备战201413版生物专题辅导与训练配套课件江苏专用91基因工程.ppt

第1讲 基因工程一、基因工程一、基因工程1.1.基因工程的三种基本工具基因工程的三种基本工具（1 1）三种工具的比较：）三种工具的比较：（2 2）限制酶切割时的注意事项：）限制酶切割时的注意事项：注注意意切切割割的的序序列列是是否否会会连连接接成成环环：切切割割图图1 1中中的的目目的的基基因因时时，最最好好不不要要只只用用BamHBamH，因因为为只只用用BamHBamH切切割割时时，目目的的基基因因的的两两端端具具有有相相同同的的黏黏性性末末端端，易易自自行行连连接接成成环环，因因此此最最好好同同时时用用BamHBamH和和Hind Hind 切割。切割。限限制制酶酶的的切切割割序序列列具具有有包包含含关关系系：图图2 2中中BamHBamH和和MboMbo识识别别的的碱碱基基序序列列和和酶酶切切位位点点分分别别是是G GGATCCGATCC、GATCGATC，这这两两个个限限制制酶酶都可切割同一碱基序列都可切割同一碱基序列GGATCCGGATCC。切割时注意是否破坏所有抗性基因，导致缺乏标记基因。切割时注意是否破坏所有抗性基因，导致缺乏标记基因。2.2.基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序（1 1）目的基因的获取途径：）目的基因的获取途径：（2 2）基因表达载体的构建）基因表达载体的构建重组质粒的构建：重组质粒的构建：表表达达载载体体的的组组成成：目目的的基基因因+启启动动子子+终终止止子子+标标记记基基因因+复复制制原点。原点。启启动动子子和和终终止止子子：启启动动子子是是RNARNA聚聚合合酶酶结结合合位位点点，启启动动转转录录；终止子是终止转录的位点。终止子是终止转录的位点。基因表达载体的构建过程：基因表达载体的构建过程：（3 3）将目的基因导入受体细胞）将目的基因导入受体细胞转化：转化：导入方法因受体细胞的种类不同而异：导入方法因受体细胞的种类不同而异：转转化化的的实实质质：目目的的基基因因导导入入受受体体细细胞胞染染色色体体基基因因组组中中并并表表达达和发挥作用。和发挥作用。（4 4）目的基因的检测与鉴定：）目的基因的检测与鉴定：导入检测：导入检测：DNADNA分子杂交技术（使用分子杂交技术（使用DNADNA探针）。探针）。个体生物学水平鉴定：如对转基因作物进行抗虫或抗病等的个体生物学水平鉴定：如对转基因作物进行抗虫或抗病等的接种实验。接种实验。【热点考向【热点考向1 1】基因工程的基本工具基因工程的基本工具高考频次高考频次3 3年年1818考考 预测指数预测指数 【典题训练【典题训练1 1】（20102010江苏高考）下表中列出了几种限制酶江苏高考）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图识别序列及其切割位点，图1 1、图、图2 2中箭头表示相关限制酶的酶中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：切位点。请回答下列问题：1 1）图）图1 1所示的一个质粒分子经所示的一个质粒分子经SmaSma切割前后，分别含有切割前后，分别含有_个游离的磷酸基团。个游离的磷酸基团。（2 2）若对图中质粒进行改造，插入的）若对图中质粒进行改造，插入的SmaSma酶切位点越多，质酶切位点越多，质粒的热稳定性越粒的热稳定性越_。（3 3）用图中的质粒和外源）用图中的质粒和外源DNADNA构建重组质粒，不能使用构建重组质粒，不能使用SmaSma切割，原因是切割，原因是_。（4 4）与只使用）与只使用EcoR EcoR 相比较，使用相比较，使用BamH BamH 和和Hind Hind 两种限两种限制酶同时处理质粒、外源制酶同时处理质粒、外源DNADNA的优点在于可以防止的优点在于可以防止_。（5 5）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混）为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入合，并加入_酶。酶。（6 6）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了）重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了_。