺的流失，此外，若例行工作发生延迟，由于某些胺（如 2,4-二氨基甲苯、2,4-二氨基苯甲醚）不稳定，会使得其无法被检出。6.4-氨基偶氮苯的确定：氨基偶氮苯的确定：新标准在附录 C 规定了 4-氨基偶氮苯的测试方法（EN14362-3：2012），4-氨基偶氮苯在 EN 14362-1：2012 的实验条件下会分解成苯胺和 1,4-苯二胺，但 1,4-苯二胺的检出限和回收率不好，通常只能检出苯胺，因此，若有苯胺有检出，就需要测试 4-氨基偶氮苯。7.各种纺织材料中使用染料的类型（附录各种纺织材料中使用染料的类型（附录 D）新标准中提供了各种纺织材料中使用染料的类型（附录 D），只有使用分散染料的纺织品需要进行萃取。并给出了判断样品是否使用分散染料的方法，如果分散染料在沸腾的氯苯中提取 20min，萃取溶剂有颜色的，则说明样品使用了分散染料。8.不使用硅藻土进行液液萃取的程序（附录不使用硅藻土进行液液萃取的程序（附录 E）新标准提供了一个不使用硅藻土进行液液萃取的方法并制定了详细的操作流程。但当萃取的结果在 5mg/kg100mg/kg 之间的，需使用标准方法（硅藻土过柱进行液液萃取的方法）重新测试。9.特定芳香胺的检测方法（附录特定芳香胺的检测方法（附录 F）新标准提供了一个从染料中直接检测芳香胺的方法。原理同直接法，但测试样品则是染料，测试方法中跳过了萃取过程，即在样品中加入甲醇，然后进行还原裂解，分离和浓缩，定性和定量，核查程序和评估。LC-DAD 对芳香胺结构的确认对芳香胺结构的确认 当 GC-MS 检出有芳香胺时，要用 LC-DAD 来确认是不是目标物质，因为芳香胺的同分异构物较多，而 GC-MS 较难区分异构体。LC-DAD 确认时，不能仅凭借保留时间来判定是不是目标物质，还需看这个峰在紫外光区的吸收光谱图。一般会将样品中检出物质的保留时间、吸收光谱与标准品的进行对照。只有当两个因素都匹配才可确认为目标物质。偶氮 SOP 方法（EN 14362-1）偶氮 SOP 方法（EN 14362-1）标准方法（过柱）筛查方法 标准方法（过柱）筛查方法 样品 需回流 样品 不需回流 加标 空白 样品 需回流 样品 不需回流 加标 空白 样品 需回流 样品 不需回流 加标 空白 样品 需回流 样品 不需回流 加标 空白 1g 样品，25ml 氯苯，平底烧瓶中回流 30min/1g 样品，25ml 氯苯，平底烧瓶中回流 30min/溶液旋转蒸发，温度45-60，旋蒸至约 1ml，再用氮气吹干/溶液旋转蒸发，温度45-60，旋蒸至约 1ml，再用氮气吹干/用 1ml2 甲醇转移至40ml 瓶中 1g 样品，加 2ml 甲醇 用 0.5ml2 甲醇转移至40ml 瓶中 1g 样品，加1ml 甲醇 加 15ml 预热后的缓冲溶液，手动振摇，置于70水浴 30min 加 8ml 预热后的缓冲溶液，手动振摇，置于 70水浴 30min 加入 3ml 保险粉溶液,振摇，置于 70水浴30min 加入 3ml 保险粉溶液,振摇，置于 70水浴 30min 取出，2min 内冷却至室温 移取 2ml 10ppm偶氮标液于40ml 瓶中，加2ml 甲醇和 15ml缓冲溶液 取出，2min 内冷却至室温 移取 2ml 10ppm偶氮标液于40ml 瓶中，加1ml 甲醇、3ml水和 8ml 缓冲溶液 加 0.2mL10%NaOH 溶液，振摇 加 0.5mL40%NaOH 溶液，再加入 7gNaCl 溶液倒入硅藻土柱，停留吸收 15min，柱子下端用平底烧瓶收集滤液 加 5mlMTBE，机械振摇 15min 用 10mlMTBE10mlMTBE 润洗 40ml 瓶子，倒入柱子 将 MTBE 全部吸出至平底烧瓶，40 500mbar 旋转蒸发至1ml，再用 