不同成熟期和不同部位栀子中4种主要活性成分的含量变化_何兵.pdf

不同成熟期和不同部位栀子中 4种主要活性成分的含量变化*何兵,田吉,李春红,刘艳(泸州医学院药物研究所,泸州 646000)摘要 目的:研究不同成熟期和不同部位栀子中 4种主要活性成分(京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、西红花苷-和西红花苷-)的含量变化。方法:采用 Dikma Dia monsilC18(250mm 416mm,5 Lm)色谱柱,以乙腈-0105%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,不同波长测定(0 30m in,240 nm,测定京尼平龙胆二糖苷、栀子苷;30 50 min,440 nm,测定西红花苷-和西红花苷-)。结果:青果期栀子中栀子苷含量高达 12%,此时无西红花苷类,而红熟期栀子,栀子苷含量下降到 3%5%,此时西红花苷-含量可达 111%以上。栀子苷和西红花苷主要分布在果肉中,而京尼平龙胆二糖苷主要分布在种子中,果皮中 4者含量相对较低。结论:以栀子提取栀子苷或主要以环烯醚萜类入药,则以青果期栀子为佳。但若要提取西红花苷类色素或主要以西红花苷类入药,则以红熟期栀子更好。关键词:HPLC;栀子;不同成熟期;不同部位;京尼平龙胆二糖苷;栀子苷;西红花苷-;西红花苷-中图分类号:R917文献标识码:A文章编号:0254-1793(2010)05-0801-05Content variation of 4 mainly components in FructusGardeniae ofdifferentmaturity and different parts*HE Bing,TI AN J,i LI Chun-hong,LI U Yan(Institute ofM ateriaM edica ofLuzhouM edical College,Luzhou 646000,China)Abstract Objective:To study the content variation of 4 components(genipin gentiobioside,geniposide,crocin-1,crocin-2)in FructusGardeniae of different maturity and different parts.M ethods:The separation was carried outon aD ikma Diamonsil C18(250 mm 416 mm,5 Lm)colu mn.The mobile phase was acetonitrile-0105%phos-phoric acid solutionw ith gradient elution and changeablewavelength detection(0-30m in,240 n m for genipin gen-tiobioside and geniposide;30-50m in,440 nm for crocin-1 and crocin-2).Results:Geniposide reached 12%inFructusGardeniae of green fruit stage,and had no crocin.Crocin-1 reached 111%in redm ature stage,and the ge-niposide decreased to 3%-5%.Geniposide and crocin mainly distributed in flesh,genipin gentiobioside mainlydistributed in seed,and they had little in peel relatively.Conclusion:To extract geniposide from FructusGardeniaeand use iridoids asmedicines,greenm ature fruit is good.But to extract pigment and use crocin asmedicines,the redmature stage is good.Key words:HPLC;Fructus Gardeniae;different maturity;different parts;genipin gentiobioside;geniposide;crocin-1;crocin-2栀子为茜草科植物栀子(Gardenia jasminoidesEllis)的干燥成熟果实,具有泻火除烦、清热利尿、凉血解毒的功效 1。栀子主要含 2类有效成分:环烯醚萜类(栀子苷、京尼平龙胆二糖苷、异栀子苷、栀子酸等)和西红花苷类(西红花苷-、西红花苷-、西红花苷-、西红花酸等)2。研究表明环烯醚萜类具有解热、抗炎、保肝、利胆、镇痛、镇静、抗菌等作用 3,而西红花苷类具有降压、抗血栓、抗炎及抗肿瘤等作用 4。目前国内文献对栀子的含量测定,主要集中在栀子全果所含的栀子苷 5和西红花苷-6,由于 2类成分无交叉吸收区域,多采用单独测定或多波长测定 7。试验发现栀子果实不同部位,所含主要成分有一定差异,而栀子不同成熟期,其主要成分含量相差更大。为充分利用栀子资)801)药物分析杂志 Chin J Phar m Anal2010,30(5)*泸州市指导性项目(泸市科 2007 64号)第一作者 Te:l 13982770721;E-mai:l lyhb2008 源,本文测定了泸州纳溪 GAP基地不同成熟期和不同部位栀子中栀子苷、京尼平龙胆二糖苷和西红花苷-、西红花苷-的含量,为进一步开发利用栀子提供科学依据。