（7 7）为了从）为了从cDNAcDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体中，然后在质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体中，然后在_的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。【规范答题】【规范答题】（1 1）生物术语要规范，用词要准确。）生物术语要规范，用词要准确。（2 2）分析图示要到位，注意限制酶的作用位点的差异。）分析图示要到位，注意限制酶的作用位点的差异。（3 3）解答最后一题时要明确选择培养基在基因工程中的作用。）解答最后一题时要明确选择培养基在基因工程中的作用。【解析】【解析】本题考查基因工程中的限制酶的作用特点。本题考查基因工程中的限制酶的作用特点。（1 1）质质粒粒切切割割前前是是双双链链环环状状DNADNA分分子子，所所有有磷磷酸酸基基团团参参与与形形成成磷磷酸酸二二酯酯键键，故故不不含含游游离离的的磷磷酸酸基基团团。从从图图1 1可可以以看看出出，质质粒粒上上只只含含有有一一个个SmaSma的的切切点点，因因此此被被该该酶酶切切割割后后，质质粒粒变变为为线线性性双双链链DNADNA分分子子，因因每每条条链链上上含含有有一一个个游游离离的的磷磷酸酸基基团团，因因此此切割后含有两个游离的磷酸基团。切割后含有两个游离的磷酸基团。（2 2）由由题题目目可可知知，SmaSma识识别别的的DNADNA序序列列只只有有G G和和C C，而而G G和和C C之之间间可可以以形形成成三三个个氢氢键键，A A和和T T之之间间只只可可以以形形成成两两个个氢氢键键，所所以以SmaSma酶切位点越多，热稳定性就越高。酶切位点越多，热稳定性就越高。（3 3）质质粒粒上上抗抗生生素素抗抗性性基基因因为为标标记记基基因因，由由图图2 2可可知知，标标记记基基因因和和外外源源DNADNA目目的的基基因因中中均均含含有有SmaSma酶酶切切位位点点，都都可可以以被被SmaSma破坏，故不能使用该酶剪切质粒和外源破坏，故不能使用该酶剪切质粒和外源DNADNA。（4 4）只只使使用用EcoREcoR，则则质质粒粒和和含含目目的的基基因因的的外外源源DNADNA两两端端的的黏黏性性末末端端相相同同，用用连连接接酶酶连连接接时时，会会产产生生质质粒粒和和含含目目的的基基因因的的外外源源DNADNA自自身身连连接接物物，而而利利用用BamH BamH 和和Hind Hind 剪剪切切时时，质质粒粒和和含含目目的的基基因因的的外外源源DNADNA两两端端的的黏黏性性末末端端不不同同，用用DNADNA连连接接酶酶连连接接时，不会产生自身连接产物。时，不会产生自身连接产物。（5 5）质粒和目的基因连接后获得重组质粒，该过程需要连接）质粒和目的基因连接后获得重组质粒，该过程需要连接酶作用，故混合后加入酶作用，故混合后加入DNADNA连接酶。连接酶。（6 6）质粒上的抗性基因为标记基因，用于鉴别和筛选含有重）质粒上的抗性基因为标记基因，用于鉴别和筛选含有重组质粒的受体细胞。组质粒的受体细胞。（7 7）将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体后，）将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体后，含有重组质粒的个体才能吸收蔗糖，因此可利用蔗糖作为唯一含有重组质粒的个体才能吸收蔗糖，因此可利用蔗糖作为唯一碳源的培养基进行培养受体细胞，含有重组质粒的细胞才能存碳源的培养基进行培养受体细胞，含有重组质粒的细胞才能存活，不含有重组质粒的因不能获得碳源而死亡，从而达到筛选活，不含有重组质粒的因不能获得碳源而死亡，从而达到筛选目的。目的。满分答案：满分答案：（1 1）0 0、2 2 （2 2）高）高（3 3）SmaSma会破坏质粒中的抗性基因和外源会破坏质粒中的抗性基因和外源DNADNA中的目的基因中的目的基因（4 4）质粒和含目的基因的外源）质粒和含目的基因的外源DNADNA片段自身环化片段自身环化（5 5）DNADNA连接连接（6 6）鉴别和筛选含有目的基因的细胞）鉴别和筛选含有目的基因的细胞（7 7）蔗糖为唯一含碳营养物质）蔗糖为唯一含碳营养物质【热点考向【热点考向2 2】基因工程的应用基因工程的应用高考频次高考频次3 3年年1212考考 预测指数预测指数 【典题训练【典题训练2 2】（20112011海南高考）回答有关基因工程的问题：海南高考）回答有关基因工程的问题：（1 1）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割）构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割DNADNA后，可能产生黏性末端，也可能产生后，可能产生黏性末端，也可能产生_末端。