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细胞生物学杂志 C h i n e s e J o u r n a l o f C e l l B i o l o g y 2 0 0 4，2 6：5 6 1 5 6 6 h t t p：w w w c j c b o r g 植物细胞色素 P 4 5 0 余小林曹家树 崔辉梅 叶纨芝(浙江大学农业与生物技术学院园艺系；农业部园艺植物生长发育与生物技术重点开放实验室，杭州3 1 0 0 2 9)摘要 对植物细胞色素P 4 5 0(C Y P 4 5 0)基因的分离，植物C Y P 4 5 0 在苯丙烷类物质、芥子油 苷及I A A和萜类等物质的生物合成中的功能，以及对天然生物合成与人工合成物质的解毒功能等 研究进展作了简要的综述。指 出分离植物细胞色素P 4 5 0 基因，并对其生物学功能进行分析以及植 物细胞 色素 P 4 5 0降解除草剂的机制及其在环境生物修复等方面的应用是今后一段 时间内植物 C Y P 4 5 0 领域的研究热点。关键词 植物细胞色素 P 4 5 0；基因分离；生物合成；解毒 细胞色素P 4 5 0(以下简称C Y P 4 5 0)是广泛存在于 动植物及细菌、真菌等细胞 内的，与内质网、线 粒体、质体、高尔基体等细胞器膜结合的一类具有 混合功能的血红素氧化酶系，是一个古老的基因超 家族，也是近年来国际学术界的研究焦点之一。近年的基因组测序结果揭示，C YP 4 5 0是高等植物 中最大的酶蛋白家族3 1。研究表明，其三维结构非 常保守，经典的C Y P 4 5 0 在催化中心有高度保守的 F x x G x R x C x C的结构域4 1。C Y P 4 5 0 最早是以C O结 合蛋白质而被发现的，因其还原型与 C O结合后在 波长4 5 0 a m有最大吸收峰而得名。C Y P 4 5 0 催化的 反应过程包括两步：电子由N A D P H N A D H传至 黄素蛋白及铁硫蛋白(或NA D P H C y t P 4 5 0还原酶)，然后再传递至C Y P 4 5 0 氧化酶。C Y P 4 5 0 催化氧化反 应可以用如下方程式表示：R H+o2+NADP H+H +R oH+H2 o+NADP+研究结果显示，各种C Y P 4 5 0酶催化的反应广 泛而复杂，主要有烷基的羟化，烯基的环氧化，烃 基的氧化，氮、硫、氧位的脱烷基化，氮位 的羟 化和氧化，硫位的氧化，氧化性脱氨、脱 卤和脱 氢，氧化性的碳碳键断裂及一些还原反应等。正因 为C Y P 4 5 0 的多种功能而被人们称为万能的生物催化 剂。已有作者对P 4 5 0 与植物次生代谢以及植物 P 4 5 0 基因的表达和调控等内容做过详尽的综述5 刚，本文 主要对植物 C Y P 4 5 0基因的分离、植物C Y P 4 5 0的 生物合成功能及其解毒功能等作简要的综述。1 植物细胞色素P 4 5 0 基因的分离 在 自然界中，CYP 4 5 0酶系无处不在。据统 计，人们已经从不同的生物中分离出 2 6 8 个家族的 C Y P 4 5 0，其中细菌 7 5 个家族，低等原核生物7 2 个 家族，植物 5 2个家族，动物 6 9个家族(h t t P：d r n e l s o n u t me m e d u C y t o c h r o me P 4 5 0 h t m1)。随着植 物基 因组 计划 的顺 利进行，从植物 中分离获得 C Y P 4 5 0基因数量也目益增多。当前，研究者主要 从拟南芥、番茄、水稻、玉米、大豆等农作物中 分离获得 C Y P 4 5 0基因全长或片段。根据研究的不 同深度和广度，其分离的数量也有很大的差异，其 中拟南芥以1 2 4 9 条 C Y P 4 5 0 E S T s，分属 3 9个基因 家族和 6 7基因亚家族而位居首位。目前，已经对 1 0 5 9 条植物 C Y P 4 5 0的基因序列进行了命名，占所 有生物2 3 7 7 条已命名的C Y P 4 5 0 的基因序列的4 5。综合 h t t p：d r n e l s o n u t me m e d u C y t o c h r o me P 4 5 0 h t ml 等网站上所发表的数据，就从植物中分离获得的 C Y P 4 5 0基因全长或片段简要见表 1。