DB5404_T 0004-2023林芝灵芝标准综合体+第2部分：菌种生产技术规程.docx

ICS 65.020.20B055404林芝市地方标准DB5404/T 00042023林芝灵芝标准综合体第 2 部分：菌种生产技术规程2022 - 12 - 03 发布2023 - 01 - 03 实施林芝市市场监督管理局发 布DB5404/T 00042023目次前言II1 范围12 规范性引用文件13 术语和定义14 菌种来源15 场地、设施要求16 原材料要求16.1 原料16.2 容器26.3 培养原料27 培养基参考配方27.1 一级种27.2 二级种和三级种28 菌种制做28.1 拌料28.2 装袋38.3 灭菌38.4 冷却、消毒、接种38.5 发菌38.6 后熟培养38.7 菌丝生长速度48.8 菌种成熟标准49 入库4II前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件是林芝灵芝标准综合体的第2部分，林芝灵芝标准综合体已经发布了以下部分：第1部分：菌种基本要求；第2部分：菌种生产技术规程；第3部分：菌袋制作规程；第4部分：栽培技术规程；第5部分：采收存储技术规范；第6部分：分级规范。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由林芝禹翔企业服务中心提出。本文件由林芝市市场监督管理局归口。本文件起草单位：西藏自治区产品质量监督检验所、米林县丽云药材种植有限公司、林芝禹翔企业 服务中心。本文件主要起草人：何天文、洛桑卓玛、罗笑娟、龙莎莎、辛双阳、次仁卓嘎、邵强、次仁罗布、 段金华、赵明。DB5404/T 00042023林芝灵芝标准综合体 第 2 部分：菌种生产技术规程1 范围本文件规定了林芝灵芝菌种生产的术语与定义、菌种来源、场地、设施要求、原材料要求、培养基 参考配方、菌种制作、入库等。本文件适用于林芝市灵芝菌种的培育。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 191 包装储运图示标志GB/T 4456 包装用聚乙烯吹塑薄膜GB 4789.28 食品安全国家标准 食品微生物学检验 培养基和试剂的质量要求GB/T 12728 食用菌术语GB 5749 生活饮用水卫生标准NY/T 528 食用菌菌种生产技术规程NY/T 1742 食用菌菌种通用技术要求NY 5099 无公害食品 食用菌栽培基质安全技术要求3 术语和定义GB/T 12728 界定的以及下列术语和定义适用于本文件。4 菌种来源林芝灵芝以国家地理标志保护产品林芝灵芝产地范围内的林芝市巴宜区、米林县、工布江达县、波密县、察隅县、朗县、墨脱县共7个县（区）现辖行政区域为中心，采集的野生白肉灵芝（Ganoderma leucocontextum）驯化培育的菌种。5 场地、设施要求应符合NY/T 528的要求。6 原材料要求6.1 原料6.1.1 栽培袋符合 GB/T 4456 的要求。6.1.2 培养基原料应符合 NY 5099 的要求。46.1.3 栽培基配制用水应符合 GB 5749 的规定。6.1.4 一级种需经出菇试验确认农艺性状和商品性状等种性合格。6.2 容器6.2.1 一级种使用 18 mm180 mm 或 20 mm200 mm 的玻璃试管或培养皿。6.2.2 二级种、三级种使用 750 mL 或以下，耐 121 -126 及以上高温高压的无色或近无色的、瓶口直径4 cm 的玻璃瓶或近透明的耐高温塑料瓶，或（13 cm17 cm）（26 cm33 cm）耐 121-126 高温高压的聚丙烯塑料袋，各类容器都应使用能满足滤菌和透气要求的无纺布塑料盖。6.3 培养原料6.3.1 化学试剂类要使用化学纯或以上级别的试剂。6.3.2 生物制剂和天然材料类材料要新鲜，无虫、无螨、无霉、洁净、干燥。7 培养基参考配方7.1 一级种以1000 mL计：a) 木屑 PDA 培养基 马铃薯（去皮、切块或片）200 g，杂木屑 20 g，葡萄糖 20 g，琼脂 20 g， 水 1000 mL，pH 自然。