免疫血液学红细胞血小板配血试验专家讲座.pptx

免疫血液学免疫血液学-红细胞红细胞 血小板血小板 输血前交叉配血试验输血前交叉配血试验免疫血液学红细胞血小板配血试验第1页 人类白细胞抗原代表个体特异性人类白细胞抗原代表个体特异性 与移植排斥相关抗原称为与移植排斥相关抗原称为组织相容性抗原或移组织相容性抗原或移植抗原植抗原-MHS-MHS 编码编码MHSMHS基因组称为基因组称为主要组织相容性复合物主要组织相容性复合物(MHC)(MHC)人类人类MHCMHC是首先在白细胞上发觉，称为是首先在白细胞上发觉，称为人类白细人类白细胞抗原胞抗原(human leukocyte antigen(human leukocyte antigen，HLA)HLA)免疫血液学红细胞血小板配血试验第2页HLAHLA研究历史研究历史最早发觉人类白细胞抗原者为最早发觉人类白细胞抗原者为Dausset-1954Dausset-1954年年 HLA HLA不但仅是白细胞特异性同种抗原。不但仅是白细胞特异性同种抗原。它是分布广泛组织抗原。它是分布广泛组织抗原。免疫血液学红细胞血小板配血试验第3页HLAHLA分型命名分型命名 血清学分型命名血清学分型命名含有临床意义含有临床意义HLAHLA基因有基因有A A、B B、C C、DRDR、DQDQ、DPDP等位点等位点(Loci)(Loci)，每个位点又有若干等位基因，这些基因产物，每个位点又有若干等位基因，这些基因产物便是便是HLAHLA抗原。抗原。临床意义比较大临床意义比较大HLA-AHLA-A、B B、C C称为称为类抗原类抗原 HLA-DR HLA-DR、DQDQ、DPDP称为称为类抗原。类抗原。免疫血液学红细胞血小板配血试验第4页HLAHLA遗传遗传 单体型遗传单体型遗传 存在基因重组存在基因重组 多态性现象多态性现象 连锁不平衡连锁不平衡免疫血液学红细胞血小板配血试验第5页 HLAHLA抗体及抗体检测抗体及抗体检测 临床上临床上HLAHLA抗体多由抗体多由妊娠、妊娠、输血或器官移植等免疫产生输血或器官移植等免疫产生免疫血液学红细胞血小板配血试验第6页HLAHLA在医学中应用在医学中应用 一、一、HLAHLA与输血与输血 HLA HLA与非溶血性输血反应与非溶血性输血反应 HLA HLA与血小板输注与血小板输注 二、二、HLAHLA与器官移植与器官移植 (一一)肾移植肾移植 (二二)骨髓移植骨髓移植 三、三、HLAHLA与亲子判定与亲子判定免疫血液学红细胞血小板配血试验第7页u一类是与其它细胞表面或组织共有抗一类是与其它细胞表面或组织共有抗原，称原，称血小板相关抗原血小板相关抗原u另一类为另一类为血小板特异性抗原血小板特异性抗原免疫血液学红细胞血小板配血试验第8页血小板血型血小板血型u相关抗原：相关抗原：主要与红细胞主要与红细胞ABOABO血型系统以及人血型系统以及人类白细胞抗原类白细胞抗原(HLA)(HLA)相关相关u特异性抗原：特异性抗原：由血小板特有抗原决定簇组成，由血小板特有抗原决定簇组成，表现出血小板独特遗传多态性，在其它细胞和组表现出血小板独特遗传多态性，在其它细胞和组织上不能发觉织上不能发觉免疫血液学红细胞血小板配血试验第9页血小板血型血小板血型u血小板表面存在红细胞血小板表面存在红细胞ABOABO系统系统A A抗原和抗原和B B抗原抗原,可能是从可能是从血浆中吸附血浆中吸附上。