2 植物C Y P 4 5 O的生物学功能 从功能意义上植物C Y P 4 5 0 可以分为两大类型【7 1，一种是具有生物合成功能的C Y P 4 5 0，此类 P 4 5 0 在 木质素中间物、植物激素、甾醇、萜类、黄酮类、异黄酮和呋喃香豆素等生物物质的合成中起重要作 用；另一类为代谢解毒的C YP 4 5 0，可以催化外源 化合物如除草剂、农药等变成非毒性产物。还有一 收稿日期：2 0 0 3 1 2 3 l 接受 日期：2 0 0 4 0 7 0 8 浙江省重大科技项目资助(No 0 2 1 1 0 2 5 3 6)通讯作者。r e l F a x：0 5 7 1 8 6 9 7 1 1 8 8 E ma i l：j s h c a o z j u e d u c n 维普资讯 http:/ 5 6 2 -综述 些 C Y P 4 5 0 可能活化某些无毒性的物质如前除草剂(p r o h e r b i c i d e)成为具有毒性的除草剂【引。2 1 C YP 4 5 0在生物物质合成中的作用 2 1 1 苯丙烷类的生物合成 在苯丙烷的生物合 成中，已报道的C Y P 4 5 0 催化反应超过 l 6 。近 年来，随着突变体库的快速构建以及基因剔除等实 验方法的建立，越来越多催化植物次生代谢物质合 成 相关酶 的基 因功能被 阐 明。研究 结果显示，C Y P 4 5 0 在植物黄酮类物质的合成反应中起着至关重 要的作用，其催化的生物合成途径如图 1 所示【。从苯丙氨酸4 一 香豆辅酶A开始，经P A L催化 生成反一 肉桂酸，随后由肉桂酸 一 4 一 羟化酶(C H C)催 化生成对 一 香豆素，而C H C就是一种C Y P 4 5 0。由 于 C H C催化反应的中心地位，其活性几乎存在于所 有植物中，且与其他 C Y P 4 5 0的活性相比具有相对 较高的活性。因此，CHC成为第一个被鉴定的 C Y P 4 5 0 t。C H C白发现以来，得到了广泛的研究，因为它参与的苯丙烷代谢途径产生大量的重要代谢 物质，如木质素、黄酮类、羟基 肉桂酸酯、木脂 体(1 i g n a n s)、二苯乙烯(s t i l b e n e s)等，以及一些其他 次生性代谢物质，如植物防御化合物(异类黄酮、香豆素、呋喃香豆素)。进一步研究表明，C H C活 性及其基因的表达受创伤、金属离子、病原侵染等 因素的调控，并可能在转录水平上进行调控f l 】。苯丙氨馥 J|【P A L 反 肉 挂溜 J L C H C(C Y P 7 3)对 香豆素 cF 3 5 HY P 7 5 A)盲 (c 一 5,7,4 -羟基异黄烷酮 图 1 细胞色素P 4 5 0 在苯丙烷类生物合成中的催化作用【2】F 3。H：一种家族还没有被鉴定的细胞色素 P 4 5 0，其生物功能为类黄酮 一 3 一 羟化酶：C HC：肉桂酸 4 羟化酶；F 2 H：黄烷酮 一 2 一 羟化 酶：F 3。5。H：类黄酮一 3 ，5。羟化酶；I F D；2 羟基异黄烷酮脱水酶；I 2 H：异黄烷酮 2 羟化酶；P A L：苯丙氨酸脱氨酶；C HS：查 耳酮合成酶；CHI：查耳酮异构酶。维普资讯 http:/ 余小林等：植物细胞色素P 4 5 0 5 6 3 目前已从绿豆】、菊芋l1 4】和苜蓿1 5 1 中分离得到C H C 的编码全长c D N A，从向日葵属植物中分离的C H C 基因被定名为 C Y P 7 3 A 。此外，在通过苯丙烷类 途径花色素苷的合成支路中，催化4 一 香豆酰基辅酶 A生成四羟基查耳酮的查耳酮合酶(C H S)，催化底 物羟基化的类黄酮3 一 羟化酶(F 3 H)和类黄酮3，5 羟 化酶(F 3，5 H)与异黄酮 2 一 羟化酶(I 2 H)和异黄酮 3 一 羟化酶(I 3 H)均有研究报道l1 6 1。Ma r t e n s 等l1 7 1 从大丁 草(Ge r b e r a h Y b，f d s)中获得 了一全长 C DNA C Y P 9 3 B 2，由酵母表达的C Y P 9 3 B 2可以催化黄烷酮 产生黄酮的反应，序列比较显示，该基因与黄酮合 酶 I I 的序列同源性为5 4。2 1 2 芥子油苷和I A A的生物合成 近几年来，从色氨酸到芥子油苷和生长素的生物合成途径的发 现是植物 C Y P 4 5 0 研究取得的显著进展之一。研究 显示，芥子油苷及其衍生物来源于自然的氨基酸，具有一个硫酸盐和半个葡糖硫苷，主要存贮于十字 花科植物细胞的液泡 内，既可用作人类的抗癌药 物，又可作为农业生产中作物的保护剂。