IL-17六个位点基因多态性与慢性阻塞性肺疾病的相关性研究.pdf

岭南急诊医学杂志2023年6月第28卷第3期5 汤观秀，张秋香，曾晖，等.中危以上跌倒风险老年住院病人跌倒预防知信行水平现状研究 J.全科护理，2022，20（04）：536.6 Ong MF，Soh KL，Saimon R，et al.Fall prevention education to reduce fall risk among community-dwelling older persons：A systematic reviewJ.J Nurs Manag，2021，29（8）：2674.7 Dalrymple SN，Lewis SH，Philman S.Tinnitus：Diagnosis and Management J.Am Fam Physician.2021；103（11）：663.8 宋方方，王丹丹，张晓菲，等.老年冠心病合并认知衰弱病人跌倒预防知信行现状及影响因素分析 J.全科护理，2022，20（25）：3585.9 胡惠菊，韩静，唐启群，等.养老机构老年人预防跌倒自我管理的现状及其影响因素研究 J.护理研究，2021，35（22）：4057.10Heng H，Jazayeri D，Shaw L，et al.Hospital falls prevention with patient education：a scoping reviewJ.BMC Geriatr，2020；20（1）：140.（修回日期：2023年05月02日）基金项目：广东省珠海市人民医院院内基金项目（2017-2乙）作者单位：广东省珠海市人民医院呼吸科（519000）*通信作者IL17六个位点基因多态性与慢性阻塞性肺疾病的相关性研究宋荣清陈燕玲黄海乐李俊何艳菊翁育清*摘要目的：探讨IL17基因六个位点的单核苷酸多态性与慢性阻塞性肺疾病（COPD）易感性、单体型与疾病的相关性、各基因位点及基因与环境之间的交互作用。方法：以2017年3月-2018年9月广东省珠海市人民医院呼吸科就诊的COPD 患者为病例组，同期体检中心的健康人群为对照组。采用聚合酶链式反应（PCR）扩增方法及SnaPshot分型技术检测IL17A及IL17F共6个基因位点基因型，采用不同模型分析上述位点不同基因型与COPD的相关性，并通过连锁不平衡分析其与COPD的相关性。结果：病例组135例，对照组57例；6种SNP位点均符合HW平衡。rs2275913位点在校正年龄因素后在超显性模型中，相比AAGG基因型，AG基因型显著降低COPD的风险（OR=0.48 P=0.025）。经连锁不平衡分析，rs2275913位点与rs3819024位点呈强连锁不平衡（D 0.8，r20.6）；将rs3819024位点与rs2275913位点进行单体型构建，形成的单体型AA、AG、GA、GG在两组间均无明显差异。rs3819024 与吸烟及 rs3819024rs1974226 与吸烟存在交互作用。当携带 rs3819024 位点AA、AG、GG 三种基因型及同时携带rs1974226GG 基因型又吸烟时患者COPD 的风险明显升高。结论：IL17Ars2275913基因多态性与COPD的发病风险相关，rs2275913的AG基因型可能是COPD的保护性基因型，可降低COPD发病风险；rs3819024rs1974226及吸烟可明显升高COPD的风险。关键词：慢性阻塞性肺疾病；IL17；基因多态性；连锁不平衡；交互作用DOI：10.3969/j.issn.1671301X.2022.03.020慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一种常见的、病死率较高的以吸烟为主要危险因素的呼吸道疾病，是先天和后天因素共同作用的结果，其中基因的表达非常关键1。多项研究表明 IL-17 基因的表达与 COPD 的发生、发展存在关联2，3。目前治疗 COPD 的药物种类无显著改变，研究COPD致病原因变得紧迫。本研究检测广东地区COPD患者和健康人群IL-17基因6个多态性位点的基因型，并进行连锁不平衡分析，以探讨其与COPD的相关性，为COPD的防治提供临床依据。1临床资料1.1一般资料（1）纳入标准：病例组符合中华医学会呼吸分会、COPD全球倡议（GOLD2017年更新版）COPD诊断标准；对照组与病例组间无血缘关系，无 COPD 家族史，肺功能正常，且无慢性咳嗽、咳痰、气短病史；签署知情同意书。（2）排除标准：合并哮喘、支气管扩张症、活动期肺结核、尘肺、矽肺、间质性肺病、肺恶性肿瘤及其他限制性肺通气功能障碍的肺病；合并原发性心脏病、严重冠状动脉粥样硬化性心脏病、依赖胰岛素的糖尿病、恶性肿瘤、结缔组织病；不能配合肺功能检查者。2017 年 3月-2018年9月珠海市人民医院（暨南大学附属第三医院）呼吸内科诊治的符合研究要求的COPD患者135例为病例组；同期的健康体检人群 57 例为对照组。