1 仪器与试药高效液相色谱仪(P680A 四元低压梯度泵,PDA-100二极管阵列检测器,TCC-100柱温箱,Chromeleon色谱工作 站);Precisa 电 子天平(XR205S M-DR);CQX25-06超声波清洗器(上海必能信超声有限公司,功率 250W,频率 25 k H z)。对照品栀子苷、西红花苷-、西红花苷-,中国药品生物制品检定所;京尼平龙胆二糖苷,芜湖甙尔塔医药科技有限公司,纯度均 98%。乙腈为色谱纯,其余试剂均为分析纯,水为重蒸馏水。栀子,2008年 10 11月采自四川省泸州市纳溪区大渡口栀子 GAP基地,共采摘 5个不同成熟期的鲜果:青果期(全果青绿或浅绿)、变色期(绿色至黄绿色)、绿熟期(果实外表呈绿黄色)、黄熟期(果体外表黄红色)、红熟期(果实呈鲜红色),经作者鉴定为茜草科植物栀子 Gardenia jas m inoides E llis的果实。2 方法与结果211 色谱条件色谱柱:Dikma Diamonsil C18(250mm 416 mm,5 L m);流动相:乙腈-0105%磷酸溶液,梯度洗脱(0 m iny 20 m iny 50 m in,乙腈 5%y15%y 45%);流速:1 mL#m in-1;检测波长:240n m(0 30 m in)测定京尼平龙胆二糖苷和栀子苷,440 nm(30 50 m in)测定西红花苷-和西红花苷-;柱温:35 e;进样量:10 LL。212 溶液的制备21211 混合对照品溶液取对照品京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、西红花苷-及西红花苷-适量,精密称定,置棕色量瓶中,加 50%甲醇制成每 1 mL含京尼平龙胆二糖苷 01021 mg、栀子苷 01615 mg、西红花苷-01088 mg及西红花苷-01016 mg的混合溶液,即得。21212 供试品溶液 取本品细粉约 0125 g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入 50%甲醇 25 mL,称定重量,超声处理 45 m in,取出,放冷,再称定重量,用 50%甲醇补足减失的重量,摇匀,过滤,即得。213 系统适应性试验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各 10 LL,注入高效液相色谱仪,记录色谱图,结果见图 1。京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、西红花苷-及西红花苷-保留时间分别为 1816,2216,3511,3718 m in;与其相邻色谱峰的分离度均大于 115;拖尾因子分别为 0199,1105,1105,1105;理论塔板数分别为 55799,73803,368870,424756。214 线性关系考察将/212110项下混合对照品溶液稀释 5倍,精密吸取此液 215 LL及/212110项下混合对照品溶液 215,5,715,10,15,20,25 LL,注入液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积 A 对进样量 C(Lg)进行回归,得京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、西红花苷-、西红花苷-标准曲线方程分别为:A=81213C+01037 r=019996A=211971C+01128 r=019998A=911106C+01172 r=019998A=901873C+01110 r=019997结果表明,京尼平龙胆二糖苷进样量在 01011 01525 Lg,栀子苷在 01308 151375 Lg,西红花苷-在 01044 21200 Lg,西红花苷-在 0100801400 Lg范围内,与峰面积有良好的线性关系。215 精密度试验精密吸取/212110项下混合对照品溶液 10 LL,连续进样 6次,测得京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、西红花苷-及西红花苷-峰面积的 RSD(n=6)分别 为 0143%,0125%,0131%,0157%。表明仪器精密度良好。216 重复性试验取同一批红熟期栀子全果样品,按/212120项下方法,平行制备 6份供试品溶液,分别进样测定,测得京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、西红花苷-及西红花苷-的平均含量(n=6)分别为 21828,521399,111011,11556mg#g-1;RSD分别为 0162%,0135%,0144%,0176%。表明方法重复性良好。217 稳定性试验取红熟期栀子全果供试品溶液,分别于制备后 0,4,8,12,24,48 h进样测定,测得京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、西红花苷-及西红花苷-峰面积的 RSD(n=6)分别为 113%,0191%,111%,115%,表明供试品溶液在 48 h内稳定。218 加样回收试验精密称取重复性试验所用栀子细粉 9份,每份约 01125 g,平均分成 3组,分别精密添加含京尼平龙胆二糖苷 01118mg#mL-1、栀子苷 21194 mg#mL-1、西红花苷-01462 mg#mL-1、西红花苷-01065 mg#mL-1的混合对照品溶液 2,3,4 mL,按/212120项下方法制备供试溶液,按上述色谱条件测定,并计算回收率。