第七章 可见分光光度法.ppt

第七章第七章 可见分光光度法可见分光光度法7-1 7-1 概概 述述7-2 7-2 物质对光的选择性吸物质对光的选择性吸收收7-3 7-3 光吸收的基本定律光吸收的基本定律7-4 7-4 分光光度计简介分光光度计简介7-5 7-5 分光光度法的建立分光光度法的建立7-6 7-6 分光光度法的应用分光光度法的应用思考题思考题17-1 7-1 概概 述述 一、吸光光度法一、吸光光度法 在光谱分析中，依据物质对光的在光谱分析中，依据物质对光的选择性吸选择性吸收收而建立起来的分析方法称为吸光光度法。而建立起来的分析方法称为吸光光度法。主要有主要有:红外吸收光谱：红外吸收光谱：分子振动光谱，吸收光波长分子振动光谱，吸收光波长范围范围800800nmnm 5050 m m。主要用于有机化合物结构鉴定。主要用于有机化合物结构鉴定。紫外吸收光谱：紫外吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长电子跃迁光谱，吸收光波长范围范围200200 400 400 nmnm（近紫外区）。近紫外区）。可用于结构鉴定和定量分析。可用于结构鉴定和定量分析。2可见吸收光谱：可见吸收光谱：电子跃迁光谱，吸收光波长范电子跃迁光谱，吸收光波长范围围400400 800800nm nm，主要用于有色物质的定量分析。主要用于有色物质的定量分析。二、吸光光度法的特点：二、吸光光度法的特点：（1 1）灵敏度高；）灵敏度高；（2 2）准确度高；）准确度高；（3 3）操作简便）操作简便快速；快速；（4 4）应用广泛。）应用广泛。37-2 7-2 物质对光的选择性吸收物质对光的选择性吸收一、物质的颜色一、物质的颜色 物质的颜色是由于物质对不同波长的光具有物质的颜色是由于物质对不同波长的光具有选择性吸收而产生的。选择性吸收而产生的。表表7-1 物质的颜色与吸收光颜色的互补关系物质的颜色与吸收光颜色的互补关系45二、光吸收曲线二、光吸收曲线 用不同波长的单色光照射某一吸光物质测用不同波长的单色光照射某一吸光物质测定其吸光度，以波长为横坐标，以吸光度为定其吸光度，以波长为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制曲线。描述物质对不同波长光纵坐标，绘制曲线。描述物质对不同波长光的吸收能力。的吸收能力。6吸收曲线吸收曲线图为图为1,10-1,10-邻二氮杂菲亚铁溶液的吸收曲线，邻二氮杂菲亚铁溶液的吸收曲线，在波长在波长510510nmnm处有最大吸收。处有最大吸收。7吸收曲线的讨论：吸收曲线的讨论：（1 1）一种）一种吸光吸光物质对不同波长的光吸物质对不同波长的光吸收程度收程度不不同。吸光度最大处对应的波长称为最大吸收同。吸光度最大处对应的波长称为最大吸收波长波长maxmax 。吸收曲线是定量分析中选择入射光波长的重吸收曲线是定量分析中选择入射光波长的重要依据。要依据。（2 2）同一种物质浓度不同，其吸收曲线形状相）同一种物质浓度不同，其吸收曲线形状相似似maxmax不变。不变。在在maxmax处处，吸光度吸光度A A正比于浓度正比于浓度C C。测定测定测定测定最灵敏最灵敏（3 3）吸收曲线可以提供物质的结构信息，并作吸收曲线可以提供物质的结构信息，并作为物质定性分析的依据之一。为物质定性分析的依据之一。8（4 4）从吸收曲线形状可以解释物质的颜色。物）从吸收曲线形状可以解释物质的颜色。物质的颜色与吸收光颜色互为补色。质的颜色与吸收光颜色互为补色。