细胞生物学实验手册.pdf

生物秀实验频道生物秀实验频道努力做您的实验助手努力做您的实验助手！http:/ 细胞 胞生 生物 物学 学实 实验 验手 手册 册 生 生 生生物 物 物物秀 秀 秀秀搜 搜 搜搜集 集 集集整 整 整整理 理 理 理 仅 仅 仅仅供 供 供供学 学 学学习 习 习习参 参 参参考 考 考 考 w w w ww w w ww w w w.b b b bb b b bi i i io o o oo o o o.c c c co o o om m m m生物秀实验频道生物秀实验频道努力做您的实验助手努力做您的实验助手！http:/ 目 录录 实验室规则(1)实验室规则(1)常用实验动物了解和解剖器械的使用(2)常用实验动物了解和解剖器械的使用(2)细胞生物学实验绘图方法与要求（4）细胞生物学实验绘图方法与要求（4）实验 实验 一 一 动物细胞的基本形态观察和显微测量（5）动物细胞的基本形态观察和显微测量（5）实验 实验 二 二 细胞生理活动的观察(7)细胞生理活动的观察(7)实验 实验 三 三 线粒体与液泡系的活体染色及观察（11）线粒体与液泡系的活体染色及观察（11）实验 实验 四 四 细胞组分的化学反应（13）细胞组分的化学反应（13）实验 实验 五 五 细胞中微丝的染色及微丝与细胞形态的实验观察（16）细胞中微丝的染色及微丝与细胞形态的实验观察（16）实验 实验 六 六 细胞分裂的形态观察（18）细胞分裂的形态观察（18）实验 实验 七 七 正常细胞与肿瘤细胞常规核型的标本制备正常细胞与肿瘤细胞常规核型的标本制备(23)(23)实验 实验 八 八 细胞融合（27）细胞融合（27）实验 实验 九 九 细胞的原代和传代培养以及细胞计数（28）细胞的原代和传代培养以及细胞计数（28）实验 实验 十 十 免疫荧光抗体法检查细胞表面抗原（33）免疫荧光抗体法检查细胞表面抗原（33）实验 十一 银染核仁形成区的光镜和电镜标本制备及观察（35）实验 十一 银染核仁形成区的光镜和电镜标本制备及观察（35）附录一 附录一 离心机转数与离心力的换算表（37）离心机转数与离心力的换算表（37）附录二 附录二 溶液的配制（38）溶液的配制（38）主要参考资料（45）主要参考资料（45）1实验室规则实验室规则 一、遵守实验纪律，按时到达实验室一、遵守实验纪律，按时到达实验室，不得迟到或早退。实验中途因故需外出时应向任，不得迟到或早退。实验中途因故需外出时应向任 课教师请假。课教师请假。二、进入实验室之前要换好白大衣及拖鞋。二、进入实验室之前要换好白大衣及拖鞋。三、保持实验室安静，不许在实验室内大声喧哗及随意走动。三、保持实验室安静，不许在实验室内大声喧哗及随意走动。四、必须严肃认真地进行实验。实验期间不得进行任何与实验无关的活动。四、必须严肃认真地进行实验。实验期间不得进行任何与实验无关的活动。五、实验室内各组仪器及器材由各组自已使用，不得互相调换。要爱护仪器、标本和设 五、实验室内各组仪器及器材由各组自已使用，不得互相调换。要爱护仪器、标本和设 备。备。如遇仪器损坏或不灵如遇仪器损坏或不灵，应及时报告任课教师，应及时报告任课教师，以便修理或更换，以便修理或更换，不要自行乱修。不要自行乱修。损坏器材或设备者应按有关规定进行赔偿。损坏器材或设备者应按有关规定进行赔偿。六、注意节约实验材料、药品和水、六、注意节约实验材料、药品和水、电等。电等。七、保持实验室内清洁整齐。实验结束后，各组必须认真清理各自的实验台面，将器材 七、保持实验室内清洁整齐。实验结束后，各组必须认真清理各自的实验台面，将器材 清洗后点清数目，然后摆放整齐清洗后点清数目，然后摆放整齐。班级值日生负责清扫室内卫生，关好水、电开关。班级值日生负责清扫室内卫生，关好水、电开关 和门、窗等，经教师允许后方可离开实验室。和门、窗等，经教师允许后方可离开实验室。八、动物尸体、纸片及实验废物应放到指定地点，八、动物尸体、纸片及实验废物应放到指定地点，不得随意乱丢。不得随意乱丢。九、有不遵守上述要求者，任课老师将终止其实验，九、有不遵守上述要求者，任课老师将终止其实验，并取消其当堂实验成绩。并取消其当堂实验成绩。2常用实验动物的了解和解剖器械的使用 常用实验动物的了解和解剖器械的使用 一、常用实验动物一、常用实验动物 常用的实验动物有蟾蜍、常用的实验动物有蟾蜍、小白鼠小白鼠、大白鼠、大白鼠、豚鼠、豚鼠、猫、猫、兔和狗等。兔和狗等。在医学实验中，常 在医学实验中，常 常根据不同的实验目的而选用不同的动物进行实验研究常根据不同的实验目的而选用不同的动物进行实验研究。例如。