1例犬子宫蓄脓的诊治及病原菌的耐药性分析.pdf

1 例犬子宫蓄脓的诊治及病原菌的耐药性分析2023 年 第 9 期1 例犬子宫蓄脓的诊治及病原菌的耐药性分析王超，刘正伟，高锋，王心竹，郝春晖，刘琪，赵福庆*（辽宁农业职业技术学院，辽宁 营口 115009）摘 要：文章旨在探究犬子宫蓄脓中病原菌的种类以及耐药情况。对大连市某动物医院接诊的一病例进行了一般检查、血常规检查、血液生化检查、X射线检查、B超检查，最终确诊为子宫蓄脓。对子宫内病原菌进行分离培养鉴定以及药物敏感试验，确定致病菌为大肠杆菌，并对庆大霉素、头孢曲松、头孢噻肟、阿米卡星、头孢吡肟、左氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、氨曲南、复方新诺明、多黏菌素B敏感，对头孢他啶中敏，对红霉素、头孢呋辛、头孢唑啉耐药。根据药敏结果选择头孢曲松进行治疗，取得了较好的治疗效果。关键词：子宫蓄脓；病原分离鉴定；药敏试验；大肠杆菌中图分类号：S 829.2 文献标识码：A 文章编号：1672-9692（2023）09-0045-05Diagnosis and treatment of a dog with pyometra and analysis of drug resistance of pathogenic bacteriaWang Chao,Liu Zhengwei,Gao Feng,Wang Xinzhu,Hao Chunhui,Liu Qi,Zhao Fuqing*(Liaoning Agricultural Vocation-Technical College,Liaoning Yingkou 115009)Abstract:The purpose of the article was to investigate the species and drug resistance of pathogenic bacteria in canine uterine pus storage.General examination,blood routine examination,blood biochemical examination,X-ray examination and B-ultrasonic examination were carried out in a case admitted to an animal hospital in Dalian.The pathogenic bacteria in utero were isolated,cultured,identified and tested for drug sensitivity.The pathogenic bacteria were identified as Escherichia coli,and were sensitive to gentamicin,ceftriaxone,cefotaxime,amicacin,cefepime,levofloxacin,ciprofloxacin,ofloxacin,amtronam,cotrimoxazole and polycolistin B,mesomin to ceftazidime,resistant to erythromycin,cefuroxime and cefazolin.Ceftriaxone was selected for treatment according to the results of drug sensitivity,and good therapeutic effect was achieved.Key words:Pyogenic uterus;Pathogen isolation and identification;Drug susceptibility test;Escherichia coli宠物犬子宫蓄脓是临床中发病率较高的疾病之一，年龄越大发病率越高1。子宫蓄脓是由于子宫脓液聚集以及条件性致病菌感染加重为特征的疾病2。研究表明，该病发病原因复杂，与机体内生殖激素、致病菌的毒力以及犬的年龄和品种有关3。子宫蓄脓分为两种类型：一种为开放型子宫蓄脓，主要表现为阴门处流出脓性分泌物；另一种为闭合型子宫蓄脓，阴门洁净，无分泌物流出4。