2021—2022年山东省猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查.pdf

Provincefrom2021to2022LJJ:AnimalHusbandry&VeterinaryNMedicine,2023,55(6):87-92.JIANGDD,WANGK Y,DU YJ,et al.Molecular epidemiological investigation of porcine reproductive and respiratory syndrome virus infection in Shandong2022年山东省猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查J.畜牧与兽医，2 0 2 3，55（6）：8 7-92.姜丹丹，王凯月，杜以军，等。2 0 2 1-.87:2023年畜牧与兽医第6 期第55卷2021一2 0 2 2 年山东省猪繁殖与呼吸综合征病毒分子流行病学调查姜丹丹，王凯月2.3，杜以军，姜平1*（1.南京农业大学动物医学院/农业农村部动物细菌学重点实验室，江苏南京210095；2.山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室，山东济南2 50 10 0；3.天津农学院动物科学与动物医学学院，天津30 0 38 0）摘要：为研究2 0 2 1一2 0 2 2 年猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）在山东地区的流行情况，从疑似发病的猪场采集了10 3份临床样本，采用RT-PCR方法对样品进行检测，并对阳性样品进行GP5和NSP2基因的序列测定、遗传进化分析以及同源性分析。结果显示：10 3份样品中检测到2 1份阳性样品，阳性率为2 0.38%。最终有5个样品能够同时扩增出GP5和NSP2基因序列，遗传进化分析显示，这5个样品中有2 个属于谱系（l i n e a g e）1；2 个属于lineage5；1个属于lineage8。各样品之间GP5基因的核苷酸同源性为8 1.5%99.3%，NSP2基因的核苷酸同源性为56.9%99.4%。本研究表明2 0 2 1一2 0 2 2 年山东地区的PRRSV传播呈现多样性，为PRRSV毒株的遗传变异、演化分析和防控提供了理论基础。关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；同源性；流行病学；遗传变异；进化分析中图分类号：S852.6文献标志码：A文章编号：0 52 9-5130(2 0 2 3)0 6-0 0 8 7-0 6Molecular epidemiological investigation of porcine reproductive and respiratorysyndrome virus infection in Shandong Province from 2021 to 2022JIANG Dandan,WANG Kaiyue23,DU Yijun”,JIANG Ping1*(1.Key Laboratory of Bacteriology,Ministry of Agriculture and Rural Affairs/College of Veterinary Medicine,Nanjing Agricultural University,Nanjing 210095,China;2.Institute of Animal Science and Veterinary Medicine,Shandong Academy of Agricultural Sciences/Shandong Province Key Laboratory of Animal Disease Control and Breeding,Jinan 250100,China;3.College of Animal Science and Veterinary Medicine,Tianjin Agricultural University,Tianjin 300380,China)Abstract:To study the prevalence of porcine reproductive and respiratory syndrome virus(PRRSV)in Shandong Province from 2021 to2022,103 clinical samples were collected of the suspected disease afflicting pigs in different farms.RT-PCR was used to detect the presenceof PRRSV in the samples.The results showed that 21 samples