因此对芥 子油苷生物合成途径的研究是植物化学研究领域中 的热点之一。此外，生长素作为植物生长的促进 剂，在顶端生长优势、根的发生、维管的分化以 及植物的热激行为等均具有重要的作用。研究表 明，植物可以通过色氨酸依赖途径和非色氨酸依赖 途径等两种方式进行吲哚 一 3 一 乙酸(I AA)的生物合 成。进一步的研究发现，在色氨酸依赖途径 中，I A A的生物合成与芥子油苷的生物合成具有相同的初 始反应，而且吲哚 一 芥子油苷还是I A A的中问代谢产 物，其催化的生物合成途径如图2 所示【2 1 8 。B a k t 1 8 等研究发现，在生长素生物合成途径中，吲哚 一 3 一 乙醛肟(I A O x)的下游没有直接检测到吲哚一 3 一 乙腈(I A N)，他们利用含C Y P 8 3 B 1 并具有生长素积累形态 特征的突变体 r u n t l 为材料，对幼苗在添加C Y P 8 3 B 1 抑制剂色胺(B 一 吲哚基乙胺)的培养基上进行生长，结果表明，顶端生长优势减弱。进而采用 I AN处 理的研究结果显示，r u n t 1 突变体没有在腈水解酶 突变体 l(n i t 1)背景下被抑制。上述结果表明，虽然 1 A O x 是I A A和芥子油苷生物合成的共同初始底物，但在I A A的生物合成途径中I A N不是I A O x 的直接产 物。2 1 3 萜类的生物合成 萜类是一大类天然化合 物，包括激素如赤霉素、脱落酸，光合色素如类 胡萝 卜 素、植物防御物质、电子载体以及结构膜成 图2 色氮酸途径I A A和芥子油苷的生物合成 I AOx：吲哚 3 乙醛肟：I AN：吲 哚 3 乙腈；I AA：吲哚 3 乙酸。分等。研究表明，C Y P 4 5 0 参与了许多萜类物质的 合成l】9 1。在植物双萜类衍生物的合成中，以赤霉素(GA)的生物合成途径最为典型。其生物合成过程 中，由e n t 一 贝壳杉烯一 e n t 一 贝壳杉醇一e n t 一 贝壳杉 醛一e n t 一 贝壳杉酸一e n t 一 7 一 羟基贝壳杉烯酸等4 个 连续步骤都是由C Y P 4 5 0 催化的l1 9 2 0 1。如图3 所示，前 3 个步骤都由贝壳杉烯氧化酶催化，后一步骤由 贝壳杉烯酸羧化酶催化，以上4 个步骤在植物中都 是相同的。利用遗传学方法，将表型矮小的G A缺 失植物用于分离“非 一 C Y P 4 5 0”G A生物合成基因 座，由此已成功地分离了一个 c Y P 4 5 0编码基因。在无外源 G A存在下不发芽的拟南芥突变体中，鉴 定了5 个影响G A生物合成的基因座(g a l g a 5)t2 1，2 2 。甾醇是三萜的重要衍生物，膜 内甾醇无 1 4 z 一 甲基，甾醇前体如动物和真菌的羊毛脂甾醇和植物 的钝叶鼠曲草醇的脱甲基反应是由C YP 5 1 家族的 C YP 4 5 0催化的。采用 CY P 8 1 作为探针，低严格(1 o w s t r i n g e n c y)杂交从小麦中分离出了C Y P 5 1。随 后，大肠杆菌表达 C Y P 5 1 与钝叶鼠曲草醇显示出类 型I 结合光谱特征，而与羊毛脂甾醇结合却无此特 征，实验结果从分子水平上进一步验证了该酶具有 较高的底物特异性【2 3 。除此之外，C Y P 4 5 0 还在脂肪酸生物合成和代 谢，生物碱、生氰糖苷和植物防御次生性物质的生 物合成过程中起催化作用。如在脂肪酸代谢中，月 桂酸羟化酶(L A H)是催化短链(c l o)和中链(C 1 2 一 C 1 4)脂肪酸重要的羟化酶l2 4】。催化两个分子 N 一 甲基乌 药碱氧化形成小檗宁的小檗宁合酶(BS)是一种 C YP 4 5 0。在植物病原菌和昆虫抗性中起重要作用 的2，4 一 二羟基-7 一 甲氧基一 1，4-苯并嗯嗪一 3 一 酮(D L MB O A)维普资讯 http:/ 5 6 4 综述 乙醺辅酶 A J 口 L 甲羟戊酸匕 档牛儿基栊牛儿基焦磷酸 J 口 l 柯巴脂基焦磷 磷酸 图 3 植物体中赤霉素的生物合成(部分参照文献【2 O】)由C YP 4 5 0催化的前 3 个步骤由贝壳杉烯氧化酶催化，后一步骤由贝壳杉烯酸羧化酶催化，以上4个步骤在植物中鄙足相同的。和2，4 二羟基 1。4 苯并嗯嗪 3 酮(D mO A)类物质的 生物合成也包含 C Y P 4 5 0的催化反应【2 5】。2 2 C Y P 4 5 0的解毒功能 植物C Y P 4 5 0除了具有生物合成的活性外，还 具有分解天然产物的功能。