DART-MS快速检测中药材中非法染色物质金胺0 5.pdf

2014 年11 月第 33 卷第 11 期分 析 试 验 室Chinese Journal of Analysis LaboratoryVol 33No 111245 1248收稿日期:2014-06-27基金项目:国家自然科学基金项目(21175127)资助E-mail:ccyunlong1016126 comDOI:10 13595/j cnki issn1000-0720 2014 0292DAT-MS 快速检测中药材中非法染色物质金胺 0郭云龙1，王洋1，李波2，高凤志2，刘淑莹*1(1 长春中医药大学吉林省人参科学研究院，长春 130117;2 长春中医药大学药学院，长春 130117)摘要:采用实时直接分析质谱法(DAT-MS)，建立了能直接对中药材及其饮片中非法添加金胺 0 快速进行定性的检测方法。在简单的样品预处理的情况下，方法检出限为 50 ng，单个样品的检测时间不超过 30 s。方法可用于中药材中金胺 0 的非法添加定性分析。关键词:实时直接分析;质谱;中药材;金胺 0;中图分类号:O657.63文献标识码:A文章编号:1000-0720(2014)11-1245-04近年来，中药染色掺假现象出现多样化趋势，市场上常见的违规添加的染色剂分为化工染料、涂料、颜料、实用色素、无机染料1，例如用金胺 0 将其他植物的树皮染色并且进行加工冒充黄柏丝;使用金胺 0 将碳酸钙粉末染成黄色掺入到人工牛黄和蒲黄中来造假等2。金胺 0(盐酸氨基四甲基二氨基苯甲烷)是接触性致癌物，在国外早被列为严禁使用的染料3。金胺 0 的现有检测手段主要是薄层和高效液相等方法，样品前处理时间较长、灵敏度有待提高。DAT 由 Cody 等于 2005 年提出4，同 年，JOEL(Peabody，USA)和 Ion Sense(Boston，USA)公司迅速将其商品化，并推向国际市场。自发明以来，DAT 质谱尤其是 DAT-MS/MS 联用技术使实验室快速筛选和在线检测进入新的时代，实现无损分析5 8。在药品与天然产品质量安全检测和控制、药物合成反应监测、药物分析等方面，已经展现了快速、在线、高通量、便于操作、实时定性的特点9 11。本实验以金胺 0 为研究对象，证实在简单的样品预处理步骤后，DAT-MS/MS 可成功应用于中药材及其饮片非法添加染色物质金胺 0 的快速检测。1实验部分1.1仪器与试剂DAT 离 子 源(美 国 Ion Sense 公 司);Agilent6520-Q-TOF 质谱仪(美国安捷伦公司);超纯水机 Waters Purifier-M220(长春莱博特公司)。甲醇(TEDIA 公司);金胺 0(阿拉丁公司);黄连、黄柏、延胡索、蒲黄、人工牛黄等药材(长春中医药大学药学院)。1.2金胺 0 标准溶液的称取 10 mg 金胺 0，置 10 mL 容量瓶中，加甲醇适量，超声 20 min 使之溶解，放至室温，甲醇定容至刻度，放置冰箱中备用。1.3质谱条件DAT-MS 离子源参数:DAT 离子源，离子化气体:氦气，压力 0.45 MPa，进样方式:筛网模块，传输速度:0.2 mm/s，放电针电压为 6 kV，格栅电压 0.35 kV，离子化温度:350;Q-TOF 质谱参数:正离子采集模式，毛细管 3.5 kV 电压，Skimmer 的电压为 65 V，扫 描 范 围 m/z 100 1500;二级质谱全扫描模式，母离子 m/z 268.1，子离子扫描范围 m/z 30 300。碎裂电压 35 eV。上述仪器条件下，对 10 g/mL 的金胺 0 标准品进行检测，得到金胺 0 的一级和二级质谱图，见图 1。1.4实验方法将药材粉碎，过筛，称取 0.5(0.05)g 样品于10 mL 容量瓶中，加甲醇适量，超声提取20 min，放至室温，定容至刻度，用 0.45 m 滤膜过滤，弃去初虑液至 2 mL EP 管中，用 1 10 L 移液枪移取 5 L 至筛网模块，放置 DAT-Q-TOF 质谱仪检测。分 析 试 验 室第 33 卷图 1金胺 0 一级质谱图(A)及二级质谱图(B)Fig.1Full scan mass spectrum(A)and two-stage full scan mass spectrum(B)of auramine 02结果与讨论2.1气体类型的选择He 和 N2均可作为 DAT 离子源的工作气体，但由于 N2作为离子化试剂时会产生副反应且这种气体的激发态粒子能量较低，为 8.5 15.5eV，它们能电离的化合物要少于 He，因此，本实验在进行样品分析时通入 He，在待机时通入 N2，这样大大节约了成本，同时避免了有机溶剂所造成的污染。2.2载气温度的优化对于 DAT 离子源，其温度对其灵敏度影响较大，对于金胺 0 的离子化效率会随着温度的改变而受到影响，因此实验分别采用 150，200，250，300，350，400，450 和 500 对其进行分析，同时每个温度条件下进行 3 次重复实验，金胺 0 在 350 时离子化效果最好，随着温度的升高金胺 0 的离子化效率下降，到达 500 时，样品已经分解，因此，载气温度选择 350(图 2)。2.3定性过程利用 Q-TOF 质谱的高分辨率和一级质谱及二级质谱对金胺 0 进行定性分析，通过计算金胺 0 的理论和测得的质荷比，相对误差在 4 106以下，可以作为定性依据。