were positive,at a positive rate of 20.38%.Then,the GP5 and NSP2 genes of5 PRRSV strains were amplified and sequenced at the same time.The genetic evolution analysis showed that two strains belonged to lineage1,another two strains belonged to lineage 5 and one strain belonged to lineage 8.The nucleotide homology of the CP5 and NSP2 genes of the5 PRRSV strains were 81.5%-99.3%and 56.9%-99.4%,respectively.Our study showed that PRRSV transmission in Shandong Provincefrom 2021 to 2022 was of diversity,which provided a theoretical basis for the genetic variation,evolutionary analysis,and prevention andcontrol of PRRSV.Keywords:PRRSV;homology;epidemiology;genetic variation;evolutionary analysis猪繁殖与呼吸综合征E（PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种危害全球养猪业发展的接触性传染病。PRRSV属于动脉炎病毒收稿日期：2 0 2 3-0 3-0 6；修回日期：2 0 2 3-0 4-10基金项目：山东省自然科学基金（ZR2020QC196，ZR2 0 2 0 K C0 0 5，ZR2021MC139,ZR2021ZD08）；国家自然科学基金（32 10 2 7 10）第一作者：姜丹丹，女，博士研究生*通信作者：姜平，教授，主要从事动物传染病学研究，E-mail：。科动脉炎病毒属成员，其基因组全长为15.4kb，是一种有囊膜的单股正链RNA病毒 1-3。PRRSV分为美洲型和欧洲型2 个基因型，每个基因型又分为多个基因亚型 4。1996 年我国首次分离到PRRSV，并将其命名为CH-la；2 0 0 6 年后出现高致病性PRRSV（H P-PRRSV），其特征是NSP2基因出现了30 个氨基酸的不连续缺失，猪体感染后出现高热、高发病率和高死亡率的明显特性 4-6 。2 0 15年以来，出现NADC30毒株流行 7-8 。为了解2 0 2 12 0 2 2 年山东地.88Animal Husbandry&VeterinaryMedicine2023No.6Vol.55区PRRSV的流行情况和变异趋势，本试验对2 0 2 1年1月到2 0 2 2 年11月采集的山东地区10 3份PRRSV临床疑似样品进行PCR检测和GP5和NSP2基因测序，并分析其遗传进化规律，为PRRS的防控提供理论依据。1材料与方法1.1主要试剂DNA Marker DL5000、D NA M a r k e r D L2 0 0 0、Pr i-meScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser(PerfectReal Time）、Pr i me ST A R H S D NA Po l y me r a s e 等购自TaKaRa宝生物工程（大连）有限公司；DNA回收试剂盒购自天根生化科技（北京）有限公司；pEASY-Blunt Cloning Kit 购自Transgen Biotech 公司。1.2病料来源与处理2021年1月到2 0 2 2 年11月，在山东省多家养殖场采集10 3份疑似PRRSV感染的样品，包括脾脏、淋巴结和肺脏等。称取1g的病料样品，放入2 mL离心管中剪碎，向管中加人1mL的灭菌PBS后使用组织研磨仪充分研磨，将研磨液放入-8 0 冰箱中反复冻融3次，12 0 0 0 r/min离心15min，上清液经0.22m滤器过滤后置于-8 0 冰箱中保存。1.3引物设计与合成参考GenBank上收录的PRRSVGP5和NSP2基因序列，在基因上、下游的保守区设计引物CP5-F：5-GGGCGACCGTTTTAGCCTGTCT-3，G P5-R:5-ATGGAAAACGCCAAAAGCACCTT-3和 NSP2-F:5-TGATTGGGATGTTGTGCT-3，NSP2-R:5-ATGATGGCTTGAGCTGAG3。PRRSV N基因的引物参考文献9。引物由北京擎科生物科技有限公司合成。1.4RT-PCR扩增及基因测序使用TRIzol法提取病料样品中的RNA，用Pri-meScriptTMRT reagent Kit withgDNA Eraser反转录试剂盒对其进行反转录，得到cDNA。