本研究经珠海 259岭南急诊医学杂志2023年6月第28卷第3期市人民医院伦理委员会批准。1.2材料（1）实验试剂：血液基因组 DNA 提取试剂盒（北京天根生物科技有限公司）、EXTaq（Takara）、PCR 板（AxyGen）、96 孔 纯 化 板（Millipore）、SNaPshot 试 剂 盒（ABI）、GS-120LIZ（ABI）。（2）实验仪器：-80低温冰箱（Thermo Scientific）、4低温冰箱（青岛海尔）、5417R 低温台 式 离 心 机（Eppendorf）、PTC-200PCR 仪（BIO-RAD）、DYY-8C 电泳仪（北京六一仪器厂）、UV-IV 紫外分析仪（北京新技术应用研究所）、ABI3730（Applied Biosystem）、真空抽滤泵（Millipore）。1.3实验方法（1）肺功能测定：应用 SENSORMEDICS2100 型肺功能检测仪（美国公司）对研究对象测量3次，取最佳值，详细记录：第一秒用力呼气容积（FEV1）和用力肺活量（FVC）、FEV1/FVC 及第一秒用力呼气容积所占预计值的百分比（FEV1%占预计值）。检测地点、时间段、专业人员及室温范围保持一致，设备按肺功能测定指南校正。（2）血液标本采集及处理：晨起空腹 EDTA 抗凝静脉血 2ml，然后将血液标本置于-80科研冰箱保存待测。实验时室温解冻标本至温度与室温平衡 20 min。（3）基因组DNA的提取：提取外周静脉血白细胞的全基因组DNA，并外送北京六合华大基因科技有限公司武汉分公司检测，试剂盒由中国北京天根生物科技有限公司提供，整个流程严格按说明书提示操作，经震荡混合、离心等一系列操作后所得溶液即为血液中基因组DNA。然后进行DNA纯度检测，直至纯度达标。多重 PCR 反应按 Gen Bank 里的基因序列和相关文献报道，应用Primer6.0软件设计PCR引物、引物合成、PCR扩增、PCR产物纯化和测序等，在DNA测序仪上将混合电泳样品进行毛细管电泳，使用 Gene Mapper4.0软件程序分析实验结果。任意抽取约3%的样本进行直接测序，复核基因型。操作委托北京六合华大基因科技有限公司武汉分公司完成。1.4统计学处理应用 SPSS20.0 软件进行数据分析，正态分布的计量资料以均数标准差表示，采用组间t检验；计数资料以构成比表示，计数资料各组间差异性比较采用卡方检验或Fishers Exact检验，多因素分析采用Logistic回归分析，P0.05 为该群体的基因型符合遗传学平衡定律，即样本具有群体遗传代表性。运用SHEsis在线软件（http：/analysis.bio- 软件）研究 IL-17 基因位点的交互作用和基因及环境之间的交互作用。2结果2.1两 组 一 般 资 料 比 较病 例 组 135 例，平 均 年 龄（71.5715.42）岁，BMI（21.026.6）kg/m2；对照组57例，平均年龄（69.2613.43）岁，BMI（23.655.39）g/m2。两组年龄、体重指数无统计学差异。2.2Hardy-Weinberg 遗传平衡定律检测按照 Hardy-Weinberg遗传平衡定律，将病例组和对照组中各基因型的实际值和预测值进行对比，发现 rs2275913、rs3819024、rs1974226、rs4711998、rs763780、rs1889570位点在两组的基因型频数方面无统计学差异（P0.05），符合 Hardy-Weinberg遗传平衡，详见表1，表明入组样本具有群体代表性。2.36个位点基因型与等位基因在两组分布及与患病的风险关系见表2、表3。2.4不 同 位 点 之 间 连 锁 不 平 衡 分 析rs1974226、rs2275913、rs3819024、rs4711998、rs763780、rs1889570 六个位点连锁不平衡情况（见图1），应用在线SHEsis软件进行建模并构建单倍体。结果见表 4。将 rs2275913 位点与rs3819024 位点进行单体型构建，形成的单体型 AA、AG、GA、GG在两组间均无明显差异。2.5基因-基因和基因-环境的交互作用本研究6个位点基因-基因交互作用模型及基因-环境交互作用模型如表 5、表 6 所示。图 2 提示当携带 rs3819024 位点 AA、AG、GG 三种基因型及同时携带rs1974226GG 基因型又吸烟时患者COPD的风险明显升高。3讨论COPD是一种常见的进行性且不完全可逆的气流受限为特征，与毒颗粒或气体造成肺组织损害引起的慢性炎症反应增强有关5。