Bcl-2、Bax、Fas、FasL、穿孔素和粒酶B在移植肾急性排斥中的共同表达和意义.pdf

第2 9 卷第1 期20 0 8 年 2 月 西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)J o u r n a l o f X i a n J i a o t o n g U n i v e r s i t y(M e d i c a l S c i e n c e s)Vo l.2 9 No.1 F e b.2 0 0 8B c l-2,B a x,F a s、F a s L、穿孔素和粒酶B在移植肾急性排斥中的共同表达和意义T小明，薛武军，田普i)1卜刘晓东(西安交通大学医学院第一附属医院肾病中心肾移植科，陕西西安7 1 0 0 6 1)摘要:.的 检测B c l-2,B a x,F a s,F a s L、穿孔素和粒酶B在移植肾急性排斥时的表达水平，探讨其在急性排斥中的作用及可能的分子机制。方法 选取3 0 例移植肾穿刺活检标本及 1 8 例正常供肾组织为研究对象，采用免疫组化方法检测 B c l-2,B a x,F a s,F a s L、穿孔素和粒酶B的表达情况。结果 根据B a n f f 9 7 病理诊断标准，急性排斥标本3 0 例，其中I A1 2 例，I B1 1 例，Q A5 例，1 B2 例;所有组织中均可发现细胞凋亡现象，急性排斥标本中更为明显;3B c l-2 在急性排斥标本中的表达水平低于正常组织(P O.0 5)，与急性排斥的病理变化呈负相关(P O.0 5);F a s,F a s L、穿孔素和粒酶B在急性排斥组中的表达水平均高于对照组，并与急性排斥的病理变化呈正相关，以F a s L和粒酶B最为明显(P 0.0 1),A*B c l-2 在肾小管上皮细胞的表达减少提示急性排斥反应的发生;)B a x 对于预测急性排斥反应的意义不大;)B c l-2,F a s,F a s L、穿孔素和粒酶 B的表达变化均与急性排斥反应密切相关，尤以F a s t和粒酶B明显，可作为监测移植肾形态学变化、功能状态以及判断预后的重要指标。关键词:细胞凋亡;肾脏移植;急性排斥反应中图分类号:R 6 1 7;R 6 9 2.5文献标识码:A文章编号;1 6 7 7-8 2 5 9(2 0 0 8)0 1-0 0 9 8-0 4T h e c o-e x p r e s s i o n a n d i t s s i g n i f i c a n c e o f a p o p t o t i c m o l e c u l e s d u r i n g a c u t e r e j e c t i o n o f h u m a n r e n a l a l l o g r a f t s D i n g X i a o m i n g,X u e Wu j u n,T i a n P u x u n,L i u X i a o d o n g(D e p a r t m e n t o f R e n a l T r a n s p l a n t a t i o n，t h e F i r s t A f f i l i a t e d H o s p i t a lMe d i c a l S c h o o l o f X i a n J i a o t o n g Un i v e r s i t y,X i a n 7 1 0 0 6 1，C h i n a)A B S T R A C T;O b j e c t i v e T o d e t e c t i n t r a g r a f t e x p r e s s i o n o f a p o p t o t i c m o l e c u le s(B c l-2,B a x,F a s,F a s L,P e r f o r i n a n d G r a n z y m e B)d u r i n g a c u t e r e j e c t i o n o f h u m a n r e n a l a l l o g r a f t s,a n d a c c e s s t h e r o l e i n a c u t e r e j e c t i o n.M e t h o d s T h i r t y t i s s u e s p e c i m e n s w e r e o b t a i n e d f r o m b i o p s y.T h e s p e c i m e n s w e r e c l a s s i f i e d o n t h e b a s i s o f t h eB a n f f c r i t e r i a.I m m u n o h i s t o c h e m i s t r y w a s u s e d