例如，蟾蜍可以用于观察离体心，蟾蜍可以用于观察离体心 脏搏动情况的实验，脏搏动情况的实验，小白鼠常用于样本很大的实验(如药物的半数致死量的测定等)小白鼠常用于样本很大的实验(如药物的半数致死量的测定等)，猫常，猫常 用于测定脑内电位的实验，而狗是局解手术中常用的实验动物。用于测定脑内电位的实验，而狗是局解手术中常用的实验动物。在我们细胞生物学实验中在我们细胞生物学实验中，除应用培养细胞外，最常用的动物是蟾蜍和小白鼠，除应用培养细胞外，最常用的动物是蟾蜍和小白鼠，下面，下面 对其特点及基本处置做一简单的介绍。对其特点及基本处置做一简单的介绍。蟾蜍蟾蜍 蟾蜍是两栖类动物，蟾蜍是两栖类动物，由于其取材方便由于其取材方便，常用于各种实验，常用于各种实验。其细胞较哺乳类动物的细胞。其细胞较哺乳类动物的细胞 大得多，因此常用于观察细胞形态的实验。大得多，因此常用于观察细胞形态的实验。1雌雄鉴别 1雌雄鉴别 通常雄性蟾蜍较雌性的为小，且在其前肢的 通常雄性蟾蜍较雌性的为小，且在其前肢的 ll3 3 趾基部有被称为婚垫的黑疣。趾基部有被称为婚垫的黑疣。2捉拿及处死方法：2捉拿及处死方法：常用捣髓法处死蟾蜍常用捣髓法处死蟾蜍，即用解剖针捣毁其脑组织和脊髓，即用解剖针捣毁其脑组织和脊髓。具体方法是，左手握住蟾蜍。具体方法是，左手握住蟾蜍 的身体和四肢的身体和四肢，使其腹部贴着掌心，食指压住蟾蜍头部前端使其尽量腹屈，使其腹部贴着掌心，食指压住蟾蜍头部前端使其尽量腹屈。在头与躯干之。在头与躯干之 间可触及一凹陷(即枕骨大孔所在处)，右手持解剖针直插入此凹陷约 间可触及一凹陷(即枕骨大孔所在处)，右手持解剖针直插入此凹陷约 l2mm，随即将针尖 l2mm，随即将针尖 转向头侧插入颅腔捣毁脑组织。转向头侧插入颅腔捣毁脑组织。然后将解剖针抽回并转向尾侧刺入脊椎管内捣毁其脊髓。然后将解剖针抽回并转向尾侧刺入脊椎管内捣毁其脊髓。如此直至其四肢松软，呼吸消失为止。如此直至其四肢松软，呼吸消失为止。小白鼠小白鼠 小白鼠是哺乳动物，是最为常用的实验动物。小白鼠是哺乳动物，是最为常用的实验动物。1捉拿方法：1捉拿方法：将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持其尾巴向后拉，将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持其尾巴向后拉，小鼠则会尽力向前蹬。小鼠则会尽力向前蹬。用左手 用左手 的拇指和食指抓住其头顶部皮肤，然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。的拇指和食指抓住其头顶部皮肤，然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。2处死方法：2处死方法：处死应以安乐死为原则，处死应以安乐死为原则，即使之无痛苦而迅速死亡即使之无痛苦而迅速死亡。常用的方法有颈椎脱位法。常用的方法有颈椎脱位法，断头，断头 法法和二氧化碳吸入法等。断头法需用特殊的断头器和二氧化碳吸入法等。断头法需用特殊的断头器，二氧化碳吸入法则将小鼠放入盛有二，二氧化碳吸入法则将小鼠放入盛有二 氧化碳的容器内即可氧化碳的容器内即可。颈椎脱位法的具体方法是：。颈椎脱位法的具体方法是：左手拇指和食指按住小白鼠的头部左手拇指和食指按住小白鼠的头部，左，左 手捉住其尾巴迅速向后猛拉，使其颈椎脱位而立即死亡。手捉住其尾巴迅速向后猛拉，使其颈椎脱位而立即死亡。3给药方法：3给药方法：小自鼠的给药途径有经口给药、小自鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射腹腔内注射、尾静脉注射、皮下注射、皮内注射和肌、尾静脉注射、皮下注射、皮内注射和肌 肉注射等肉注射等。我们常用的是腹腔注射。我们常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住小鼠(。具体方法是：左手捉住小鼠(如前所述)如前所述)，在其腹正中，在其腹正中 线稍外侧(避开膀胱和血管)用酒精消毒后，线稍外侧(避开膀胱和血管)用酒精消毒后，首先将注射针头向头部方向刺入皮下，首先将注射针头向头部方向刺入皮下，进针 进针 1 1 2mm 2mm 后，再以 后，再以 45角刺穿腹部肌肉而进入腹腔(刺穿腹肌时有一落空感)。针头刺入腹腔后 45角刺穿腹部肌肉而进入腹腔(刺穿腹肌时有一落空感)。针头刺入腹腔后 切勿左右摆动，切勿左右摆动，以免损伤肠管或肝脏。以免损伤肠管或肝脏。