COPD长期以来被认为是与吸烟相关的疾病，但只有 10%-20%的吸烟者最终导致 COPD，其中相表1两组六个位点基因型遗传平衡检验基因位点rs1974226rs2275913rs3819024rs4711998rs763780rs1889570基因型GGAAAGGGAAAGGGAAAGGGAAAGCCTTCTGGAAAG实际值167223395310058349915103748133516228102理论值1661254155956136941410276613155663393等位基因频率G=0.93A=0.07G=0.46A=0.54G=0.56A=0.44G=0.27A=0.73C=0.17T=0.83G=0.59A=0.41c2值0.420.210.260.070.450.95P值0.810.900.880.970.800.62 260岭南急诊医学杂志2023年6月第28卷第3期表2两组六个位点基因型分布及与COPD相关性的分析基因模型rs1974226共显性显性隐形超显性rs2275913共显性显性隐形超显性rs3819024共显性显性隐形超显性rs4711998共显性显性隐形超显性rs763780共显性显性隐形超显性rs1889570共显性显性隐形超显性基因型GGAGAAGGAG-AAGG-AGAAGG-AAAGAAAGGGAAAG-GGAA-AGGGAA-GGAGGGAGAAGGAG-AAGG-AGAAGG-AAAGAAAGGGAAAG-GGAA-AGGGAA-GGAGTTCTCCTTCT-CCTT-CTCCTT-CCCTGGAGAAGGAG-AAGG-AGAAGG-AAAG病例组n（%）116（85.9）18（13.3）1（0.7）116（85.9）19（14.1）134（99.3）1（0.7）117（86.7）18（13.3）33（24.4）77（57）25（18.5）33（24.4）102（75.6）110（81.5）25（18.5）58（43）77（57）38（28.1）74（54.8）23（17）38（28.1）97（71.8）112（83）23（17）61（45.2）74（54.8）72（53.3）55（40.7）8（5.9）72（53.3）63（46.7）127（94.1）8（5.9）80（59.3）55（40.7）93（68.9）35（25.9）7（5.2）93（68.9）42（31.1）128（94.8）7（5.2）100（74.1）35（25.9）40（29.6）74（54.8）21（15.6）40（29.6）95（70.4）114（84.4）21（15.6）61（45.2）74（54.8）对照组n（%）51（89.5）5（8.8）1（1.8）51（89.5）6（10.5）56（98.2）1（1.8）52（91.2）5（8.8）20（35.1）23（40.4）14（24.6）20（35.1）37（64.9）43（75.4）14（24.6）34（59.6）23（40.4）20（35.7）25（44.6）11（19.6）20（35.7）36（64.3）45（80.4）11（19.6）31（55.4）25（44.6）31（54.4）19（33.3）7（12.3）31（54.4）26（45.6）50（87.7）7（12.3）38（66.7）19（33.3）40（70.2）16（28.1）1（1.8）40（70.2）17（29.8）56（98.2）1（1.8）41（71.9）16（28.1）22（38.6）28（49.1）7（12.3）22（38.6）35（61.4）50（87.7）7（12.3）29（50.9）28（49.1）OR值1.000.63（0.22-1.81）2.03（0.12-33.34）1.000.71（0.27-1.91）1.002.13（0.13-34.99）1.000.63（0.22-1.79）1.000.46（0.22-0.97）0.90（0.38-2.15）1.000.57（0.29-1.12）1.001.45（0.68-3.07）1.000.48（0.26-0.92）1.000.60（0.30-1.24）0.85（0.34-2.10）1.000.66（0.34-1.30）1.001.15（0.52-2.58）1.000.64（0.34-1.21）1.000.78（0.40-1.55）2.06（0.68-6.24）1.000.94（0.50-1.77）1.002.27（0.78-6.66）1.000.71（0.37-1.37）1.001.06（0.52-2.14）0.39（0.05-3.28）1.000.96（0.48-1.89）1.000.38（0.05-3.20）1.001.10（0.55-2.22）1.000.71（0.36-1.42）0.58（0.21-1.59）1.000.68（0.35-1.31）1.000.70（0.28-1.79）1.000.84（0.45-1.57）P值0.590.490.60.370.078*0.110.340.025*0.370.230.730.170.260.860.140.30.60.90.320.790.480.260.450.58AIC236.9235.5235.7235.1232.8233.3235230.9233.9232.5233.8232235.3235.9233.8234.9236.9235.9234.9235.9236.4234.6235.4235.6 