b) PDA 培养基 马铃薯（去皮、切块或片）200 g，葡萄糖 20 g，琼脂 20 g，水 1000 mL，pH 自然。c) 综合 PDA（CPDA）培养基 马铃薯（去皮、切块或片）200 g，葡萄糖 20 g，蛋白胨 2 g，磷酸二氢钾 3 g，硫酸镁 1.5 g，琼脂 20 g，维生素 B1 10 mg，水 1000 mL，pH 自然。7.2 二级种和三级种以100 g干料计：a) 玉米（小麦、高粱）98 g，轻质碳酸钙 1 g，硫酸钙 1 g。高粱（或玉米、小麦）浸泡 12 h-24 h 时，煮熟至掰开无白心，沥去多余水分，晾干表面水分，混合轻质碳酸钙和硫酸钙拌匀，pH 自然。b) 杂木屑 77 g，麸皮 17 g，玉米粉 3 g，轻质碳酸钙 2 g，硫酸钙 1 g，加水至培养料含水量60 %，pH 自然。c) 玉米芯颗粒 77 g，麸皮 17 g，玉米粉 3 g，轻质碳酸钙 2 g，硫酸钙 1 g，加水至培养料含水量 60 %，pH 自然。8 菌种制做工艺流程备料拌料装袋灭菌冷却接种培养。8.1 拌料将培养基按本规范第7章的配方比例称取，拌匀，并掌握好PH值。代料以用手紧握培养料成团，松开后龟裂，手掌有微量水迹为准（含水量60 %65 %）。8.2 装袋用长33 cm、宽17 cm、厚0.05 mm塑料菌袋。采用机械或手工装袋。压实填至袋口约4/5处，用菌种套环封袋口。8.3 灭菌8.3.1 常压灭菌灭菌锅加温达到100 （海拔3000 m左右的地方，压力达到0.04 MPa时）保持12 h16 h，停火2 h 后将料袋出锅。8.3.2 高压灭菌排气2次,待冷气排净,压力达到0.105 MPa0.15 MPa，温度121 126 时保持15 min30 min 或20 min，自然冷却至压力表到“0”时打开放气阀，打开炉门，待冷却至可以搬动时，将培养基袋取出。8.4 冷却、消毒、接种8.4.1 冷却料袋放置在接种室内，自然冷却至常温。8.4.2 消毒接种场所准备好后，选用2 %3 %来苏儿水溶液喷雾消毒，或选用国家卫生部和农业部规定的无公害药剂进行熏蒸消毒。8.4.3 接种菌种符合NY/T 528的要求,种菌龄30 d35 d。17 cm33 cm规格的菌种，每袋接20个30个料袋。8.5 发菌8.5.1 菌袋摆放菌室前，用3%来苏尔水溶液对发菌室内空间喷雾消毒，然后将菌袋摆放在培养架上，或墙式叠堆在 地面上，摆放方式和摆放密度依发菌室温度确定。8.5.2 环境控制发菌温度控制在20 25 ，空气相对湿度保持50 %60 %；菌丝封面后开始通风；发菌室需遮光，即“暗光培养，宜黑勿亮”。8.5.3 发菌管理发菌15 d左右进行一次全面检查，发现污染的及时清理，同时将菌袋上下、内外位置调换；菌袋间温度低于20 ，通过加温提高发菌室温度，促进菌丝生长。当袋内菌丝长至菌袋五分之四后，发菌室内再次喷洒3 %来苏尔消毒。8.6 后熟培养菌丝长满菌袋后，要后熟10 d30 d。温度（182），空气相对湿度40 %60 %。8.7 菌丝生长速度8.7.1 一级种在PDA（马铃薯葡萄糖琼脂）培养基上，在避光、适温（251）条件下，菌丝长速为（8.21.1） mm/d，菌丝长满斜面的时间为8 d10 d。8.7.2 二级种在适宜培养基上、适宜培养容器里（以使用15 cm28 cm聚丙烯塑料菌种袋、装量300 g干料每袋为例），在避光、适温（251 ）条件下，菌丝长速为（8.00.8）mm/d，菌丝长满容器的时间为23 d30 d。8.7.3 三级种在适宜培养基上、适宜培养容器里（以使用17 cm33 cm聚丙烯塑料菌种袋、装量400 g干料每袋为例），在避光、适温（251）条件下，菌丝长速为（6.70.8）mm/d，菌丝长满容器的时间为26 d 40 d。8.8 菌种成熟标准菌袋表面菌丝洁白粗壮，看不到培养基，菌袋内菌丝连接紧密,表面无杂菌污染，段轻压有弹性、松软，掰开菌袋内部菌丝紧密、色白，有林芝灵芝菌丝固有香味。9 入库完成培养的菌种要及时入库、登记。生产环节要做好详细记录并留样备检。