N2 吹干 等 MTBE 完全吸收后，再次用 10mlMTBE10mlMTBE 润洗 40ml 瓶子，倒入柱子 加 2ml 内标溶液，振摇溶解，吸入 GC 小瓶上 GCMS 测试 回流与不回流方法都需要做空白，除了无样品，其他均与样品做法完全一致 等吸收后，用 60mlMTBE60mlMTBE 直接倒入柱子中 滤液收集完全后，40 500mbar 下旋转至约 1ml，再用 N2 吹干加 2ml 内标溶液，振摇溶解，吸入 GC 小瓶上 GCMS 测试 回流与不回流方法都需要做空白，除了无样品，其他均与样品做法完全一致 注意：当用本方法测试检出偶氮 4-100mg/kg 时，需要加测标准方法 注意：当用本方法测试检出偶氮 4-100mg/kg 时，需要加测标准方法 各主要测试方法的比较各主要测试方法的比较 GB/T 17592 EN 14362-1 GB/T 19942 ISO/TS 17234 In-House Method 取 样 制 样 1g 样品剪碎 5mm5mm，若需氯苯回流则剪成合适尺寸 1g 样品剪碎，若需氯苯回流则剪成合适尺寸 1g剪碎样品，加入20mL正己烷，40 度超声20min 脱脂，倒掉正己烷，样品放置过夜 1g 剪碎样品 回 流 抽 提 加入25mL氯苯悬空回流 30min，冷却至室温（聚酯试样需进行此（聚酯试样需进行此步骤）步骤）加入 25mL 氯苯悬空回流 30min，冷却至室温（根据样品材质和染（根据样品材质和染料属性决定是否进行料属性决定是否进行此步骤）此步骤）加入 25mL 氯苯回流30min，冷却(视具体情况决定如何过滤)旋 转 蒸 发 旋蒸至近干，用 2mL甲醇转移（情况同上）（情况同上）旋蒸至近干，用 2mL甲醇转移（情况同上）（情况同上）旋蒸至近干，用 2mL 甲醇转移 恒 温 水 浴 加入 17mL 预热至 70的柠檬酸缓冲溶液，加盖摇匀。70水浴30min 加入 2mL 甲醇和15mL 预热至 70的柠檬酸缓冲溶液，加盖摇匀。70水浴30min 加入 17mL 预热至 70的柠檬酸缓冲溶液，加盖摇匀。70水浴 255min 加入 11mL 预热至 70的柠檬酸缓冲溶液。70水浴 30min 还 原 裂 解 加入3mL保险粉溶液，摇匀，70水浴30min。取出后 2min 内冷却至室温 加入 3mL 保险粉溶液，摇匀，70水浴30min。取出后用冷水2min 内冷却至室温 加入 1.5mL 保险粉溶液，70水浴 10min；再加入 1.5mL 保险粉溶液，70水浴 10min；2min 内冷却至室温 加入 3mL 保险粉溶液，摇匀，70水浴 30min，在 2min 内冷却至室温 液 液 萃 取 将反应液倒入提取住内，吸附 15min，用 420mL 乙醚洗提，收集提取液 在反应液中加入0.2mL 10%氢氧化钠溶液，振摇。将反应液倒入提取住内，吸附 15min，用 10、60mL叔丁基甲醚洗提，收集提取液 将反应液倒入提取住内，吸附 15min，加入1mL 20%氢氧化钠溶液，用 15、20、40mL叔丁基甲醚洗提，收集提取液 加入 7g 氯化钠，1mL2M氢氧化钠，摇匀。准确加入 2.0mL 乙酸乙酯，用力振摇 2min，静置使分层 旋 转 蒸 发 在 35旋转蒸发至将近 1mL，在用氮气缓慢吹干 在 50以下旋转蒸发至将近 1mL，在用氮气缓慢吹干 在 50以下旋转蒸发至将近 1mL，在用氮气缓慢吹干 定 容 待 测 取 1.0mL 含内标的甲醇溶液润洗烧瓶，移入色谱瓶中，GC-MS 测试。取 2.0mL 含内标的乙腈溶液润洗烧瓶，移入色谱瓶中，GC-MS测试 取 2.0mL 甲醇润洗烧瓶，移入色谱瓶中，GC-MS 测试 取上层有机相约1mL移入色谱瓶中，GC-MS 测试