注意每次注入的液体量应为 注意每次注入的液体量应为 0.10.2ml10 0.10.2ml10 克体重。克体重。二、常用手术器械及操作方法：二、常用手术器械及操作方法：1解剖针：用于挑、刺等。常用来捣髓处死蟾蜍，持法如执笔法。1解剖针：用于挑、刺等。常用来捣髓处死蟾蜍，持法如执笔法。22解剖刀(即外科手术刀)：解剖刀(即外科手术刀)：用于各种皮肤切口和组织切除等。用于各种皮肤切口和组织切除等。持法有执弓法与执笔法 持法有执弓法与执笔法 两种。前者用于较大力量切开较长距离的坚韧的组织，两种。前者用于较大力量切开较长距离的坚韧的组织，如大动物的皮肤切口等；如大动物的皮肤切口等；后者则用后者则用3于小力量的短距离切开，或分离皮肤和肌肉等。于小力量的短距离切开，或分离皮肤和肌肉等。3大剪刀：用于剪毛、皮肤、皮下组织和肌肉等。持法如图。3大剪刀：用于剪毛、皮肤、皮下组织和肌肉等。持法如图。4眼科剪刀：用于剪断神经、血管4眼科剪刀：用于剪断神经、血管、筋膜等细软组织。、筋膜等细软组织。5眼科镊子：用于提取神经、血管和筋膜等细软组织。5眼科镊子：用于提取神经、血管和筋膜等细软组织。6钝头镊子：用于提取脏器、组织等。6钝头镊子：用于提取脏器、组织等。7有钩镊子：用于提取皮肤切口等7有钩镊子：用于提取皮肤切口等。常用手术器械 常用手术器械 执手术刀的姿势 执手术刀的姿势 执手术剪的姿势 执手术剪的姿势 执手术镊的姿势 执手术镊的姿势 执手术刀、手术剪、手术镊的姿势执手术刀、手术剪、手术镊的姿势4细胞生物学实验绘图方法与要求细胞生物学实验绘图方法与要求 一、一、在仔细观察的基础上，在仔细观察的基础上，选择典型结构进行描绘，选择典型结构进行描绘，要求真实、要求真实、准确(注意各部结构的比例 准确(注意各部结构的比例 关系)。关系)。二、二、用铅笔绘图，用铅笔绘图，线条要明确清晰，线条要明确清晰，图的深浅明暗一律以点的疏密来表示，图的深浅明暗一律以点的疏密来表示，点要圆而一致点要圆而一致，不得涂暗影或进行其它美术加工。不得涂暗影或进行其它美术加工。三、各部结构名称要在一侧引直线注明三、各部结构名称要在一侧引直线注明。各引线要平行不得交叉。各引线要平行不得交叉。四、每幅图的大小、位置在纸面上必须安排得当并注意纸面的整洁。四、每幅图的大小、位置在纸面上必须安排得当并注意纸面的整洁。5实验一 实验一 动物细胞的基本形态观察和显微测量动物细胞的基本形态观察和显微测量 【实验目的】【实验目的】制备不同细胞的临时制片制备不同细胞的临时制片，观察，观察、了解细胞的基本形态、了解细胞的基本形态，学会使用测微尺，学会使用测微尺，通过测量，通过测量 对红细胞的进化进行分析。对红细胞的进化进行分析。【实验用品】【实验用品】一、材料和标本 一、材料和标本 蟾蜍一只，人血液一滴。蟾蜍一只，人血液一滴。二二、器材和仪器、器材和仪器 配有目镜测微尺的显微镜一台、配有目镜测微尺的显微镜一台、载片十张、载片十张、盖片三张、盖片三张、吸水纸吸水纸、手、手 术器材一套、解剖盘一个、镜台测微尺一个、小平皿一个、牙签。术器材一套、解剖盘一个、镜台测微尺一个、小平皿一个、牙签。三、试剂 三、试剂 1甲苯胺兰、1甲基兰、Ringer 1甲苯胺兰、1甲基兰、Ringer 氏液(两栖类用)。氏液(两栖类用)。【实验内容】【实验内容】一、细胞的基本形态观察一、细胞的基本形态观察 (一)原理(一)原理 细胞的形态结构与功能相关是很多细胞的共同特点，细胞的形态结构与功能相关是很多细胞的共同特点，在分化程度较高的细胞更为明显，在分化程度较高的细胞更为明显，这种合理性是生物漫长进化过程所形成的。例如：这种合理性是生物漫长进化过程所形成的。例如：具有收缩机能的肌细胞伸展为细长形；具有收缩机能的肌细胞伸展为细长形；具有感受刺激和传导冲动机能的神经细胞有长短不一的树枝状突起；具有感受刺激和传导冲动机能的神经细胞有长短不一的树枝状突起；游离的血细胞为圆形、游离的血细胞为圆形、椭圆形或圆饼形。椭圆形或圆饼形。不论细胞的形状如何不论细胞的形状如何，细胞的结构一般分为三大部分：，细胞的结构一般分为三大部分：细胞膜细胞膜、细胞质和细胞核。但、细胞质和细胞核。但 也有例外。例如：哺乳类红细胞成熟时细胞核消失。也有例外。例如：哺乳类红细胞成熟时细胞核消失。(二)观察方法与结果(二)观察方法与结果 1制备蟾蜍脊髓压片观察脊髓前角运动神经细胞。1制备蟾蜍脊髓压片观察脊髓前角运动神经细胞。取蟾蜍一只，取蟾蜍一只，破坏脑和脊髓，在口裂处剪去头部，破坏脑和脊髓，在口裂处剪去头部，除去延脑，除去延脑，剪开椎管，剪开椎管，可见乳白色 可见乳白色 脊髓，脊髓，取下脊髓放在平皿内取下脊髓放在平皿内，用 用 Ringer Ringer 氏溶液洗去血液后放在载玻片上，氏溶液洗去血液后放在载玻片上，剪碎剪碎。