在S a l v ia o ff i c i n a l i s，单 萜樟脑被氧化为 6 外 羟基樟脑，这一过程是由微 粒体C Y P 4 5 0(樟脑 6 外 羟化酶)催化完成的【2 6】。一 些用作模式底物以测定哺乳动物C Y P 4 5 0 活性的合成 的荧光底物(如7 氧香豆素和 7 氧试卤灵)也可被植 物中的某些 C Y P 4 5 0分解【l 0】。另一类主要的C Y P 4 5 0 介导的反应是除草剂、农 药和外源物质的解毒途径。植物对许多除草剂产生 的生物化学抗性是因为除草剂被快速转化为羟基化的 失活产物【2 7】，这些产物随后与植物细胞壁的糖类分 子结合。C Y P 4 5 0 对除草剂的代谢作用已知包括小麦 和玉米对绿麦隆(c h l o r t o l u r o n)的N-脱甲基作用和环甲 基的羟基化作用2 8 29 ，小麦对禾草灵(d i c l o f o p)的芳基 羟基化作用3 o 1、小麦对醚苯磺隆(t r i a s u l f u r o n)和绿 磺隆(c h l o r s u l f u r o n)的芳基羟基化【3 l】、玉米对氟嘧黄 隆(p r i m i s u l f u r o n)的芳基和嘧啶环羟基化【2 9】、玉米对 灭草松(b e n t a z o n)的芳基羟基化作用等3 0 1。一旦明确 C Y P 4 5 0 与除草剂的降解有关，分离 相关基因便成了人们研究的重点。有趣的是，第一 个分离出来的除草剂代谢C Y P 4 5 0 基因不是来 自于植 物，而是从土壤细菌浅灰链霉菌(S t r e p t o my c e s g r i s e o l u s)中分离得到的S U 1 和S U 2 基因。其中S U 1 (C Y P I O 5 A 1)基因的靶蛋白是线粒体基质，能活化无 毒的磺酰脲类 R 7 4 0 2成为一种高效的植物毒性除草 剂。O K e e f e 等【3 l】将该基因重组在 C a MV 3 5 S和绒毡 层特异表达启动子后转化烟草进行表达，结果发 现，当基因在全株表达，R 7 4 0 2处理的植株则死 亡，而绒毡层特异表达启动子引起的特异表达，用 R 7 4 0 2处理未成熟的花会导致雄性不育。所以，目 前 U 1 R 7 4 0 2系统作为阴性选择标记被广泛应用。在哺乳动物中，很少有参与药物和外源生物物 质代谢 的 cYP 4 5 0。但从小 鼠体 内分离得到 的 C Y P I A 1 基因进行重组转化植物后，成功地获得了 耐除草剂的转基因烟草和马铃薯 3 2】。研究表 明，C Y P l Al的代谢底物较为广泛，如阿特拉津(除草 剂)、绿麦隆(除草剂)和p y r i mi n o b a c me t h l 等。近几年，人们对所有能代谢除草剂的植物源 C Y P 4 5 0进行比较后发现，从菊芋中分离得到的和 从大豆中分离得到的C Y P 7 1 A I O 它们各自表达产物 的解毒效率较高，其中C Y P 7 1 A I O 基因具有C Y P 4 5 0 的基本保守序列【3 3】。试验结果表明，C Y P 7 6 B l 对 苯脲的催化周期比C Y P 7 1 A1 0的长 l 0 倍，当上述两 种基因超量表达时，对苯脲的耐性则会相应提高。目前还没有有关多代谢C Y P 4 5 0 的周期速率的研究报 道。此外，从植物中还分离和鉴定具有代谢除草剂 功能的其他C Y P 4 5 0，如C Y P 7 1 Al 1、C Y P 7 3 AI 和 C Y P 7 6 B 1 等6】。鉴于除草剂已广泛使用，现已成为 生态环境的主要污染源，因此利用C Y P 4 5 0 对除草剂 等人工合成物质的代谢可望开辟新的生物除污途径。3 展望 随着现代生物学实验方法的日臻完善和技术的 维普资讯 http:/ 余小林等：植物细胞色素 P 4 5 0 5 6 5 不断提高，越来越多的植物 C Y P 4 5 0 酶被鉴定，部 分编码其氨基酸的全长 c DNA也被成功分离。因 此，植物P 4 5 0的研究无论在理论上探索植物的生理 代谢、选择进化和与环境的关系上，还是在农业生 态、生物防治和作物基因工程上都有重要而广泛的 意义。目前，虽 然越 来越 多 的 科 学家 转 向植 物 C Y P 4 5 0 的研究，但分离和鉴定植物 C Y P 4 5 0 仍然是 该领 域研究 的首要任务。