临床中，两种类型发病严重时常表现为功能紊乱伴发的呕吐、腹泻、电解质失衡等情况，严重时可发生休克、黄疸及脓毒血症5。在整个疾病发展过程中，致病菌起到主要作用，因此，明确致病菌种类以及找到治疗效果良好的抗生素是治疗本病的关键。本文对1例犬子宫蓄脓的病例进行了细菌分离鉴定，并对分离细菌进行药敏试验研究，以期为该病的诊断、治疗及预防提供参考。1病例资料患犬雌性，7岁，体重8.6 kg，免疫齐全，未交配。主诉近1 w患犬阴道口流出黏性棕色分泌物，有腥臭味；食欲减退，饮水量少，精神萎靡，呼吸较从前急促，无其他病史。2检查结果2.1患犬临床检查结果患犬有舔舐生殖器现象，体温升高（39.7），呼吸急收稿日期：2023-03-07作者简介：王超，硕士，助教，研究方向为小动物临床诊疗。通讯作者：赵福庆，博士，讲师，研究方向为动物疾病诊断及治疗。基金项目：辽宁省自然科学基金项目营口联合基金（2021-YKLH-11）；辽宁农业职业技术学院院级课题（Lnz202032）452023 年 第 9 期Modern Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine促（37 次/min），收缩压108 mmHg，舒张压58 mmHg，心率110 次/min，黏膜潮红，皮肤轻度脱水。触诊腹部膨大，阴门处有分泌物流出。建议进行实验室检查和影像学检查。2.2患犬实验室检查结果2.2.1患犬阴道分泌物检查结果无菌棉签蘸取患犬阴道分泌物，涂片染色，镜检观察。结果发现，镜检可见分泌物中有大量的杆状细菌和炎性细胞，未发现霉菌和滴虫感染。2.2.2患犬血常规检查结果（见表1）患犬外侧小隐静脉采血约0.5 mL，放入含有EDTA试管中混匀，利用爱德氏血液分析仪进行检测。由表1可知，患犬白细胞数为59.15109/L，中性粒细胞数为 51.62109/L，单核细胞数为 4.56109/L，数值偏高。血小板数为73109/L，数值偏低。结果提示，患犬体内存在严重感染。2.2.3患犬血清生化检查结果（见表2）患犬外侧小隐静脉采血约1 mL，放入无抗凝剂的试管中，利用血液生化分析仪进行检测。由表2可知，患犬血液球蛋白含量为51 g/L，C反应蛋白含量为97.5 mg/L，提示患犬体内存在显著的全身炎症。2.3患犬影像学检查结果2.3.1患犬X射线检查结果（见图1、图2）由图1、图2可知，患犬腹腔子宫部位出现密度均匀的液体成像，提示患犬子宫内可能存在积液或蓄脓。2.3.2患犬B超检查结果患犬保定，对腹部超声部位剃毛，涂抹耦合剂，利用探头在患犬耻骨前端先纵向扫查，再横向扫查以确定膀胱位置，再利用探头从患犬子宫颈向上扫查，子宫超声扫查结果见图3。由图3可知，患犬子宫壁增厚，伴有积液，提示患犬患有子宫蓄脓、子宫内膜炎、子宫壁囊肿。2.4患犬诊断结果根据临床症状及实验室检查、影像学检查结果，患犬表1患犬血常规检测结果Tab.1Routine blood test results of sick dog项目白细胞数目/(109/L)中性粒细胞数目/(109/L)淋巴细胞数目/(109/L)单核细胞数目/(109/L)中性粒细胞百分比/%淋巴细胞百分比/%单核细胞百分比/%红细胞数目/(1012/L)血红蛋白/(g/L)红细胞比容/%平均红细胞体积/fL平均红细胞血红蛋白含量/pg红细胞分布宽度变异系数/%血小板数目/(109/L)结果59.1551.622.764.6587.34.77.95.9114339.566.824.213.273参考范围6.0017.003.6212.300.834.910.141.9752.081.012.033.02.013.05.108.5011019033.056.060.076.020.027.012.517.2117490表2患犬血清生化检查结果Tab.2Serum biochemical test results of sick dog项目血糖/(mmol/L)肌酐/(mol/L)尿素/(mmol/L)磷离子/(mmol/L)钙离子/(mmol/L)总蛋白/(g/L)白蛋白/(g/L)球蛋白/(g/L)谷丙转氨酶/(U/L)碱性磷酸酶/(U/L)谷氨酰转移酶/(U/L)总胆红素/(mol/L)胆固醇/(mmol/L)胰淀粉酶/(U/L)脂肪酶/(U/L)C反应蛋白/(mg/L)结果5.89823.51.052.3082315111193055.1350021097.5参考范围4.117.95441592.59.60.812.201.983.0052822340254510125232120110152.848.265001 5002001 800010.0图1患犬X射线检查结果（腹背位）Fig.1 X-ray results of sick dog(ventral dorsal position)图2患犬X射线检查结果（右侧位）Fig.2 X-ray results of sick dog(right lateral position)46现代畜牧兽医2023 年 第 9 期确诊为子宫蓄脓。