ICP-MS测定红花续断膏中铅砷镉汞铜含量.pdf

食品与药品 Food and Drug 2023年第25卷第4期 345粒细胞巨噬细胞刺激因子中内毒素的含量J.中国当代医药,2014,21(7):12.5 朱昱,郭姣梅,张军霞,等.定量检测茵栀黄注射液细菌内毒素方法的建立及应用J.中国卫生检验杂志,2019,29(5):525.6 张虞婷,丁苏苏,李倚云.细菌内毒素的研究进展及其检查法的应用J.天津药学,2015,27(5):66.7 国家药典委员会.中华人民共和国药典.二部M.北京:中国医药科技出版社,2020:1520-1521.8 国家药典委员会.中华人民共和国药典.四部M.北京:中国医药科技出版社,2020:178-181.9 杨海燕,周继春,张军霞,等.微量动态显色法检测奥拉西坦注射液中细菌内毒素含量J.中国药事,2020,34(5):596-601.10 杨海燕,辛琰琰,周继春,等.冠心宁注射液中细菌内毒素含量的微量动态显色法定量检测研究J.中医药导报,2020,26(12):40-43.11 刘骅,王花花,王珺,等.微量鲎试剂动态显色法定量检测重组新型冠状病毒疫苗（CHO 细胞）细菌内毒素的研究J.中国药理学通报,2022,38(7):1110-1113.12 裴宇盛,陈晨,耿颖,等.微量动态显色法与动态显色法的等效性评价J.中国药理学通报,2022,38(7):1107-1109.13 Tom M,Ryan P,Naira S.Saving the horseshoe crab:A synthetic alternative to horseshoe crab blood for endotoxin detectionJ.PLoS Biol,2018,10(12):1-10.14 马莉,张凇,王安航,等.细菌内毒素定量检测方法的常见问题剖析J.中国医院药学杂志,2013,33(9):733-734.15 Fingola F F,Albertino S R,Abrantes S M P,et al.Intralaboratory validation of kinetic chromogenic Limulus Amebocyte Lysate assay for bacterial endotoxin determination in anti-bothropic serumJ.J Pharm Biomed Anal,2013,85(8):93-98.ICP-MS测定红花续断膏中铅砷镉汞铜含量黄焕霞1，刘金磊2，陆蓉蓉1，赵晓辉1*（1.山东明仁福瑞达制药股份有限公司，山东 济南 250104；2.山东古金中医药科技有限公司，山东 济南 250104）摘 要：目的 建立红花续断膏中铅、砷、镉、汞、铜元素的测定方法。方法 采用电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）对黑膏药中铅、砷、镉、汞、铜元素进行测定。结果 铅、砷、镉、汞、铜分别在050 ng/ml，020 ng/ml，02 ng/ml，02 ng/ml，0200 ng/ml范围内呈良好的线性关系，相关系数（r）均大于0.995；系统精密度、重复性结果RSD均小于10%；各元素检测限为0.0050.11 ng/ml，定量限为0.010.90 ng/ml；平均加样回收率为91.99%111.16%（RSD10.0%，n=6）。结论 本法简便、准确、重复性好，可作为红花续断膏中铅、砷、镉、汞、铜检测方法。关键词：红花续断膏；重金属；电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）；测定中图分类号：R284.1 文献标识码：A 文章编号：1672-979X（2023）04-0345-04DOI：10.3969/j.issn.1672-979X.2023.04.012Determination of Lead,Arsenic,Cadmium,Mercury and Copper in Safflower Dipsacus Ointment by ICP-MSHUANG Huan-xia1,LIU Jin-lei2,LU Rong-rong1,ZHAO Xiao-hui1(1.Shandong Mingren Freda Pharmaceutical Co.,Ltd.,Jinan 250104,China;2.Shandong Gujin Chinese Medicine