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莫索尼定点眼对家兔葡萄膜巩膜途径房水流量的影响张磊，杨建刚，孙乃学（西安交通大学第二医院眼科，西安7 1 0 0 0 4）摘要：目的测定莫索尼定（M o x o n i d i n e，MO X）局部应用后对家兔葡萄膜巩膜途径（U v e o s c l e-r a l o u t f l o w，F u）房水流出量的影响，探讨MO X局部应用的房水动力学机制。方法正常家兔2 0只，随机分为2组，分别采用生理盐水及莫索尼定点眼，点眼前及点眼后3 0m i n，测量双眼眼压。点眼后1.5h用0.1m m o l/L异硫氰酸荧光素牛血清白蛋白（F l u o r e s c e i n-i s o t h i o c y a n a t eb o-v i n e a l b u m i，F I T C-B S A）行前房灌注，测定F u各组织的荧光强度，采用改良S u g u r o法计算各组F u房水再现量。结果MO X单侧点眼后，点眼侧兔眼F u房水再现量为（7.2 1+0.9 8 8）*1 0-1L3 0m i n-1，对侧眼F u房水再现量为（7.5 3+0.2 1 4）*1 0-1L3 0m i n-1，与对照组相比具有显著性差异。结论局部点用MO X可通过增加后路房水流量降低眼压。关键词：莫索尼定；葡萄膜巩膜途径；眼压中图分类号：R 7 7 3文献标识码：A文章编号：0 2 5 8-0 6 5 9（2 0 0 2）0 1-0 0 5 6-0 3E f f e c t o ft o p i c a l l ya p p l i e dL o x o n i d i n eo nu v e o s c l e r a lo u t f l o wZ h a n gL e i，Y a n gJ i a n g a n g，S u nN a i x u eD e p a r t m e n to fO p h t h a l m o l o g y，S e c o n dH o s p i t a lo fX ia nJ i a o t o n gU n i v e r s i t y，X ia n7 1 0 0 0 4，C h i n aA B S T R A C T：O b j e c t i v eT oq u a n t i t a t i v e l ya n a l y z et h ee f f e c to ft o p i c a l l ya p p l i e dm o x o n i d i n eo nu v e o s c l e r a l o u t f l o w.M e t h o d s H e a l t h yw h i t e r a b b i t sw e r er a n d o m l yd i v i d e d i n t o2g r o u p s，0.9%s a l i n e a n dm o x o n i d i n ew e r e a p p l i e du n i l a t e r a l l y.T h i r t ym i n u t e s b e f o r e a n d a f t e r t h e t r e a t m e n t，t h ei n t r a o c u l a r p r e s s u r e o f b i l a t e r a l e y sw a sm e a s u r e d.O n e a n dh a l f h o u r s a f t e r t h e t r e a t m e n t，t h e e y e sw e r e p e r f u s e d f o r 3 0m i n u t e sw i t h0.1m m o lL-1F I T C-B S A.T h e nt h ee y e sw e r ee n u c l e a t e da n dd i s s e c t e d i n t o a n t e r i o r a n dp o s t e r i o r u v e a，a n t e r i o r a n dp o s t e r i o r s c l e r a，r e t i n a a n d r e m a i n i n g f l u i d.T h eu v e o s l e r a l o u t f l o ww a s c a