光的互补：光的互补：蓝蓝 黄黄97-3 7-3 光吸收的基本定律光吸收的基本定律一、一、Lamber-Beer定律定律 二、吸光系数和吸收光谱二、吸光系数和吸收光谱 三、偏离三、偏离Beer定律的因素定律的因素四、透光率的测量误差四、透光率的测量误差 10一、一、Lamber-Beer定律定律吸收光谱法基本定律吸收光谱法基本定律描述物质对单色光吸收强弱与描述物质对单色光吸收强弱与 液层厚度和待测物浓度的关系液层厚度和待测物浓度的关系假设一束平行单色光通过一个均匀的、非散射假设一束平行单色光通过一个均匀的、非散射的吸光物体的吸光物体 11l取物体中一极薄层取物体中一极薄层12讨论：讨论：1 1LamberLamber-Beer-Beer定律的适用条件（前提）定律的适用条件（前提）入射光为单色光，均匀非散射的稀溶液入射光为单色光，均匀非散射的稀溶液2 2该该定定律律适适用用于于均均匀匀非非散散射射固固体体、液液体体和和气气体体样品样品3 3在同一波长下，各组分吸光度具有加和性在同一波长下，各组分吸光度具有加和性 A=AA=A1 1+A+A2 2+A+An n13二、吸光系数和吸收光谱二、吸光系数和吸收光谱1吸光系数的物理意义：吸光系数的物理意义：单位浓度、单位厚度的吸光度单位浓度、单位厚度的吸光度 讨论：讨论：1）a=f（组分性质，温度，溶剂，组分性质，温度，溶剂，）当组分性质、温度和溶剂一定，当组分性质、温度和溶剂一定，a=f（）2）不同物质在同一波长下不同物质在同一波长下a可能不同（选择性吸收）可能不同（选择性吸收）同一物质在不同波长下同一物质在不同波长下a一定不同一定不同 3）a，物质对光吸收能力物质对光吸收能力,定量测定灵敏度定量测定灵敏度 定性、定量依据定性、定量依据142吸光系数两种表示法：吸光系数两种表示法：1）摩尔吸光系数）摩尔吸光系数：在一定在一定下，下，c=1mol/L，b=1cm时的吸光度时的吸光度 2）百分含量吸光系数）百分含量吸光系数/比吸光系数比吸光系数a：在一定在一定下，下，c=1g/100mL，b=1cm时的吸光度时的吸光度 3）两者关系）两者关系3吸收光谱（吸收曲线）：吸收光谱（吸收曲线）：A最大吸收最大吸收最大吸收最大吸收最小吸收最小吸收最小吸收最小吸收 特征值特征值特征值特征值定性依据定性依据定性依据定性依据肩峰肩峰肩峰肩峰154吸光度测量的条件选择：吸光度测量的条件选择：1）测量波长的选择）测量波长的选择:注：采用空白对比消除因溶剂和容器的吸收、注：采用空白对比消除因溶剂和容器的吸收、光的散射和界面反射等因素对透光率的干扰光的散射和界面反射等因素对透光率的干扰选选选选A=0.151.00A=0.151.002）吸光度读数范围的选择：）吸光度读数范围的选择：3）参比溶液）参比溶液(空白溶液空白溶液)的选择：的选择：16三、偏离三、偏离Beer定律的因素定律的因素l依据依据BeerBeer定律，定律，A A与与C C关系应为经过关系应为经过原点的直线原点的直线l偏离偏离BeerBeer定律的定律的主要因素表现为主要因素表现为以下两个方面以下两个方面（一）光学因素（一）光学因素（二）化学因素（二）化学因素 17（一）光学因素（一）光学因素 1非单色光的影响：非单色光的影响：Beer定律应用的重要前提定律应用的重要前提入射光为单色光入射光为单色光 l照射物质的光经单色照射物质的光经单色器分光后并非真正单器分光后并非真正单色光色光l其其波波长长宽宽度度由由入入射射狭狭缝缝的的宽宽度度和和棱棱镜镜或或光光栅的分辨率决定栅的分辨率决定l为为了了保保证证透透过过光光对对检检测测器器的的响响应应，必必须须保保证一定的狭缝宽度证一定的狭缝宽度l这这就就使使分分离离出出来来的的光光具一定的谱带宽度具一定的谱带宽度1819讨论：入射光的谱带宽度严重影响吸光系数和吸收光入射光的谱带宽度严重影响吸光系数和吸收光谱形状谱形状 结论：结论：选择较纯单色光（选择较纯单色光（，单色性单色性）选选maxmax作为测定波长（作为测定波长（，S