以反转录得到的cDNA为模板，GP5-F/R和NSP2-F/R分别为引物，进行PCR扩增，反应体系如下：GP5-F/CP5-R或NSP2-F/NSP2-R上、下游引物（浓度为10 mol/L)各1 L，5 Pr i me ST A R Bu f f e r（M g Pl u s）10 L,10 x dNTP Mixture（2.5 m m o l/L e a c h）4 L，c D NA100 ng,PrimeSTAR HS DNA Polymerase 1.5 L,加ddH,0至总体积为50 L。将体系配好后，混匀并瞬离，置于PCR仪中进行扩增反应，反应条件如下：982 m in;9 8 30 s，,58 30 s,7 2 1.5m in,35个循环；7 2 10 min；4保存。PCR产物进行1.0%琼脂糖凝胶电泳检测，阳性样品使用DNA回收试剂盒进行胶回收后，连接到pEASY-Blunt载体，并转化到DH5感受态中，送北京擎科生物科技有限公司测序1.5PRRSV遗传进化分析使用DNAStar、M EG A 7.0 软件分析测序片段与GenBank中收录的2 0 株PRRSV毒株（表1）GP5和NSP2基因的同源性，构建遗传进化树，分析2 0 2 1一2022年山东地区PRRSV的遗传变异特征。表1参考毒株信息病毒名称地区年份登录号谱系HUB1中国2006EF0759458BJ中国2016EU8257238HUN4中国2006EF6350068TJ中国2006EU8602488JXA1P80中国2008FJ5488538JXA1中国2006EF1124458JXwn06中国2016EF6410088GDBY1中国2008GQ3744428CH-1a中国1996AY0326268CH-1R中国2008EU8078408GD中国2008EU8257248CM2中国2011JN6624243QYYZ中国2011JQ3087983QY2010中国2010JQ7436663MN184B美国2006DQ1760201CHsx1401中国2014KP8616251JL580中国2015KR7063431NADC30美国2008JN6544591RespPRRS MLV美国1994AF0661835VR2332美国2003AY15056452结果与分析2.1RT-PCR检测对收集到的山东不同地区猪场疑似PRRSV感染病料共10 3份进行剪碎、研磨并提取RNA，以反转录得到的cDNA为模板，使用N基因的扩增引物进行RT-PCR检测，检出阳性病料2 1份，阳性率为2 0.38%。2.2GP5和NSP2基因遗传进化分析对检测阳性的2 1份样品的GP5和NSP2基因进行扩增，通过琼脂糖凝胶电泳鉴定后，使用胶回收试剂盒回收目的基因片段，将其连接到pEASY-Blunt载体上并测序，最终有5个样品能够同时扩增出GP5.8920233年畜牧与兽医第6 期第55卷和NSP2基因序列，将测序结果与GeneBank收录的代表性毒株的CP5和NSP2基因进行比较分析，分别绘制遗传进化树。由图1可知，GP5和NSP2基因的遗传进化分析结果类似，5个样品中有2 个（SD D Y2、SD D Y3）与NADC30处于同一分支，属于谱系（lineage）1；2 个（SDQD1、SD Q D 4）与Resp-PRRSMLV处于同一分支，属于lineage5；1个（SD D Y4）与JXA1处于同一分支，属于lineage8；未检出与QYYZ处于同一分支（lineage3）的样品。AHUB1.seqBSDDY4.seqBJ.seqJXA1P80.seqHuN4.seqJXA1.seqTJ.seqJXwm06.seqJXwn06.seqTJ.seqJXA1.seqGD.seqSDDY4.SeqLineage8HuN4.seqLineage81GD.seqHUB1.seqGDBY1.seqGDBY1.seqJXA1P80.seqLBJ.seqCH-1RseqCH-1R.seqCH-1a.seqCH-1a.seqVR2332.seqFGM2.seqSDQD4.seqLineage5QYYZ.seqLineage 3SDQD1.seqQY2010.seqLRespPRRSMLV.seqVR2332.seq-GM2.seqSDQD1.seqQYYZ.seqLineage3SDQD4.seqLineage5QY2010.seqRespPRRSMILV.seqMN184B.seqMN184B.seqSDDY3.seqJL580.seqSDDY2.SeqSDDY3.seqCHsx1401.seqSDDY2.seqNADC30.seqLineagelCHsx 1401.seqLineage1JL580.seq-NADC30.seq0.010.05A.GP5的遗传进化分析；B.NSP2的遗传进化分析。