l c u l a t e db yu s i n gm o d i f i e dS u g u r om e t h o d.R e s u l t s T o p i c a l l ya p p l i e dm o x o n i d i n ec o u l dp r o m i n e n t l yi n c r e a s et h eq u a n t i t yo fu v e o s c l e r a lo u t f l o wi nr a b b i t sb i l a t e r a l l y.T h e r ew a ss i g n i f i c a n td i f f e r e n c eb e t w e e nt h eMO Xg r o u pa n dt h ec o n t r o lg r o u p（P0.0 5）.C o n c l u s i o nM o x o n i d i n esI O Pl o w e r i n ge f f e c ta t l e a s tp a r t l yi st h r o u g h i n c r e a s i n gu v e o s c l e r a l o u t f l o w.K E YWO R D S：m o x o n i d i n e；u v e o s c l e r a l o u t f l o w；i n t r a o c u l a r p r e s s u r e青光眼是临床上的常见病，以往对于抗青光眼药物的研究多集中于小梁网-S c h l e m m管途径。6 0年代中期，B i l l等1在研究猴眼房水引流途径时发现有房水经其他途径引流，即葡萄膜巩膜途径（U v e o s c l e r a l o u t f l o w，F u）。后续的研究又陆续发现人、兔及猫眼上也存在此途径。该途径房水流出收稿日期：2 0 0 1-0 7-0 6修回日期：2 0 0 1-0 9-2 0基金项目：卫生部科学研究基金资助项目（9 8-2-2 0 7）作者简介：张磊（1 9 7 6-），男（汉族），住院医师.量占总量的比例依种属不同而有所区别，兔、猫为3%8%，年轻人约为3 6%，6 0岁以上者约4%1 4%2。莫索尼定（M o x o n i d i n e，MO X）是德国B e i e r s-d o r f公司于9 0年代初推出的一种新型抗高血压药物，点眼或脑室内注射后可显著降低家兔双眼眼压3，4。本实验使用F I T C-B S A前房灌注法测量MO X单侧点眼对家兔房水葡萄膜巩膜途径流量第2 3卷 第1期2002年2月西安医科大学学报J O U R N A LO FX I A NM E D I C A LU N I V E R S I T YV o l.2 3 N o.1F e b.2 0 0 2的影响，探讨MO X降眼压的房水动力学机制。1材料和方法1.1动物正常白色家兔2 0只（二级动物），体重2.5 3.0k g，雌雄兼用，由西安医科大学动物实验中心提供。1.2药品与试剂均于实验当日配制。MO X粉剂由陕西省医药工业研究所提供，以无菌蒸馏水配成浓度为1 gL-1的点眼液。异硫氰酸荧光素牛血清白蛋白（F I T C-B S A）由第四军医大学病理教研室提供，分子质量7 00 0 0，浓度0.6 4 2m m o lL-1，实验前用0.1m m o lL-1磷酸缓冲液稀释为0.1m m o lL-1。1.3用药方法家兔点眼三次（对照组双眼点生理盐水；MO X组一侧点MO X，另一侧眼点生理盐水），每次5 0L，间隔1m i n。1.4眼压的测量分别于点眼前及点眼后1h测量家兔双侧眼压，测量采用S c h i o t s眼压计在表面麻醉下测定，采用双砝码法，取校正眼压值。1.5前房灌注采用改良S u g u r o法5。生理盐水点眼后1.5 h，于氯胺酮麻醉下（2 5m gk g-1），用自制灌注系统在手术显微镜下，行兔眼双前房灌注，持续3 0m i n。灌注时恒压2 k P a，灌注压采用液面高度加以控制。灌注毕，立即处死家兔，摘出双侧眼球。1.6组织分离清除眼球表面组织，用大量磷酸缓冲液（P B S）冲去眼球表面沾染的F I T C-B S A。剪除角膜组织，用P B S充分冲洗前房，除去虹膜及晶状体。移入干净培养皿，在手术显微镜下，于赤道部将眼球剪为前后两部分，并进一步分为前巩膜、前葡萄膜（主要为睫状体）、后巩膜、后葡萄膜、视网膜及残余液（包括脉络膜上腔液、玻璃体等）六部分。