261岭南急诊医学杂志2023年6月第28卷第3期表4IL17A和IL17F六个基因位点的连锁不平衡分析SNPrs1974226rs2275913rs2275913rs3819024rs763780rs1889570D0.990.830.93r20.080.610.13基因位点rs1974226rs2275913rs3819024rs4711998rs763780rs1889570等位基因GAGAGAGACTGA病例组n（%）250（93）20（7）127（47）143（53）150（56）120（44）71（26）199（74）49（18）221（82）154（57）116（43）对照组n（%）107（94）7（6）51（45）63（55）65（58）47（42）33（29）81（71）18（16）96（84）72（63）42（37）P值0.8040.2130.6180.4620.2210.110OR值1.1240.6911.1291.2410.6601.593表3两组六个位点等位基因分布及与COPD相关性的分析注：AIC是衡量统计模型拟合优良度的指标，P值和OR值均已经过年龄纠正，加粗带*数据表示两组差异有统计学意义注：方块内数据为D，r2100所得。图1基因连锁不平衡图表5IL17A与IL17F之间六个位点之间基因交互作用基因-基因rs2275913rs3819024，rs1889570rs3819024，rs763780，rs1889570训练样本准确度0.58340.62530.6714检验样本准确度0.58340.47950.4745交叉检验一致性10/107/105/10c2（P）0.50370.86860.836表6IL17A与IL17F之间六个基因环境交互作用模型基因-环境吸烟rs3819024，吸烟rs3819024，rs1974226，吸烟训练样本准确度0.80580.81520.8249检验样本准确度0.80580.80210.7883交叉检验一致性10/108/108/10c2（P）0.01070.0120.0154图2IL-17A（rs1974226和rs3819024）与吸烟交互作用分析单元格图当一部分在戒烟后气道炎症仍然存在。另外，一部分从未吸烟的人也发生COPD。肺组织的慢性炎症机制是COPD的特征性改变，而白细胞介素是炎症反应中一种重要的促炎细胞因子。报道显示IL-17在COPD发病过程发挥重要作用，IL-17基因多态性与多种自身免疫性疾病患病风险的相关性6，7。本研究试图从遗传易感性及基因和环境共同作用的角度解释COPD的发病机制。本 研 究 通 过 检 测 COPD 患 者 和 健 康 人 的 IL-17Ars1974226、rs2275913、rs4711998、rs3819024 及 IL-17F基因 rs1889570、rs763780 六个位点的单核苷酸多态性，发现 六 个 位 点 均 符 合 Hardy-Weinberg 遗 传 平 衡 定 律，rs2275913 位点在校正年龄因素后在超显性模型中，相比AA-GG 基因型，AG 基因型显著降低 COPD 的风险（OR=0.48 P=0.025）；共显性模型亦提示 AG 基因型可能降低COPD 的风险（OR=0.46 P=0.078），提示杂合子 AG 基因型为 保 护 性 基 因 型。IL-17Ars1974226、rs3819024、rs4711998、rs763780、rs1889570 在各模型中并未发现与COPD 发病存在显著关联，对rs2275913与COPD 相关性的研究发现纯合子AA基因型是保护性基因型，在相加模型中显示 A 等位基因是保护性等位基因。而徐丹等4在对新疆人群的研究中未发现 rs2275913 位点基因多态性与COPD 的相关性。这可能与 COPD 的发病存在地域差异有关。本研究发现 rs2275913 位点与 rs3819024 位点呈强连锁 不 平 衡（D0.8，r20.6）；rs1974226 和 rs2275913、rs763780 和 rs1889570 呈弱完全连锁不平衡（D 0.8，r20.33）。将 rs3819024 位点与 rs2275913 位点进行单体型构建，形成的单体型AA、AG、GA、GG在病例组及对照组间均无明显差异，提示两位点连锁不平衡间构建的单体型与COPD 患病的风险无明显相关。而徐丹4等的研究发现rs3819024、rs2275913、rs8193036存在连锁不平衡，3个位点之间构建的 CAA 单体型是 COPD 的保护性单体型。由于本研究未纳入 rs8193036 位点，导致等位基因间的重组情况不一致。为研究基因及吸烟的交互作用，将这两因素纳 262岭南急诊医学杂志2023年6月第28卷第3期入MDR进行建模，结果发现最优二阶模型为rs3819024-吸烟构建的交互模型，其交叉检验一致性（8/10）、检验样本准确度最高（0.80）且 P0.01；最佳三阶模型为 rs3819024-rs1974226-吸烟构建的交互模型，其交叉检验一致性（8/10）、检验样本准确度最高（0.79）且P0.01；即rs3819024与吸烟及 rs3819024-rs1974226 与吸烟存在交互作用。