上。u是否还存在其它红细胞血型抗原尚在探讨是否还存在其它红细胞血型抗原尚在探讨之中之中u在我国，通常进行在我国，通常进行ABOABO同型血小板输血同型血小板输血免疫血液学红细胞血小板配血试验第10页配合性血小板输注配合性血小板输注ABOABO同型同型血小板抗体筛选血小板抗体筛选交叉配合试验：确保供受体血小板型交叉配合试验：确保供受体血小板型和和HLAHLA型配合型配合免疫血液学红细胞血小板配血试验第11页血小板血型血小板血型 血小板特异性抗原血小板特异性抗原n 含有独特型特异性，并组成血小板膜结构中一含有独特型特异性，并组成血小板膜结构中一部分部分n血小板特异性抗原有血小板特异性抗原有6 6个血型系统个血型系统2424个抗原，正个抗原，正式命名为式命名为HPA-1HPA-1、HPA-2HPA-2、HPA-3HPA-3、HPA-4HPA-4、HPA-5HPA-5、HPA-15HPA-15免疫血液学红细胞血小板配血试验第12页血小板血型临床意义血小板血型临床意义一一.血小板输注无效性血小板输注无效性(PTR)(PTR)二二.输血后紫癜输血后紫癜(PTP)(PTP)三三.新生儿同种免疫性血小板降低性紫癜新生儿同种免疫性血小板降低性紫癜(NAITP)(NAITP)四.血小板本身免疫作用血小板本身免疫作用-特发性血小板降低性紫特发性血小板降低性紫癜癜(简称简称ITP)ITP)免疫血液学红细胞血小板配血试验第13页血小板同种抗体与输血血小板同种抗体与输血 1.ABO1.ABO血型选择血型选择 普通需要做主侧或次侧交叉配血，最好输注普通需要做主侧或次侧交叉配血，最好输注ABOABO血型配合血小板血型配合血小板 2 2RhRh血型选择血型选择 D D阴性患者，最好要防止用阴性患者，最好要防止用D D阳性献血者浓缩血阳性献血者浓缩血小板。对育龄妇女能够注射小板。对育龄妇女能够注射RhRh免疫球蛋白免疫球蛋白 免疫血液学红细胞血小板配血试验第14页 目标目标:供者与患者血液供者与患者血液 安全安全有效有效相容相容免疫血液学红细胞血小板配血试验第15页输血前免疫血液学检验输血前免疫血液学检验内容：内容：1.1.患者病史、标本查对及处理患者病史、标本查对及处理2.2.供受双方供受双方ABOABO、RhRh血型判定血型判定3.3.不规则抗体筛选和判定不规则抗体筛选和判定4.4.交叉配血试验交叉配血试验5.5.汇报和发血汇报和发血免疫血液学红细胞血小板配血试验第16页标标 本本一、标本采集一、标本采集二、红细胞悬液配制二、红细胞悬液配制三、标本保留三、标本保留免疫血液学红细胞血小板配血试验第17页标标 本本一、标本采集一、标本采集1 1红细胞标本红细胞标本-ACD-ACD或或CPDCPD、(Na(Na2 2-EDTA)-EDTA)抗抗凝静脉血凝静脉血 少数患者有一个本身抗体少数患者有一个本身抗体-不宜用抗凝不宜用抗凝血液作为红细胞抗原标本血液作为红细胞抗原标本免疫血液学红细胞血小板配血试验第18页 2 2血清标本血清标本 普通试验防止使用血浆普通试验防止使用血浆 配血试验用血清配血试验用血清不超出不超出7272小时小时免疫血液学红细胞血小板配血试验第19页二、红细胞悬液配制二、红细胞悬液配制1 1、红细胞悬液惯用浓度有、红细胞悬液惯用浓度有2 2、5 5和和10102 2、2 2悬液普通用于滴定抗体效价，悬液普通用于滴定抗体效价，5 5悬液惯悬液惯用于血型判定和交叉配血试验，用于血型判定和交叉配血试验，1010悬液则悬液则用于测定抗体亲协力。