f o r d e t e c t i n g t h e e x p r e s s i o n o f a p o p t o t i c m o l e c u l e s i n t h e r e n a lg r a f t s.R e s u lt s T h e r e w e r e 3 0 a c u t e r e j e c t i o n s p e c i m e n s;I A(n=1 2)，I B(n=1 1)，II Mn=5)，a n d II B(n=2).A p o p t o t i c c e l ls w e r e f o u n d i n a l l t h e s a m p le s,a n d m o r e o b v i o u s d u r i n g a c u t e r e j e c t i o n.I n t h e a c u t er e j e c t i o n s p e c i m e n s,t h e e x p r e s s i o n o f B c l-2 d e c r e a s e d(P 0.0 5).F a s,F a s L,P e r f o r i n a n d G r a n z y m e B w e r ei n c r e a s e d d u r i n g a c u t e r e j e c t i o n,a n d t h e r e w a s a c o r r e l a t i o n o f t h e e x p r e s s i o n o f F a s L a n d G r a n z y m e B w i t hh is t o l o g ic a l c h a n g e s(P 0.0 1).C o n c lu s io n T h e d e c r e a s e o f B c l-2 o f t h e g r a f t s i n d i c a t e s t h a t i t w a s i n v o l v e di n a c u t e r e n a l r e j e c t i o n.B a x c o u l d n o t r e f l e c t t h e o n s e t o f a c u t e r e n a l r e j e c t i o n.F a s L a n d G r a n z y m e a r e u s e f u lf o r m o n i t o r i n g t h e h i s t o l o g y a n d f u n c t i o n o f r e n a l a l l o g r a f t s.K E Y WO R D S:a p o p t o s i s i r e n a l t r a n s p l a n t a t i o n:a c u t e r e j e c t i o n 尽管近年来随着器官保存、组织配型技术的发展，以及新型免疫抑制剂的广泛应用，肾移植患者的人肾短期存活率均获得了很大的提高，但远期效果并收稿日期:2 0 0 7-0 3-2 7修回日期:2 0 0 7-0 4-2 3作者简介:丁小明(1 9 7 0-)，男(汉族)，博士学位，副教授.研究方向 器官移植.E-m a i l:x m d i n g m e d m a i l.c o m.c n没有得到相应的改善。急性排斥反应是导致移植肾功能丧失的最主要的因素之一，但其分子机制目前尚未完全阐明。自从 1 9 9 5 年 K r a r n s 首次提出细胞凋亡是急性排斥反应可能的机制后，凋亡相关分子在急性排斥中的作用成为国内外学者的重要研究领域.凋亡相关分子在移植肾中的表达水平与急性排斥反万方数据1 期丁小明，薛武军，田普训，等.B c l-2,B a x,F a s,F a s L、穿孔素和粒酶B 在移植肾急性排斥中的共同表达和意义应的发生、发展、治疗效果及移植物的功能形态变化密切相关，研究这些分子的作用机制有利于进一步降低急性排斥反应的发生率，促进临床肾移植的发展。1 材料与方法1.1 研究对象及分组实验组:1 9 9 7 年至 2 0 0 3 年间肾移植术后两周内在本中心诊断为急性排斥反应的移植肾穿刺标本 3 0 例，其中男性 1 8 例，女性 1 2例，年龄2 2-5 6 岁，平均3 6 岁;对照组:1 8 例正常供肾作为对照。1.2 组织配型A B O血型:血型相同者 2 0 例，血型相容者1 0 例;群体反应性抗体(P R A):2 6 例为阴性，另4 例分别为1 5 0 0,2 0 肠,3 0 0 o,4 0 0 o;淋巴细胞毒交叉配型试验:均为阴性(1 0 0 0);H L A配型:H L A位点2 个抗原错配4 例，H L A位点3 个抗原错配 1 6例，H L A位点 4 个抗原错配 8 例，HL A位点 5 个抗原错配2 例。