DB43_T 2792-2023渔业水体水和底泥中阿维菌素和伊维菌素的测定+液相色谱-串联质谱法地方标准.docx

ICS65.150CCSB5043湖南省地方标准DB 43/T 27922023渔业水体水和底泥中阿维菌素和伊维菌素的测定 液相色谱-串联质谱法Determination of avermectin and ivermectin in water and sediment from fisherywaters by liquid chromatography-tandem mass spectrometry2023 - 11 - 09 发布2024 - 02 - 09 实施湖南省市场监督管理局发 布目次前言II1 范围12 规范性引用文件13 术语和定义14 方法原理15 试剂与材料16 仪器与设备27 样品28 测定步骤39 结果计算和表述510 检测方法的灵敏度、准确度和精密度6附录A（资料性） 阿维菌素和伊维菌素标准溶液特征离子质量色谱图7前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖南省农业农村厅提出。本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：湖南省水产科学研究所、农业农村部渔业产品质量监督检验测试中心（长沙）、衡阳市畜牧水产事务中心、澧县农产品质量安全检测中心。本文件主要起草人：万译文、杨霄、李小玲、曾春芳、谢仲桂、张光洁、陈湘艺、索纹纹、刘伶俐、雷琴、洪波、崔先锋、何咏、黄华伟、肖维、尹升福、黄向荣、谢玉昆。渔业水体水和底泥中阿维菌素和伊维菌素的测定 液相色谱-串联质谱法1 范围本文件规定了渔业水体中阿维菌素和伊维菌素的液相色谱-串联质谱测定方法。本文件适用于渔业水体水、底泥中阿维菌素和伊维菌素的测定。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB 17378.5 海洋监测规范 第 5 部分：沉积物分析HJ 494 水质 采样技术指导SL 187 水质 采样技术规程3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4 方法原理水试样中的目标物经 HLB 固相萃取柱富集和净化，底泥试样中的目标物经氨化乙腈提取，PSA 和C18吸附剂净化。净化后的溶液用带有电喷雾离子源的液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。5 试剂与材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯；水应为符合 GB/T 6682 规定的一级水。试剂5.1.1 甲醇（CH3OH）：色谱纯。5.1.2 乙腈（CH3CN）：色谱纯。5.1.3 乙酸铵（CH3COONH4）：色谱纯。5.1.4 甲酸（HCOOH）：色谱纯。5.1.5 氯化钠（NaCl）。5.1.6 氨水（NH3 H2O）。溶液配制5.2.1 5 mmol/L 乙酸铵溶液：取乙酸铵 0.19 g，用水溶解并稀释至 500 mL。5.2.2 70% 乙腈水溶液：取乙腈 70 mL，用水稀释至 100 mL。5.2.3 0.2% 氨化乙腈：取氨水 1 mL，用乙腈稀释至 500 mL。 标准品5.3.1 阿维菌素B1a（Avermectin B1a, C48H72O14, CAS 号：65195-55-3），含量95.0%。5.3.2 伊维菌素B1a（Ivermectin B1a, C48H74O14, CAS 号：71827-03-7），含量95.0%。 标准溶液配制5.4.1 标准储备液（100 g/mL）：取阿维菌素、伊维菌素标准品各约 10 mg，精密称定，用乙腈溶解并稀释定容至 100 mL，配制成浓度均为 100 g/mL 的标准储备液。-18避光保存，有效期 6 个月。