将另一载 将另一载 玻玻片压在脊髓碎块上片压在脊髓碎块上，用力挤压，用力挤压。将上面的载。将上面的载玻片取下即可得到压片。在压片上滴一滴甲 玻片取下即可得到压片。在压片上滴一滴甲 苯胺兰染液，苯胺兰染液，染色 染色 10 10 分钟，分钟，盖上盖玻片，盖上盖玻片，用吸水纸用吸水纸吸去多余染液。吸去多余染液。在显微镜下观察，在显微镜下观察，染色 染色 较深的小细胞是神经胶质细胞。较深的小细胞是神经胶质细胞。染成兰紫色的染成兰紫色的、大的、大的、有多个突起的细胞是脊髓前角运动 有多个突起的细胞是脊髓前角运动 神经细胞，胞体呈三角形或星形，中央有一个圆形细胞核，内有一个核仁(参照照片)。神经细胞，胞体呈三角形或星形，中央有一个圆形细胞核，内有一个核仁(参照照片)。2蟾蜍骨骼肌细胞的剥离与观察 2蟾蜍骨骼肌细胞的剥离与观察 剪开蟾蜍腿部皮肤，剪开蟾蜍腿部皮肤，剪下一小块肌肉剪下一小块肌肉，放在载片上，放在载片上，用镊子和解剖针剥离肌肉块成为，用镊子和解剖针剥离肌肉块成为 肌束，继续剥离，可得到很细的肌纤维肌束，继续剥离，可得到很细的肌纤维(肌细胞)(肌细胞)。尽可能拉直肌纤维。在显微镜下观察，。尽可能拉直肌纤维。在显微镜下观察，肌细胞为细长形，肌细胞为细长形，可见折光不同的横纹，可见折光不同的横纹，每个肌细胞有多个核，每个肌细胞有多个核，分布于细胞的周边(参照照 分布于细胞的周边(参照照 片)。片)。3蟾蜍肝脏压片的制备与观察 3蟾蜍肝脏压片的制备与观察 剪开蟾蜍腹腔，取一小块(约 剪开蟾蜍腹腔，取一小块(约 23mm 23mm 3 3)肝放在平皿内)肝放在平皿内，用，用 Ringer Ringer 氏液洗净，用镊子轻 氏液洗净，用镊子轻 压将肝中的血挤出。压将肝中的血挤出。然后放在载片上，然后放在载片上，制片方法同脊髓压片。制片方法同脊髓压片。染色用甲基兰。显微镜下观 染色用甲基兰。显微镜下观 察可见肝细胞核染成兰色，肝细胞紧密排列，挤成多角形(参照照片)。察可见肝细胞核染成兰色，肝细胞紧密排列，挤成多角形(参照照片)。4蟾蜍血涂片的制备与观察 4蟾蜍血涂片的制备与观察 取一滴蟾蜍血液，靠近一端滴在载片上将另一载片的一端呈 取一滴蟾蜍血液，靠近一端滴在载片上将另一载片的一端呈 45角紧贴在血滴的前 45角紧贴在血滴的前 缘，缘，均匀用力向前推，均匀用力向前推，使血液在载片上形成均匀的薄层。使血液在载片上形成均匀的薄层。(图(图 l l 一 一 1)。1)。晾干。晾干。显微镜观察可 显微镜观察可 见蟾蜍红细胞为椭球形，有核。白细胞数目少，为圆形。见蟾蜍红细胞为椭球形，有核。白细胞数目少，为圆形。6图 图 11 11 血涂片的制备 血涂片的制备 5人血涂片的制备与观察 5人血涂片的制备与观察 取人血一滴，取人血一滴，制片方法同上。显微镜观察可见人红细胞为凹圆盘形制片方法同上。显微镜观察可见人红细胞为凹圆盘形，无核，无核。自细胞数。自细胞数 目少，为圆形。目少，为圆形。6人口腔上皮细胞标本的制备与观察 6人口腔上皮细胞标本的制备与观察 用牙签刮取口腔上皮细胞均匀地涂在载片上用牙签刮取口腔上皮细胞均匀地涂在载片上(不可反复涂沫)，(不可反复涂沫)，滴一滴甲苯胺兰染液，滴一滴甲苯胺兰染液，染色 染色 5 5 分钟，盖上盖片，分钟，盖上盖片，吸去多余染液。显微镜下观察可见复盖口腔表面的上皮细胞为扁 吸去多余染液。显微镜下观察可见复盖口腔表面的上皮细胞为扁 平椭圆形，中央有椭圆形核，染成兰色平椭圆形，中央有椭圆形核，染成兰色。二、测微尺的使用二、测微尺的使用 (一)原理(一)原理 测微尺分目镜测微尺和镜台测微尺，测微尺分目镜测微尺和镜台测微尺，两尺配合使用。两尺配合使用。目镜测微尺是一目镜测微尺是一个放在目镜像平 个放在目镜像平 面上的玻璃圆片。圆片中央刻有一条直线，此线被分为若干格面上的玻璃圆片。圆片中央刻有一条直线，此线被分为若干格，每格代表的长度随不同物，每格代表的长度随不同物 镜的放大倍数而异。镜的放大倍数而异。因此，因此，用前必须测定。镜台测微尺是在一个载片中央封固的尺，用前必须测定。镜台测微尺是在一个载片中央封固的尺，长 1 长 1 毫米(1000m)，被分为 毫米(1000m)，被分为 100 100 格，每格长度是 格，每格长度是 10 10 微米微米。(二)方法(二)方法 11将镜台测微尺放在显微镜的载物台上夹好，将镜台测微尺放在显微镜的载物台上夹好，小心转动目镜测微尺和移动镜台测微尺 小心转动目镜测微尺和移动镜台测微尺 使两尺平行，记录镜台测微尺若干格所对应的目镜测微尺的格数(图 使两尺平行，记录镜台测微尺若干格所对应的目镜测微尺的格数(图 12)。