1.3 免疫抑制剂的应用术前 1-2 d口服环抱素A(C S A)4.5-5.0 mg/(k g d)加霉酚酸醋(MMF)1.5 g/d;术前口服 MMF 2.0 g/d、强的松(P r e d)8 0m g;移植术中及术后 1-4 d 应用甲基强的松龙 2 5 0-7 5 0 m g/d、环磷酞胺1 0 0-2 0 0 m g/d 冲击治疗。术后当血肌醉降至2 6 5.2 F.m o l/L以下时开始口服C S A。术后第 1 天即开始口服MMF 1.5 g/d,C S A起始量4.5-5 m g/(k g d)，强的松维持量 1 0-2 0mg/d,1.4 急性排斥的诊断和治疗1.4.1 诊断标准临床上表现有尿量减少、体重增加、发热、血压升高、移植肾区肿大和压痛;血尿素氮和肌配持续升高，肾功能进行性下降;B超检查:移植肾体积增大，皮质增厚，回声增强，D o p p l e r 显示移植肾血液供应差、流速慢;同位素肾动态显示移植肾核素摄取及分泌、排泄相均较差;排除其他类型的排斥反应;排除C S A的肾毒性;肾间质及血管周围大量单核细胞浸润，肾小管周围淋巴细胞聚集，有血管内膜炎;移植肾病理诊断为急性排斥反应。1.4.2 急性排斥反应的治疗首先采用大剂量的甲基强的松龙、环磷酞胺冲击治疗2-3 d。甲基强的松龙冲 击治疗无效时改用抗C D 3 单克隆抗体(O K T 3)或者抗胸腺细胞免疫球蛋白(A T G)。抗排斥治疗时间7-1 0 d，待排斥反应逆转后恢复三联免疫抑制方案。肾血管扩张药物的应用:利尿合剂的使用:盐酸多巴胺2 0 m g、盐酸酚妥拉明1 0 m g、速尿 2 0-8 0m g,6 5 4-2 1 0 m g，加人5 0 g/L(5 写)葡萄糖注射液5 0 0 m L中静脉点滴，每日1-3次;盐酸川弯嗦1 2 0 m g 加人5 0 g/L(5 o o)葡萄糖注射液或生理盐水2 5 0-5 0 0 m L 中静脉点滴，每日1 次。这两种液体持续应用至肾功能恢复正常。1.5 主要试剂鼠抗人 B c l-2 单抗(I g G,)、鼠抗人B a x 单抗(I g G 2 b)、兔抗人 F A S多抗(I g G)、兔抗人F A S-L多抗(I g G)均为美国S a n t a C r u z 公司产品;鼠抗人穿孔素单抗(I g G)为深圳晶美生物公司产品;鼠抗人粒酶B单抗(I g G 2 8)，免疫组化 S P染色试剂盒、D A B 显色试剂盒、中性树胶均为北京中山生物技术公司产品。1.6 实验方法1.6.1 常规病理技术 移植肾穿刺标本立即放人新鲜配制的1 0%(体积分数)甲醛溶液中固定，1 2 h后梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察移植肾组织中主要的凋亡细胞类型。所有组织均先按B a n f f 9 7 分类标准进行诊断。1.6.2 免疫组化染色 严格按照S P 染色试剂盒说明书进行，实验中每种指标均设置阳性和空白对照(以P B S 代替一抗)。免疫组化染色以出现明显棕黄色即为阳性结果，若D A B显色1 5 m i n 组织仍无着色则为阴性结果。所检测蛋白表达半定量:姗:5 0%以上的肾小管呈阳性表达;料:2 5 0 0-5 0%的肾小管呈阳 性表达;+:2 5 纬以下的肾小管呈阳性表达。1.7 统计学处理用 Wi l c o x o n 两样本比较法进行统计分析，用S p e a r m a n 等级相关分析。统计分析利用S P S S 1 0.0 软件进行，以P 4 个单核细胞/每小管横断面或1 0 个小管细胞)占4 0 0 0，工 B(明显的间质浸润;严重小管炎病灶，即1 0 个单核细胞/每小管横断面或1 0 个小管细胞)3 6.6 0 o,II A(轻度到.中度动脉内膜炎)1 6.6 0 0,II B(严重动脉内膜炎，管腔狭窄2 5%以上)6.6 0 0,2.2 移植肾组织中的细胞凋亡H E染色可见，凋亡细胞的核呈蓝黑色，胞浆为淡红色，单个散在地分布在组织中。表现为核染色质致密浓缩，核碎裂等，可发现凋亡小体。依常见顺序排列为肾小管上皮细胞、炎细胞、动脉壁平滑肌细胞、内皮细胞、肾小球系膜细胞、移行上皮细胞。肾小管上皮细胞凋亡可与核分裂相伴出现，细胞核碎裂细胞趋向腔面或脱落于管腔中，主要见于近曲小管和直小管，集合小管相对少见。炎细胞凋亡主要为淋巴细胞和中性白细胞，见于万方数据西 安 交 通 大 学 学 报(医 学 版)第 2 9 卷肾间质或小血管腔内，多为凋亡小体。浆细胞凋亡时胞浆红染、固缩，核碎片3-5 个。其他类型细胞凋亡主要表现为核碎裂。本实验中所有的标本均可发现凋亡细胞，但以急性排斥标本中的凋亡细胞数目最多，形态学特征也更为典型。2.3 移植肾组织中 B c l-2/B a x蛋白的表达B c l-2表达的阳性定位为胞浆及胞膜有棕黄色颗粒。