S且成线性）且成线性）202杂散光的影响：杂散光的影响：杂杂散散光光是是指指从从单单色色器器分分出出的的光光不不在在入入射射光光谱谱带宽度范围内，与所选波长相距较远带宽度范围内，与所选波长相距较远杂杂散散光光来来源源：仪仪器器本本身身缺缺陷陷；光光学学元元件件污污染染造成造成杂散光可使吸收光谱变形，吸光度变值杂散光可使吸收光谱变形，吸光度变值3反射光和散色光的影响：反射光和散色光的影响：反射光和散色光均是入射光谱带宽度内的光反射光和散色光均是入射光谱带宽度内的光 直接对直接对T T产生影响产生影响散射和反射使散射和反射使TT，AA，吸收光谱变形吸收光谱变形注：一般可用空白对比校正消除注：一般可用空白对比校正消除4非平行光的影响：非平行光的影响：使光程使光程，AA，吸收光谱变形吸收光谱变形21（二）化学因素（二）化学因素lBeer定律适用的另一个前提：稀溶液定律适用的另一个前提：稀溶液l浓度过高会使浓度过高会使C与与A关系偏离定律关系偏离定律22四、透光率的测量误差四、透光率的测量误差T影响测定结果的相对误差两个因素：影响测定结果的相对误差两个因素：T和和T T影响因素：仪器噪音影响因素：仪器噪音 1）暗噪音）暗噪音 2）讯号噪音）讯号噪音231）暗噪音）暗噪音与检测器和放大电路不确切性有与检测器和放大电路不确切性有 关与光讯号无关关与光讯号无关242）讯号噪音）讯号噪音与光讯号有关与光讯号有关 表明测量误差较小的范围 一直可延至较高吸光度区，对测定有利 2512-4 12-4 分光光度计简介分光光度计简介一、主要部件一、主要部件光源单色器样品室检测器显示 261光源：光源：2单色器：单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件包括狭缝、准直镜、色散元件 棱镜棱镜对不同波长的光折射率不同对不同波长的光折射率不同色散元件色散元件 分出光波长不等距分出光波长不等距 光栅光栅衍射和干涉衍射和干涉 分出光波长等距分出光波长等距钨灯或卤钨灯钨灯或卤钨灯可见光源可见光源 3501000nm氢灯或氘灯氢灯或氘灯紫外光源紫外光源 200360nm273吸收池：吸收池：玻璃玻璃能吸收能吸收UV光，仅适用于可见光区光，仅适用于可见光区 石英石英不能吸收紫外光，适用于紫外和可见光区不能吸收紫外光，适用于紫外和可见光区 要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）4检测器：检测器：将光信号转变为电信号的装置将光信号转变为电信号的装置5记录装置：讯号处理和显示系统记录装置：讯号处理和显示系统光电池光电池光电管光电管光电倍增管光电倍增管二极管阵列检测器二极管阵列检测器282912-5 12-5 分光光度法的建立分光光度法的建立一、一、显色反应及显色条件的选择显色反应及显色条件的选择 1.1.显色显色反应反应 将试样中被测组分转化成有色化合将试样中被测组分转化成有色化合物的反应。物的反应。配位化学反应：配位化学反应：如：如：FeFe3+3+与与CNSCNS-反应反应氧化还原反应：氧化还原反应：如：如：MnMn2+2+转化转化MnOMnO4-4-302.2.显色剂显色剂 在显色反应中与被测组分生成有色化合物在显色反应中与被测组分生成有色化合物的试剂。的试剂。无机显色剂：无机显色剂：硫氰酸盐、钼酸铵、过氧化氢硫氰酸盐、钼酸铵、过氧化氢等。等。有机显色剂：有机显色剂：如如三苯甲烷类有铬天青三苯甲烷类有铬天青S S、二甲二甲酚橙等；酚橙等；偶氮偶氮类有类有偶氮胂偶氮胂、PARPAR等等。313.3.