饲料检测操作规程.doc

目 录一、化验仪器操作规程31.电子天平操作规程32.马福炉操作规程43.恒温干燥箱操作规程44.凯氏定氮仪操作规程55.离心机操作规程56.数显恒温水浴锅操作、维护规程66.真空泵、抽滤装置操作规程87.电热蒸馏水器操作规程88.脂肪提取仪操作规程99.722型分光光度计操作规程910. pH计的操作规程10二、实验操作规程151.饲料中水分和其他挥发性物质含量的测定152.饲料中粗灰分的测定183.饲料中粗蛋白的测定204.饲料中钙的测定245.饲料中总磷的测定286 .饲料中水溶性氯化物的测定337.粗脂肪的测定388. 挥发性盐基氮的测定409.鱼粉中酸价的测定4210.饲料原料中游离氨的测定4311.植物蛋白原料生熟度判定4512.甲基紫法测饲料混合均匀度5013. 微矿的测定521.水的总硬度的测定522. 饲料级 碘酸钙533.甲酸钙的测定544.饲料级 硫酸锰565.硫酸钠的测定586.饲料级 硫酸锌607. 饲料级 亚硒酸钠628.饲料级 氧化锌649.碱式氯化铜的测定6510.饲料级 硫酸铜6611.饲料级 硫酸亚铁6812.饲料级 氯化钴7013.小苏打（NaHCO3）的测定7214.饲料级 硫酸镁7315.饲料级 磷酸氢钙的测定7416. 饲料级 磷酸二氢钙的测定7617.饲料及饲料原料中氟的测定7818.石粉中钙镁含量的测定8214.油脂检测851.过氧化值测定852.酸价的测定873.油脂TBA值的测定方法884.皂化值的测定905.油脂含皂量测定法916.油脂碘价的测定927.油脂中矿物油的定性检测948.生物柴油的检验949.油脂定性试验9515.饲料中游离棉酚的测定方法9516.霉菌毒素检测方法971.呕吐毒素(DON)的检测ELISA法972.黄曲霉毒素的测定ELISA法1013.赤霉烯酮毒素测定10417. 镜检部分1081.鱼粉掺假检测及真蛋白质的测定1102.鱼粉中掺入植物质、胺盐和鞣革粉的化学检验1123.鱼粉中掺入植物质的检验1134.鱼粉中掺入铵盐的检验1135.鱼粉中掺入 鞣革粉的检验1146.盐析法测真蛋白1147.测非蛋白氮法1158.伪劣玉米蛋白粉的识别1159.掺假豆粕的鉴定11710.磷酸盐的鉴别11911.氯化胆碱的真伪鉴别11912.肉骨粉掺假检验121一、化验仪器操作规程1.电子天平操作规程1、使用前：观察水平仪，调整水平调节脚，使水泡位于水平仪中心2、开机：按开关键ON，2秒钟后显示本机型号“xxxx”，再2秒后显示“0.0000”。3、校正：用砝码进行校正， 按CAL(校正健)健，稍许后放入砝码，出现该天平的最大称量数，取下砝码显示零，则表示校正成功；若出现的不是最大称量数或零，需按TAR(归零健)归零，再加砝码进行校正，重复3次。4、称量：每次称量，都要关闭侧门、顶门。5、清零“TAR”：每称完一个样品都要归零，需要盛器的样品，称完皮后先归零，保证再称的质量为样品质量。注意事项：a、本机应置于稳定的工作台面上，避免震动、阳光照射和气流。b、相对湿度应小于75%。c、工作环境温度15-25，避免温差过大。d、每次称量时，侧门要轻开，关。e、经常更换内置的变色硅胶，以保持干燥。f、保持天平内无饲料粉末。g、不要轻易挪动电子天平。2.马福炉操作规程1、接通电源。2、设定温度：将仪器温度指示仪温度调至测量所需温度（测灰分：55020）,绿灯升温，红灯定温。3、测量：从达到设定温度时计时开始。