由于有 5 0多年动物 C Y P 4 5 0 的研究基础以及近年来对 C Y P 4 5 0 性质有了 更多的了解和提纯方法的不断改进，越来越多的植 物 C Y P 4 5 0被分离纯化。在分离纯化过程中，目标 蛋白质数量的多少是分离纯化工作成功与否的关 键。研究表明，用药物等诱导物质可使 C Y P 4 5 0的 量增多，所以寻找适宜的外源物质，诱导提高目标 蛋白质的表达丰度及其适宜的分离技术是今后分离 纯化C Y P 4 5 0的主要研究内容之一。其次，分离植物 C Y P 4 5 0基因和测定它们的生 物化学功能是 目前植物 P 4 5 0研究的核心。迄今为 止，利用缺失功能突变体法、差异筛选法和表达序 列标签法(E S T)已成功地分离 了3 0 0 0多个植物 C Y P 4 5 0 基因，但仅有极少数的C Y P 4 5 0 基因的功能 被鉴定，因此，验证与测定其生物学功能是整个 C YP 4 5 0 研究领域的焦点。随着大肠杆菌和酵母体 外表达系统的进一步完善，已经把多种动物、微生 物和植物的C Y P 4 5 0 进行了体外表达，并积累了许 多成功的经验，为测定未知的C Y P 4 5 0 基因的生物 学功能打下了基础。最近，本实验室利用 m R N A差 异显示技术(D D P C R)结合 R AC E 技术成功分离并克 隆到一个与白菜核雄性不育相关的编码细胞色素 C Y P 4 5 0 c D N A全长 C Y P 8 6 MF。该c D N A具有一个 完整的长 1 5 7 8 b P的开放阅读框，经 Ge n Ba n k B L A S T查询表明，C Y P 8 6 MF与位于拟南芥第一条 染色体上的编码细胞色素P 4 5 0 基因C Y P 8 6 C 4 核苷酸 序列有 8 5 3 的同源性，氨基酸同源率为 8 4 9；N o r t h e r n 验证表明C Y P 8 6 MF 在白菜两用系不育株的 表达受到了明显地抑制，并且该基因在花蕾中特异 表达，而在叶片和茎中不表达3 4】。当前对该基因可 能的生物学功能正在做进一步的研究。另外，植物 C Y P 4 5 0 基因的表达和调控也是今 后一段时间的研究热点。研究表明，C Y P 4 5 0基因 的表达调节主要是转录水平的调节，以m R N A的剪 切和蛋白质翻译等转录后调节为辅。C Y P 4 5 0 基因 的表达还受许多生物和非生物因子的调节，如微生 物侵染、光、化学物质的诱导和组织器官特异性和 发育分化等因素的影响。此外，随着植物基因组计 划的进一步深入，对调控 C YP 4 5 0基因表达的内在 因素将有更清楚的认识，如 C YP 4 5 0基因的启动 子、增强子、衰减子和诱导因素的受体蛋白及其基 因序列等作用元件与作用因子的单 一 及其相互的调 节作用都将是今后植物 C Y P 4 5 O 研究的重要内容。随着现代生物技术的发展，人们可以按设计改造 C Y P 4 5 0基因的结构及操纵其表达过程，由此改变 P 4 5 0的活性，甚至构建具有天然 C Y P 4 5 0不具备的 新活性。最后，C Y P 4 5 0的生物解毒功能的开发和利用 也是今后一段时间植物 C Y P 4 5 0的研究重点。由于 C Y P 4 5 0不但能分解天然的生物物质，还能分解如 除草剂、农药和外源物质等人工合成的物质，但 目 前对其代谢的机制还不是很清楚。相信在不久的将 来，在清楚 C Y P 4 5 0代谢人工合成的物质机制的基 础上，通过遗传转化等分子生物学手段改造的植物 和微生物将大大提高其对除草剂及农药的耐性，并 通过这些超级生物来达到修复环境的 目的。此外，在庞大的C Y P 4 5 0 家族中也有可能寻找到诸如b a r 一 样的标记基因，并应用于植物表达载体的构建。参考文献(R e f e r e n c e s)1 Ne l s o n DR A r c h B i o c h e m B i o p h y s，1 9 9 9，3 6 9：1 2 F e l d ma n n AK Cu r r Op i n P l a n t Bi o l，2 0 0 1，4：1 6 2 3 We r c k-Re i c h h a r t D e l a 1 T r e n d s P l a n t S c i，2 0 0 0，5：1 1 6 4 Ha s e ma n n CA e l a 1 J Mo l B i o l，1 9 9 4，2 3 6：1 1 6 9 5 赵剑等。