12)。2按下式求出目镜测微尺每格代表的长度 2按下式求出目镜测微尺每格代表的长度 目镜测微尺每格代表的长度(m)=目镜测微尺每格代表的长度(m)=X10X10 三、测量人口腔上皮细胞三、测量人口腔上皮细胞 从显微镜载物台上取下镜台测微尺，从显微镜载物台上取下镜台测微尺，换上人口腔上皮细胞标本换上人口腔上皮细胞标本，测量细胞，测量细胞、细胞核的、细胞核的 长短径。长短径。【作【作 业】业】一、分别求出使用低倍镜(10X)，高倍镜(40X)时目镜测微尺每格代表的长度：一、分别求出使用低倍镜(10X)，高倍镜(40X)时目镜测微尺每格代表的长度：低倍镜：目镜测微尺每格代表的长度=XlO(m)=低倍镜：目镜测微尺每格代表的长度=XlO(m)=m m 高倍镜：目镜测微尺每格代表的长度=XlO(m)=高倍镜：目镜测微尺每格代表的长度=XlO(m)=m m 二、分别绘制所观察的 二、分别绘制所观察的 6 6 种细胞并注明基本结构。种细胞并注明基本结构。三、计算蟾蜍红细胞的核质比例。三、计算蟾蜍红细胞的核质比例。计算细胞、细胞核体积的公式：计算细胞、细胞核体积的公式：圆 圆 形 V=4/3r 形 V=4/3r 3 3(r(r 为半径)为半径)椭圆形 V=4/3ab 椭圆形 V=4/3ab 2 2(a、b(a、b 为长、短半径)为长、短半径)核质比 ND=Vn(VcVn)(Vn 核质比 ND=Vn(VcVn)(Vn 为核的体积，Vc为核的体积，Vc 是细胞质的体积)是细胞质的体积)7实验二 实验二 细胞生理活动的实验观察细胞生理活动的实验观察 【实验目的】【实验目的】通过制片与观察加深理解细胞的运动、吞噬等生理活动。通过制片与观察加深理解细胞的运动、吞噬等生理活动。【实验用品】【实验用品】一、材料和标本 一、材料和标本 雄性蟾蜍、小白鼠、l鸡血悬液、6淀粉肉汤、草履虫。雄性蟾蜍、小白鼠、l鸡血悬液、6淀粉肉汤、草履虫。二、二、器材和仪器 器材和仪器 光镜、光镜、2ml 2ml 注射器、注射器、载玻片载玻片、盖玻片、盖玻片、解剖器材、解剖器材、滴管、滴管、移液管、移液管、试 试 管、玻璃片、黑纸。管、玻璃片、黑纸。三、试剂 三、试剂 0.3台盼兰、1刚果红。0.3台盼兰、1刚果红。【实验内容】【实验内容】一、细胞的吞噬活动一、细胞的吞噬活动 (一)原理(一)原理 白细胞是机体防御系统中能游走的单位。白细胞是机体防御系统中能游走的单位。它分为粒细胞系、它分为粒细胞系、单核细胞系单核细胞系、淋巴系三类。淋巴系三类。它们有许多生理功能它们有许多生理功能，如游走性，如游走性、变形运动、变形运动、趋化性、趋化性、吞噬异物等吞噬异物等。在白细胞中。在白细胞中，以粒细，以粒细 胞胞、单核细胞的吞噬活动较强，、单核细胞的吞噬活动较强，故称此二类细胞为吞噬细胞。故称此二类细胞为吞噬细胞。单核细胞由血液进入组织后 单核细胞由血液进入组织后 逐渐演变成巨噬细胞逐渐演变成巨噬细胞。吞噬细胞主要靠吞噬来处理异物。吞噬细胞主要靠吞噬来处理异物。吞噬细胞首先由于趋化作用而向。吞噬细胞首先由于趋化作用而向 异物游走异物游走，然后伸出伪足包围异物，并发生内吞作用形成吞噬泡将异物吞入细胞，然后伸出伪足包围异物，并发生内吞作用形成吞噬泡将异物吞入细胞，继而溶，继而溶 酶体与吞噬泡融合消化异物。酶体与吞噬泡融合消化异物。(二)小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察(二)小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察 ll实验前二天，实验前二天，每天向小鼠腹腔注射 每天向小鼠腹腔注射 6淀粉肉汤 6淀粉肉汤 OO51ml(含 51ml(含 OO3台盼兰，3台盼兰，起标 起标 记作用)，以刺激腹腔产生较多的巨噬细胞(此步由教师在实验前进行完毕)。记作用)，以刺激腹腔产生较多的巨噬细胞(此步由教师在实验前进行完毕)。2实验时，每组取一只经上述处理的小鼠，腹腔注射 2实验时，每组取一只经上述处理的小鼠，腹腔注射 1鸡血悬液 1鸡血悬液 051ml，注射 051ml，注射 后轻揉小鼠腹部以使红细胞悬液分散均匀。后轻揉小鼠腹部以使红细胞悬液分散均匀。31 31 小时后，用颈椎脱位法处死小鼠，迅速剖开小鼠腹壁，向腹腔注入 小时后，用颈椎脱位法处死小鼠，迅速剖开小鼠腹壁，向腹腔注入 O5ml1ml O5ml1ml 生理盐水，用牙签轻轻搅拌使生理盐水与腹腔液混匀生理盐水，用牙签轻轻搅拌使生理盐水与腹腔液混匀。