用于测定抗体亲协力。免疫血液学红细胞血小板配血试验第20页三、标本保留三、标本保留1 1血清标本血清标本 不稀释血清标本如加有防腐剂不稀释血清标本如加有防腐剂可在可在44保留数月保留数月,在在-20-20以下可保留多年以下可保留多年如用生理盐水稀释血清只限当日使用如用生理盐水稀释血清只限当日使用2 2红细胞标本红细胞标本 普通试验用凝血标本要在普通试验用凝血标本要在5 5天天之内使用，以不溶血为准。如用保留液可保之内使用，以不溶血为准。如用保留液可保留留3 3周周用盐水配制红细胞悬液只能在当日使用用盐水配制红细胞悬液只能在当日使用免疫血液学红细胞血小板配血试验第21页 供受双方供受双方ABOABO、RhRh血型判定血型判定ABOABO血型正反定型血型正反定型RhRh血型判定血型判定试管法试管法玻片法玻片法免疫血液学红细胞血小板配血试验第22页抗A、抗B以外全部抗体统称为不规则抗体。常见于屡次输血人群不规则抗体筛选和判定不规则抗体筛选和判定免疫血液学红细胞血小板配血试验第23页不规则抗体筛选和判定不规则抗体筛选和判定患者血清患者血清+试剂筛选红细胞试剂筛选红细胞 盐水介质盐水介质 聚凝胺介质（最为惯用）聚凝胺介质（最为惯用）抗人球蛋白介质（最为惯用敏感）抗人球蛋白介质（最为惯用敏感）酶介质法酶介质法免疫血液学红细胞血小板配血试验第24页交叉配血试验交叉配血试验受者血清受者血清+供者红细胞供者红细胞受者红细胞受者红细胞+供者血清供者血清 方法方法主侧主侧次侧次侧 盐水介质盐水介质盐水介质盐水介质 聚凝胺介质聚凝胺介质聚凝胺介质聚凝胺介质 抗人球蛋白介质抗人球蛋白介质抗人球蛋白介质抗人球蛋白介质 酶介质法酶介质法酶介质法酶介质法免疫血液学红细胞血小板配血试验第25页红细胞抗原抗体反应过程红细胞抗原抗体反应过程抗原抗体靠近：红细胞抗原位点带负电荷，抗体Fab端带正电（Kell系统抗原带正电荷）抗原抗体结合：静电引力、氢键、疏水键及范德华力免疫血液学红细胞血小板配血试验第26页影响红细胞抗原抗体反应原因影响红细胞抗原抗体反应原因离子强度：反应液中电解质会增加溶液介电常数，减弱抗原抗体间静电作用。降低离子强度能够显著增加抗原抗体结合速率。如:离子强度由0.17M降到0.03M时，抗D和D阳性红细胞开始结合速率增加1000倍。免疫血液学红细胞血小板配血试验第27页红细胞表面电荷及其相互之间距离红细胞表面电荷及其相互之间距离免疫血液学红细胞血小板配血试验第28页低离子强度作用原理低离子强度作用原理当溶液中缺乏离子时，抗原抗体之间静电作用力强当溶液中离子增多时，抗原抗体之间静电作用力弱抗原抗原非离子非离子静电作用力抗体抗体静电作用力离子抗原抗原抗体抗体免疫血液学红细胞血小板配血试验第29页聚凝胺技术免疫血液学红细胞血小板配血试验第30页（1）低离子聚凝胺交叉配血技术）低离子聚凝胺交叉配血技术n原理：聚凝胺（Polybrene），一个高价阳离子季胺盐多聚物，溶解后能产生很多正电荷，能够中和红细胞表面负电荷，使红细胞之间距离降低，能引发正常红细胞可逆性非特异性凝集。