DB34∕T 814-2023 饲料中硒的测定 原子荧光法(安徽省).pdf

ICS 65.120 CCS B 46 34 安徽省地方标准 DB34/T 8142023 代替 DB34/T 814-2008 饲料中硒的测定 原子荧光法 Determination of selenium in feeds by atomic fluorescence method 2023-10-07 发布 2023-11-07 实施 安徽省市场监督管理局 发 布 DB34/T 8142023 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件代替 DB34/T 814-2008 饲料中硒的测定 原子荧光法，与 DB34/T 814-2008 相比，除结构性调整和编辑性改动外，主要技术变化如下：a)修改了5.8条，试剂中增加了硼氢化钾（见5.8，2008版的4.7）；b)增加了“检测方法的灵敏度、准确度和精密度”（见第10章）。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由安徽省兽药饲料监察所提出。本文件由安徽省农业农村厅归口。本文件起草单位：安徽省兽药饲料监察所、合肥中龙神力动物药业有限公司、安徽农业大学、安徽省农业科学院畜牧兽医研究所、萧县孙圩子镇畜牧兽医站、萧县动物疫病预防和控制中心、芜湖市弋江区农业服务中心。本文件主要起草人：丁在亮、马心玲、高翔、刘红云、邢丽、宋亚伟、付艳伟、宋祥军、马瑞钰、赵士朝、王梦云、陈婷霞。本文件所代替文件的历次版本发布情况为：2008年首次发布为 DB34/T 814-2008；本次为第一次修订。DB34/T 8142023 1 饲料中硒的测定 原子荧光法 1 范围 本文件规定了原子荧光法测定饲料中硒的原理、试剂、仪器、分析步骤、结果处理与表述、检测方法的灵敏度、准确度和精密度。本文件适用于饲料中硒的测定。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。4 原理 试样经酸加热消解后，在 6 mol/L 盐酸(HCl)介质中，将试样中的六价硒（Se6+）还原成四价硒（Se4+），用硼氢化钠(NaBH4)或硼氢化钾(KBH4)作还原剂，将四价硒（Se4+）在盐酸介质中还原成硒化氢(H2Se)，由载气(氩气)带入原子化器中进行原子化，在硒特制空心阴极灯照射下，基态硒原子被激发至高能态，在去活化回到基态时，发射出特征波长的荧光，其荧光强度与硒含量成正比。与标准系列比较定量。5 试剂 实验室用水应符合 GB/T 6682 中二级用水的规格，使用的试剂除另有说明外，应为分析纯。5.1 硝酸(HNO3)，优级纯。5.2 高氯酸(HClO4),优级纯。5.3 盐酸(HCl)，优级纯。5.4 6 mol/mL 盐酸溶液：取 500 mL 用水稀释至 1000 mL，摇匀。5.5 混合酸:硝酸+高氯酸(4+1)混合酸。5.6 氢氧化钠溶液：称取 10.0 g 分析纯氢氧化钠（NaOH）用水溶解，然后稀释至 1000 mL，摇匀。5.7 硼氢化钾（或硼氢化钠）溶液(8 g/L):称取 8.0 g 硼氢化钠(NaBH4)或 硼氢化钾(KBH4)，溶于5.8 氢氧化钠溶液（5.7）中，然后用氢氧化钠溶液（5.7）稀释至 1000 mL。铁氰化钾(100 g/L):称取 10.0 g 铁氰化钾(K3Fe(CN)6),溶于 100 mL 水中，混匀。5.9 硒标准储备液:精确称取 100.0 mg 硒(光谱纯)，溶于 10 mL 硝酸中，加 2 mL 高氯酸（5.3），5.10 置水浴中加热 3 h4 h，冷却至室温后再加 8.4 mL 盐酸（5.4），然后置沸水浴中 2 min，冷却至室DB34/T 8142023 2 温后，稀释至 1000 mL，此储备液浓度为每毫升相当于 100 g 硒。贮存于 0 4 冰箱中，备用。或者有证的商品标准储备溶液。硒标准工作液:取 100 g/mL 硒标准储备液 1.0 mL，稀释至 100 mL，此标准工作液浓度为 1 5.11 g/mL，此标准工作液现配现用。6 仪器 原子荧光光度计。6.1 分析天平 分度值 0.0001 g。6.2 自动控温消化炉（室温1000）。6.3 电热板（3000 W）或可调温电炉（600 W）。6.4 7 试样的制备 按照 GB/T 20195 选取有代表性的饲料样品不少于 1000 g，四分法缩减至 200 g，粉碎，使全部通过 0.45 mm 筛，混匀，储存于磨口瓶中阴凉条件下保存备用。