有机有机显色剂显色剂的特性的特性与金属离子生成极其稳定的螯合物与金属离子生成极其稳定的螯合物选择性和灵敏度高选择性和灵敏度高应用广泛应用广泛 其特性与有机显色剂的分子结构有密切其特性与有机显色剂的分子结构有密切的关系：的关系：（1 1）生色团（发色团）：）生色团（发色团）：能吸收紫外能吸收紫外-可见光的基团可见光的基团 有有机机化化合合物物：具具有有不不饱饱和和键键和和未未成成对对电电子子的的基基团团,具具有有n n电电子子和和电电子子的的基基团团产产生生n n*跃迁和跃迁和*跃迁跃迁跃迁跃迁E E较低较低例：例：C CC C；C CO O；C CN N；NNN N 32（2 2）助助色色团团：本本身身无无紫紫外外吸吸收收，但但可可以以使使生生色色团吸收峰加强同时使吸收峰长移的基团团吸收峰加强同时使吸收峰长移的基团有机物：连有杂原子的饱和基团有机物：连有杂原子的饱和基团例：例：OHOH，OROR，NHNH，NRNR2 2，XX（3 3）红移和蓝移：）红移和蓝移：由由于于化化合合物物结结构构变变化化（共共轭轭、引引入入助助色色团团取代基）或采用不同溶剂后取代基）或采用不同溶剂后 吸收峰位置向长波方向的移动，叫红移（长移）吸收峰位置向长波方向的移动，叫红移（长移）吸吸收收峰峰位位置置向向短短波波方方向向移移动动，叫叫蓝蓝移移（紫紫移移，短移）短移）33（4 4）增色效应和减色效应）增色效应和减色效应 增色效应：吸收强度增强的效应增色效应：吸收强度增强的效应 减色效应：吸收强度减小的效应减色效应：吸收强度减小的效应（5 5）强带和弱带：）强带和弱带：maxmax10105 5 强带强带 maxmax1060 60nmnm。345 5、显色显色条件的条件的选择选择（1 1）显色剂用量：显色剂用量：固定待测组分固定待测组分的浓度和其他条件的浓度和其他条件只改变显色剂浓度只改变显色剂浓度测定测定吸光度吸光度。做。做A-A-剂用量剂用量 c cR R的关系曲线如图。的关系曲线如图。选择曲线变化平坦处作为显色条件。选择曲线变化平坦处作为显色条件。（2 2）溶液的溶液的pHpH值值 固定待测组分的浓度和其他条件只改变溶固定待测组分的浓度和其他条件只改变溶液的液的pHpH值测定值测定吸光度吸光度。做。做A-pHA-pH曲线，曲线，选择曲选择曲线中吸光度较大且恒定的平坦区所对应的线中吸光度较大且恒定的平坦区所对应的pHpH范围范围。吸光度与显色剂用量关系曲线cRcRcRAAA35（3 3）显色温度显色温度 固定待测组分的浓度和其他条件只改变反固定待测组分的浓度和其他条件只改变反应温度，测定应温度，测定吸光度吸光度。做。做A-TA-T曲线，曲线，选择曲线选择曲线中吸光度较大且恒定的平坦区所对应的中吸光度较大且恒定的平坦区所对应的温度温度范范围围。（4 4）显色显色时间及稳定时间时间及稳定时间 固定待测组分的浓度和其他条件只改变反固定待测组分的浓度和其他条件只改变反应的时间，测定应的时间，测定吸光度吸光度。做。做A-tA-t曲线，曲线，选择曲选择曲线中吸光度较大且恒定的平坦区所对应的线中吸光度较大且恒定的平坦区所对应的时间时间范围范围。pHA 图12-9 吸光度与pH关系曲线36二、干扰的消除二、干扰的消除1.1.加入掩蔽剂加入掩蔽剂选择掩蔽剂的原则是：掩蔽剂不与待测组分选择掩蔽剂的原则是：掩蔽剂不与待测组分反应；掩蔽剂本身及掩蔽剂与干扰组分的反应产反应；掩蔽剂本身及掩蔽剂与干扰组分的反应产物不干扰待测组分的测定。物不干扰待测组分的测定。例：测定例：测定TiTi4 4，加加入入H H3 3POPO4 4掩蔽剂使掩蔽剂使FeFe3+3+(黄色黄色)成为成为Fe(POFe(PO)2 23-3-(无色无色)，消除，消除FeFe3+3+的干扰的干扰。2.2.分离干扰离子分离干扰离子采用适当的分离方法预先除去干扰物质。采用适当的分离方法预先除去干扰物质。373.3.