MiR-144-3p调控E2F8对肾透明细胞癌增殖、凋亡的影响.pdf

收稿日期:基金项目:国家自然科学基金();江西省重点研发计划(B B G L )作者简介:田捷(),男,硕士研究生,主要从事泌尿系肿瘤的研究.通信作者:刘飞,副主任医师,E m a i l:p h i g e r c o m.M i R p调控E F 对肾透明细胞癌增殖、凋亡的影响田捷,余黄琴,周敏,郭龙,刘飞(南昌大学第二附属医院泌尿外科,南昌 ;九江市第一人民医院耳鼻喉科,江西 九江 )摘要:目的研究m i R p对肾透明细胞癌(K I R C)增殖、凋亡的影响并探究其分子机制.方法检测肾小管上皮细胞HK 和K I R C细胞系 O、A CHN、O S R C 中m i R p、E F mR NA和E F 蛋白的表达差异;检测K I R C组织和癌旁组织中m i R p和E F mR NA的表达差异.采用荧光素酶报告实验验证E F mR NA和m i R p的互作关系.分别在 O细胞中过表达m i R p和沉默E F,采用WB检测增殖、凋亡相关蛋白的表达;同时在 O细胞中过表达m i R p和过表达E F,并检测增殖、凋亡相关蛋白的表达;分别采用C C K 法和流式细胞术检测上述转染细胞的增殖和凋亡.结果与HK 细胞相比,K I R C细胞系 O、A CHN、O S R C 中m i R p表达水平较低(P ),与E F 表达水平呈负相关;与癌旁组织相比,K I R C组织中m i R p表达水平较低(P ),E F 表达水平较高(P).过表达m i R p可以抑制 O细胞增殖并促进其细胞凋亡,沉默E F 也可以达到相同性质的效果.过表达E F 可以逆转过表达m i R p对 O细胞增殖和凋亡的影响.荧光素酶报告实验证实m i R p靶向调控基因E F.结论m i R p可以通过调控基因E F 抑制K I R C肿瘤细胞 O的增殖和促进其细胞凋亡.关键词:m i R p;E F;K I R C;增殖;凋亡中图分类号:R 文献标志码:A文章编号:()D O I:/j c n k i l c s y E f f e c t o fM i R pR e g u l a t i o no fE F o nP r o l i f e r a t i o na n dA p o p t o s i s i nR e n a lC l e a rC e l lC a r c i n o m aT I A NJ i e,Y UH u a n g q i n,Z H O U M i n,G U OL o n g,L I UF e i(D e p a r t m e n t o fU r o l o g y,t h eS e c o n dA f f i l i a t e dH o s p i t a l o fN a n c h a n gU n i v e r s i t y,N a n c h a n g ,C h i n a;D e p a r t m e n t o fO t o l a r y n g o l o g y,J i u j i a n gF i r s tP e o p l esH o s p i t a l,J i u j i a n g ,C h i n a)A B S T R A C T:O b j e c t i v e T oe x p l o r e t h e e f f e c t o fm i R po np r o l i f e r a t i o na n da p o p t o s i s i nk i d n e yr e n a l c l e a r c e l l c a r c i n o m a(K I R C)a n d i t sm o l e c u l a rm e c h a n i s m s M e t h o d s T h e e x p r e s s i o no fm i R p,E F mR NAa n dE F mR NAp r o t e i nw a sm e a s u r e d i nr e n a l t u b u l a r e p i t h e l i a l c e l l s(HK)a n dK I R Cc e l l l i n e s(E F O,A CHNa n dO S R C )I na d d i t i o n,t h e e x p r e s s i o no fm i R pa n dE F mR NA w a sm e a s u r e di nK I R Ca n dp a r a c a n c e r o u st i s s u e s T h ei n t e r a c t i o nb e t w e e nE F mR NAa n dm i R pw a sv e r i f i e db yl u c i f e r a s ea s s a y I n Oc e l l s,m i R pw a so v e