表示本研究测序样品图1基于PRRSVGP5和NSP2的遗传进化分析2.3GP5基因同源性分析5个PRRSV阳性样品GP5基因的核苷酸同源性为8 1.5%99.3%，与美洲型代表毒株VR2332的核苷酸同源性为8 3.5%99.7%；与高致病性毒株JXA1的核苷酸同源性为8 1.8%9 9.3%；与RespPRRSMLV的核苷酸同源性为8 3.5%99.7%；与CH-1a的核苷酸同源性为8 3.7%94.9%；与NADC30的核苷酸同源性为8 5.7%93.4%；与HuN4的核苷酸同源性为8 2.0%99.3%；与QYYZ的核苷酸同源性为8 1.2%8 4.2%。2.4GP5氨基酸序列分析5个PRRSV阳性样品GP5的氨基酸序列与参考毒株进行比较，结果见图2。GP5的氨基酸序列以点突变为主，未发现插序列，其中SDDY3在34位氨基酸的位置存在缺失突变，该突变位于GP5蛋白的高变区HVR1（32 35a a）（以VR2332为参考），在信号肽区域（1 31aa）中SDDY4发生与JXA1毒株同样的变异；SDQD1和SDQD4发生与RespPRRSMLV毒株同样的变异；SDDY2和SDDY3分别发生6个和7 个碱基突变，基本与NADC30毒株类似。不同谱系样品PRRSV的毒力位点R13和R151发生突变，由图2 可以看出，SDQD1发生R13Q13，R151G 151的突变；SDQD4发生R13Q13的突变；SDDY2发生R13P13，R151K 151的突变；SDDY3发生R13Q13的突变；SDDY4在毒力位点没有发生突变。有2 个样品在中和表位（37 45aa）发生碱基突变，SDDY4样品的L39I39，SDDY3的L41S41。有3个样品在非中和表位（2 7 30 a a）发生碱基突变，SDQD1和SDQD4的V29A29，SD D Y3的N30D302.5NSP2其基因同源性分析5个PRRSV阳性样品NSP2基因的核苷酸同源性为56.5%99.4%，与美洲型代表毒株VR2332的核苷酸同源性为6 1.2%99.9%，与高致病性毒株JXA1的核苷酸同源性为6 0.0%9 6.5%，与RespPRRSMLV的核苷酸同源性为6 1%10 0%，与CH-1a的核苷酸同源性为6 0.1%8 8.7%，与NADC30的核苷酸同源性为50.1%8 6.9%，与HuN4的核苷酸同源性为6 0.0%96.2%，与QYYZ的核苷酸同源性为59.1%7 6.9%。2.6NSP2氨基酸序列分析5个PRRSV阳性样品NSP2的氨基酸序列与标准毒株进行比较，结果见图3。位于lineage1的2 个样品（SDDY2和SDDY3）与NADC30毒株的特征一致，在32 3 433位、48 1位以及533 551位发生131个氨基酸的不连续缺失；位于lineage5的2 个样品.90No.6Vol.552023AnimalHusbandry&VeterinaryMedicine（SD Q D 1和SDQD4）与RespPRRSMLV毒株的特征一致，没有发生氨基酸的缺失和插入；位于lineage8的1个样品（SD D Y4）与HP-PRRSV毒株的特征一致，在48 1位以及534 56 2 位有30 个氨基酸发生不连续缺失。MajorityMLGKCLTAGCCRLFLWCIVPFCLAVLNASNNSSSHLQLIYNLTLCELNGTDWLAQKFDWAVETFVIFPVLTHIVSYGALTTSHFLDTVGLATVSTAGITKGRYRWRSPVIIEKGGKV18283e405060708090100150160HUB1.5eq1N工298VBJ.seq298NVHuN4.seq298VTJ.seq298VJXwno6.seqN298VJXA1P80.5eq.N.G.298JXA1.seq298VGD.5eqN298VGDBY1.SeqN工A298VSDDY4.seqN工298VCH-1R.SeqQF.N.V298SNSVCH-1a.seqNSFN298VGM2.seqQ.NG.YSTNC.V.298QY2010.seq.NG.YSTN298QYYZ.seqNG.YSTNS.V.A298RespPRRSMLV.Seq.D.N.A.V.298AGVR2332.5eqA.D.A.V298SDQD4.seq.D.A.V298SDQ01.seq.SD.NA.V298AGNADC30.SeqNS.NER.Y298JL580.seqPNSN.DK.S.298SCHsx1401.seqQN.H.