选择适当的显色反应条件选择适当的显色反应条件通过控制适宜的显色条件，消除干扰组分通过控制适宜的显色条件，消除干扰组分的影响。的影响。4.4.选择适宜的波长选择适宜的波长避开干扰物的最大吸收，配制适当的参比避开干扰物的最大吸收，配制适当的参比液，消除干扰组分的影响。液，消除干扰组分的影响。5.5.提高显色反应的选择性提高显色反应的选择性利用被测物能形成三元络合物的特点，提利用被测物能形成三元络合物的特点，提高显色反应的选择性。高显色反应的选择性。38三、吸光度测定条件的选择三、吸光度测定条件的选择1.1.选择适当的入射波长选择适当的入射波长 一般应该选择一般应该选择maxmax为入射光波长。但如果为入射光波长。但如果maxmax处有共存组分干扰时，则应考虑选择灵处有共存组分干扰时，则应考虑选择灵敏度稍低但能避免干扰的入射光波长。敏度稍低但能避免干扰的入射光波长。吸光度测定条吸光度测定条件的选择件的选择曲线曲线A A为钴络合为钴络合物的吸收曲线物的吸收曲线曲线曲线B B为显色剂为显色剂的吸收曲线的吸收曲线392.2.选择适当的参比溶液选择适当的参比溶液 注：采用空白对比消除因溶剂和容器的吸收、光的散射注：采用空白对比消除因溶剂和容器的吸收、光的散射和界面反射等因素对透光率的干扰。和界面反射等因素对透光率的干扰。40参比溶液的选择一般遵循以下原则：参比溶液的选择一般遵循以下原则：溶液溶液代号代号在测定波长处有无吸收在测定波长处有无吸收试液试液1 1无无无无干扰有干扰有干扰有干扰有显色剂显色剂2 2无无有有无无有有其它所其它所加试剂加试剂3 3无无有有无无有（或有（或无）无）参比溶参比溶液液2+32+3或或（水（水)2+32+31 1(1+(1+掩蔽掩蔽)后后+2+3+2+3413.3.控制适宜的吸光度读数范围控制适宜的吸光度读数范围四、标准曲线的绘制四、标准曲线的绘制标准曲线法绘图示例标准曲线法绘图示例：选选选选A=0.151.00A=0.151.00420.20.80.40.6A 0 1 2 3 4 5C/mgL-1工作曲线4312-6 12-6 分光光度法的应用分光光度法的应用 _ _示差分光光度法示差分光光度法一、示差分光光度法（示差法）一、示差分光光度法（示差法）原理原理 示差法需要较大的入射光强度，示差法需要较大的入射光强度，并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准并采用浓度稍低于待测溶液浓度的标准溶液作参比溶液。溶液作参比溶液。设：待测溶液浓度为设：待测溶液浓度为c cx x，标准溶液浓度为标准溶液浓度为c cs s(c cs s c cx x)。则：则：A Ax x=bcbcx x A As s=bcbcs s x x s s=b b(c cx xc cs s）=b bc c 44 示差法测得的吸光度与示差法测得的吸光度与cc呈直线关系。由呈直线关系。由标准曲线上查得相应的标准曲线上查得相应的c c值，则待测溶液浓值，则待测溶液浓度度c cx x：c cx x=c cx x+c c示差法标尺扩展原理：示差法标尺扩展原理：T/%Tr/%普通法：普通法：c cs s的的T T=10%=10%；c cx x的的T T=5%=5%示差法：示差法：c cs s做参做参比比,调调T T=100%=100%则则 c cx x的的T T=50%=50%；标尺扩展标尺扩展1010倍倍45一、示差分光光度法一、示差分光光度法误差公式的推导误差公式的推导 4647例：普通分光光度法测某试液，测得例：普通分光光度法测某试液，测得T Tx x%=5%=5%。假定假定 T=T=0.5%0.5%。试问（试问（1 1）测定结果的相对误差）测定结果的相对误差 （2 2）如果以）如果以T=10%T=10%的标准溶液作参比溶液，的标准溶液作参比溶液，示差法测得的示差法测得的T=T=？