同时对金胺 0 进行二级质谱串联，碎裂电压分别 10，20，30，35，40 eV，因在 35 eV下，碎片离子最为丰富，最终选择 35 eV，见图 1B。2.4专属性分别称取黄连、黄柏、人工牛黄、蒲黄及延胡索0.5 g 各2 份，其中1 份按照1.4 方法制备，为 A 溶液，另 1 份，移取 1 mg/mL 金胺 0 标准溶液 100 L分别加入上述容量中，加甲醇适量，超声20 min，放至室温，定容至刻度，用 0.45 m 滤膜过滤至EP2.0 mL 管中备用，为 B 溶液。将 A、B 溶液分别图 2金胺 0 离子化温度的优化Fig.2Optimization of DAT ionization temperature ofauramine 0用 DAT-MS 检测，金胺 0(C17H21N3HCl)的相对分子量为 303.8，在正离子模式 DAT-MS 下，得到质子化 C17H21N3+H+的准分子离子峰，m/z 为268.1。通过对以上五味药材中化学成分的分析表明，与金胺 0 m/z 为 268.1 的准分子离子峰不产生干扰，见图 3 图 7。为了增强检测的专属性，防止假阳性的产生，在一级质谱图的基础上，同时进行二级质谱的扫描，在 35 eV 碎裂电压下，以金胺 0准分子离子峰为母离子的二级质谱图中显示m/z 252.1，147.1 131.1，107.1 的碎片离子，见图 1B。2.5检出限利用上述选择后条件，按照 2012 年国家食品药品监督管理局发布“关于利用药品补充检测方法对制售假劣中药材中药饮片违法行为进行查处的通知”批复了 25 个中药(饮片)品种的补充检验方法12 中上述 5 种中药材薄层的标准为 0.1 mg，液相色谱的标准为 50 g，对 1 mg/mL 金胺 0 标准品逐级稀释，移取 5 L 至筛网模块，经检测在0.05 g 时，完全可以检出，大大提升了检出限度。6421第 11 期郭云龙等:DAT-MS 快速检测中药材中非法染色物质金胺 0图 3黄连(A)及黄连+金胺 0(B)一级质谱图Fig.3Full scan mass spectra of coptidis rhizome(A)and coptidis rhizome+auramine 0(B)图 4黄柏(A)及黄柏+金胺 0(B)一级质谱图Fig.4Full scan mass spectra of phellodendri chinensis cortex(A)and phellodendri chinensis cortex+auramine 0(B)图 5人工牛黄(A)及人工牛黄+金胺 0(B)一级质谱图Fig.5Full scan mass spectra of rovis calculus artifactus(A)and rovis calculus artifactus+auramine 0(B)图 6蒲黄(A)及蒲黄+金胺 0(B)一级质谱图Fig.6Full scan mass spectra of typhae pollen(A)and typhae pollen+auramine 0(B)7421分 析 试 验 室第 33 卷图 7延胡索(A)及延胡索+金胺 0(B)一级质谱图Fig.7Full scan mass spectra of corydlis rhizoma(A)and corydlis rhizoma+auramine 0(B)参考文献 1 钱疆，杨方，陈弛，等 分析试验室，2012，31(6):50 2 饶伟文，蒋玲，赵纯玉，等 药物分析杂志，2007，27(11):1742 3 蒋玲，彭 飞 燕，饶 伟 文，等中 草 药，2011，42(7):1344 4 Cody B，Laramee J A，Durst H D Anal Chem，2005，77(8):2297 5 Fernandez F M，Green M D，Neuton P N Indust Eng Chem es，2008，47(3):585 6 Venter A，Nefliu 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was carried out Limits of detection(LOD)was 50 ng/g The average analysis time for each single sample was less than 30 seconds DAT-MS was provedto be a useful tool for rapid detection of illegal addition auramine 0 in chinese medicines The method wassimple，reliable，accurate，fast，and can be used for qualitative analysis of illegal to addition auramine 0 inchinese medicinesKeywords:Direct analysis in real time;MS;Chinese medicine;Auramine 08421