Technology Co.,Ltd.,Jinan 250104,China)Abstract:Objective To establish a method for determination of lead,arsenic,cadmium,mercury and copper in Safflower Dipsacus Ointment.Methods Lead,arsenic,cadmium,mercury and copper in black plaster were determined using an inductively coupling plasma mass spectrometry(ICP-MS).Results The linearity of Pb,As,Cd,Hg and Cu were good in the range of 0-50 ng/ml,0-20 ng/ml,0-2 ng/ml,0-2 ng/ml and 0-200 ng/ml,respectively,收稿日期：2022-02-11作者简介：黄焕霞，主管药师，从事中药新药研究，E-mail:*通讯作者：赵晓辉，硕士，副主任药师，从事中药质量研究，E-mail:346 食品与药品 Food and Drug 2023年第25卷第4期and the correlation coefficients were all greater than 0.995.The RSDs of the accuracy and repeatability tests were less than 10%;the detection limits of each element ranged from 0.005 ng/ml to 0.11 ng/ml,and the limits of quantification were in the range of 0.01-0.90 ng/ml.The average recoveries were 91.99%-111.16%(RSDs10.0%,n=6).Conclusion The method is simple,accurate and reproducible,and can be used as a method for the determination of lead,arsenic,cadmium,mercury and copper in Safflower Dipsacus Ointment.Key Words：Safflower Dipsacus Ointment;heavy metal;inductively coupling plasma mass spectrometry(ICP-MS);determination黑膏药是我国传统中药剂型，具有两千多年的历史，广泛用于多种疾病治疗1。红花续断膏为红花、续断、蜈蚣、象皮、血竭、川乌、草乌等多味中药制成的黑膏药，具有活血化瘀，续筋接骨，消肿止痛，补益肝肾的功能，对骨折后愈合具有促进作用。在制备过程中铅丹与麻油在高温中形成脂肪酸铅盐，有报道黑膏药中铅可能会被人体吸收而造成铅中毒2-3，近年黑膏药质量控制研究报道较少，现黑膏药多数仅有软化点、锥入度等物理指标检测4-6，安全性指标研究报道较少，故本研究对红花续断膏中铅及砷、镉、汞、铜元素含量进行研究，指导黑膏药的质量控制及临床用药。1 仪器与材料1.1 仪器AUW120D型电子天平（日本岛津）；HH-6恒温水浴锅（上海力辰邦西）；ICPMS-2030电感耦合等离子体质谱仪（日本岛津）；MDS-6微波消解仪（上海新仪微波）。1.2 试药红花续断膏（山东古金中医药科技有限公司，50 g/贴，批号：20200818，20200819，20200820，20210222，20210223，20210224，20210225）。铅元素标准溶液（中国计量科学研究院，1000 g/ml）；砷元素标准溶液（中国计量科学研究院，1000 g/ml）；镉元素标准溶液（中国计量科学研究院，1000 g/ml）；汞元素标准溶液（中国计量科学研究院，1000 g/ml）；铜元素标准溶液（中国计量科学研究院，1000 g/ml）；锗元素标准溶液（国家有色金属及电子材料分析测试中心，1000 g/ml）；铟元素标准溶液（国家有色金属及电子材料分析测试中心，1000 g/ml）；铋元素标准溶液（国家有色金属及电子材料分析测试中心，1000 g/ml）；甲醇为色谱纯，乙醇、丙酮等其他试剂均为分析纯。