假如使抗体致敏红细胞被聚凝胺凝集，则凝集不可逆。免疫血液学红细胞血小板配血试验第31页1红细胞间有一定间距2 加入聚凝胺后，能够缩短红细胞之间距离，使其非特异性凝集3 加入枸橼酸钠，能够中和聚凝胺4 红细胞非特异性凝集消失聚凝胺交叉配血技术示意图聚凝胺交叉配血技术示意图1聚凝胺枸橼酸钠免疫血液学红细胞血小板配血试验第32页1红细胞上已经有不完全抗体致敏2 加入聚凝胺后，缩短红细胞之间距离，让不完全抗体能够同时与两个红细胞结合使其特异性凝集3 加入枸橼酸钠中和聚凝胺4 因为不完全抗体结合，红细胞特异性凝集不消失聚凝胺交叉配血技术示意图2聚凝胺枸橼酸钠枸橼酸钠不完全抗体不完全抗体免疫血液学红细胞血小板配血试验第33页试验分步原理血清红细胞悬液加入LIM混合液Polybrene受体血型抗原IgG抗 体快速致敏免疫血液学红细胞血小板配血试验第34页试验分步原理Polybrene分子连接到红细胞上加入Polybrene免疫血液学红细胞血小板配血试验第35页试验分步原理离心Polybrene拉 近红细胞间距离并造成凝集1个IgG分子同时连接两个红细胞免疫血液学红细胞血小板配血试验第36页试验分步原理加入重悬液减弱 了 Polybrene作用加重悬液免疫血液学红细胞血小板配血试验第37页试验分步原理已被血型抗体致敏红细胞不会散开阳性结果免疫血液学红细胞血小板配血试验第38页试验分步原理未被血型抗体致敏红细胞很快散开阴性结果免疫血液学红细胞血小板配血试验第39页注意事项注意事项n按百分比加样n致敏时间n观察非特异性凝集n观察结果n关于冷凝集免疫血液学红细胞血小板配血试验第40页聚凝胺方法特点聚凝胺方法特点n灵敏：灵敏：灵敏度比抗球蛋白方法高1-20倍。n速度快：速度快：试验时间5分钟左右。n准确：准确：准确度高于酶试验。n不适合于不适合于Kell系统抗体检测，但黄种人群中Kell系统抗体极罕见。n操作要求较高操作要求较高免疫血液学红细胞血小板配血试验第41页（2）微柱凝胶技术免疫血液学红细胞血小板配血试验第42页微柱凝胶技术免疫血液学红细胞血小板配血试验第43页凝胶技术原理凝胶技术原理反应室外管壁反 应室 底孔内 套管壁凝胶或玻璃珠亲和凝胶试剂或盐水特殊粘液免疫血液学红细胞血小板配血试验第44页凝胶技术原理：凝胶技术原理：A、反应室：反应室：下端底孔很小，液体在孵育过下端底孔很小，液体在孵育过程中不会流入下方微柱中。程中不会流入下方微柱中。B、试剂或盐水层：试剂或盐水层：红细胞在离心力作用下红细胞在离心力作用下穿越该层，红细胞与反应室中血清分离穿越该层，红细胞与反应室中血清分离并与该层液体中试剂反应。并与该层液体中试剂反应。C、粘液粘液：亲和柱中有一层粘液，作用与亲和柱中有一层粘液，作用与“试剂或盐水层试剂或盐水层”相同。相同。免疫血液学红细胞血小板配血试验第45页1 1）敏敏感感：在在凝凝胶胶试试验验中中常常能能发发觉觉其其它它试试验验不不易易发觉问题。发觉问题。2 2）结结果果可可保保留留 凝凝胶胶试试验验结结果果可可在在冰冰箱箱中中保保留留数数日，而且较轻易被拍成照片。日，而且较轻易被拍成照片。3 3）操操作作技技术术要要求求较较低低：凝凝胶胶试试验验操操作作主主要要是是简简单单加加样样和和判判读读，孵孵育育、离离心心过过程程都都有有专专门门设设备备。