4用注射器抽取腹腔液，滴片，然后盖上盖片4用注射器抽取腹腔液，滴片，然后盖上盖片。5镜检，高倍镜下画图记录所见结果。5镜检，高倍镜下画图记录所见结果。二、暗视野观察细胞的纤毛和鞭毛运动二、暗视野观察细胞的纤毛和鞭毛运动 (一)原理(一)原理 暗视野照明法是一种不使照射被检物体的光线直接进入物镜的照明方法。暗视野照明法是一种不使照射被检物体的光线直接进入物镜的照明方法。常常用它来 常常用它来 观察没有染色的活体细胞或胶体粒子。观察没有染色的活体细胞或胶体粒子。利用此照明法，利用此照明法，在镜检时不能直接看到通过标本的 在镜检时不能直接看到通过标本的 照明光线照明光线，只有被检物体反射或衍射的光线进入物镜可以提高分辨率，在暗视野中可以看，只有被检物体反射或衍射的光线进入物镜可以提高分辨率，在暗视野中可以看 到明亮的被检物体的存在和运动，但它们的内部结构却看不清楚。到明亮的被检物体的存在和运动，但它们的内部结构却看不清楚。(二)自制遮光板变普通显微镜为“简单的暗视野显微镜”。(二)自制遮光板变普通显微镜为“简单的暗视野显微镜”。步骤：步骤：1将显微镜聚光器调到最高位，用低倍镜调焦至清楚。1将显微镜聚光器调到最高位，用低倍镜调焦至清楚。2取下目镜，从镜筒中观察并调节光圈的大小，使其与镜筒中所见物镜的视野相等。2取下目镜，从镜筒中观察并调节光圈的大小，使其与镜筒中所见物镜的视野相等。3放一块透明玻璃于载物台透光孔上，3放一块透明玻璃于载物台透光孔上，用尺子测量光圈孔径。用尺子测量光圈孔径。4按照图 4按照图 6-1 6-1 的形状，用黑纸剪成与调节后光圈孔径一样大小的中央遮光板。的形状，用黑纸剪成与调节后光圈孔径一样大小的中央遮光板。5将中央遮光板放置在显微镜的滤光框上，即可进行标本的暗视野观察。5将中央遮光板放置在显微镜的滤光框上，即可进行标本的暗视野观察。注：如果使用高倍镜观察标本时，应按高倍镜调焦的视野大小重新制作中央遮光板。注：如果使用高倍镜观察标本时，应按高倍镜调焦的视野大小重新制作中央遮光板。8图 图 61 61 中央遮光板 中央遮光板 a光圈孔径 a光圈孔径 b滤光片直径 b滤光片直径(三)观察蟾蜍上颌粘膜上皮细胞的纤毛运动(三)观察蟾蜍上颌粘膜上皮细胞的纤毛运动 步骤：步骤：1用捣毁脑脊髓的方法处死蟾蜍。1用捣毁脑脊髓的方法处死蟾蜍。2腹部向上将蟾蜍固定在蜡盘上。2腹部向上将蟾蜍固定在蜡盘上。3沿蟾蜍二侧口角向后剪开约 3沿蟾蜍二侧口角向后剪开约 l l 厘米厘米，将下颌翻转固定在腹部。，将下颌翻转固定在腹部。44在上颌中线距喉头 在上颌中线距喉头 1 1 厘米处放置腊屑，厘米处放置腊屑，观察腊屑向什么方向移动？记录腊屑开始移 观察腊屑向什么方向移动？记录腊屑开始移 动到消失的时间(见图 动到消失的时间(见图 6-2 6-2 蟾蜍口腔内面图)。蟾蜍口腔内面图)。5然后，用眼科剪刀剪取咽头前部的上颌粘膜约 5然后，用眼科剪刀剪取咽头前部的上颌粘膜约 22cm 22cm 2 2 小块，用牙签挑取剪下的粘 小块，用牙签挑取剪下的粘 膜，将纵切面贴于载片上。膜，将纵切面贴于载片上。6加一滴生理盐水于载玻片标本上6加一滴生理盐水于载玻片标本上，加盖玻片，加盖玻片，镜检。，镜检。图 图 62 62 蟾蜍口腔内面图 蟾蜍口腔内面图 结果：结果：1在低倍镜下观察上颌粘膜细胞纤毛运动的现象。1在低倍镜下观察上颌粘膜细胞纤毛运动的现象。2换高倍镜仔细观察纤毛有规律的运动。2换高倍镜仔细观察纤毛有规律的运动。(四)暗视野观察蟾蜍精子的鞭毛运动(四)暗视野观察蟾蜍精子的鞭毛运动 步骤：步骤：l将前面实验所用蟾蜍沿腹中线开腹，暴露出黄色圆柱状精巢。l将前面实验所用蟾蜍沿腹中线开腹，暴露出黄色圆柱状精巢。2剪取一侧精巢于盛有自来水的平皿中，用镊子夹住精巢的一端，清洗去血污。2剪取一侧精巢于盛有自来水的平皿中，用镊子夹住精巢的一端，清洗去血污。33移取洗净的精巢于另一干净的平皿上，移取洗净的精巢于另一干净的平皿上，用眼科剪将精巢充分剪碎后，用眼科剪将精巢充分剪碎后，加入数滴自来 加入数滴自来 水混匀。水混匀。4用吸管吸取平皿内液体，滴一滴于载玻片上4用吸管吸取平皿内液体，滴一滴于载玻片上，盖上盖玻片，稍待，盖上盖玻片，稍待 223 3 分钟于镜下 分钟于镜下 观察。观察。9结果：结果：1在低倍镜下可见到视野中有许多精子：头部呈长锥形，尾为细长的线状结构。1在低倍镜下可见到视野中有许多精子：头部呈长锥形，尾为细长的线状结构。