r e x p r e s s e d,E F w a s s i l e n c e d,o rb o t hm i R pa n dE F w e r eo v e r e x p r e s s e d T h e e x 实用临床医学 年第 卷第期P r a c t i c a lC l i n i c a lM e d i c i n e,V o l ,N op r e s s i o no fp r o l i f e r a t i o n a n da p o p t o s i s r e l a t e dp r o t e i n sw a sd e t e c t e db y W e s t e r nb l o t F u r t h e r m o r e,t h ep r o l i f e r a t i o na n da p o p t o s i so ft h et r a n s f e c t e dc e l l sw e r ed e t e c t e db yC C K a s s a ya n df l o wc y t o m e t r y,r e s p e c t i v e l y R e s u l t s T h e e x p r e s s i o no fm i R p i nHK c e l l sw a sh i g h e r t h a nt h a t i n O,A CHNo rO S R C c e l l s(P ),a n d i t se x p r e s s i o nw a sn e g a t i v e l yc o r r e l a t e dw i t ht h ee x p r e s s i o no fE F C o m p a r e dw i t ht h ea d j a c e n tn o r m a l t i s s u e s,m i R pe x p r e s s i o nd e c r e a s e da n dE F e x p r e s s i o ni n c r e a s e di nK I R C(P )B o t hm i R po v e r e x p r e s s i o na n dE F s i l e n c ei n h i b i t e dt h ep r o l i f e r a t i o na n dp r o m o t e dt h ea p o p t o s i si n Oc e l l s O v e r e x p r e s s i o no fE F r e v e r s e dt h ee f f e c to fm i R po v e r e x p r e s s i o no np r o l i f e r a t i o na n da p o p t o s i so f Oc e l l s L u c i f e r a s er e p o r t e ra s s a yc o n f i r m e dt h a tm i R pd i r e c t l yt a r g e t e dE F g e n e C o n c l u s i o n m i R pc a ni n h i b i tt h ep r o l i f e r a t i o na n dp r o m o t et h ea p o p t o s i s i nK I R C Oc e l l sb yr e g u l a t i n gE F g e n e K E Y WO R D S:m i R p;E F;K I R C;p r o l i f e r a t i o n;a p o p t o s i s肾透明细胞癌(k i d n e yr e n a l c l e a rc e l l c a r c i n o m a,K I R C)是肾细胞癌中最常见的病理分型,其最有效的治疗方法仍是手术干预 .目前,K I R C发生发展的分子机制尚不明确,K I R C相关的基础研究对未来K I R C的临床诊疗水平的进步有重要意义.微小R NA(m i R NA)属于非编码R NA,有些m i R NA可以与目标基因mR NA的 端非翻译区(UT R)结合,以此在转录水平调控基因表 达,m i R NA的 异 常 表 达 与 肿 瘤 的 发 生 发 展 密 切 相关.有研究 表明,许多m i R NA作为肿瘤抑制因子在人类癌症发生中发挥作用,例如m i R p在肺癌、胶质瘤、甲状腺癌、胃癌、膀胱癌、前列腺癌中表达水平降低,它可作为肿瘤抑制因子与下游靶基因结合抑制肿瘤的进展.E F转录因子家族的主要功能是对细胞周期的调节,其功能的变化影响着肿瘤细胞的增殖、侵袭和迁移 .E F 是新发现的E F家族成员,其在K I R C中的生物学功能和临床转化意义尚未被研究,但是T a r g e t S c a n软件预测(h t t p s:/wwwt a r g e t s c a n o r g)E F 存在 与m i R p的结合位点,提示E F 的表达可能受m i R p的调节.