其中能被人为改变原因较少。其中能被人为改变原因较少。4)4)无需洗涤抗球蛋白试验：无需洗涤抗球蛋白试验：优点：优点：免疫血液学红细胞血小板配血试验第46页缺点：缺点：n凝胶试验方法成本较高，需要特殊设备。凝胶试验方法成本较高，需要特殊设备。n高高度度敏敏感感有有时时也也会会造造成成不不便便：有有报报导导应应用用凝胶试验后，凝胶试验后，1/3001/300库血直抗阳性。库血直抗阳性。免疫血液学红细胞血小板配血试验第47页2不完全抗体能够结合在红细胞不完全抗体能够结合在红细胞表面表面,不过不能和两个红细胞不过不能和两个红细胞同时结合（致敏）。同时结合（致敏）。3加入抗人球蛋白加入抗人球蛋白1红细胞彼此之间有一定间距红细胞彼此之间有一定间距4抗人球蛋白能够同时和两抗人球蛋白能够同时和两个不完全抗体个不完全抗体FC段结合，段结合，从而把红细胞连接在一起。从而把红细胞连接在一起。（3）抗人球蛋白交叉配血法示意图免疫血液学红细胞血小板配血试验第48页1.试剂红细胞试剂红细胞(表面标有抗血小板抗体表面标有抗血小板抗体)2.加入供者血小板加入供者血小板3.试剂红细胞和血小板特异性结合试剂红细胞和血小板特异性结合4.加入受者血清加入受者血清,如有抗血小板如有抗血小板抗体抗体,则和血小板发生特异性结则和血小板发生特异性结合合5.凝胶柱中抗人球蛋白捕捉抗血凝胶柱中抗人球蛋白捕捉抗血小板抗体小板抗体,造成试剂红细胞凝集。造成试剂红细胞凝集。（4）血小板配血试验原理示意图（阳性）血小板配血试验原理示意图（阳性）免疫血液学红细胞血小板配血试验第49页1.试剂红细胞试剂红细胞(表面标有抗血小板抗体表面标有抗血小板抗体)2.加入供者血小板加入供者血小板3.试剂红细胞和血小板特异性结合试剂红细胞和血小板特异性结合4.加入受者血清加入受者血清,如血清中无抗如血清中无抗血小板抗体血小板抗体,则凝胶柱中抗人球则凝胶柱中抗人球蛋白不发生特异性结合，试剂蛋白不发生特异性结合，试剂红细胞仍呈单个分布。红细胞仍呈单个分布。血小板配血试验原理示意图（阴性反应）血小板配血试验原理示意图（阴性反应）免疫血液学红细胞血小板配血试验第50页免疫血液学红细胞血小板配血试验第51页发血程序发血程序（常规和紧急情况）（常规和紧急情况）n1.常规情况下发血普通程序 (1)临床申请 (2)血液新鲜程度选择(大量用血和新生儿)(3)血型选择(ABO、Rh、新生儿换血、不规则抗体筛检)(4)交叉配血 (5)发血，做好统计免疫血液学红细胞血小板配血试验第52页发血程序发血程序（常规和紧急情况）（常规和紧急情况）n2.紧急情况下发血普通程序 (1)快速检血型，选ABO、Rh同型血 (2)标识“未经配血”字样 (3)留供受者血样 (4)发血后做好统计 (5)与临床保持联络免疫血液学红细胞血小板配血试验第53页小小 结结n1.掌握输血前检验内容n2.掌握几个惯用交叉配血试验原理、方法和异同点n3.掌握临床输血和发血程序免疫血液学红细胞血小板配血试验第54页作作 业业n1.请列表比较红细胞血型系统中抗原及产生抗体异同点n2.请列表比较几个交叉配血方法、操作步骤、所针正确抗体、注意事项异同点，并进行各种配血方法方法学评价。免疫血液学红细胞血小板配血试验第55页Bye!免疫血液学红细胞血小板配血试验第56页