若要在限制末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后，使其直接进行连接，则应选择能使酶切割目的基因和质粒后，使其直接进行连接，则应选择能使二者产生二者产生_（相同，不同）黏性末端的限制酶。（相同，不同）黏性末端的限制酶。（2 2）利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人）利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是_。在用表达载体转化大肠杆菌时，常用在用表达载体转化大肠杆菌时，常用_处理大肠杆菌，以利处理大肠杆菌，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNAmRNA，可，可用标记的胰岛素基因片段作为探针与用标记的胰岛素基因片段作为探针与mRNAmRNA杂交，该杂交技术被杂交，该杂交技术被称为称为_。为了检测胰岛素基因转录的。为了检测胰岛素基因转录的mRNAmRNA是否是否翻译成翻译成_，常用抗原，常用抗原-抗体杂交技术。抗体杂交技术。（3 3）如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，）如果要将某目的基因通过农杆菌转化法导入植物细胞，先要将目的基因插入农杆菌先要将目的基因插入农杆菌TiTi质粒的质粒的_中，然后用该农杆中，然后用该农杆菌感染植物细胞，通过菌感染植物细胞，通过DNADNA重组将目的基因插入植物细胞的重组将目的基因插入植物细胞的_上。上。【规范答题】【规范答题】（1 1）生物术语规范：平末端、）生物术语规范：平末端、RNARNA聚合酶、聚合酶、DNA-RNADNA-RNA分子杂交技术、分子杂交技术、T-DNAT-DNA。（2 2）审审题题规规范范：第第（2 2）小小题题中中“为为了了检检测测胰胰岛岛素素基基因因是是否否转转录录出出了了mRNA”mRNA”，实实质质是是检检测测的的第第二二步步，需需用用“分分子子杂杂交交技技术术”，而而不不是是“DNA“DNA分分子子杂杂交交技技术术”；第第（3 3）小小题题中中通通过过DNADNA重重组组将目的基因插入植物细胞的部位是将目的基因插入植物细胞的部位是“染色体染色体”一定要准确。一定要准确。【解析】【解析】（1 1）限制酶切割）限制酶切割DNADNA可以产生黏性末端和平末端。一可以产生黏性末端和平末端。一般同一种限制酶切割目的基因和质粒，产生相同的黏性末端。般同一种限制酶切割目的基因和质粒，产生相同的黏性末端。（2 2）基因表达载体中启动子是）基因表达载体中启动子是RNARNA聚合酶特异性识别并结合的聚合酶特异性识别并结合的位置，驱动基因转录。用大肠杆菌作为受体细胞时，要用位置，驱动基因转录。用大肠杆菌作为受体细胞时，要用CaCa2+2+处理，以利于表达载体进入。检测目的基因是否转录，可用分处理，以利于表达载体进入。检测目的基因是否转录可用分子杂交技术，检测目的基因是否表达出蛋白质，可用抗原子杂交技术，检测目的基因是否表达出蛋白质，可用抗原抗抗体杂交技术。体杂交技术。（3 3）目的基因插入农杆菌质粒）目的基因插入农杆菌质粒DNADNA上，然后插入植物细胞的染上，然后插入植物细胞的染色体上。色体上。满分答案：满分答案：（1 1）平）平 相同相同（2 2）提提供供RNARNA聚聚合合酶酶特特异异性性识识别别和和结结合合位位点点，驱驱动动基基因因转转录录CaCa2+2+DNARNADNARNA分子杂交技术分子杂交技术胰岛素（蛋白质）胰岛素（蛋白质）（3 3）TDNATDNA 染色体染色体【热点考向【热点考向3 3】细胞工程细胞工程高考频次高考频次3 3年年8 8考考 预测指数预测指数【典题训练【典题训练3 3】（20112011天津高考）絮凝性细菌分泌的具有絮天津高考）絮凝性细菌分泌的具有絮凝活性的高分子化合物，能与石油污水中的悬浮颗粒和有机物凝活性的高分子化合物，能与石油污水中的悬浮颗粒和有机物等形成絮状沉淀，起到净化污水的作用。为进一步提高对石油等形成絮状沉淀，起到净化污水的作用。为进一步提高对石油污水的净化效果，将絮凝性细菌和石油降解菌融合，构建目的污水的净化效果，将絮凝性细菌和石油降解菌融合，构建目的菌株。其流程图如下。菌株。其流程图如下。据图回答：据图回答：（1 1）溶菌酶的作用是）溶菌酶的作用是_。