2 方法与结果2.1 测定方法2.1.1 供试品溶液制备 取供试品约0.5 g，精密称定，置聚四氟乙烯消解罐中，加硝酸10 ml，密闭，置微波消解仪中消解，消解完全后，冷却，将消解液转入50 ml量瓶中，用少量水洗涤消解罐3次，洗液合并于量瓶中，加入金单元素标准溶液（l g/ml）200 l，用水稀释至刻度，摇匀，即得砷、镉、汞、铜供试品溶液。精密吸取上溶液1 ml置100 ml量瓶中，用10%硝酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密吸取1 ml置100 ml量瓶中，用10%硝酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得铅供试品溶液。同法制备试剂空白溶液。2.1.2 标准贮备溶液的制备 分别精密量取铅、砷、镉、汞、铜单元素标准溶液适量，用10%硝酸溶液稀释制成每l ml分别含铅、砷、镉、汞、铜为l，0.5，l，l，10 g的溶液，即得。2.1.3 系列标准溶液的制备 精密量取铅、砷、镉、铜标准贮备液适量，用10%硝酸溶液稀释制成每l ml含铅0，2，5，10，20，50 ng，含砷0，l，2，5，10，20 ng，含镉0，0.2，0.4，0.8，1，2 ng，含铜0，10，20，50，100，200 ng 的系列浓度混合溶液。另精密量取汞标准贮备液适量，用10%硝酸溶液稀释制成每l ml分别含汞0，0.2，0.4，0.8，l，2 ng的溶液，临用新配。2.1.4 内标溶液的制备 精密量取锗、铟、铋单元素标准溶液适量，用水稀释制成每l ml各含l g的混合溶液，即得。2.1.5 测定法 测定时选取的同位素为63Cu、75As、114Cd、202Hg和208Pb，其中63Cu、75As以72Ge为内标，114Cd以115In为内标，202Hg和208Pb以209Bi为内标，选食品与药品 Food and Drug 2023年第25卷第4期 347择碰撞反应模式，选用校正方程对测定的元素进行校正。仪器的内标进样管在仪器分析工作过程中始终插入内标溶液中，依次将仪器的样品管插入各个浓度的标准溶液中进行测定（浓度依次递增），以测量值（3次读数的平均值）为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。将仪器的样品管插入供试品溶液中，测定，取3次读数的平均值。从标准曲线上计算得相应的浓度7-9。2.2 线性取2.1.3项下铅、砷、镉、汞、铜系列标准溶液及2.1.4项下锗、铟、铋内标溶液，注入电感耦合等离子体质谱仪，以内标校正浓度为横坐标，以对应的元素响应值为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明本法测定铅、砷、镉、汞、铜的线性关系均良好。结果见表1。表1 线性结果元素线性方程r浓度范围/ngml-1铅C=0.1159I-0.58840.99965050 砷C=1.3494I-0.067900.99981020镉C=0.4523I-0.060670.9988502汞C=1.0905I+0.00350.9985502铜C=0.5353I-2.37450.9999502002.3 系统精密度取2.1项下铅、砷、镉、汞、铜3号标准溶液，分别连续进样6次，结果RSD分别为5.4%，3.3%，5.7%，3.4%，4.3%，RSD均小于10%，表明系统精密度良好。2.4 检测限和定量限取空白溶液，按2.1.5项下方法测定，连续进样12次，结果显示铅元素的检测限为0.1077 ng/ml，定量限为0.3589 ng/ml；砷元素的检测限为0.0668 ng/ml，定量限为0.2226 ng/ml；镉元素的检测限为0.0052 ng/ml，定量限为0.0173 ng/ml；汞元素的检测限为0.0301 ng/ml，定量限为0.9032 ng/ml；铜元素的检测限为0.0514 ng/ml，定量限为0.1713 ng/ml。2.5 重复性取样品，按2.1.5项下方法测定，结果铅、砷、镉、汞、铜平均含量分别为2.40105，0.091，0.173，0.003，6.61 mg/kg，RSD分别为5.5%，4.8%，6.3%，7.4%，5.5%（n=6），RSD均小于10%，表明重复性良好。