22置高倍镜下观察：置高倍镜下观察：可见有许多靠尾部鞭毛弯曲摆动驱使而运动的精子，可见有许多靠尾部鞭毛弯曲摆动驱使而运动的精子，测量鞭毛长 测量鞭毛长 度。度。三、草履虫纤毛运动及食物泡的形成三、草履虫纤毛运动及食物泡的形成图 图 63 63 草履虫 草履虫 草履虫是一种单细胞动物。虫体由一个细胞组成草履虫是一种单细胞动物。虫体由一个细胞组成，能执行复杂的生理功能。，能执行复杂的生理功能。其体表，其体表，均匀密布纤毛，均匀密布纤毛，为运动细胞器。为运动细胞器。身体的前部有口沟，身体的前部有口沟，由前端斜向伸至体中部由前端斜向伸至体中部，口沟的底部为胞口，口沟的底部为胞口，下部一短管斜向后部而入胞质下部一短管斜向后部而入胞质，称胞咽。，称胞咽。纤毛有规律的摆动纤毛有规律的摆动使食物在 使食物在 胞咽聚结形成食物泡胞咽聚结形成食物泡(吞噬泡)(吞噬泡)，最后脱离胞咽入胞质。，最后脱离胞咽入胞质。食物泡随细胞质由体后端到前端不 食物泡随细胞质由体后端到前端不 停环流，并与溶酶体(含酸性水解酶)融合，停环流，并与溶酶体(含酸性水解酶)融合，行使细胞内消化。行使细胞内消化。根据食物泡中刚果红指示剂的颜色变化(酸性时根据食物泡中刚果红指示剂的颜色变化(酸性时，为红色；为红色；近中性时，近中性时，为黄色；为黄色；碱性时，碱性时，为蓝色)。可以观察到消化过程。为蓝色)。可以观察到消化过程。实验步骤：实验步骤：11取一滴草履虫培养液于载玻片上，取一滴草履虫培养液于载玻片上，放上几根棉花纤维，放上几根棉花纤维，以减慢草履虫的运动以减慢草履虫的运动。加盖 加盖 玻片，制成临时装片。玻片，制成临时装片。22观察草履虫的运动方式(观察时光线可调暗些观察草履虫的运动方式(观察时光线可调暗些)：)：可见镜下有许多样似倒置鞋底的草 可见镜下有许多样似倒置鞋底的草 履虫，体表纤毛不断摆动，虫体以其中轴左旋前进，履虫，体表纤毛不断摆动，虫体以其中轴左旋前进，若遇阻力则试触后即刻回避而转向。若遇阻力则试触后即刻回避而转向。3观察草履虫的食物泡的形成：3观察草履虫的食物泡的形成：1)在盖玻片一侧加一滴 1)在盖玻片一侧加一滴 l的刚果红指示剂，l的刚果红指示剂，用吸水纸从另一侧吸引使指示剂进入盖片 用吸水纸从另一侧吸引使指示剂进入盖片 下方，选一运动较迟缓的草履虫，移入高倍镜观察吞噬活动。下方，选一运动较迟缓的草履虫，移入高倍镜观察吞噬活动。2)2)几分钟后可见草履虫体内出现许多红色食物泡，几分钟后可见草履虫体内出现许多红色食物泡，随着食物泡不停的在胞质中环流，随着食物泡不停的在胞质中环流，食物不断消化食物不断消化，泡内酸性减弱或近中性，泡内酸性减弱或近中性，颜色渐渐呈黄色，食物泡渐小，颜色渐渐呈黄色，食物泡渐小，最后食物泡颜色最后食物泡颜色10呈蓝色，不能被消化的残渣，环流到身体后部的胞肛排出，不排出时不易见到胞肛。呈蓝色，不能被消化的残渣，环流到身体后部的胞肛排出，不排出时不易见到胞肛。【作【作 业】业】11画图记录细胞吞噬实验所画图记录细胞吞噬实验所见结果，见结果，小鼠巨噬细胞吞噬实验如何解释细胞内台盼兰的 小鼠巨噬细胞吞噬实验如何解释细胞内台盼兰的 着色？着色？2在观察细胞纤毛和鞭毛运动实验中,记录一下腊屑从开始运动到消失的时间。2在观察细胞纤毛和鞭毛运动实验中,记录一下腊屑从开始运动到消失的时间。3鞭毛和纤毛有何异同？3鞭毛和纤毛有何异同？11实验三 实验三 线粒体(Mitochondrion)和液泡系 线粒体(Mitochondrion)和液泡系(Vacuolar system)的活体染色及(Vacuolar system)的活体染色及观察观察 【实验目的】【实验目的】1、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、1、观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布；数量与分布；2、学习一些细胞器的超活染色技术。2、学习一些细胞器的超活染色技术。【实验用品】【实验用品】一、实验材料 一、实验材料 人口腔上皮细胞，人口腔上皮细胞，小麦种子或黄豆幼根根尖。小麦种子或黄豆幼根根尖。二、二、器材和仪器 器材和仪器 显微镜、显微镜、恒温水浴锅、恒温水浴锅、解剖盘、解剖盘、剪刀、剪刀、镊子、镊子、双面刀片、双面刀片、解剖盘解剖盘载玻 载玻 片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。片、凹面载玻片、盖玻片、表面皿、吸管、牙签、吸水纸。