经与宠主沟通后决定进行子宫摘除术。3治疗3.1术前准备患犬禁食12 h，禁水4 h，术前补液以纠正机体电解质平衡。手术器械包消毒烘干。麻醉前患犬注射止血敏（酚磺乙胺）、美洛昔康注射液，仰卧保定后进行术部剃毛，丙泊酚诱导麻醉，气管插管连接呼吸麻醉机，异氟烷维持术中麻醉。术部碘伏消毒，铺设创巾。3.2手术过程患犬脐后方3 cm处切开约5 cm的切口，剪除多余的脂肪组织以防止术后结节产生。子宫钩进入患犬腹腔将肠管拉到一侧，暴露子宫后将子宫角缓慢拉出，找到卵巢和输卵管，并钝性分离出卵巢，利用三钳法分别结扎两侧卵巢血管。分离周围的子宫韧带，将两边的动、静脉结扎完全，利用三钳法将子宫体夹紧贯穿结扎，切断子宫体。患犬摘除的子宫和卵巢见图4。荷包缝合患犬子宫残端，先用温热的0.9%生理盐水冲洗，再使用温热的甲硝唑冲洗腹腔，缝合腹壁肌肉层、皮下组织，最后常规结节缝合患犬皮肤，腹部伤口消毒上药、贴敷料贴。患犬苏醒后佩戴伊丽莎白圈，防止舔咬伤口。3.3术后护理术后患犬精神沉郁，没有食欲、不愿意活动，8 h后少量喂食喂水，观察患犬无异常后再少量喂食高能量易消化食物。观察患犬状态，无异常后再慢慢过渡到正常的饮食结构。整个护理过程中，应保证环境安静整洁。3.4病原菌的分离与鉴定手术取出子宫后，2 mL无菌注射器抽取约1 mL子宫内液体，放入1.5 mL无菌离心管中，置于4 温箱保存后将样品转送至实验室进行病原菌分离鉴定。3.4.1病原菌培养及染色镜检结果样本经划线法涂布接种于培养皿，37 培养12 h后，可观察到培养基上的菌落形态单一，呈灰白色、圆形、光滑、湿润、不透明、菌落较大，无嗜血现象。挑取单个菌落进行革兰氏染色，显微镜下观察细菌形态单一，呈短杆状，为革兰氏阴性菌（红色），菌株编号命名为W201101。革兰氏染色镜检结果见图5。3.4.2病原菌PCR鉴定结果挑取单个菌落加入1 mL灭菌水中制成菌液，100 水浴加热10 min，8 000 r/min离心3 min。取1 L离心后的菌液作为 PCR 扩增模板，利用 16S rDNA 通用引物 27F、1492R作为引物，扩增片段长度为1 500 bp。PCR 反 应 体 系（20 L）：2Taq PCR MasterMix 10 L、上下游引物各1 L、DNA模板1 L、灭菌水7 L。PCR 反应条件：95 预变性 5 min；94 变性 30 s，55 退火30 s，72 延伸2 min，共30个循环；72 延伸7 min，4 保温。PCR产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳验证后，由苏州泓迅生物科技有限公司进行测序，测序结果在NCBI核酸数据库中进行BLASTN搜索。病原菌16S rDNA基因检测结果见图6，病原菌16S rDNA序列同源性比对结果见表3。3.5病原菌药敏试验结果（见表4）采用K-B琼脂扩散法进行药敏试验，游标卡尺量取抑菌圈直径。由表4可知，病原菌对庆大霉素、头孢曲松、头孢噻肟、阿米卡星、头孢吡肟、左氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、氨曲南、复方新诺明、多黏菌素B敏感，对红霉素、头孢呋辛、头孢唑啉耐药，对头孢他啶中介。