本研究旨在探究m i R p和E F 在K I R C中的表达情况,并对其相互作用对K I R C细胞增殖和凋亡调控产生的影响展开研究,以期为K I R C的早期诊断和治疗手段开发提供新的线索.材料与方法实验材料与试剂肾小管上皮细胞系HK 和K I R C细胞系 O,A CHN和O S R C 均购自武汉普诺赛生命科技有限公司;澳洲胎牛血清(F B S)、T r a n s I n t r oE L转染试剂、T r i z o l总R NA抽提试剂购自北京全式金生物技术有限公司;R PM I 培养基、DMEM培养基、胰蛋白酶购自北京索莱宝科技有限公司;荧光素酶试剂盒购自南昌聚焦生物科技有限公司;兔源多克隆E F 抗体购自艾博抗(上海)贸易有限公司;C C K 试剂和细胞凋亡检测试剂盒购自广州锐博生物公司.收集南昌大学第二附属医院泌尿外科 年月至 年 月进行的 例腹腔镜下肾癌根治术中获取的肾癌及对应癌旁组织标本,保存于液氮中备用.纳入标准:患者术后病理组织学检查确诊肾透明细胞癌.排除标准:术前接受免疫治疗或其他治疗者.本研究已取得患者的知情同意,并通过医院伦理委员会审核.试验方法细胞培养采用含 F B S、青链霉素的R PM I 培养HK 、O、O S R C 细 胞,采 用 含 F B S、青链霉素的DMEM培养基培养A CHN细胞,并置于、C O的无菌恒温培养箱中.选择处于对数生长期的细胞进行后续实验.实时定量P C R使用T r i z o l提取细胞和组织的总R NA,经逆转录合成c D NA模板后,使用荧光定量P C R试剂盒配置反应体系,在P C R仪中进行扩增,检测m i R p和E F mR NA的表达水平.m i R p实用临床医学 年第 卷第期P r a c t i c a lC l i n i c a lM e d i c i n e,V o l ,N o上引物 G G C C G G C G T A C AG T AT AGAT GA ;下 引 物 G T G C AG G G T C C GAG G T .内 参 基因U 上 引 物:C T C G C T T C G G C AG C A C A ;下 引 物:AA C G C T T C A C GAAT T T G C G T .E F 上引物:C C T GAGAT C C G C AA C AGA GAT ;下 引 物:AGAT G T C AT T AT T C A C AG C AG G G .内 参 基 因GA P DH上 引 物:AA C G GAT T T G G C C G T AT T G G ;下 引 物:C AT T C T C G G C C T T GA C T G T G .反 应 条 件:s,s,m i n,共 个循环.采用 C t方法计算基因的相对表达水平.蛋白免疫印迹将细胞在R I P A裂解液中裂解,并用B C A法测定蛋白质浓度.将总蛋白样品加入预制的S D S P AG E凝胶,进行常规电泳后并转移到聚偏二氟乙烯(P V D F)上.用脱脂牛奶对膜进行封闭处理h,用T B S T清洗次,下孵育一抗过夜.用T B S T清洗次,每次 m i n,然后在室温下孵育二抗h.用T B S T清洗次,每次 m i n,用化学发光试剂进行荧光显色,用成像系统拍照并分析目标蛋白的相对表达量.细胞转染取对数生长期的 O细胞,用胰酶消化后接种到新孔板中,当细胞生长至汇合度 时,遵循T r a n s I n t r oE L转染试剂说明书将m i n i cm i R p载体及空白对照载体转染至细胞中,分别标 记 为m i R p组 和m i R N C组.转 染 后h,更换为含 F B S的 新鲜培养基.转染 后 h,通过q R T P C R检测转染效率.采用 上 述 转 染 方 法,将 O细 胞 分 为s i E F 组(转染s i R NA的表达载体,沉默E F 表达)、s i N C组(转染空载体,作为s i E F 组的阴性对照)、a n t i m i R p组(转染m i R p表达的干扰载体)、a n t i m i R N C组(转染空载体,作为a n t i m i R p组 的 阴 性 对 照)、m i R pp c D NA E F 组(m i n i cm i R p载 体 与E F 过表 达 载 体 共 转 染)和m i R pp c D NA组(m i n i cm i R p载体与p c D NA空载共转染,作为m i R p p c D NA E F 组的阴性对照).C C K 细胞增殖实验以 个孔的密度将细胞接种于 孔板,每组设置个复孔,并置于、C O的无菌恒温培养箱中培养至细胞汇合度达;分别于生长、h时,在 不 同 的 孔 内 加 入 L的C C K 试剂,h后用酶标仪检测 n m波长处吸光值.