（2 2）PEGPEG的作用是的作用是_。（3 3）经经处处理理后后，在在再再生生培培养养基基上上，未未融融合合的的A A、B B难难以以生生长长。图中图中ABAB融合菌能生长和繁殖的原因是融合菌能生长和繁殖的原因是_。（4 4）目目的的菌菌株株的的筛筛选选：筛筛选选既既能能分分泌泌具具有有絮絮凝凝活活性性的的化化合合物物，又又能能在在含含有有_的的培培养养基基上上生生长长的的ABAB融融合合菌菌，选选择择效效果果最好的作为目的菌株。最好的作为目的菌株。（5 5）为为探探究究目目的的菌菌株株不不同同发发酵酵时时间间发发酵酵液液的的絮絮凝凝效效果果，将将目目的的菌菌株株进进行行发发酵酵培培养养，定定时时取取发发酵酵液液，加加入入石石油油污污水水中中：同同时时设置设置_为对照组。为对照组。【规范答题】【规范答题】（1 1）生物术语规范：分解细胞壁、诱导原生质）生物术语规范：分解细胞壁、诱导原生质体融合。体融合。（2 2）审题规范：流程图表示的是将絮凝性细菌和石油降解菌）审题规范：流程图表示的是将絮凝性细菌和石油降解菌融合构建目的菌株的过程，而细菌具有细胞壁，因此融合之前融合构建目的菌株的过程，而细菌具有细胞壁，因此融合之前必须去掉细胞壁，这样就明确了溶菌酶的作用。必须去掉细胞壁，这样就明确了溶菌酶的作用。（3 3）作答规范：第（）作答规范：第（3 3）小题中要回答出两个方面的原因，即）小题中要回答出两个方面的原因，即未融合的未融合的A A、B B难以生长，图中难以生长，图中ABAB融合菌能生长和繁殖的原因；融合菌能生长和繁殖的原因；第（第（5 5）小题注意该实验的目的是探究目的菌株不同发酵时间）小题注意该实验的目的是探究目的菌株不同发酵时间发酵液的絮凝效果，故需要设置不加发酵液的石油污水作对照。发酵液的絮凝效果，故需要设置不加发酵液的石油污水作对照。【解析】【解析】（1 1）由于细菌具有细胞壁无法完成细胞融合，所以）由于细菌具有细胞壁无法完成细胞融合，所以需要用溶菌酶去除其细胞壁。需要用溶菌酶去除其细胞壁。（2 2）PEGPEG为聚乙二醇，其作用是诱导原生质体融合。为聚乙二醇，其作用是诱导原生质体融合。（3 3）未融合的）未融合的A A、B B失活部位不同，即活性部位不同，不能在失活部位不同，即活性部位不同，不能在培养基上生存，而融合后的细菌活性部位互补则能生存。培养基上生存，而融合后的细菌活性部位互补则能生存。（4 4）由题意可知，目的菌株是将絮凝性细菌和石油降解菌融）由题意可知，目的菌株是将絮凝性细菌和石油降解菌融合后建立的，因此该菌株既能分泌具有絮凝活性的化合物，又合后建立的，因此该菌株既能分泌具有絮凝活性的化合物，又能在含有石油的培养基上生长。能在含有石油的培养基上生长。（5 5）该实验的目的是探究目的菌株不同发酵时间发酵液的絮）该实验的目的是探究目的菌株不同发酵时间发酵液的絮凝效果，故需要设置不加发酵液的石油污水作对照，从而确定凝效果，故需要设置不加发酵液的石油污水作对照，从而确定目的菌株的絮凝效果。目的菌株的絮凝效果。满分答案：满分答案：（1 1）分解细胞壁）分解细胞壁（2 2）诱导原生质体融合）诱导原生质体融合（3 3）两亲本失活部位不同，融合后活性部位互补）两亲本失活部位不同，融合后活性部位互补（4 4）石油）石油（5 5）不加发酵液的石油污水）不加发酵液的石油污水1.1.（20122012浙江高考）天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少浙江高考）天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因控制蓝色色素合成的基因B B，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基因已知的基因B B。现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正确。现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是（的是（）A.A.提取矮牵牛蓝色花的提取矮牵牛蓝色花的mRNAmRNA，经逆转录获得互补的，经逆转录获得互补的DNADNA，再扩，再扩增基因增基因B BB.B.利用限制性核酸内切酶从开蓝色花的矮牵牛的基因文库中获利用限制性核酸内切酶从开蓝色花的矮牵牛的基因文库中获取基因取基因B BC.C.利用利用DNADNA聚合酶将基因聚合酶将基因B B与质粒连接后导入玫瑰细胞与质粒连接后导入玫瑰细胞D.D.