图3患犬B超检查结果Fig.3 Result of B-ultrasonic examination of sick dog图4患犬摘除的子宫和卵巢Fig.4 Uterus and ovaries removed from sick dog图5革兰氏染色镜检结果Fig.5 Results of microscopic examination with Gram staining472023 年 第 9 期Modern Journal of Animal Husbandry and Veterinary Medicine3.6治疗用药方案术后前5 d每天对患犬静脉输注营养液、消炎等对症治疗，输液方案为：静脉滴注0.9%氯化钠注射液150 mL+头孢曲松钠 200 mg，5%葡萄糖注射液 150 mL+代谢强10 mL，0.9%氯化钠注射液150 mL+谷胱甘肽540 mg，替硝唑注射液50 mL；皮下注射美昔注射液0.9 mL。住院1 w后患犬出院，术后10 d复查，伤口愈合良好，遂拆线。拆线后佩戴伊丽莎白圈，3 d线道完全愈合，摘下伊丽莎白圈。4讨论犬子宫蓄脓是一种常见的子宫内膜疾病。研究发现，犬子宫蓄脓在各个年龄段均可发生，最小发生子宫蓄脓的犬为6月龄，10岁前的母犬发病率在19%，未妊娠的母犬发病率相对较高6-7。发生这一现象的原因除垂体卵巢功能下降之外，还与免疫系统功能下降有关8。子宫蓄脓也与雌激素、孕酮的水平有关，雌激素水平较高可以提高外周血液中自然杀伤细胞的吞噬能力，而孕酮水平升高时，犬子宫内膜组织出现异位性增生，子宫平滑肌的收缩能力降低，导致子宫腺体毒素积累和异常排泄。母犬发情期和发情后期，雌激素水平下降，孕酮水平升高，导致非特异性的免疫效率降低，发情期和发情早期Toll样受体（TLR）的表达降低，使胚胎定植和发育。在此阶段，致病菌进入子宫内并附着于子宫内膜，刺激免疫反应发生，促进Toll样受体2（TLR2）和Toll样受体4（TLR4）的表达增加，从而刺激细胞因子、环氧合酶-2（COX-2）和前列腺素E2和F2的分泌，引起炎症反应9。本病例中，患犬未受孕，年龄较大，表现生殖道流出脓性分泌物、体温升高、精神萎靡、轻度脱水、腹部膨大等较明显且典型的症状，因此初步判定为开放型子宫蓄脓。血常规检查发现，患犬白细胞数、中性粒细胞数、单核细胞数等指标的数值均偏高，生化检查球蛋白和C反应蛋白数值偏高，表明患犬存在严重感染。超声检查显示子宫增粗1.93 cm，子宫壁增厚，超声和X射线检查均显示子宫内有液体成像。上述检查可以确诊该犬患开放性子宫蓄脓。子宫蓄脓除了影响犬生殖系统外，还会导致其他脏器发生病变10，分泌物及化脓菌滞留在子宫内，产生的毒素被吸收至血液会引起肝肾损伤，导致肝肾功能下降11。本病例中，患犬肌酐、尿素以及转氨酶等指标均在参考范围内，表明肝肾未受到损伤。研究表明，与闭锁型子宫蓄脓相比，开放型子宫蓄脓是中度炎症。闭锁型子宫蓄脓患犬外阴部没有分泌物，通常难以得到及时治疗，大量分泌物在子宫内积聚使子宫腔扩张；若病程在晚期，可使子宫内膜萎缩，严重时可引发败血症，导致患犬死亡12。犬子宫蓄脓常用的治疗方案分为保守治疗和手术治疗。对于开放型子宫蓄脓，保守治疗可采用注射前列腺素、孕酮拮抗剂阿来司酮、抗生素等药物进行治疗，在发病早期治疗效果较好；对于闭锁型子宫蓄脓，保守治疗存在一定的风险，因而通常采用手术治疗8,13。本病例中，患犬年龄较大，不作为育种犬，与宠主沟通后决定采取手术治疗。术前稳定体液平衡纠正电解质紊乱，术中注意麻醉风险，术后给予抗生素防止感染发生；为减少术后疼痛带来的应激反应，应给予镇痛药14。手术取出子宫后，利用无菌注射器抽取子宫内液体，进行病原菌分离，通过细菌培养、革兰氏染色、16S rDNA测序最终确定该病原菌为大肠注：M为DL2000 DNA Marker，1为分离病原菌。图6病原菌16S rDNA基因检测结果Fig.6 16S rDNA gene results of isolated bacteria表3病原菌16S rDNA序列同源性比对结果Tab.3Homology comparison results of bacterial 16S rDNA sequences菌株编号W201101最高相似率/%100参考菌株GenBank登录号KP789325.1菌种大肠杆菌表4病原菌药敏试验结果Tab.4Drug sensitivity test results of pathogenic bacteria项目红霉素庆大霉素头孢曲松头孢噻肟阿米卡星头孢吡肟左氟沙星环丙沙星氧氟沙星头孢他啶氨曲南复方新诺明头孢呋辛头孢唑啉多黏菌素B纸片含量/g151030303030555303025303030判定标准/mmR15121314141413151214151014158I16201314142015221516151714161620131515171621111515171621911S211521231718172116182216181812抑菌圈直径/mm10.7422.0228.3127.5923.4920.4431.8336.9632.7216.0629.8828.1113.0911.6917.82结果RSSSSSSSSISSRRS注：R表示耐药；I表示中敏；S表示敏感。