1.7荧光强度的测定分别将各部分组织放入组织研磨器（预先放置1m LP B S）内充分研磨，然后将组织匀浆倒入刻度离心管，3 0 0 0 rm i n-1离心1 5m i n。取出离心管，读取上清液体积数（m L），并测量上清液荧光强度（待荧光分光光度计工作稳定后），共测三次，取其平均值。测定时激发光波长为4 9 0n m，发射光波长为5 2 0n m。1.8标准曲线的建立为排除组织自发荧光的影响，需作标准曲线。随机取正常家兔5只，处死后取出双侧眼球（共1 0只眼），按前述方法测定每只眼各组织上清液的荧光强度，即各组织背景荧光强度。然后分别用各组织上清液（不同眼同一组织上清液混合后），配成6种已知浓度F I T C-B S A溶液（应遵从实验中测得之荧光强度不得超出曲线的内涵这一原则），测定溶液荧光强度，求得荧光强度均数，减去相应背景荧光强度均数，即为该组织已知浓度F I T C-B S A溶液的平均荧光强度。用此荧光强度对溶液浓度作直线回归，求出直线方程，即该组织的标准曲线方程。1.9数据处理将各组测得的荧光强度代入相应组织的直线方程，即可求出不同组织上清液中F I T C-B S A浓度。MO X组与对照组眼压比较、各组内及各组间房水再现量比较均采用方差分析。按以下公式计算房水流出量：房水再现量（L）E 后路各组织上清液F I T C-B S A浓度*该组织上清液体积数/灌注液F I T C-B S A浓度2结果2.1眼压的比较表1中，MO X组点眼前双眼基础眼压与对照组相比并无显著性差异（P 0.0 5），MO X点眼后1h，点药侧及对侧眼眼压均明显下降，与对照组相比具有显著性差异（P 0.0 5）。表1 MO X组与对照组眼压比较（m m H g，1m m H g E 0.1 3 3k P a）组别处理前处理后对照组（右眼）3 0.0 0+1.9 43 0.4 0+3.0 6对照组（左眼）2 9.7 0+2.8 33 0.2 0+2.6 2MO X组（右眼）3 0.4 0+3.7 12 0.8 0+3.5 2MO X组（左眼）3 0.9 0+2.2 82 2.0 0+3.8 22.2回归方程的建立按前述方法分别求出各组织荧光强度对F I T C-B S A浓度的回归方程，各组织上清液的荧光强度与上清液中F I T C-B S A浓度间存在直线回归关系，直线方程的系数具有显著性意义（见表2）。表2回归方程的建立组织常数系数P值前巩膜-5.0 5 2*1 0-72.1 7 0*1 0-6 0.0 1*后巩膜5.8 0 0*1 0-72.1 7 0*1 0-6 0.0 1*前葡萄膜3.6 3 0*1 0-72.1 7 0*1 0-6 0.0 1*后葡萄膜-1.3 7 3*1 0-62.1 7 0*1 0-6 0.0 1*视网膜1.4 4 8*1 0-62.1 7 0*1 0-6 0.0 1*残余液7.9 7 1*1 0-72.1 7 0*1 0-6 0.0 1*注：各部分F I T C-B S A浓度E系数*相应部分荧光强度+常数；P值表示各部分回归方程是否存在，即荧光强度与F I T C-B S A浓度间是否存在直线关系，P0.1 0即具有显著性。751期张磊，杨建刚，孙乃学.莫索尼定点眼对家兔葡萄膜巩膜途径房水流量的影响2.3各组F u房水再现量由表3可知，各组后路房水再现量均以前巩膜、前葡萄膜、残余液（主要为脉络膜上腔液）为多，而后巩膜、后葡萄膜、视网膜较少。说明F I T C-B S A主要从脉络膜间隙及前巩膜间隙排出眼外。表3各组F u房水再现量（x+s，*1 0-3L3 0m i n-1）组别前巩膜后巩膜前葡萄膜后葡萄膜视网膜残余液对照组（右）6 0.9 2+2 8.2 25 6.8 4+2 5.5 17 8.3 0+3 2.3 21 1.2 7+1 0.0 14 4.7 4+9.8 31 2 0.1 0+4 0.1 9对照组（左）7 1.8 8+2 4.2 35 5.0 3+1 8.5 57 8.2 3+3 3.3 07.9 5+5.5 64 1.3 2+8.7 19 0.1 9+4 2.4 7MO X组（右）1 7 5.2 0+5 5.6 17 3.5 3+4 3.8 02 3 0.4 0+6 4.8 38.0 9+8.0 94 4.8 7+9.3 72 2 0.9+1 0 6.1 0MO X组（左）1 8 6.1 0+4 7.7 77 0.4 6+1 9.8 41 9 2.5 0+5 1.0 79.3 0+4.8 55 0.2 6+8.3 52 1 2.5+5 4.2 62.4各组F u房水再现量的比较0.1%MO