按阳性程度，依次为:肾小管上皮细胞(近曲小管为著)、移行上皮细胞、肾小球系膜细胞、血管内皮和间质中单核淋 巴细胞。在对照组 中的表达以(份)为主(4 2.1%)，急性排斥标本则多为(+)(5 1.1 0 0)，组间比较有统计学意义(P O.0 5).2.4 移植肾组织中穿孔素/颗粒酶 B的表达1 0 0%急性排斥反应的移植肾病理标本均表达穿孔素和粒酶B，二者的表达情况类似，主要定位于肾小管上皮细胞和间质淋巴细胞的胞浆和胞膜。急性排斥组主要为(一)一(珊)(分别为6 8%和7 0.2%);正常对照组主要为(+)(分别为5 7.9%和6 3.2%).组间比 较差异均有统计学意义(P O.0 5,P O.0 1)，穿孔素和粒酶 B的表达与病理分级呈正相关，以粒酶 B的 相关程度较好(r=0.3 5 6,P O.O 1),2.5 F a s/F a s-L的表达F a s 抗原的表达定位于细胞浆和细胞膜，主要为肾小管上皮细胞(近曲小管为著)，偶见于间质浸润的单核及淋巴细胞。在急性排斥组标本中的表达明显高于对照组(P 0.0 5),F a s-L则在肾小管上皮细胞和间质淋巴细胞均可发现表达，急性排斥组较正常对照组表达明显，有极显著的差异(P O.0 1).F a s 和F a s L的表达与病理分级均呈正相关，尤其以 F a s L的相关程度最高(r=0.3 6 8，P O.0 1)。3 讨论 许多大型移植中心的回顾性研究表明，急性排斥反应是发生慢性排斥反应的重要危险因素。G a l a n t e等 2)对 1 5 4 4 名患者进行随访分析后发现，非急性排斥组移植物5 年存活率为8 2.2 0 a，而急性排斥组为6 2.4%(P O.0 0 1)，同时慢性移植肾病的发生率分别为7.6%和2 2.9 肠。因此，对移植肾急性排斥反应的准确而及时的诊断，对于病情的控制和判断预后十分重要。二 有研究证实，急性排斥反应是一种复杂的免疫机制所导致的炎性损伤过程，由细胞免疫和体液免疫共同参与，但细胞免疫发挥更为关键的作用。临床上约9 0%急性排斥反应以细胞免疫介导为主，称为急性细胞型排斥反应。其病理形态学的特征为明显的间质炎性细胞浸润，炎性细胞主要为C T L，伴有程度不等活化的的N K细胞、巨噬细胞等，通过破坏肾小管基底膜累及肾小管上皮细胞，引起肾小管炎，导致肾小管上皮细胞肿胀、坏死，损伤移植物功能。因此，C T L是引起急性排斥反应并导致移植肾损伤的最主要的环节.C T L对靶细胞的杀伤主要有两种方式，即攻击靶细胞膜和攻击靶细胞核，分别通过诱发靶细胞溶解性坏死和细胞程序性死亡(P C D)而实现的。在本研究中，通过光镜观察到移植肾组织中存在广泛的细胞凋亡现象，并尤其以急性排斥标本中多见，对缺血缺氧极为敏感的近曲小管上皮细胞是重要的凋亡细胞类型。说明了肾小管上皮细胞是急性排斥时淋巴细胞攻击的主要靶细胞，细胞凋亡与急性排斥反应中淋巴细胞介导的移植物损伤密切相关;同时也提示我们监测移植肾中细胞凋亡的变化对急性排斥的病情有一定的指导意义。Ma t s u n。等 3 也有类似的发现，他利用抗 B M-1 抗体特异地识别凋亡细胞，发现急性排斥反应病变中显示不同程度的阳性表达;相比之下，肾功能稳定者，未见 B M-1 阳性染色细胞.研究结果表明，肾小管上皮细胞凋亡在移植肾急性肾功能不全中起了重要作用.此外，在研究中我们还观察到急性排斥标本中浸润的淋巴细胞也有不同程度的凋亡现象。这可能是由于临床诊断急性排斥反应后给予激素冲 击等治疗所导致的。A u g u s t 等 4 发现，病理活检证实为急性排斥的患者中，在给予激素冲击治疗后，移植肾组织中浸润的淋巴细胞凋亡明显增加，并且淋巴细胞的凋亡预示患者病情转归良好。此结论与我们的观察结果相似。目前研究发现，多种凋亡调控基因及相关分子参与了急性排斥中C T L杀伤靶细胞的过程。但是，其具体机制仍未完全阐明。一般认为的途径主要为两种:一是F a s/F a s-L 介导的细胞凋亡途径;另一种是穿孔素/颗粒酶介导的细胞毒途径 s 7。本研究结果表明，急性排斥标本中F a s,F a s-L、穿孔素和粒酶 B的表达水平均高于正常对照组(P 0.0 5)，并且与急性排斥反应的病理分级呈正相关，以F a s-L和粒酶B的表达最为明显。说明F a s/F a s-L和穿孔素/粒酶B途径均参与了急性排斥C T L介导的肾小管上皮细胞凋亡，提示它们的表达水平变化可准确地反映移植肾的损伤情况，可用于急性排斥病情的诊断和预后判断。研究表明 6 7,B c l-2 蛋白 可抑制多种因素引起的细胞凋亡，显著延长细胞生命.表达B r-1-2 基因的上皮万方数据1 期丁小明，薛武军，田普训，等.B c l-2,B a x,F a s,F a s L、穿孔素和粒酶B 在移植肾急性排斥中的共同表达和意义细胞具有生存能力，而失去B c l-2 基因表达能力的上皮细胞则注定要凋亡。B a x 是一种B c l-2 相关蛋白，具有对抗B c l-2 蛋白抑制凋亡的作用。