流式细胞术检测细胞凋亡以 个孔的密度将细胞种植于孔板,每组设置个复孔,依照P I A P C试剂盒说明书处理细胞.用缓冲液重悬细胞,轻摇至均匀,孵育 m i n.加入适量P I A P C,避光孵育 m i n,上机检测.双荧光素酶报告实验T a r g e t S c a n生物信息学软件预测m i R p与E F 存在结合位点,E F 可能是m i R p的一个靶基因.构建野生型E F(W i l d E F)和突变型E F(M u t a n t E F)的质粒,按照方法将空白对照载体和m i n i cm i R p载体分别与W i l d E F 和M u t a n t E F 共 转 染,并 置 于、C O无菌恒温培养箱中培养 h.收集各组细胞,按照荧光素酶基因报告试剂盒说明书进行检测.统计学方法采用S P S S 和G r a p h P a dP r i s m 软件进行数据分析.组间比较采用t检验.以P 为差异有统计学意义.结果K I R C细胞系和组织中m i R p和E F 的表达情况与肾小管上皮细胞系HK 相比,K I R C细胞系 O、A CHN和O S R C 中m i R p表达水平均较低(P ,图 A),而E F 蛋白和mR NA表达水平均较高(P、P 和P ,图 AB).与癌旁组织相比,肾透明细胞癌组织中m i R p表达水平较低(P ),而E F mR NA表达水平较高(P).见图 C.实用临床医学 年第 卷第期P r a c t i c a lC l i n i c a lM e d i c i n e,V o l ,N o1.51.00.50.0HK2OS-RC-2ACHN786-O*miR-144-3p表达水平86420HK2OS-RC-2ACHN786-O*E2F8表达水平AHK2OS-RC-2ACHN786-OE2F8GAPDH86420E2F8mRNA表达水平*1.51.00.50.0miR-144-3p表达水平癌旁组织癌组织癌旁组织癌组织COS-RC-2 ACHN786-O*1.21.00.80.60.40.20.0HK2*BE2F8/GAPDHA:m i R p和E F 在肾小管上皮细胞和肾癌细胞系中的表达;B:E F 蛋白在肾小管上皮细胞和肾癌细胞系中的表达;C:m i R p和E F 在肾透明癌细胞癌和癌旁组织中的表达.P,P,P .图K I R C细胞系和组织中m i R p和E F 的表达情况过表达m i R p抑制 O细胞的增殖m i R p组 O细胞中m i R p水平显著高于m i R N C组(P),说明过表达m i R p的 O细胞株构建成功,且其m i R p组细胞中E F mR NA的表达水平显著下降(P ).与m i R N C组相比,m i R p组细胞周期蛋白C C N D 的表达量明显降低,P 和P 的表达水平明显升高(P);m i R p组 O细 胞 增 殖 能 力 较m i R N C组 显 著 下 降(P).见图.150100500*miR-144-3p表达水平786-OmiR-NC组miR-144-3p组786-O*E2F8表达水平AmiR-NC组miR-144-3p组1.51.00.50.0A:过表达m i R p对 O细胞E F 表达水平影响.P,P .图过表达m i R p抑制 O细胞的增殖实用临床医学 年第 卷第期P r a c t i c a lC l i n i c a lM e d i c i n e,V o l ,N oCCND1F21P27GAPDHmiR-NC组miR-144-3p组*B1.00.80.60.40.20.0*CCND1/GAPDH p21/GAPDH p27/GAPDHmiR-NC组miR-144-3p组吸光度（450 mm)C2.01.51.00.50.0786-O*miR-NC组miR-144-3p组4824072时间/hB:过表达m i R p对 O细胞增殖蛋白表达的影响;C:过表达m i R p对 O细胞增殖的影响.P.图(续)过表达m i R p促进 O细胞凋亡流式细胞术分析结果表明,与m i R N C组 相比,m i R p组中凋亡细胞占比显著增多(P )(图 A).并且,与m i R N C组相比,m i R p组凋亡蛋白B c l 表达水平明显降低,而B a x和C a s p a s e 表达水平明显升高(P).见图 B.miR-144-3p组miR-NC组*凋亡细胞比例/%1086420miR-NC组miR-144-3p组AmiR-NC组miR-144-3p组Bcl-2BaxCaspase-3GAPDHB1.00.90.80.70.60.50.40.30.20.10.0Bax/GAPDHBcl-2/GAPDHCaspase-3/GAPDHmiR-NC组miR-144-3p组*A:流式细胞术检测细胞凋亡;B:过表达m i R p对 O细胞凋亡蛋白表达的影响.P,P .图过表达m i R p促进 O细胞凋亡沉默E F 表达抑制 O细胞的增殖并促进凋亡沉默E F 表达的 O细胞株(s i E F 组)细胞增殖能力较s i N C组显著降低(P)(图 A).