X单侧点眼1.5h后可明显增加家兔双侧F u房水再现量；MO X组处理眼与对侧眼F u房水再现量无显著性差异（P 0.0 5）；与对照组相比，MO X组双眼F u房水再现量均明显增加，该差异具有显著性（P 0.0 5 0.0 1*0.0 5 0.0 1*0.0 1*MO X组（右）7.5 3+0.2 1 4 0.0 1*0.0 5MO X组（左）7.2 1+0.9 8 8 0.0 1*0.0 5注：*表示P 0.0 5；*表示P 0.0 1P1、P2、P3、P4分别表示各组与对照组右眼、对照组左眼、M O X组右眼、M O X组左眼F u流量A n o v a检验的P值3讨论B i l l最初测定葡萄膜巩膜途径房水流量时，采用碘白蛋白灌注液灌注猴眼前房，检测眼球各组织及眶组织中放射性碘蛋白量，再通过相应公式计算房水流出量。此方法较为复杂，且由于计算结果中包含了眼眶组织中示踪剂的量，故得出的流量较实际值偏高。S u g u r o等6用F I T C-D e x t r a n作为示踪剂行猴眼前房灌注，分别测定眼球各组织中的示踪剂含量，进而计算出后路房水流量，该方法方便了组织处理，避免了放射性测定，排除了F u外示踪剂的影响，测定结果较准确。本实验采用改良S u-g u r o法，以F I T C-B S A代替F I T C-D e x t r a n作为示踪剂。F I T C-B S A分子质量为7 00 0 0，较为适中，易于进入睫状体间隙及脉络膜上腔，极少进入脉络膜血管。其性质稳定，溶液中解离极少，且用免疫学方法易于制备，因此采用F I T C-B S A作为示踪剂切实可行。以往部分实验提出，莫索尼定降眼压的机制是通过增加F u房水流量。本实验证实了这一假设。因此将莫索尼定应用于临床将为部分难治性青光眼的治疗提供有益的新思路。综上所述，局部点用莫索尼定可通过增加F u房水流量降低眼压。该结论可作为进一步研究莫索尼定临床应用的基础。参考文献：1B i l lA.T h ea q u e o u sh u m o rd r a i n a g em e c h a n i s mi nt h ec y n o m o l g u sm o n k e y（M a c a c ai r u s）w i t he v i d e n c eo fu n-c o n v e n t i o n a l r o u t e sJ.I n v e sO p h t h a l m o l，1 9 6 5，2 7：9 1 1-9 1 9.2N i l l s s o nSF.T h eu v e o s c l e r a lo u t f l o wr o u t e sJ.E y e，1 9 9 7，1 1（P t 2）：1 4 9-1 5 4.3O g i d i g b e nM，C h uTC，P o t t e rDE，e ta l.T h es e c o n dg e n e r a t i o no f c e n t r a l l y a c t i n g d r u g s：m o x o n i d i n eJ.J o u r-n a l P h a r ma n dE x pT h e r a p e u t i c s，1 9 9 4，2 2：8 9 7-9 0 4.4C a m p b e l lW R，P o t t e rDE.C e n t r a lm e d i a t e do c u l a rh y-p e r t e n s i o n：p o t e n t i a lr o l eo fi m i d a z o l i n er e c e p t o r sJ.A n n a l sN YA c a d e m yS c i，1 9 9 4，4 5：4 6 3-4 8 5.5 孙乃学，喻应贵，王建明，等.盐酸哌唑嗪点眼对葡萄膜巩膜途径的影响 J.眼科研究，1 9 9 8，1 6（1）：1 0-1 4.6S u g u r oK，T o r i sCB，P e d e r s o nJE.U v e o s c l e r a l o u t f o l wf o l l o w i n g i n t h em o n k e y e y e u s i n g a f l u o r e s c e n t t r a c e rJ.I n v e s tO p h t h a l m o lV i s，1 9 8 5，2 6：8 1 0-8 1 5.（编辑胡爱玲）85西安医科大学学报第2 3卷