8 分析步骤 试样制备 8.1 8.1.1 配合饲料、浓缩饲料、单一饲料的处理：称取 0.5 g2.0 g 样品于 150 mL 高型烧杯内，在通风橱内加 10.0 mL 混合酸(5.6)及几粒玻璃珠，盖上表面皿冷消化，过夜。次日于电热板上加热，并及时补加混合酸（使烧杯内溶液不少于 10.0 mL）。当溶液变为清亮无色并伴有白烟时，再继续加热至剩余体积 2 mL 左右，切不可蒸干。冷却，再加 5 mL 6 mol/L 盐酸(5.5)，继续加热至溶液变为清亮无色并伴有白烟出现，以完全将六价硒（Se6+）还原成四价硒（Se4+）。冷却，转移至 50 mL 容量瓶中，用水稀释到刻度。同时做空白试验，处理好的待测试样溶液应在 7 日内测定。8.1.2 高含量硒样品的处理（预混合饲料、高硒功能性饲料）的处理：对于每千克饲料含硒在 1 mg以上的样品，按（8.1.1）处理后再准确取一定体积溶液再稀释后（使溶液含硒量0.2 g/mL）测定；对于以石粉为载体的预混料，称取 1 g5 g 样品（精确到 0.0001 g），于 150 mL 高型烧杯中，在通风橱内加 10 mL 水后再逐滴加入 10 mL 硝酸（5.2），煮沸至烧杯中溶液剩下 5 mL 左右时再加 10.0 mL 混合酸(5.6)及几粒玻璃珠，盖上表面皿冷消化，过夜。再按（8.1.1）处理后再准确取一定体积溶液再稀释后（使溶液含硒量0.2 g/mL）测定，处理好的待测试样溶液应在 7 日内测定。8.1.3 吸取 10 mL 处理好的待测试样溶液于 15 mL 离心管中，加 6 mol/mL 盐酸(5.5)2 mL，铁氰化钾溶液(5.9)1 mL,混匀待测，处理好的待测试样溶液应在 7 日内测定。标准工作液的配制 8.2 分别取0.0 mL,0.1 mL,0.2 mL,0.3 mL,0.4 mL,0.5 mL硒标准工作液（5.11）于 15 mL 离心管中用去离子水稀释至 10 mL,再分别加 6 mol/mL盐酸(5.5)2 mL，铁氰化钾(5.9)1 mL,混匀，制成标准工作液，此标准工作液配置后 7 天内使用。测定 8.3 8.3.1 仪器参考条件:负高压:340 V；灯电流:100 mA；原子化温度:800；炉高:8 mm；载气流速:DB34/T 8142023 3 500 mL/min；屏蔽气流速:1000 mL/min；测量方式:标准曲线法；读数方式:峰面积；延迟时间:1 s；读数时间:15 s；加液时间:8 s；进样体积:2 mL。各实验室可根据自己的仪器性能调整相应的参数。8.3.2 标准工作液的测定：按照 8.3.1 的条件设定好仪器，待炉温升高到设定温度后，稳定 10 min20min 后开始测量。连续用标准工作液（8.2）的零浓度管进样，读数稳定之后，转入标准工作液测量，绘制标准曲线，标准曲线的线性系数 R299.5%，可以进行试样的测定，否则重新测定。8.3.3 试样的测定：绘制标准曲线后转入试样测定，先测定试样空白后，按照设定的进样程序依次测定试样消化液（8.1.3），测定不同的试样前都应清洗进样器。试样测定结果按公式（1）计算。9 结果计算和表述 结果计算 9.1 试样中硒的含量按公式（1）计算。(1)式中：X 试样中硒的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；c 试样消化液测定浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；0c 试样空白消化液测定浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL)；m 试样质量(体积)，单位为克(g)；V 试样消化液总体积，单位为毫升(mL)；1000 换算系数；f 高含量硒样品的稀释倍数，未稀释的样品f值为 1。结果表述 9.2 每个试样平行测定两次，以其算术平均值作为结果。计算结果精确到 0.001 mg/kg（0.001 mg/L）。10 检测方法的灵敏度、准确度和精密度 灵敏度 10.1 本方法的检测限为 3 ng/kg，定量限为 10 ng/kg。准确度 10.2 本方法在 0.01 mg/kg0.5 mg/kg 添加浓度范围内，回收率为 80%110%。精密度 10.3 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的 20%。