5.4.2 混合标准中间液（1.0 g/mL）：分别精密量取阿维菌素、伊维菌素标准储备液各 1 mL，于100 mL 容量瓶中，用乙腈稀释定容至刻度，配制成浓度为 1.0 g/mL 的混合标准中间液。-18避光保存，有效期 1 个月。 材料5.5.1 HLB 固相萃取柱：500 mg/6 mL。5.5.2 PSA（N-丙基乙二胺）吸附剂：粒径 40 m63 m 或相当者。5.5.3 C18 吸附剂：粒径 40 m63 m 或相当者。5.5.4 微孔滤膜：0.45 m 玻璃纤维滤膜和 0.22 m 聚四氟乙烯滤膜。6 仪器与设备液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾离子源。分析天平：感量 0.01 g 和 0.00001 g。冷冻干燥机。涡旋混合器。高速离心机：转速10000 r/min。超声波清洗器。固相萃取装置。氮吹仪。旋转蒸发仪。pH 计。7 样 品 样品采集水样采集应符合 SL 187 的要求。底泥样品采集应符合 HJ 494 的要求。 试样制备采集的水样经 0.45 m 玻璃纤维滤膜过滤后，置于样品瓶中，在 04避光保存。采集的底泥样品经冷冻干燥机冷冻干燥后，剔除石块和植物体等异物，用研钵研磨后过 60 目（孔径 0.25 mm）网筛，在 04避光保存。 空白试样制备选取不含阿维菌素和伊维菌素的同类样品，按照 7.2 的方法制备。8 测定步骤 提取8.1.1 水量取 20 mL（准确至0.1 mL）试样，置于 50 mL 离心管中，用甲酸调节 pH 至 4.0（0.2），混合均匀。无需提取，待净化。8.1.2 底泥称取 5 g（准确至0.02 g）试样于 50 mL 离心管中，加入 3 mL 水润湿，加入 0.2%氨化乙腈 11 mL，涡旋混合 1 min，超声提取 10 min，加入氯化钠 2 g，涡旋混合 1 min，8000 r/min 离心 5 min，取上清液并转移至 25 mL 比色管中，残渣用 10 mL 0.2%氨化乙腈重复提取一次，合并上清液，用乙腈定容至 25 mL，混匀，备用。 净化8.2.1 水HLB 固相萃取柱依次用 5 mL 甲醇、5 mL 水活化。取水样过柱，控制流速不超过 1 mL/min。待水样全部通过小柱后，用 5 mL 水淋洗，减压抽干，用 6 mL 甲醇洗脱。收集洗脱液，40下氮气吹至近干。用 1.00 mL 70%乙腈水溶液溶解残渣，过 0.22 m 聚四氟乙烯滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。8.2.2 底泥移取 10.00 mL 上述备用液至 25 mL 茄形瓶中，40下减压浓缩至近干，用 2.00 mL 70%乙腈水溶液溶解残渣，加入PSA 吸附剂 100 mg，C18 吸附剂 40 mg，涡旋振荡 30 s，10000 r/min 离心 5 min，取上清液过 0.22 m 聚四氟乙烯滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。 底泥试样含水率测定应符合 GB 17378.5 的要求。 标准曲线制备8.4.1 水精密量取混合标准中间液适量，用 70% 乙腈水溶液配制成阿维菌素和伊维菌素浓度为 1 g/L、2 g/L、5 g/L、10 g/L、20 g/L、50 g/L 和 100 g/L 的系列混合标准工作液，供液相色谱-串联质谱仪测定。以测得特征离子质量色谱峰峰面积为纵坐标、对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，求得回归方程和相关系数。8.4.2 底泥精密量取混合标准中间液适量，用 7 份经提取和净化处理的空白试样基质溶液溶解稀释，配制成阿维菌素和伊维菌素浓度为 1 g/L、2 g/L、5 g/L、10 g/L、20 g/L、50 g/L 和 100 g/L 的系8.5.2 质谱参考条件质谱参考条件如下：a) 离子源：电喷雾离子源；b) 扫描方式：正离子扫描；c) 检测方式：多反应监测（MRM）；d) 喷雾电压：5.5 kV；e) 脱溶剂气温度：400；f) 多反应监测母离子、子离子、去簇电压和碰撞能量见表 2。