2.6 中间精密度取样品，分别由不同操作人员在不同日期按2.1.5项下方法分别测定6份供试品，结果铅、砷、镉、汞、铜平均含量分别为2.45105，0.101，0.171，0.003，6.59 mg/kg，RSD分别为6.1%，6.9%，7.5%，8.2%，6.6%（n=6），RSD均小于10%，表明本法测定中间精密度良好。2.7 准确度精密称取样品5 g，置研钵中，加热软化，精密加入硅藻土5 g，研匀备用。取适量，精密称定，置聚四氟乙烯消解罐中，分别精密加入铅单元素标准液2000 ng、砷单元素标准液25 ng、镉单元素标准液25 ng、汞单元素标准液25 ng、铜单元素标准液25 ng，加硝酸10 ml，摇匀，密闭，置微波消解仪中消解，消解完全后，冷却，将消解液转入50 ml量瓶中，用少量水洗涤消解罐3次，洗液合并于量瓶中，加入金单元素标准溶液（l g/ml）200 l，用水稀释至刻度，摇匀，即得砷、镉、汞、铜混合准确度溶液。精密吸取上溶液1 ml置100 ml量瓶中，用10%硝酸溶液稀释至刻度，摇匀，精密吸取1 ml置100 ml量瓶中，用10%硝酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得铅准确度溶液。同法制备6份，注入电感耦合等离子质谱仪，依法测定，结果见表2。结果显示铅平均回收率为102.7%，RSD为5.9%，砷平均回收率为91.99%，RSD 为7.4%，镉平均回收率为111.16%，RSD为3.7%，汞平均回收率为109.39%，RSD为9.5%，铜平均回收率为94.12%，RSD为7.5%，表明方法准确度良好。2.8 样品测定取7批膏药，按2.1.5项下方法测定，结果见表3。结果显示红花续断膏中铅含量在2.071052.54105 mg/kg范围内，砷含量在0.050.14 mg/kg范围内，镉含量在0.160.19 mg/kg范围内，汞含量均小于0.003 mg/kg，铜含量在6.28.7 mg/kg范围内。348 食品与药品 Food and Drug 2023年第25卷第4期3 讨论研究中发现黑膏药较黏，需加热至7080 使成液态后称量。准确度试验中样品黏稠，无法与标准溶液混匀，故先用硅藻土将样品充分分散，使成固态粉末，便于试验操作，随行空白对照。研究显示红花续断膏中铅含量较高，约占样品总重的21%25%，测定铅含量时需将供试品溶液稀释1104倍后进样测定。本法所测铅含量为总铅含量，包含脂肪酸铅盐及反应剩余铅丹中铅含量，与文献报道基本一致8，另表明样品中砷、镉、汞、铜含量较低，膏药一般为完整皮肤应用，可吸收砷、镉、汞、铜元素量较低。红花续断膏中铅是主要辅料铅丹的成分，又是有一定毒性的成分，其应用后铅吸收与样品中铅含量、临床应用周期之间关系有待进一步研究。参考文献1 祝浩东.中药传统黑膏药的发展历史及制法研究J.浙江中医药大学学报,2021,45(5):537-541.2 马熙.狗皮膏中毒性成分的检测及其铅的体外透皮吸收研究D.成都:成都中医药大学,2011.3 张友政,张学毅.黑膏药的临床疗效与铅中毒的控制J.实用中医药杂志,2008,24(7):463.4 何海珍.浅谈黑膏药工艺控制及质量标准研究J.中成药,2005,27(11):1370-1371.5 张清,余新启.黑膏药疮疡膏工艺及质量标准研究J.时珍国医国药,2008,19(10):2423-2425.6 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8.314942529.54084.994.127.50.5009 8.314942534.790 105.90.5016 8.326562531.792 93.860.5017 8.328222531.893 94.260.50308.34982530.80089.80.5026 8.343162532.348 96.02表3 检测结果批号铅/mgkg-1砷/mgkg-1镉/mgkg-1汞/mgkg-1铜/mgkg-120200818 2.421050.08200.1720.0036.720200819 2.541050.07580.1610.0038.520200820 2.111050.08400.1670.0038.720210222 2.471050.07660.1820.0038.520210223 2.211050.13300.1770.0037.820210224 2.091050.08490.1750.0036.220210225 2.071050.05030.1640.0038.3