结果结果解：解：（1 1）48（2 2）作业：作业：P P269269:4,5,6:4,5,6 思考题思考题:7:749 第十二章第十二章 可见分光光度法思考题可见分光光度法思考题 1朗伯朗伯-比耳定律的物理意义是什么？写出其数学表比耳定律的物理意义是什么？写出其数学表达式。达式。2摩尔吸光系数摩尔吸光系数的物理意义是什么？其大小与哪些的物理意义是什么？其大小与哪些因素有关？因素有关？在分析化学中有何意义？在分析化学中有何意义？3什么是吸收曲线？什么是标准曲线？它们有何实际什么是吸收曲线？什么是标准曲线？它们有何实际意义？意义？4显色反应如何选择？显色反应如何选择？5吸光度测量条件如何选择？吸光度测量条件如何选择？6光度分析法中，参比溶液应如何选择？光度分析法中，参比溶液应如何选择？7示差光度法的测定原理是什么？如何用示差光度法示差光度法的测定原理是什么？如何用示差光度法进行定量分析？进行定量分析？答案答案501.答答：当当一一束束平平行行的的单单色色光光通通过过液液层层厚厚度度为为b的的有有色色溶溶液液时时，溶溶液液的的吸吸光光度度A与与液液层层的的厚厚度度b和和溶溶液液的的浓浓度度c成正比。即成正比。即A=lg(I0/I)=bc2.答答：摩摩尔尔吸吸光光系系数数在在数数值值上上等等于于1molL-1吸吸光光物物质质在在1cm光光程程中中的的吸吸光光度度。它它是是吸吸光光物物质质在在特特定定波波长长下下的的一一个个特特征征常常数数。其其单单位位为为L mol-1 cm-1。由由于于值值与与入入射射光光波波长长有有关关，故故表表示示时时，应应注注明明所所用用入入射射光光波波长长。在在分分析析化化学学中中，值值的的大大小小反反应应了了：（1）吸吸光光物物质质对对某某一一特特定定波波长长光光吸吸光光能能力力大大小小的的量量度度。值值越越大大，该该吸吸光光物物质质的的吸吸光光能能力力越越强强。（2）衡衡量量光光度度分分析析方方法法灵灵敏敏度度的的重重要要指指标标，值值越越大大，方方法的灵敏度越高。法的灵敏度越高。513.答答：以以入入射射光光波波长长作作横横坐坐标标，用用分分光光光光度度计计测测量量每每一一波波长长下下物物质质对对光光的的吸吸光光度度作作纵纵坐坐标标所所绘绘制制的的曲曲线线，称称为为吸吸收收曲曲线线。其其作作用用是是：选选择择入入射射光光波波长长，在在此此波波长长下下测测量量吸吸光光度度，则则分分析析的的灵灵敏敏度度最最高高。因因此此，吸收曲线是吸光光度法中选择测定波长的重要依据。吸收曲线是吸光光度法中选择测定波长的重要依据。在在某某特特定定波波长长下下，用用分分光光光光度度计计测测量量一一系系列列不不同同浓浓度度的的标标准准溶溶液液的的吸吸光光度度，然然后后以以浓浓度度为为横横坐坐标标，对对应应的的吸吸光光度度值值为为纵纵坐坐标标所所绘绘制制的的曲曲线线，称称为为标标准准曲曲线线（亦亦称称工工作作曲曲线线）。它它是是作作为为待待测测物物质质定定量量分分析析的的依依据据。如如果果在在相相同同条条件件下下测测得得待待测测试试液液的的吸吸光光度度值值，从从标标准准曲曲线线上上就就可可查查得得待待测测试试液液的的浓浓度度，这这就是标准曲线法。就是标准曲线法。524.答答：显显色色反反应应的的选选择择原原则则是是：（1）选选择择生生成成的的有有色色物物质质（MR）的的较较大大的的显显色色反反应应；（2）显显色色剂剂（R）在在测测定定波波长长处处无无吸吸收收，即即尽尽可可能能小小；（3）反反应应生生成成的的有有色色物物质质（MR）的的组组成成要要恒恒定定，化化学学性性质稳定。质稳定。5.答：吸光度测量条件包括三个主要方面：答：吸光度测量条件包括三个主要方面：（1）入入射射光光波波长长的的选选择择：入入射射光光的的波波长长应应根根据据吸吸收收曲曲线线选选择择max为为宜宜。