与s i N C组相比,s i E F 组细胞周期蛋白C C N D 的表达量显著降低,P 蛋白表达量则显著升高(P).与s i N C组相比,s i E F 组凋亡蛋白B c l 表达量显著降低,而B a x蛋白表达量显著升高(P).见图 B.实用临床医学 年第 卷第期P r a c t i c a lC l i n i c a lM e d i c i n e,V o l ,N osi-NC组si-E2F8组E2F8CCND1P21P27Bcl-2BaxCaspase-3GAPDHB1.00.90.80.70.60.50.40.30.20.10.0*CCND1/GAPDHP21/GAPDHP27/GAPDHBcl-2/GAPDHE2F8/GAPDHBax/GAPDHCaspase-3/GAPDH*si-NC组si-E2F8组1.51.00.50.04824072si-NC组si-E2F8组吸光度（450 mm)时间/h*AA:沉默E F 对 O细胞活性的影响;B:沉默E F 的表达对 O细胞增殖、凋亡蛋白表达的影响.P,P.图沉默E F 表达抑制 O细胞的增殖并促进凋亡m i R p可靶向抑制E F 的表达T a r g e t S c a n生物信 息学软件 预 测 结 果 显 示,E F 是m i R p的潜在靶基因,m i R p和E F mR NA的 UT R之 间 存 在 结 合 位 点(图 A).与m i R N CW i l d E F 共转染的细胞相比,m i m i cm i R p W i l d E F 共转染细胞中荧光素酶活性明显下降(P ),而m i R N CM u t a n t E F 和m i R p M u t a n t E F 共转染细胞内的荧光素酶活性无明显差异(P).见图 B.与m i R N C相比,m i R p组中E F 蛋白表达水平明显降低(P),而a n t i m i R p组中E F 蛋白表达水平较a n t i m i R N C组明显升高(P).见图 C.A3210荧光素酶活性miR-144-3pNC*Wild-E2F81.51.00.50.0荧光素酶活性miR-144-3pNCMutant-E2F8BmiR-NC组miR-144-3p组anti-miR-NC组anti-miR-144-3p组E2F8GAPDH1.41.21.00.80.60.40.20.0*miR-NC组anti-miR-144-3p组anti-miR-NC组miR-144-3p组CE2F8/GAPDHA:h a s m i R p与E F 互补的核苷酸序列;B:双荧光素酶报告实验验证m i R p与E F mR NA的相互作用;C:W e s t e r n印迹检测E F 的表达.P,P .图m i R p可靶向抑制E F 的表达实用临床医学 年第 卷第期P r a c t i c a lC l i n i c a lM e d i c i n e,V o l ,N o过表达E F 逆转过表达m i R p对 O细胞增殖、凋亡的影响与m i R pp c D NA组相比,转染后m i R p p c D NA E F 组 O细胞增殖活性显著升高(P).见图 A.与m i R pp c D NA组 相 比,m i R pp c D NA E F 组C C N D、B c l 蛋白表达水平显著升高,而P 、B a x蛋白表达水平显著降低(均P).见图 B.1.51.00.50.04824072吸光度（450 mm)时间/h*miR-144-3p+pcDNA组miR-144-3p+pcDNA-E2F8组786-OE2F8CCND1P21Bcl-2BaxGAPDHmiR-144-3p+pcDNA组miR-144-3p+pcDNA-E2F8组miR-144-3p+pcDNA组B1.00.90.80.70.60.50.40.30.20.10.0*CCND1/GAPDHP21/GAPDHBcl-2/GAPDHE2F8/GAPDHBax/GAPDH*miR-144-3p+pcDNA-E2F8组AA:过表达E F 逆转过表达m i R p对 O细胞增殖能力的抑制作用;B:过表达E F 逆转过表达m i R p对 O细胞增殖、凋亡蛋白表达的作用.P.图过表达E F 逆转过表达m i R p对 O细胞增殖、凋亡的影响讨论由于早期症状的隐匿性和有效早期诊断方法的缺乏,许多新确诊的肾透明细胞癌的患者已经处于疾病晚期,通常伴有局部或远处转移,导致预后不良.因此需要寻找K I R C治疗的新方案来改善患者预后.研究表明m i R NA s与多种肿瘤的发生发展密切相关,可以通过调控下游分子的表达水平参与肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移过程,并可作为癌症的预后指标,所以鉴定肿瘤相关m i R NA并预测其下游分子是相关研究中至关重要的内容 .m i R p的编码基因位于 号染色体上,包含一个 非 编 码 转 录 单 元,该 转 录 单 元 也 编 码m i R .