水质检测微生物指标专家讲座.pptx

微生物指标v菌落总数v总大肠菌群v耐热大肠菌群水质检测微生物指标专家讲座第1页一、菌落总数v1.方法平皿计数法v2.定义:菌落总数（standard plate-count bacteria）水样在营养琼脂上有氧条件下37培养48h后，所得1mL水样所含细菌总数。厌氧或微需氧菌、有特殊营养要求以及非嗜中温细菌，因为现有条件不能满足其生理需求，故难以繁殖生长。所以菌落总数并不表示实际中全部细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。v3.主要培养基：营养琼脂v4.主要仪器：培养箱36+1 等水质检测微生物指标专家讲座第2页5.检验步骤v生活饮用水生活饮用水 1mL水样+15mL45左右琼脂 摇匀，做平行样和空白对照。冷却后，翻转平板，36+1 培养48h后计数。v水源水水源水 先制成1：10，1：100等稀释液，再按生活饮用水检验步骤进行检验。水质检测微生物指标专家讲座第3页注意事项v（1）操作要快而准，包含材料、加样、倒培养基。v（2）吸液体时液体不能进入吸头。v（3）样品稀释时一定要混匀。v（4）倒培养基前，瓶口要过火焰。v（5）一定要有空白对照。v（6）培养基温度控制，培养基薄厚。水质检测微生物指标专家讲座第4页6.菌落计数及汇报方法 作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检验，以防遗漏。在记下各平皿菌落数后，应求出同稀释度平均菌落数，供下一步计算时应用。在求同稀释度平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采取，而应以无片状菌落生长平皿作为该稀释度平均菌落数。若片状菌落不到平皿二分之一，而其余二分之一中菌落数分布又很均匀，则可将此平皿计数后乘2以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度平均菌落数。水质检测微生物指标专家讲座第5页7.不一样稀释度选择及汇报方法首选30300之间进行计算，若只有一个稀释度平均菌落数符合此范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数汇报之（见表1实例1）。若有两个稀释度，其生长菌落数均在30300之间，则视二者之比值来决定，若其比值小于2应汇报二者平均数（见表1实例2），若大于或等于2则汇报其中稀释度较小菌落数（见表1实例3、4）。若全部稀释度平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高平均菌落数乘以稀释倍数汇报之（见表1实例5）。若全部稀释度平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低平均菌落数乘以稀释倍数汇报之（见表1实例6）。水质检测微生物指标专家讲座第6页若全部稀释度平均菌落数均不在30300之间，则应以最靠近30或300平均菌落数乘以稀释倍数汇报之（见表1实例7）。若所以稀释度平板上均无菌落生长，则以未检出汇报之。假如所以平板上都菌落密布，不要用“多不可计”汇报，而应在稀释度最大平板上，任意数其中2个平板1cm2中菌落数，除2求出每平方厘米内平均菌落数，乘以皿底面积63.6cm2，再乘其稀释倍数作汇报。菌落计数汇报：菌落数在100以内时按实有数汇报，大于100时，采取两位有效数字，在两位有效数字后面数值，以四舍五入方法计算，为了缩短数字后面零数也可用10指数来表示。水质检测微生物指标专家讲座第7页表1 稀释度选择及菌落总数汇报方式实例实例v不一样稀释度平均菌落数两个稀释度两个稀释度菌落数之比菌落数之比菌落总数菌落总数/（CFU/mL）v汇报方式v/(CFU/mL)1010-1-11010-2-21010-3-31 113651365164164202016400164001600016000或或1.6104 42 22760276029529546461.61.637750377503800038000或或3.8104 43 32890289027127160602.22.227100271002700027000或或2.7104 44 415015030308 82 21500150015001500或或1.5103 35 5多不可计多不可计16501650513513513000513000510000510000或或5.1105 56 6272711115 5270270270270或或2.7102 27 7多不可计多不可计305305121230500305003100031000或或3.1104 4水质检测微生物指标专家讲座第8页二、总大肠菌群v1.方法多管发酵法（另有滤膜法和酶底物法）v2.定义 总大肠菌群（total coliforms）指一群在37培养24h能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。v3.主要培养基：乳糖蛋白胨培养液、伊红美兰培养基和革兰氏染液。v4.主要仪器：培养箱、平皿和试管等。