三、三、试剂 试剂（1）Ringer（1）Ringer 溶液：溶液：氯化钠 0.85g(变温动物用 氯化钠 0.85g(变温动物用 0.65g)0.65g)氯化钾 0.25g 氯化钾 0.25g 氯化钾 0.25g 氯化钾 0.25g 氯化钙 0.03g 氯化钙 0.03g 蒸馏水 100ml 蒸馏水 100ml（2）10%、1/3000（2）10%、1/3000 中性红溶液：中性红溶液：称取 称取 0.5g 0.5g 中性红溶于 中性红溶于 50ml Ringer 50ml Ringer 液，稍加热(3040)使之很快溶解，用滤纸 液，稍加热(3040)使之很快溶解，用滤纸 过过滤，滤，装入棕色瓶于暗处保存装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，否则易氧化沉淀，失去染色能力。失去染色能力。临用前，临用前，取已配 取已配 制的 制的 1%中性红溶液 1%中性红溶液 1ml，加入 1ml，加入 29ml Ringer 29ml Ringer 溶液混匀溶液混匀，装入棕色瓶备用。，装入棕色瓶备用。（3）1%、1/5000（3）1%、1/5000 詹纳斯绿 詹纳斯绿 B B 溶液 溶液 称取 称取 50mg 50mg 詹纳斯绿 詹纳斯绿 B B 溶于 溶于 5ml Ringer 5ml Ringer 溶液中，稍加微热(3040)，使之溶解，溶液中，稍加微热(3040)，使之溶解，用滤纸过滤后，即为 用滤纸过滤后，即为 1%原液。1%原液。取 取 1%原液 1%原液 l ml l ml 加入 加入 49ml Ringer 49ml Ringer 溶液，即成 溶液，即成 1/5000 1/5000 工作液装入瓶中备用。最好现用现配，工作液装入瓶中备用。最好现用现配，以保持它的充分氧化能力。以保持它的充分氧化能力。【实验内容】【实验内容】原 理 原 理 活体染色是能使生活有机体的细胞或组织特异性着色但对活样品又没有毒害作用的一 活体染色是能使生活有机体的细胞或组织特异性着色但对活样品又没有毒害作用的一 种活体染色方法，其目的是显示生活细胞内的某些结构种活体染色方法，其目的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生，而不影响细胞的生命活动和产生 任何物理任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形、化学变化以致引起细胞的死亡。活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞形 态结构和生理态结构和生理、病理状态。、病理状态。通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。通常把活体染色分为体内活体染色与体外活体染色两类。体外 体外 活体染色又称超活染色，它是由活的动活体染色又称超活染色，它是由活的动、植物分离出部分细胞或组织小块、植物分离出部分细胞或组织小块，以染料溶液浸，以染料溶液浸 染染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。活体染料之所以能固定、堆积在细胞。活体染料之所以能固定、堆积在细胞 内某些特殊的部分，内某些特殊的部分，主要是靠染料的“主要是靠染料的“电化学电化学”特性。”特性。碱性染料的胶粒表面带阳离子碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸，酸 性染料的胶粒表面带有阴离子，性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们 它们 彼此之间就发生了吸引作用彼此之间就发生了吸引作用。但并非任何染料均可用于活体染色，。但并非任何染料均可用于活体染色，理论上应选择那些对细 理论上应选择那些对细 胞无毒性或毒性极小的染料胞无毒性或毒性极小的染料，且使用时需要配成稀淡的溶液。，且使用时需要配成稀淡的溶液。一般说来，一般说来，最为适用的是碱 最为适用的是碱 性染料，性染料，这可能是因为它具有溶解在类脂质(这可能是因为它具有溶解在类脂质(如卵磷脂如卵磷脂、胆固醇等、胆固醇等)的特性，易于被细胞吸)的特性，易于被细胞吸12收。詹纳斯绿 收。詹纳斯绿 B(Janus green B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重 B(Janus green B)和中性红(neutral red)两种碱性染料是活体染色剂中最重 要的染料，对于线粒体和液泡系的染色分别具有专一性。要的染料，对于线粒