将基因将基因B B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞【解析】【解析】选选A A。具体分析如下：。具体分析如下：2.2.在高光强、高温和高氧分压的条件下，高粱由于含有磷酸烯在高光强、高温和高氧分压的条件下，高粱由于含有磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶，其利用醇式丙酮酸羧化酶，其利用COCO2 2的能力远远高于水稻。从高粱的的能力远远高于水稻。从高粱的基因组中分离出磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因（基因组中分离出磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因（PpcPpc基因），利基因），利用农杆菌介导的转化系统将其转入水稻体内，从而提高水稻的用农杆菌介导的转化系统将其转入水稻体内，从而提高水稻的光合效率。下列说法错误的是（光合效率。下列说法错误的是（）A.A.在在此此过过程程中中会会用用到到限限制制性性核核酸酸内内切切酶酶、DNADNA连连接接酶酶和和载载体体等等工具工具B.B.此此技技术术与与花花药药培培养养技技术术相相结结合合，可可以以快快速速获获得得纯纯合合子子，缩缩短短育种周期育种周期C.PpcC.Ppc基基因因导导入入受受精精卵卵是是此此技技术术的的关关键键，否否则则不不能能达达到到该该基基因因在各组织细胞中都表达的目的在各组织细胞中都表达的目的D.D.此此项项技技术术是是否否成成功功必必须须测测定定转转基基因因植植株株与与对对照照植植株株同同化化二二氧氧化碳的速率化碳的速率【解析】【解析】选选C C。该基因与二氧化碳的利用有关，植物利用二氧。该基因与二氧化碳的利用有关，植物利用二氧化碳是在叶绿体中，因此该基因可导入叶绿体中进行表达，提化碳是在叶绿体中，因此该基因可导入叶绿体中进行表达，提高对二氧化碳的固定能力。高对二氧化碳的固定能力。3.3.（20112011江江苏苏高高考考）关关于于现现代代生生物物技技术术应应用用的的叙叙述述，错错误误的的是（是（）A.A.蛋白质工程可合成自然界中不存在的蛋白质蛋白质工程可合成自然界中不存在的蛋白质B.B.体细胞杂交技术可用于克隆动物和制备单克隆抗体体细胞杂交技术可用于克隆动物和制备单克隆抗体C.C.植物组织培养技术可用于植物茎尖脱毒植物组织培养技术可用于植物茎尖脱毒D.D.动物细胞培养技术可用于转基因动物的培育动物细胞培养技术可用于转基因动物的培育【解析】【解析】选选B B。蛋白质工程是通过对基因进行一定程度的改造，。蛋白质工程是通过对基因进行一定程度的改造，进而合成新的蛋白质，以合乎人们的需求；植物组织培养中，进而合成新的蛋白质，以合乎人们的需求；植物组织培养中，由于茎尖几乎不含或少含病毒，因此可以培育出无病毒植株；由于茎尖几乎不含或少含病毒，因此可以培育出无病毒植株；在转基因动物的培育过程中，可利用动物细胞培养技术，使获在转基因动物的培育过程中，可利用动物细胞培养技术，使获得外源基因的受体细胞增殖。得外源基因的受体细胞增殖。B B项中的体细胞杂交技术，目前项中的体细胞杂交技术，目前指植物体细胞杂交，克隆动物和单克隆抗体的制备过程中不涉指植物体细胞杂交，克隆动物和单克隆抗体的制备过程中不涉及该技术。及该技术。4.4.（多多选选）在在用用基基因因工工程程技技术术构构建建抗抗除除草草剂剂的的转转基基因因烟烟草草过过程程中，下列操作正确的是（中，下列操作正确的是（）A.A.用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸B.B.用用DNADNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体C.C.将重组将重组DNADNA分子导入原生质体分子导入原生质体D.D.用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞【解析】【解析】选选B B、C C、D D。本题考查基因工程的有关知识，基因工。本题考查基因工程的有关知识，基因工程的一般过程：程的一般过程：用限制性核酸内切酶切割含目的基因的用限制性核酸内切酶切割含目的基因的DNADNA分子（抗除草剂基因）和载体（质粒），分子（抗除草剂基因）和载体（质粒），用用DNADNA连接酶连接连接酶连接切割好的目的基因和载体，切割好的目的基因和载体，重组重组DNADNA分子导入受体细胞，因分子导入受体细胞，因为是植物可以说是原生质体，为是植物可以说是原生质体，用相应的试剂和病原体筛选转用相应的试剂和病原体筛选转基因细胞，基因细胞，用植物组织培养技术培养抗除草剂的转基因烟草用植物组织培养技术培养抗除草剂的转基因烟草（表达）。