当凋亡发生时，B a x蛋白可从细胞浆转移到线粒体并与线粒体膜相结合，通过自 身或与其他B c l-2 家族成员形成的同型和异型二聚体促进细胞发生凋亡。体外实验表明，在调节细胞凋亡的过程中，B c l-2/B a x 两蛋白之间的比例是决定对细胞凋亡抑制作用强弱的关键因素C s)。本实验结果表明，急性排斥组标本中B c l-2 在肾小管上皮细胞的表达较正常对照组明显下降(P 0.0 5),B a x 的表达在两组中虽然无差异，但 B c l-2/B a x 的比值下降了，反映了移植肾上皮细胞的凋亡，提示 B c l-2 和 B a x 参与了C T L损伤肾小管上皮细胞的过程。此外，B c l-2在移植肾中的表达水平与移植肾急性排斥反应病理变化呈负相关(P 0.0 5)，可一定程度反映移植物的损伤情况。由于F a s 系统和穿孔素是 C T L发挥细胞毒作用的起始环节，B c l-2 作用位点可能在穿孔素和(或)F a s 系统介导的细胞凋亡途径的下游。综上所述，细胞凋亡是急性排斥反应时移植物损.伤的重要机制之一，与排斥反应的发生、发展和移植物的功能变化密切相关.B c l-2,B a x,F a s,F a s L、穿孔素和粒酶B均参与了移植肾急性排斥时C T L介导的肾小管上皮细胞损伤，它们在移植肾中的表达变化提示了急性排斥反应的发生，F a s L和粒酶B可作为监测移植肾形态学变化、功能状态以及预后判断的重要指标，B c l-2 则从属于F a s 系统和穿孔素介导的细胞凋亡过程。参考文献:1 R a c u s e n L C,S o l e z K,C o l v i n R B,e t a l.T h e B a n f f 9 7 w o r k i n g c l a s s i f i c a t i o n o f r e n a l a l l o g r a f t p a t h o l o g y J .K i d n e y I n t,1 9 9 9,5 5(2):7 1 3-7 2 3.2 G a l a n t e N Z,T e d e s c o H S,M a c h a d o P G P,e t a l.A c u t e r e j e c t i o n i s a r i s k f a c t o r f o r l o n g-t e r m s u r v i v a l i n a s i n g l e-c e n t e r a n a l y s i s o f 1 5 4 4 r e n a l t r a n s p l a n t s J .T r a n s p l a n t P r o c,2 0 0 2,3 4(2):5 0 8-5 1 3.3 M a t s u n o T,N a k a g a w a K,S a s a k i H,e t a l.A p o p t o s i s i n a c u t e t u-b u l a r n e c r o s i s a n d a c u t e r e n a l a l lo g r a f t r e j e c t i o n J .T r a n s p l a n t P r o c,1 9 9 4,2 6(4):2 1 7 0-2 1 7 3.4 C h r i s t i a n A,W e r n e r S K,K a r l h e i n i D,e t a l.P r o g n o s t i c v a l u e o f l y m p h o c y t e a p o p t o s i s i n a c u t e r 句 e c t i o n o f r e n a l a l l o g r a f t s J .T r +a n s p l k n t a t i o n,1 9 9 9,6 7(4):5 8 1-5 8 5.5 丁小明，刘晓东，田普训，等.肾移植术后患者外周血及移植肾组 织中穿孔素、顺粒酶 B表达的研究【J .中华器官移植杂志，2 0 0 5,2 6(6):3 4 4-3 4 6 6 M a r t i n S I,G r e e n D R.A p o p t o s i s a n d c a n c e r:t h e f a i l u r e o f c o n-t r o l s o n c e l l d e a t h a n d c e l l s u r v i v a l J .C r i t R e v O n c o l H e m a t o l,1 9 9 5,1 8(2).1 3 7-1 5 3.7 杨长春，王林源，梁计魁，等.B c l-2 基因家族与细胞凋亡【J .