生分 1 9 9 9，1 1：1 2 7 6 B o l we l l GP e l a 1 P h y t o c h e mi s t r y，l 9 9 4，3 7：l 4 9 l 、文 疑 细咆色素P 4 5 0酶系 匀、功能与喧融酶景 京：科学出版社 2 0 0 l 8 S c h u l e r MA P l a n t P h y s i o l，l 9 9 6，1 1 2：l 4 l 1 9 R u s s e l l DW J B i o l Ch e m，l 9 7 l，2 4 6：3 8 7 0 1 O B a t a r d Y e l a 1 P l a n t C e l l E n v i r o n，l 9 9 5，1 8：5 2 3 1 1 B e l l-L e l o n g DA e l a 1 P l a n t Ph y s i o l，l 9 9 7，1 1 3：7 2 9 【1 2 F r a n k MR e l a 1 P l a n t P h y s i o l，l 9 9 6，1 1 0：l 0 3 5 1 3 Mi z u t a n i M e l a 1 Pl a n t Ce l l P h y s i o l，l 9 9 3，3 4：4 8 l 【1 4】T e u t s c h GH e l a 1 Pr o c N a t l Ac a d S c i A，l 9 9 3，9 0：4 l O 2 1 5 F a h e n d o r f T e l a 1 Ar c h B i o c h e m Bi o p h y s，l 9 9 3，3 0 5：5 0 9 1 6 S h i ma d a Y e l a 1 F 髓 S L e t t，l 9 9 9，4 6 1：2 4 l 1 7 Ma r t e n s S e l a 1 P l a n t J，l 9 9 9，2 0：6 l 1【1 8 1 B a k S P f 口，P l a n t C e l l，2 0 0 l，1 3：l O l 【1 9 He d d e n P e l a 1 A n n u Re v P l a n t P h v s i o l P l a n t Mo l Bi o l，l 9 9 7 4 8：43l 2 O 曾广文等。艚物 成都：成 科技人学出版 t，l 9 9 8 2 1 Ch i a n g HH e l a 1 Pl a n t C P，l 9 9 5 7：l 9 5 维普资讯 http:/ 5 6 6 综述 2 2 1 S u n T e l 口 P l a n t C e l l，l 9 9 2，4：l l 9 【2 3 1 B a k S e l a 1 P l a n t J，l 9 9 7，l l：l 9 l 【2 4 1 S a l a u n J P e l a 1 Dr u g Me t a b o l Dr u g I n t e r a c t，l 9 9 5，1 2：2 6 l 2 5 1 F r e y M e l a 1 S c i e n c e，l 9 9 7，2 7 7：6 9 6 2 6 1 F u n k C e l a 1 P l a n t P h y s i o l，l 9 9 3，l O l：l 2 3 l 【2 7】F r e a r DS e l a 1 P e s t i c i d e Bi o c h e m Ph y s i o l，l 9 9 l，4 l：2 7 4 I 2 8 1 Mo u g i n C e l a 1 P l a n t S c i，1 9 9 0，6 6：1 9 5 【2 9】【3 0】3l 32 33 34 Fo nn e Pfis t e r R e l a1 Ph y t oc h e mi s t r y，1 9 9 0，2 9：2 7 93 Mc Fa dd e n J J e l a1 Bi oc h e m Bi o ph y s Re s Co mmu n，1 9 9 0，1 6 8 206 OKe ef e DF e l a1 Pl a nt Ph y s i o l，1 99 4，1 05：47 3 La c ou r T e l a1 Bi o c h e m Bi o p hy s Ac t a，1 9 9 9，1 4 3 3：8 7 Si mi n s z k y B e l a1 Pr o c