有研究 证明m i R p在肿瘤发展过程中扮演重要角色,与其靶向基因mR NA之间的相互作用影响着诸多肿瘤生物学过程.在本研究通过T a r g e t S c a n生物信息学软件预测m i R p和E F 之 间 的 互 作 关 系,得 出E F 可 能 是m i R 的 下 游 靶 基 因.已 有 研究 指出E F 在人类黑色素瘤、卵巢癌、肝细胞癌和肺癌中过表达,并证实E F 过表达与卵巢癌的组织病理学进展相关.还有报道 证明E F 促进癌细胞增殖,帮助其建立抗药性和侵袭性,可能是肝细胞癌和肺癌的潜在治疗靶点.有研究 通过上调E F 的表达调节细胞周期,增强了乳腺癌细胞增殖和致瘤能力.以上数据表明,E F 可能作为m i R p的下游靶基因,在癌症的恶性进展中发挥重要作用.本研究发现,与肾小管上皮细胞HK 相比,K I R C肿瘤细胞 O、A CHN、O S R C 中m i R p表达水平显著降低,并与E F 表达水平呈负相关,在收集到的K I R C组织标本中也得出了同样结果.上调m i R p的表达可以抑制 O细胞增殖并促进其细胞凋亡,而沉默E F 的表达也可以达到同样性质的效果.过表达E F 可以逆转过表达m i R p对K I R C细胞系 O的增殖抑制和调控促进作用.荧光素酶报告实验也证明m i R p和E F mR NA之间存在相互作用,m i R p对K I R C中的抑制作用是通过与E F mR NA的 UT R结合,在转录水平调控E F 表达来实现的.本研究结果表明E F 是m i R p下游靶基因,m i R p可以通过靶向调控E F 基因抑制K I R C肿瘤细胞 O的增殖、促进其细胞凋亡,且m i R p和E F 表达的组合可能是K I R C患者预后的高敏感度标志物.本研究在体外细胞系中验证了m i R p与靶基因E F 的作用,但仍待动物模型实验数据的支持.同时,需要进一步挖掘m i R p在K I R C中可能发挥的其他功能以及与E F 相关的信号通路,以明确其具体作用机制.实用临床医学 年第 卷第期P r a c t i c a lC l i n i c a lM e d i c i n e,V o l ,N o参考文献:S I E G E LRL,M I L L E RKD,F U C H SHE,e t a l C a n c e r s t a t i s t i c s,JC AC a n c e r JC l i n,():E S C UD I E RB,P O R T AC,S C HM I D I N G E R M,e t a l R e n a l c e l lc a r c i n o m a:E S MO c l i n i c a lp r a c t i c eg u i d e l i n e sf o rd i a g n o s i s,t r e a t m e n t a n df o l l o w u pJ A n nO n c o l,():B A R T E LDP M i c r o R NA s:t a r g e tr e c o g n i t i o na n dr e g u l a t o r yf u n c t i o n sJC e l l,():S UNJ,S H IR,Z HAOS,e ta l E F,ad i r e c tt a r g e to fm i R ,p r o m o t e sp a p i l l a r yt h y r o i dc a n c e rp r o g r e s s i o nv i ar e g u l a t i n gc e l l c y c l eJJE x pC l i nC a n c e rR e s,():L I NLB,Z HE N G Y G,TU Y Y,e ta l M i c r o R NA s u p p r e s s e st u m o r i g e n e s i sa n dt u m o rp r o g r e s s i o no fa s t r o c y t o m ab yt a r g e t i n gE Z H J H u mP a t h o l,():GUO Y W,Y I NGL,T I AN Y,e ta l m i R d o w n r e g u l a t i o ni n c r e a s e sb l a d d e rc a n c e rc e l lp r o l i f e r a t i o nb yt a r g e t i n gE Z H a n dr e g u l a t i n gW n t s i g n a l i n gJF E B SJ,():S UNXB,C H E NYW,Y A OQS,e t a l M i c r o R N A s u p p r e s s e sp r o s t a t