结果见表 1。)802)药物分析杂志 Chin J Phar m Anal2010,30(5)图 1不同成熟期栀子 HPLC色谱图Fig 1HPLC chromatograms of Fructus Gardeniae in different maturityA.混合对照品(mixed reference substances)B.青果期栀子(green fruit stage)C.变色期栀子(color chang ing stage)D.绿熟期栀子(green ma-ture stage)E.黄熟期栀子(yellow mature stage)F.红熟期栀子(red mature stage)1.京尼平龙胆二糖苷(genipin gentiobioside)2.栀子苷(geniposide)3.西红花苷-(crocin-1)4.西红花苷-(crocin-2)表 1 京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、西红花苷-及西红花苷-回收率试验结果Tab 1 Results of recovery test of genipin gentiobioside,geniposide,crocin-1 and crocin-2成分(component)回收率(recovery)/%(n=3)低浓度(low concentration)中浓度(m iddle concentration)高浓度(high concentration)平均值(mean)/%(n=9)京尼平龙胆二糖苷(genipin gentiobioside)98143(111)98140(0192)98153(0190)98145栀子苷(geniposide)98162(0163)98167(0175)98197(0159)98175西红花苷-(crocin-1)98173(0161)98190(0156)98191(0166)98185西红花苷-(crocin-2)98164(0192)98169(0183)98149(0174)98161 注(note):括号内为 RSD(%)RSD(%)in the parenthesis)803)药物分析杂志 Chin J Phar m Anal2010,30(5)219 样品测定分别精密吸取/2120项下对照品溶液和供试品溶液各 10 LL,按上述色谱条件测定并按外标法计算 4种成分的含量,结果见表 2及表 3。表 2纳溪 GAP基地不同成熟期栀子全果中 4种成分含量测定结果(m g#g-1,n=3,RSD 2%)Tab 2Deter m ination results of 4 components in Fructus Gardeniae of differentm aturity from NaxiGAP base成熟期(maturity)京尼平龙胆二糖苷(genipin gentiobioside)栀子苷(geniposide)西红花苷-(crocin-1)西红花苷-(crocin-2)青果期(green fruit stage)0179121102)变色期(co lor chang ing stage)116510911601770114绿熟期(green mature stage)21508212431120180黄熟期(yellow mature stage)21765915581801126红熟期(redmature stage)218352140111011156表 3纳溪 GAP基地红熟期不同部位栀子中 4种成分含量测定结果(m g#g-1,n=3,RSD 2%)Tab 3 Determ ination results of 4 com ponents in FructusGardeniae of different parts from NaxiGAP base样品来源(sample source)京尼平龙胆二糖苷(genipin gentiobioside)栀子苷(geniposide)西红花苷-(crocin-1)西红花苷-(crocin-2)果皮(peel)013228 14341090193果肉(flesh)014979 121181462106种子(seed)410936 105214501483 讨论311 试验曾采用 HPLC测定了泸州纳溪 GAP基地11批栀子全果中 4种成分的含量 8,本试验参照其供试品溶液的制备方法和色谱条件,测定了栀子不同成熟期和不同部位中 4种成分的含量,方法简便、快速、准确。312 采用紫外二极管阵列检测器在 190 600 nm范围内分别扫描混合对照品及供试品溶液中京尼平龙胆二糖苷、栀子苷、西红花苷-及西红花苷-的紫外吸收,对照品和样品中的各成分的最大吸收峰分别为 240 nm、240 nm、440 n m 和 440 n m。根据各成分保留时间的差异,在 0 30 m in设定测定波长 240以测定京尼平龙胆二糖苷、栀子苷,30m in后以 440 n m 测定西红花苷类。313 从表 2可见,随着栀子成熟度不同,栀子苷和西红花苷含量差异较大,在青果期中,栀子苷的含量高达 12%,此时栀子中不含西红花苷类,随着栀子由青果期y变色期y绿熟期y黄熟期 y红熟期的转变,栀子苷的含量逐渐降低,而西红花苷的含量逐渐增加,最后西红花苷-的含量可达 111%以上,而此时栀子苷则降为 5%以下,最后维持在 3%5%左右。从二者化学结构来看,均具有相同的环状结构,栀子苷有可能是西红花苷的合成前体。314 文献报道同产地同品种的栀子中栀子苷及西红花苷类含量相差较大,这可能由于其成熟度不同所致。