根据图二结果，提示当携带rs3819024位点AA、AG、GG三种基因型及同时携带 rs1974226GG 基因型又吸烟时，患者COPD的风险明显升高。综上所述，IL-17Ars2275913 基因多态性与广东地区COPD的发病风险密切相关，杂合子AG基因型可能是保护性基因型，而rs1974226、rs3819024位点基因多态性与吸烟存在交互作用。rs2275913位点与rs3819024位点呈强连锁不平衡，但未发现危险单体型。本研究将扩大样本量及位点的检测，继续研究其他位点的 SNP 特性，并对 COPD 患者进行严重程度及性别进行分层研究，为COPD的诊断及预防提供更多的临床依据。参考文献1 Wain LV，Shrine N，Miller S，et al.Novel insights intothe genetics of smoking behaviour，lung function，andchronic obstructive pulmonary disease（ukbileve）：A genetic association study in uk biobank J.Lancet RespirMed，2015，3（10）：769.2 Korytina GF，Akhmadishina LZ，Kochetova OV，et al.Inflammatoryandimmuneresponsegenespolymorphisms are associated with susceptibility to chronic obstructive pulmonary disease in tatars population from russia J.Biochem Genet，2016，54（4）：388.3 张之海，戴垚垚，陈杰，等.IL17、Tlr4、p2x7基因多态与慢性阻塞性肺疾病的关联研究 J.中华疾病控制杂志，2018，2：142.4 徐丹，李风森，龚理，等.IL17 基因多态性位点与新疆地区慢性阻塞性肺病的风险关系 J.临床检验杂志，2017，5：341.5 Decramer M，Janssens W，Miravitlles M.Chronic obstructive pulmonary diseaseJ.Lancet，2012，379（9823）：1341.6 Duan MC，Zhang JQ，Liang Y，et al.Infiltration of IL17producing t cells and treg cells in a mouse model ofsmokeinduced emphysemaJ.Inflammation，2016，39（4）：1334.7 Roos AB，Sanden C，Mori M，et al.IL17a is elevated inendstage chronic obstructive pulmonary disease and contributes to cigarette smokeinduced lymphoid neogenesisJ.Am J Respir Crit Care Med，2015，191（11）：1232.（修回日期：2023年05月26日）基金项目：广东省医学科研基金项目（202056214153447）作者单位：1.广东省第二中医院（510095）2.南部战区总医院*通信作者慢性乙型肝炎优化治疗策略对公共卫生管理绩效的影响魏东1彭奋飞1李前宁1李晓君1李典鸿1吕丽萍2*摘要目的：通过优化HBeAg阳性CHB患者治疗策略，为提高公共卫生管理绩效提供临床依据。方法：选取广东省第二中医院2020年10月至2022年12月诊治的HBeAg阳性慢性乙型肝炎（CHB）患者110例为研究对象，按随机数表法分为对照组和标准治疗组、隔日治疗组和隔2日治疗组。在对照组的基础上，标准治疗组联合重组细胞因子基因衍生蛋白注射液(乐复能)按说明书方案给药（1次10 g，每日1次，连用12周后改为隔日1次，1周3次）；隔日治疗组联合乐复能按隔日1次的方案给药（1次10 g，隔日1次）；隔2日治疗组联合乐复能按隔2日1次的方案给药（1次10 g，隔2日1次），疗程均为24周。比较治疗前后血清HBeAg水平变化。结果：治疗组较对照组均有更高的HBeAg转阴率；标准治疗组与隔日治疗组间无显著差异，但均优于隔2日治疗组；隔日治疗组有更好的卫生经济学效应。结论：对HBeAg阳性CHB进行乐复能隔日治疗对提高公共卫生管理绩效、改善HBeAg阳性CHB患者的健康结局较标准疗法和隔2日疗法具有更优的卫生经济学效应。关键词慢性乙型肝炎；公共卫生管理绩效；乐复能DOI：10.3969/j.issn.1671301X.2022.03.021 263