Nat l Ac a d Sc i US A，1 9 9 9，9 6：1 7 5 0 Ye W Z e t a 1 J Hor t S c f Bi o t e c h 20 0 3，78：3 1 9 Pl a nt Cy t o c hr o me P4 5 0 Xi a o Li n Y u，J i a S h u Ca o ，Hu i Me i Cu i，W a n Zh i Y e (De p a r t me n t o f Ho r t i c u l t u r e，C o l l e g e o f Ag r i Bi o t e c h n o l o g y o f Z h e j i a n g U n i v e r s i ty；T h e S t a t e A g r i c u l t u r e Mi n i s t r y L a b o r a t o ry o f Ho r t i c u l t u r a l P l a n t Gr o wt h De v e l o p me n t Bi o t e c h n o l o g y,Ha n g z h o u 31 0 0 2 9,Ch i n a 1 Ab s t r a c t T h e i s o l a t i o n o f p l a n t c y t o c h r o me P 4 5 0 g e n e s a n d t h e i r f u n c t i o n s i n b i o s y n the s i s o f me t a b o l i t e s s u c h a s p h e n y l p r o p a n o i d，g l u c o s i n o l a t e s，I AA a n d t e r p e n o i d，a n d d e t o x i fic a t i o n o f s o me n a t u r a l a n d s y n t h e t i c a l c h e mi c als we r e b rie fly r e v i e we d I t wa s a l s o p r o p o s e d i n o u r P a D e r tha t f u r t h e r r e s e a r c h o f t h i s are a wi l l b e f o c u s e d o n the i d e n t i fic a t i o n o f mo r e c y t o c h r o me P 4 5 0 g e n e s，an a l y s i s o f t h e i r b i o l o g i c a l f u n c t i o n s，a n d e l u c i d a t i o n o f t h e r o l e o f c y t o c h r o me P 4 5 0 o n h e r b i c i d e r e s i s t a n c e a n d the i r a p p l i c a t i o n i n e n v i r o n me n t b i o l o g i c a l r e c o v e r y Ke y wo r d s p l a n t c y t o c h r o me P 4 5 0；i s o l a t i o n g e n e；b i o s y n the s i s；d e t o x i f c a t i o n Re c e i v e d：De c e mb e r 3 1，2 00 3 Ac c e pt e d：J ul y 8，20 0 4 T h i s wo r k wa s s u p p o r t e d b y t h e K e y S c i t e c h n o l o g y P r o j e c t o f Z h e j i a n g P r o v i n c e(No 0 2 1 1 0 2 5 3 6)C o r r e s p o n d i n g a u t h o r T e l F a x：8 6 5 7 1 8 6 9 7 1 1 8 8，E ma i l：j s h c a o z j u e d u c n 维普资讯 http:/