工.NE工298MN184B.5eq工.NDH.S.298R.ISDDY2.5eqSV工NE298SDDY3.5eq.GNH.N.295图2GP5蛋白氨基酸序列对比分析MajorityTTEQPHVNQCCALVPWTQEPLDKDSVPLTAFSLSNCYYPAQGDEVHHRERLNSVLSKLEEWLEEYGLMSTGLGPRPVLPSGLDELKDQMEEOLLKLANTQATSEMMANAAEQVDLKAWKSYPRWTPPPPPPRVQPRKTKSVKSLPEG31832033340350360370380390480410428430440450HuN4.seq6TJ.seqG.RHUB1.5eq.G.A.R.DGDBY1.Seq.R.DBJ.seq.6.G.P.6.R.0GD.seq.6.RJXA1P88.5eg.T.R.JXA1.seq6RJXwne6.seq.RSDDY4.seq.Q.T.T.CH-1a.seqR.6.PNCH-1R.Seq.R.6.S.EP.NGM2.5eqLCRR.V.P.SA.Q.LLSQY2010.seqLC.D.RR.I.A.RRT.V.P.L.SA.APSQYYZ.seg.LC.D.RR.I.A.RR.T.V.P.L.SA.V.A.VPTRespPRRSMLV.Seq.IKL.Q.R.KS.NN.K.R.P.EP.TR.RVR2332.seq.IKL.Q.R.KS.NN.A.YTAK.R.P.EP.T.R.P.RSDQD1.5eq.-QL.Q.R.KS.NN.A.YRK.R.P.EP.R.RSDQD4.seq.-L.Q.R.KS.NNA.Y.RTAK.R.P.EPT.R.NKP.RCHsx1481.seqAAKL.PT.R.H.P.T.A.RSPEF.S.AE.R.NPN184B.seqAAKL.LT.RH.AT.RS.KF.AE.SJL580.5eqAV.L.PT.H.P.T.A.GSSEF.S.AE.R.NNADC30.5eqAAKL.LI.H.P.T.KSEF.S.AE.R.NSDDY2.seqA.RL.LA.HTS.T.AA.TS.EF.S.AG.R.NSDDY3.SeqA.KL.LTD.H.S.TAAA.MSSEF.VR.T.NMajorityKPVPAPRRKVRSDCGSPVLMGONVPNGNED-TVGGPFNFPTPSEPMTPSSEPVLVPASR-RVPKLMTPLSGSAPVPAPRRTVT-AATTLTHODEPLDLSASSQTEYEASPLAPPONMGILEAGG460470480498500510520530540550560578580590600HuN4.seqS.MTJ.seqHUB1.5eqS.GOBY1.SeqS.三PBJ.seq工.5.GD.5eqS.D.K.JXA1P8e.seqSVJXA1,seqJXiwno6.seqSDDY4.seq.C.A.A.E.VRCH-1a.seq.G.M.Q-HI.RPV.PSRPMTPLSEPIFVSAPRHKFQ.EEANPYFCH-1R.SeqM.Q-HI.RPV.SRPMTPLSEPIFVSAPRHKFQ.EEANP二G42.5eqA.PGG.T.M.LQ-HF.ST.P.PRLMTPLSEPVFVSAPRHEFR.KGVNLT.AP.C.F.V.SVLQL.E.V.GDKEQY201e.segA.PGG.T.M.LQ-HF.ST.PRLMTPLSEPVFVSAPRHEFR.EGVNLT.A.C.F.V.SVLQL.E.V.GDKEQYYZ.seqPGG.T.M.LQ-HF.ST.PPRLMTPLSEPVFVSAPRHEFR.EGVNLT.A.CF.V.SVLQL.E.V.GDKERespPRRSMLV.Seq.GL.I.SSPQ-CIFRPA.EP.I.G.SRPVTPLSEPIPVPAPRRKFQ.KRLSS.AIPPY.N.P.SG.V.GVE.VR2332.5eqGSL.GD.S.LA.SS.L.I.SSPQ-CIFRPA.EP.I.G.SRPVTPLSEPIPVPAPRRKFQ.KRLSS.AIPPY.P.SG.V.GVE.sDQ01.seq.G.SL.GD.S.LA.SS.DLL.I.SSPQ-CIFRPA.EP.I.G.SRPVTPLSEPIPVPAPRRKFQ.KRLSS.AIPPY.N.P.SG.V.GSR.SDQ04.seqSL.GDA.S.LA.SS.DLL.I.SSPQ-CIFRPA.EP.I.G.SRPVTPLSEPIPVPAPRRKFO.KKLSS.AIPPY.N.V.P.SG.V.GVE.CHsx1401.5eq.I.RG.L.SLCG.F.DS.GLA.HS.ILP.SVAR.N.P.P.RT.SR.KSS.ITPT.S.CGLd.EGNL.VG.AC.GL.L.SEDA.AVRRMN1848.5eqR.K.IG.R.ISL.G.L.DSR.LA.S.D.LP.LVAS.P.P.RV.SR.VSSPIV.T.GLR.EGWNL.V.AC.L.LSEOV.AVERJL580.5eqR.L.RI.M.L.SL.GDF.DS.AA.HS.VLL.VAR.N.P.P.RT.FR.KPSSMT.T.CRLQ.EGINL.VR.AC.P.S.L.SEDA.AMR.NADC30.seQR.L.I.R.L.SL.G.F.DS.LA.RS.VLP.SVAR.N.P.P.RT.SR.KPSPIV.T.CGLO.EGVNL.VG.AC.L.L.SEDA.AVRRSDDY2.seQR.L.I.M.LAALDG.F.SR.LAS.HS.VLL.SVAR.D.PI.P.RT.FQ.P.PTA.TRFdAGKMGS.VA.PAC.L.SEDA.TV.RSDDY3.seqR.L.I.M.FAALD.F.DR.AN.HP.V.L.SVAR.D.PI.P.RT.SQ.PSPTA.T.M.RLAGKMDS.W.PAC.L.H.S.L.SEDA.MV.