（表达）。5.5.（20122012江苏高考）图江苏高考）图1 1表示含有目的基因表示含有目的基因D D的的DNADNA片段长度片段长度（bpbp即碱基对）和部分碱基序列，图即碱基对）和部分碱基序列，图2 2表示一种质粒的结构和表示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有部分碱基序列。现有MspMsp、BamHBamH、MboMbo、Sma4Sma4种限制性种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C CCGGCGG、G GGATCCGATCC、GATCGATC、CCCCCCGGGGGG。请回答下列问题：。请回答下列问题：（1 1）图图1 1的的一一条条脱脱氧氧核核苷苷酸酸链链中中相相邻邻两两个个碱碱基基之之间间依依次次由由_连接。连接。（2 2）若若用用限限制制酶酶SmaSma完完全全切切割割图图1 1中中DNADNA片片段段，产产生生的的末末端端是是_末端，其产物长度为末端，其产物长度为_。（3 3）若若图图1 1中中虚虚线线方方框框内内的的碱碱基基对对被被T-AT-A碱碱基基对对替替换换，那那么么基基因因D D就就突突变变为为基基因因d d。从从杂杂合合子子中中分分离离出出图图1 1及及其其对对应应的的DNADNA片片段段，用用限限制制酶酶SmaSma完完全全切切割割，产产物物中中共共有有_种种不不同同长长度度的的DNADNA片段。片段。（4 4）若将图）若将图2 2中质粒和目的基因中质粒和目的基因D D通过同种限制酶处理后进行通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是_。在导入。在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，一般需要用添加添加_的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的培养基进行培养。经检测，部分含有重组质粒的大肠杆菌菌株中目的基因的大肠杆菌菌株中目的基因D D不能正确表达，其最可能的原因不能正确表达，其最可能的原因是是_。【解解析析】（1 1）两两条条脱脱氧氧核核苷苷酸酸链链之之间间的的碱碱基基通通过过氢氢键键相相连连，一一条条脱脱氧氧核核苷苷酸酸链链之之间间的的氢氢键键通通过过脱脱氧氧核核糖糖磷磷酸酸脱脱氧氧核核糖糖连接。连接。（2 2）根根据据限限制制酶酶SmaSma识识别别的的碱碱基基序序列列可可知知，限限制制酶酶SmaSma切切割割产产生生的的末末端端为为平平末末端端，在在图图1 1序序列列中中共共有有2 2个个SmaSma酶酶切切位位点点，切割后的产物长度分别为切割后的产物长度分别为537 bp537 bp、790 bp790 bp、661 bp661 bp。（3 3）图图1 1中中有有SmaSma的的两两个个识识别别序序列列，完完全全切切割割后后产产生生三三个个不不同同长长度度的的DNADNA片片段段，若若虚虚框框中中的的碱碱基基被被T-AT-A替替换换，则则产产生生两两个个DNADNA片片段段，其其中中一一个个DNADNA片片段段与与上上次次切切割割的的相相同同，因因此此经经完完全全切切割后共产生割后共产生4 4个不同长度的个不同长度的DNADNA片段。片段。（4 4）切切割割目目的的基基因因可可选选用用限限制制酶酶BamHBamH和和限限制制酶酶MboMbo，但但限限制制酶酶MboMbo可可将将质质粒粒中中的的抗抗生生素素A A抗抗性性基基因因和和抗抗生生素素B B抗抗性性基基因因破破坏坏，而而限限制制酶酶BamHBamH只只破破坏坏抗抗生生素素A A抗抗性性基基因因，因因此此只只能能选选用用限限制制酶酶BamHBamH；重重组组质质粒粒中中含含有有抗抗生生素素B B抗抗性性基基因因，因因此此可可在含抗生素在含抗生素B B的培养基上培养。的培养基上培养。答案：答案：（1 1）脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖）脱氧核糖、磷酸、脱氧核糖（2 2）平）平537 bp537 bp、790 bp790 bp、661 bp661 bp（3 3）4 4（4 4）BamHBamH 抗生素抗生素B B同同种种限限制制酶酶切切割割形形成成的的末末端端相相同同，部分目的基因部分目的基因D D与质粒反向连接与质粒反向连接