水质检测微生物指标专家讲座第9页5.检验步骤v乳糖发酵试验 取1mL水样接种到10mL双料乳糖蛋白胨培养液中，取1mL水样接种到10mL单料乳糖蛋白胨培养液中，另取1mL水样注入9mL灭菌生理盐水中，混匀后吸收1mL（即0.1mL水样）注入到10mL单料乳糖蛋白胨培养液中，每一稀释度接种5管。对已处理过出厂自来水，需经常检验或天天检验一次，可直接接种5份10mL水样双料培养基，每份接种10mL水样。检验水源水时，如污染较严重，应加大稀释度，可接种1，0.1，0.01mL甚至0.1，0.01，0.001mL，每个稀释度接种5管，每个水样共接种15管。接种1mL以下水样时，必须作10倍递增稀释后，取1mL接种，每递增稀释一次，换用1支1mL灭菌刻度吸管。接种管置36+1 培养箱内，培养24h+2h后,如全部乳糖蛋白胨培养管都不产酸产气，则可汇报为总大肠菌群阴性，如有产酸产气者，则按以下步骤进行。水质检测微生物指标专家讲座第10页v分离培养 将产酸产气发酵管分别转钟在伊红美兰琼脂平板上，于36+1 培养箱内培养18h24h，观察菌落形态，挑取符合以下特征菌落作革兰染色、镜检和证实试验。深紫黑色、含有金属光泽菌落；紫黑色、不带或略带金属光泽菌落；淡紫红色、中心较深菌落水质检测微生物指标专家讲座第11页v证实试验 经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌，同时接种乳糖蛋白胨培养液，置36+1 培养箱内培养24 h+2h,有产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在。水质检测微生物指标专家讲座第12页6.结果汇报v查表 依据证实为总大肠菌群阳性管数，查MPN（most probable number,最可能数）检索表，汇报每100mL水样中总大肠菌群最可能数（MPN）值。5管法结果见表2,15管结果见表3.稀释样品查表后所得结果应乘稀释倍数。如全部乳糖发酵管均为阴性时，可汇报总大肠菌群未检出。（表3略）水质检测微生物指标专家讲座第13页表2 用5份10mL水样时各种阳性和阴性结果组合时最可能数（MPN）5 5个个10mL管中阳性管数管中阳性管数最可能数（最可能数（MPN）0 02.21 12.22.22 25.15.13 39.29.24 416.016.05 51616水质检测微生物指标专家讲座第14页三、耐热大肠菌群v1.方法多管发酵法（另有滤膜法）v2.定义 耐热大肠菌群（thermotolerant coliform bacteria）用提升培养温度方法将自然环境汇中大肠菌群与粪便中大肠菌群区分开，在44.5 仍能生长大肠菌群，称为耐热大肠菌群。v3.主要培养基：EC培养基和伊红美兰琼脂v4.主要仪器：恒温水浴培养箱水质检测微生物指标专家讲座第15页5.检验步骤 自总大肠菌群乳糖发酵试验中阳性管（产酸产气）中取1滴转钟于EC培养基中，置44.5 水浴箱或隔水式恒温培养箱内（水浴箱水面应高于试管中培养液面），培养24 h+2h后，如全部管均不产气，则可汇报为阴性，如有产气者，则转钟于伊红美兰琼脂平板上，置44.5 培养18h24h，凡平板上有经典菌落者，则证实为耐热大肠菌群阳性。水质检测微生物指标专家讲座第16页v如检测未经氯化消毒水，且只想检测耐热大肠菌群时，或调查水源水耐热大肠菌污染时，可直接多管耐热大肠菌群方法，即在第一步乳糖发酵试验时按总大肠菌群接种乳糖蛋白胨培养液在44.5 +0.5 水浴中培养。水质检测微生物指标专家讲座第17页6.结果汇报v依据证实为耐热大肠菌群阳性管数，查最可能数（MPN）检索表，汇报每100mL水样中耐热大肠菌群最可能值。水质检测微生物指标专家讲座第18页耐热大肠菌群卫生学意义v作为一个卫生指标菌，耐热大肠菌群中很可能含有粪源微生物，所以耐热大肠菌群存在表明可能受到了粪便污染，可能存在大肠杆菌。不过，耐热大肠菌群存在并不代表对人有什么直接危害。v 通常情况下耐热大肠菌群与总大肠菌群相比，在人和动物粪便中所占百分比较大，而且因为在自然界轻易死亡等原因，耐热大肠菌群存在可认为近期水体直接或间接地受到了粪便污染。因而，与总大肠菌群相比，耐热大肠菌群在水体中检出，说明水体更为不清洁，存在肠道致病菌和食物中毒菌可能性更大。水质检测微生物指标专家讲座第19页v耐热大肠菌群是总大肠菌群一部分将培养温度提升到4445，在此条件下仍能生长和发酵乳糖菌群被称为耐热大肠菌群。它们由埃希氏菌属以及克雷伯菌属、肠杆菌属和柠檬酸杆菌属中一些菌种组成。这些生物中只有埃希氏大肠杆菌是粪源特异性，就是指通常大量存在于人类、其它哺乳动物和鸟类粪便中，极少在不是粪便污染主体土壤和水中发觉 耐热大肠菌群在供水系统中再繁殖是不可能，除非管网中有充分营养物质(生化需氧量(BOD)超出10mgL)或者不适当物质接触处处理后水，水温超出15，以及管网中没有游离余氯。v从这些参数含义能够知道他们可能联络是，在硝酸盐氮,氨氮,耗氧量较高时，水体污染程度较大，其对应卫生指标总大肠菌群,耐热大肠菌群也比较高，这主要是针对生活污水而言，所以这种关系在其它类废水中不一定存在。水质检测微生物指标专家讲座第20页