图3NSP2蛋白氨基酸序列对比分析9120233年畜牧与兽医第6 期第55卷3讨论PRRSV基因组至少包含10 个开放阅读框（O RF），其中ORF1a和ORF1b编码至少16 种与复制相关的非结构蛋白，ORF2a、O RF2 b、O RF3、ORF4、O RF5、O RF5a、O RF6 和ORF7编码8 种病毒结构蛋白 10-1。PRRSV自198 7 年在美国暴发以来，由于其基因组突变的多样性，导致了对PRRS的防控更加困难，对全球养猪业造成了巨大的经济损失，至今PRRS仍然是威胁世界范围内养猪企业的重要传染病 12-131。从1996 年以来，我国先后出现了3次PRRSV的大流行，分别是经典毒株、高致病性毒株和NADC30毒株 13-15。目前，中国主要流行的PRRSV为美洲型病毒，分为4个谱系：lineage1、lineage 3、l i n e a g e 5以及 lineage 816。为了跟踪和检测PRRSV毒株的遗传进化，揭示其基因组变异的演变规律，本研究采集了2 0 2 1一2 0 2 2 年山东地区部分发病猪场的临床样品，对检测PRRSV阳性的样品进行基因测序，分析CP5和NSP2基因的遗传进化、核苷酸同源性以及基因缺失特征。结果显示，10 3份临床样品PRRSV阳性率为2 0.38%。完成5个样品的GP5和NSP2基因序列分析，其中2 个属于lineage1，2个属于lineage5，1个属于lineage8，为PRRS防控提供了重要的理论依据。GP5是PRRSV中一种主要的膜蛋白，参与病毒的感染过程。由于ORF5的高度变异性，常被用于PRRSV分离株的遗传进化分析和分类。此外，CP5是一种重要的免疫原性蛋白，含有几个主要中和性抗原表位和N-糖基化位点，在病毒的复制、感染以及中和抗体产生中发挥重要作用 17-18 。通过对GP5基因的同源性分析发现，SDDY4与JXA1和HuN4毒株的同源性最高为99.3%，属于高致病性毒株；SDQD1和SDQD4与RespPRRSMLV毒株的同源性最高为99.7%，属于经典PRRSV毒株；SDDY2和SDDY3与NADC30毒株的同源性最高分别为93.4%和8 9.0%，属于类NADC30毒株。R13和R151是PRRSV潜在的毒力位点 19，本研究测序的5个样品中，有4个样品GP5的R13和R151位点发生突变，这表明这4个样品中的毒株致病性可能发生了改变；有2 个样品的中和表位（37 45aa）发生了碱基突变，说明病毒逃逸疫苗免疫诱导中和作用的能力产生了变化，疫苗免疫的保护作用可能有所降低。NSP2是最大的非结构蛋白，包含高度可变区，该区域经常发生碱基突变、插人或缺失，所以NSP2可能是监测PRRSV遗传和进化的重要指标 2 0 。通过对NSP2基因的同源性分析发现，SDDY4与JXA1P80毒株的同源性最高为96.8%，属于高致病性毒株；SDQD1和SDQD4与RespPRRSMLV毒株的同源性最高分别为99.4%和10 0%，属于经典PRRSV毒株；SDDY2和SDDY3与NADC30毒株的同源性最高分别为8 6.9%和8 5.3%，属于类NADC30毒株。本研究测序的5个样品中，其中1个样品有30 个氨基酸发生不连续缺失，与HP-PRRSV的特征是一致的，2个样品存在131个氨基酸的不连续缺失，与NADC30毒株的特征是一致的；另外2 个样品与RespPRRSMLV毒株的特征是一致的，并没有发生氨基酸的缺失或者插人。以上结果表明，山东地区PRRSV的传播存在多样性。综上所述，山东地区2 0 2 1一2 0 2 2 年的PRRSV流行呈现多样性，PRRSV仍然在发生遗传变异，只有不断对其进行流行病学监控，才能为PRRS的防控提供理论依据。参考文献：1ZHOU Z,LIU Q,HU D,et al.Complete genomic characterizationand genetic diversity of four European genotype porcine reproductiveand respiratory syndrome virus isolates from China in 2011 J.Virus Genes,2015,51(3):375-384.2LIY,XU G,DU X,et al.Genomic characteristics and pathoge-nicity of a new recombinant strain of porcine reproductive and respir-atory syndrome virus J.Arch Virol,2021,166（2):38 9-402.3ZHOU Z,WU J,ZHANG S,et al.Analysis of 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