48现代畜牧兽医2023 年 第 9 期杆菌。为提高治疗效率、节省治疗费用以及预防病原菌传播，对分离出的病原菌进行药物敏感性试验。选取15种常见抗生素进行试验，结果显示，该病原菌对除红霉素、头孢呋辛、头孢唑啉外的其他12种抗生素均敏感。根据药敏试验结果，患犬术后选用头孢曲松钠治疗，效果良好。手术治疗犬子宫蓄脓效果良好，但降低了育种价值，且子宫、卵巢摘除后，发生癌症、骨科疾病、肥胖症和尿失禁等疾病的风险大大增加15。此外，与成年犬相比，老年犬的手术风险较高，选择治疗方案时更应慎重。本研究结果为犬子宫蓄脓的治疗和预防提供了一定的理论依据。5结论犬子宫蓄脓常发生于年龄较大且未妊娠的母犬中，犬的发病率大于猫，发病与激素水平、病原菌感染以及相关疾病的继发感染相关。目前，临床诊断子宫蓄脓的检查方式以血常规、血液生化检查、C反应蛋白检查、X射线检查及超声检查为主。手术治疗犬子宫蓄脓具有良好效果，但也存在增加其他疾病风险的弊端，因此建议采用早期保守治疗配合抗生素使用的治疗方法。参考文献1 郝志明.犬子宫蓄脓研究进展J.中国兽医杂志,2018,54(8):70-72.2 Ahn S,Bae H,Kim J,et al.Comparison of clinical and inflammatory parameters in dogs with pyometra before and after ovariohysterectomyJ.Can J Vet Res,2021,85(4):271-278.3 于凤芝,乔立东,王喜顺,等.犬子宫蓄脓症的形成原因及诊治J.山东畜牧兽医,2023,44(3):52-54.4 陈诗涵,魏润宇,李军朝,等.7例犬子宫蓄脓病例的病原菌分离鉴定J.中国动物检疫,2019,36(12):83-87.5 洪菲,梁晚枫.1例犬子宫蓄脓诱发肾衰竭及采用腹膜透析法治疗的效果观察J.黑龙江畜牧兽医,2018(14):221-222.6 Stone E A,Littman M P,Robertson J L,et al.Renal dysfunction in dogs with pyometraJ.J Am Vet Med Assoc,1988,193(4):457-464.7 曲佳宝.哈市犬子宫蓄脓发病情况、病理学及细菌学的调查分析D.哈尔滨:东北农业大学,2019.8 董影.大连金州区60例犬子宫蓄脓的诊治D.沈阳:沈阳农业大学,2022.9 Silva E,Henriques S,Brito S,et al.Oestrous cycle-related changes in production of Toll-like receptors and prostaglandins in the canine endometriumJ.J Reprod Immunol,2012,96(1/2):45-57.10 王馨悦,魏学良.162例犬子宫蓄脓症调查分析J.现代畜牧兽医,2020(5):40-43.11 刘佩,谢秋秋,黎铭心,等.1例犬子宫蓄脓的诊断与治疗J.江西畜牧兽医杂志,2022(3):43-46.12 Fieni F,Topie E,Gogny A.Medical treatment for pyometra in dogsJ.Reprod Domest Anim,2014,49(2):28-32.13 张久丽.犬子宫蓄脓的诊断与手术治疗J.现代畜牧科技,2021(9):91-92.14 王虞,刘舒月,陈芯怡,等.5例老年犬子宫蓄脓症围手术期并发症的处理与分析J.黑龙江畜牧兽医,2020(4):57-60.15 Zheng H H,Du C T,Zhang Y Z,et al.Identification of canine pyometra-associated metabolites using untargeted metabolomicsJ.Int J Mol Sci,2022,23(22):14161.49