由于栀子成熟周期短,必须在 2 3周内采摘,在大面积栽种情况下,极有可能造成前期采摘果实尚未完全成熟,此时栀子苷含量相对较高,但其西红花苷含量却并未达峰值。而到后期,待栀子完全成熟后,虽然其西红花苷含量相对较高,但其栀子苷含量却又有所降低。因此,若以栀子提取栀子苷或主要以环烯醚萜类入药以解热抗炎、保肝利胆,则以青栀子为佳,此时并无色素成分的干扰,且含量和药效也相对较高;若要提取西红花苷或主要以西红花苷类入药,则需待栀子由黄变红,完全成熟,此时西红花苷的含量才能达到峰值。当栀子红透后应尽快烘干,不然易霉烂。315 鲜栀子在 60 e 烘干后,由于果肉收缩,其果皮和果肉极易剥离。栀子种子包埋在果肉中,再以手捏碎果肉,反复揉搓,即可分离果肉和种子。316 从表 3可见,栀子果皮中,栀子苷和西红花苷含量均较低,但在果肉中,栀子苷和西红花苷的含量均较高,而京尼平龙胆二糖苷主要分布在种子中。)804)药物分析杂志 Chin J Phar m Anal2010,30(5)参考文献1ChP(中国药典).2005.Vol(一部):1732X I E Xue-jian(谢学建),ZHANG Jun-hui(张俊慧),MA A i-hua(马 爱 华).Evolvedinvestigationof Chinesetraditionalmedicine-Gardenoside(中药栀子研究进展).L is hizhenM edM a-terM ed Res(时珍国医国药),2000,11(10):9433YU W ei-ping(于维萍),FU Chun-sheng(傅春升),ZHONGY ing-li(钟映莉).Research survey of irido ids in Gardenia jas mi-noides(栀子中环烯醚萜类化合物的研究概况).Shandong J T ra-dit ChinM ed(山东中医杂志),2007,26(8):5794L I U Y ing(刘瑛),GU T ian-ming(古天明),ZHOU Hong(周红).Phar macological studies of crocins(西红花苷类成分药理作用研究概况).J Chengdu Univ(N at SciEd)(成都大学学报 自然科学版),2008,27(1):165L I U Y ing(刘瑛),ZHANG Hao(张浩).Deter m ination of genipo-side in Fructus Gardeniae(栀子药材中栀子苷的含量测定).W estChina J Phar m Sci(华西药学杂志),2003,18(5):3746WANG Chun-fang(王春芳),LU Jing(鲁静).HPLC deter m ina-tion of the content of crocin(高效液相色谱法测定栀子中藏红花素的含量).Chin J Phar m Anal(药物分析杂志),1997,17(5):3217JI A L in(贾琳),ZHANG Hao(张浩),CHEN Chu(陈雏),et al.Si multaneous deter m ination of geniposide and crocin-1 in FructusG ardeniae by HPLC(HPLC同时测定栀子药材中栀子苷和西红花苷-1的含量).W est China J Phar m Sci(华西药学杂志),2005,20(3):2238HE Bing(何兵),TI AN Ji(田吉),LI Chun-hong(李春红),etal.Si multaneous deter m ination of 4 components in Gardenia jas mi-noides ofNaxiGAP base byHPLC(泸州纳溪 GAP基地栀子中 4种主要活性成分的含量测定).Chin T raditPatM ed(中成药),2009,31(12):1884(本文于 2009年 5月 7日收到)欢迎订阅 2010年 5 药物分析杂志 6 5药物分析杂志 6是由中国科学技术协会主管,中国药学会主办,中国药品生物制品检定所药物分析杂志编辑部编辑出版的学术性期刊。主要栏目有研究论文、交流、综述等。报道化学药物、中药与天然药物、抗生素、蛋白质、多肽类药物、生物技术药物等的分析、质量标准研究、临床药物分析、药物分析基础理论与实践以及新方法、新技术的应用,并及时报道国家重大研究课题的最新成果。本刊获 2006年、2007年、2008年中国科协精品科技期刊工程项目 C类资助,获 2009年中国科协精品科技期刊示范项目证书,2010年再度获得中国科协精品科技期刊工程 C类项目资助。本刊为我国自然科学核心期刊、中文核心期刊、全国统计源期刊,被国内外主要检索系统收录。本刊坚持质量第一、面向广大读者,以其独具的深度与广度展示我国药物分析的现状与发展。本刊 2005年开始由双月刊改为月刊,大 16开本,每期 160页,国内外公开发行。每期定价 25元,全年定价 300元,国内邮发代号:2-237,国外读者请同中国国际图书贸易总公司(中国国际书店,北京399信箱)联系。欢迎广大读者到当地邮局订阅,并欢迎有关专业人员集体订购,价格从优。本刊已将创刊以来的文章制成光盘,需要者请与本刊联系。希望为本刊推广发行者,价格另议。地址:北京市天坛西里 2号(100050)联系人:刘小帅电话:[phone] 传真:[phone]编辑部网址:www.yw 浏览网址: E-m ai:l ywfx 5药物分析杂志6编辑部)805)药物分析杂志 Chin J Phar m Anal2010,30(5)