中 国武普医学杂志，2 0 0 1,1 2(1 0):6 1 7-6 1 9.8 D o n g C,G r a n v i l l e D J,T u f f n e l C E,e t a l.B a x a n d a p o p t o s i s i n a c u t e a n d c h r o n i c r e j e c t i o n o f r a t c a r d i a c a l l o g r a f t s J .L a b I n-v e s t,1 9 9 9,7 9(1 2):1 6 4 3-1 6 5 3.(编辑卓选鹏)A(上接第 9 7页)5 N a t o r i S,S e l z n e r M,V a l e n t i n o K L,e t a l.A p o p t o s i s o f s i n u-s o i d a l e n d o t h e l i a l c e l l s o c c u r s d u r i n g l i v e r p r e s e r v a t i o n i n j u r y b y a c a s p a s e-d e p e n d e n t m e c h a n i s m J .T r a n s p l a n t a t i o n,1 9 9 9,6 8 (1):8 9-9 6.6 H i n e s I N,H a r a d a H,W o l f R,e t a l.S u p e r o x i d e a n d p o s t-i s-c h e m i c l i v e r i n j u r y:p o t e n t i a l t h e r a p e u t i c t a r g e t f o r l i v e r t r a n s-p l a n t a t i o n J .C u r r M e d C h e m,2 0 0 3,1 0(2 4):2 6 6 1-2 6 6 7.7 F a r g h a l i H,C a n o v a N,K u c e r a T,e t a l.N i t r i c o x i d e s y n t h a s e i n h i b i t o r s m o d u l a t e l i p o p o l y s a c c h a r i d e-i n d u c e d h e p a t o c y t e i n j u-r y:d i s s o c i a t io n b e t w e e n i n v i v o a n d i n v i t r o e f f e c t s J .I n t I m-m u n o p h a r m a c o l,2 0 0 3,3(1 2):1 6 2 7-1 6 3 8.8 吴天鸣，杨翔，高志刚，等.一氧化氮对大鼠肝缺血一 再灌注损伤中 肝细胞词亡的影响 J .中华实验外科杂志，2 0 0 1,1 8(3):2 2 5-2 2 7.9 D a s，X i L,K u k r e j a R C.P h o s p h o d i e s t e r a s e-5 i n h i b i t o r s i ld e-n a f i l p r e c o n d i t i o n s a d u l t c a r d i a c m y o c y t e s a g a i n s t n e c r o s i s a n d a p o p t o s i s.E s s e n t i a l r o l e o f n i t r i c o x i d e s i g n a l i n g J .J B i o l C h e m,2 0 0 5,2 8 0(1 3):1 2 9 4 4-1 2 9 5 5.1 0 R a m a l h o R M,C o r t e z-P i n t o H,C a s t r o R E,e t a l.A p o p t o s i s a n d B c l-2 e x p r e s s i o n i n t h e l i v e r s o f p a t i e n t s w i t h s t e a t o h e p a t i t i s J .E u r J G a s t r o e n t e r o l H e p a t o l,2 0 0 6,1 8(1).2 1-2 9.1 1 T o g o S,K u b o t a T,M a t s u o K,e t a l.M e c h a n i s m o f l i v e r f a i l u r e a f t e r h e p a t e c t o m y J .N i p p o n G e k a G a k k a i Z a s s h i,2 0 0 4,1 0 5 (1 0):6 5 8-6 6 3.(编辑卓选鹏)万方数据