血清葡萄糖的测定(GOD-POD法)教案资料.ppt

血清葡萄糖的测定(GOD-POD法)实验目的掌握酶法血清葡萄糖浓度的原理掌握血糖变化的临床意义2024/11/4 周一2实验原理血清葡萄糖是用以过氧化物酶的偶联酶反应定量法测定的。葡萄糖氧化酶（GOD）利用氧将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，同时释放过氧化氢。过氧化物酶（POD）催化过氧化氢氧化色素原（如4-氨基安替比林和苯酚），并使色素原氧化成色素，即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖的含量成正比。葡萄糖GOD红色醌类化合物POD2024/11/4 周一3实验试剂器材器材5ml移液管，50或100ul微量可调式移液管,721E型分光光度计，1比色皿，37度恒温水浴锅。试剂试剂0.1磷酸盐缓冲液（Ph=7.0）称取无水磷酸二氢钾5.3g，溶于蒸馏水800ml中，调节pH=7.0,定容至1L酶试剂取过氧化物酶1200U，4-氨基安替比林10mg，叠氮化钠100mg，溶入磷酸盐缓冲液80ml中，调节pH值至7.0，用磷酸盐缓冲液定容至100ml，置于4度保存，可稳定存在3个月。酚溶液称取重蒸馏酚100mg，溶入蒸馏水100ml中，用棕色瓶储存。酶-酚混合试剂将酶试剂及酚溶液等量混合，4度可放一个月。2024/11/4 周一4实验试剂12mmol苯甲酸钠溶液称取苯甲酸钠1.6g，于800ml蒸馏水中加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至1L。葡萄糖标准储存液（100mmol/L）称取已干燥至恒重的无水葡萄糖1.082g，溶入约70ml12mmol/L苯甲酸钠溶液中定容至100ml。2h以后方可使用。葡萄糖标准工作液（5mmol/L）吸取葡萄糖标准储存液5.00ml，置入100ml容量瓶中，用12mmol/L，苯甲酸钠溶液稀释至刻度，混匀。2024/11/4 周一5实验操作试剂试剂空白管空白管标准管标准管测定管测定管血清/L-0.02葡萄糖标准液/L-0.02-蒸馏水/L0.02-酶酚混合试剂/L3.003.003.00混匀，置于37C水浴中，保温25min，在波长510nm处比色，以空白管调零，读取标准管和测定管的吸光度。血清葡萄糖的含量=5mmol/dL参考值：3.89-6.11mmol/L2024/11/4 周一6注意事项1.葡萄糖氧化酶法可直接用于测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰性物质浓度过高，可干扰氧化酶反应，造成结果假性偏低。2.因红细胞的酵解将导致测定结果偏低，建议测定样品以草酸钾-氟化钠为抗凝剂以抑制糖酵解。3.严重黄疸，溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液，然后在进行测定。2024/11/4 周一7临床意义生理性高血糖：可见于摄入高糖食物后，或紧张情绪肾上腺素分泌增加时。病理学高血糖：1.糖尿病:病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。2.内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质功能及髓质功能亢进，引起各种对抗胰岛素的激素分泌过多，或升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。3.颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤，颅内出血，脑膜炎等，引起血糖增高。4.脱水引起的高血糖：如呕吐，腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。生理性低血糖：见于饥饿和剧烈运动时病理性低血糖：特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性，肝源性和胰岛素瘤等。2024/11/4 周一8此此课课件下件下载载可自行可自行编辑编辑修改，修改，仅仅供参考！供参考！感感谢谢您的支持，我您的支持，我们们努力做得更好！努力做得更好！谢谢谢谢