ec a n c e rg r o w t ha n d m e t a s t a s i sb yt a r g e t i n gE Z H JT e c h n o lC a n c e rR e sT r e a t,:L I UC,YAN GZZ,D E N GZY,e t a l D o w n r e g u l a t e dm i R pc o n t r i b u t e s t op r o g r e s s i o no f l u n ga d e n o c a r c i n o m at h r o u g he l e v a t i n gt h ee x p r e s s i o no fE Z H J C a n c e r M e d,():XU Q H,L I AOBL,HUS,e t a l C i r c u l a rR NA f a c i l i t a t e st h ep r o g r e s s i o no fg a s t r i cc a n c e rb ys p o n g i n g m i R a n du p r e g u l a t i n g HMG B J B i o t e c h n o lL e t t,():D E G R E GO R IJ,J OHN S ON D G D i s t i n c ta n do v e r l a p p i n gr o l e s f o rE Ff a m i l ym e m b e r s i nt r a n s c r i p t i o n,p r o l i f e r a t i o na n da p o p t o s i sJC u r rM o lM e d,():K E N TLN,L E ON EG T h eb r o k e nc y c l e:E Fd y s f u n c t i o n i nc a n c e rJ N a tR e vC a n c e r,():H S I EHJ J,P UR D U EMP,S I GNO R E T T I S,e t a l R e n a l c e l lc a r c i n o m aJ N a tR e vD i sP r i m e r s,:RU P A I MOO L ER,S L A C KFJ M i c r o R NAt h e r a p e u t i c s:t o w a r d san e we r a f o r t h em a n a g e m e n t o f c a n c e r a n do t h e r d i s e a s e sJ N a tR e vD r u gD i s c o v,():H I L L M,T R AN N m i R NAi n t e r p l a y:m e c h a n i s m sa n dc o n s e q u e n c e s i nc a n c e rJ D i s M o d e l M e c h,():d mm Z HANGJ,Q I N X,S UN Q,e ta l T r a n s c r i p t i o n a lc o n t r o lo fP A X r e g u l a t e dm i R /m o d u l a t e sm e t a s t a s i sb ys u p p r e s s i n gA D AM se x p r e s s i o nJ O n c o g e n e,():P A R I S IF,A R I YANS,NA R AYAN D,e ta l D e t e c t i n gc o p yn u m b e rs t a t u sa n du n c o v e r i n gs u b c l o n a lm a r k e r s i nh e t e r o g e n e o u s t u m o rb i o p s i e sJBMCG e n o m i c s,:E OH KJ,K I M HJ,L E EJW,e t a l E F i n d u c e s c e l l p r o l i f e r a t i o n a n di n v a s i o n t h r o u g h t h e e p i t h e l i a l m e s e n c h y m a lt r a n s i t i o na n dn o t c hs i g n a l i n gp a t h w a y s i no v a r i a nc a n c e rJI n t JM o lS c i,():D OULY,HANKY,X I AO MC,e t a l m i R ps u p p r e s s e s t u m o rg r o w t ha n dm e