表2 多反应监测母离子、子离子、去簇电压和碰撞能量表2 多反应监测母离子、子离子、去簇电压和碰撞能量（续）列基质匹配混合标准工作液，过 0.22 m 聚四氟乙烯滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。以测得特征离子质量色谱峰峰面积为纵坐标、对应的标准溶液浓度为横坐标，绘制标准曲线，求得回归方程和相关系数。 测定8.5.1 液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下 ：a) 色谱柱：C18 (1002.1 mm,粒径 2.6 m)，或相当者；b) 流动相：A 为乙腈，B 为 5 mmol/L 乙酸铵溶液，梯度洗脱条件见表 1；c) 进样量：5 L；d) 流速：0.35 mL/min；e) 柱温：40。表1 流动相梯度洗脱条件时间minA%B%010900.510903.09556.09556.11090751090化合物名称母离子m/z子离子m/z去簇电压V碰撞能量eV305.2a10035阿维菌素890.4567.310018伊维菌素892.4a 定量离子。8.5.3 定性测定569.3 a9523307.09536在相同测试条件下，试样中待测物的保留时间与标准工作液中待测物的保留时间一致，偏差在 2.5%以内，且试样中待测物定性离子的相对丰度与浓度相当的标准溶液对应的定性离子的相对丰度一致。其允许偏差应符合表 3 的要求。表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%502050102010允许的相对偏差/% 20 25 30 508.5.4 定量测定按 8.5.1 和 8.5.2 设定仪器条件，取标准工作溶液、试样溶液、空白试样溶液等体积进样测定，外标法定量。标准工作溶液和试样溶液中目标物的响应值均应在仪器检测线性范围内。阿维菌素和伊维菌素标准溶液特征离子质量色谱图见附录A。空白实验按照与上述测定步骤相同的条件进行空白试样（见 7.3）的测定。9 结果计算和表述水中待测物含量按式（1）计算。计算结果须扣除空白值，保留两位有效数字。𝑋𝑋1 = 𝐶𝐶𝑖𝑖𝑉𝑉 (1)𝑉𝑉0式中：𝑋𝑋1试样中待测物的含量，单位为微克每升（g/L）；𝐶𝐶𝑖𝑖从标准工作曲线得到的待测物溶液浓度，单位为微克每升（g/L）；𝑉𝑉 试样最终定容体积，单位为毫升（mL）；𝑉𝑉0试样体积，单位为毫升（mL）；底泥中待测物含量按式（2）计算。计算结果须扣除空白值，保留两位有效数字。𝑋𝑋2 = 𝐶𝐶𝑖𝑖𝑉𝑉1Ү81; 𝑉 (2)𝑉𝑉2𝑚𝑚(1𝑤𝑤)式中：𝑋𝑋2试样中待测物的含量，单位为微克每千克（g/kg）；𝑉𝑉1试样提取液体积，单位为毫升（mL）；𝑉𝑉2准确移取的备用液体积，单位为毫升（mL）；𝑚𝑚试样质量，单位为克（g）；𝑤𝑤试样含水率，单位为质量分数（%）。10 检测方法的灵敏度、准确度和精密度 灵敏度本方法在渔业水体水中阿维菌素和伊维菌素的检出限均为 0.02 g/L，定量限均为 0.05 g/L；在渔业水体底泥中阿维菌素和伊维菌素的检出限均为 0.3 g/kg，定量限均为 1.0 g/kg。 准确度本方法水在 0.05 g/L5 g/L 添加浓度水平上的回收率为 60%110%；底泥在 1 g/kg100 g/kg添加浓度水平上的回收率为 70%110%。 精密度本方法的批内相对标准偏差10%，批间相对标准偏差15%。A A附 录 A（资料性）阿维菌素和伊维菌素标准溶液特征离子质量色谱图阿维菌素和伊维菌素标准溶液特征离子质量色谱图见图A.1。图A.1 阿维菌素和伊维菌素标准溶液特征离子质量色谱图（10g/L ）