因因在在此此波波长长处处值值最最大大，使使测测定定具有较高的灵敏度。具有较高的灵敏度。（2）参参比比溶溶液液的的选选择择：在在吸吸光光度度的的测测量量中中，由由于于比比色皿的反射以及溶剂、试剂等对光的吸收，使得色皿的反射以及溶剂、试剂等对光的吸收，使得53 测测得得的的吸吸光光度度值值不不能能真真实实地地反反映映待待测测物物质质对对光光的的吸吸收收，也也就就不不能能真真实实地地反反映映待待测测物物质质的的浓浓度度。为为了了校校正正上上述述影影响响需需要要正正确确选选择择参参比比溶溶液液。通通过过调调节节仪仪器器使使参参比比溶溶液液的的吸吸光光度度为为零零（A=0）,或或透透光光度度T=100%。借借此消除上述影响。此消除上述影响。（3）吸吸光光度度读读数数范范围围的的选选择择 吸吸光光度度值值太太大大或或太太小小时时，读读数数波波动动所所引引起起的的吸吸光光度度读读数数误误差差较较大大，为为了了减减小小读读数数误误差差，应应使使测测量量的的吸吸光光度度值值控控制制在在A=0.151.0（或或透透光光度度T在在75%10%）范范围围之之内内。可可以以采采用用以以下下措措施施：（a）控控制制溶溶液液的的浓浓度度，如如改改变变试试样样的的称称量量，或或改改变变溶溶液液的的稀稀释释度度等等；（b）选选择择不不同同厚厚度度的的比比色色皿，以改变光程的长度。皿，以改变光程的长度。546.答：答：参比溶液的参比溶液的选择原则如下：选择原则如下：（1）若若仅仅待待测测物物（M）与与显显色色剂剂（R）的的反反应应产产物物（MR）有吸收，可用蒸馏水作有吸收，可用蒸馏水作参比溶液。参比溶液。（2）若若待待测测物物（M）无无吸吸收收，而而显显色色剂剂（R）或或其其它它试试剂剂（R）有有吸吸收收，则则用用不不加加试试样样的的空空白白溶溶液液作作参比溶液。参比溶液。（3）若若试试样样中中的的其其它它组组分分有有吸吸收收（待待测测物物M之之外外的的组组分分，如如N），但但不不与与显显色色剂剂反反应应，当当显显色色剂剂无无吸吸收收时时，可可用用试试样样溶溶液液作作参参比比溶溶液液；当当显显色色剂剂有有吸吸收收时时，可可在在试试液液中中加加入入适适当当掩掩蔽蔽剂剂将将待待测测组组分分掩掩蔽蔽后后再再加加显色剂，以此溶液作参比溶液。显色剂，以此溶液作参比溶液。总总之之，选选择择参参比比溶溶液液的的原原则则是是：应应使使测测得得的的试试液液的的吸光度能真正反映待测物的浓度。吸光度能真正反映待测物的浓度。557.答答：示示差差光光度度法法是是用用一一个个比比被被测测试试液液浓浓度度（cx）稍稍低低的的标标准准溶溶液液（cs）作作参参比比溶溶液液与与试试液液进进行行比比较较。以以cs作作参参比比溶溶液液，调调节节仪仪器器透透光光度度读读数数为为100%（A=0），测测得得的的吸吸光光度度是是试试液液与与参参比比溶溶液液的的吸吸光光度度差差值值（称称为为相相对对吸吸光光度度），即即A=b(cx-cs)=bc。由由此此可可知知，被被测测试试液液与与参参比比溶溶液液的的吸吸光光度度差差值值（A）与与两两溶溶液液浓浓度度之之差差(c)成成正正比比，这这就就是是示示差差光光度度法法的的基本原理。基本原理。示示差差光光度度法法常常采采用用标标准准曲曲线线法法进进行行定定量量分分析析。以以上上述述浓浓度度为为cs的的标标准准溶溶液液作作参参比比溶溶液液，测测定定一一系系列列c已已知知的的标标准准溶溶液液的的相相对对吸吸光光度度A，绘绘制制Ac工工作作曲曲线线，再再测测未未知知液液的的相相对对吸吸光光度度A，由由工工作作曲曲线线查查出相应的出相应的c，经换算经换算cx=cs+c，即为所求。即为所求。56