4、放入样品时不要碰到炉胆内的电热偶。5、取样：时间到达所需时间后（测灰分需灼烧4小时），先将炉门微开，温度降至200度以下，才能将坩埚取出，以免内外温差过大致坩埚炸裂。3.恒温干燥箱操作规程1、通电：打开电源开关，绿灯亮。2、调温：将控温仪旋钮按照逆时针旋至所需温度处，测定水分所需温度：10523、恒温：温度升至设定温度时，即红绿灯交替明熄时。4、放样：将待测样品放入箱中，称样皿半开盖，样品不要过于拥挤，确保空气流动顺畅，打开鼓风，计时。5、打开鼓风，以利于样品受热均匀。6、取样：烘4个小时，将样品取出，放入干燥器中，约需30分钟后称量计算。注意事项：a、本箱应放置平稳，不得倾斜与震动，以免箱内温度不匀。b、本箱周围不得与高温或易燃物接近。c、不得放易燃易爆物品。d、顶部温度计显示数与设定所需温度数保持一致（温度校正）。e、打开鼓风保证受热均匀。4.凯氏定氮仪操作规程1、开关顺序：先打开冷却水开关，再开电源。2、预热：手动打开蒸汽开关，蒸馏数分钟直到三角烧瓶中有液体流出。3、测定：换上一个待测样品，放好接收液。为了避免交叉污染，请不要用手接触输出管，必要时请握住输出管的塑料部分。加NaOH，然后打开蒸汽开关，进行蒸馏，蒸馏到150ml，把输出管往上提，再蒸馏片刻。取下三角瓶，输出管末端用少量蒸馏水冲洗，洗液均流入测该样品的三角瓶内。样品全部检测结束时，放一空消化管和一空三角烧瓶进行空蒸，直到三角烧瓶中有液体流出。关闭电源及水源。注意事项：a、定期进行蒸汽缸清洗：100ml柠檬酸溶于800ml水中。b、蛋白全部检测结束后，对定氮仪的外观及消化管与的接口处用湿抹布轻轻擦掉外漏的碱。c、每次使用前检查输往蒸汽发生器中的蒸馏水的水位。5.离心机操作规程1、放样：将待测样品等量对称性地放入离心槽中。2、开机：打开电源开关。3、定时：调整离心所需要的时间。4、转速：调整离心所需的转速（一档500转）。5、归位：结束后，一定要将转速回调为“0”，保证下次离心时转速由低到高。注意事项：a、放置台面一定要平整。b、当在使用时读数在0-1000处不启动时，应将旋钮拨至4000处（即最大转速处），待空转20分钟后，即可从0至高速运转（因气温关系内部油脂凝固而影响运转）6.数显恒温水浴锅操作、维护规程1. 技术参数 电源：220V 50Hz 功率：800w熔丝管：8A 温控范围：室温100温控精度：0.5温升速度：由室温升至沸点70分钟搅拌速度：0-1000转/分搅拌功率：3-6W使用环境：环境温度5-40；相对湿度80%2. 适用范围适用于数显恒温水浴锅的操作。3. 操作步骤3.1往水箱中注入适量的洁净自来水。3.2将控温旋钮调到最低（从左向右调节温度逐渐增大）。3.3 接通电源，打开电源开关。3.4 将控制小开关置于“设定”段，此时显示屏显示的温度为设定的温度，调节旋钮，设置到工作所需温度即可。此时黄灯亮，表示仪器正在加热。3.5 将控制小开关置于“测量”端，此时显示屏显示的温度为水箱内水的实际温度，随着水温的变化，显示的数字也会相应的变化。3.6 当加热到3.4设定的温度时，加热会自动停止。绿色指示灯亮；当水箱内的水热量散发，低于3.4设定的温度时，黄灯亮，继续加热。3.7 如果水温不均匀，可打开搅拌功能，慢慢调节搅拌旋钮，让水箱内水自动循环。3.8 工作完毕，将温控旋钮置于最小值，切断电源。4. 注意事项4.1水箱内注水时，加热管至少应低于水面5cm。4.2 仪器工作中，水箱内水位低时，应及时加入适量的水，以防水箱内水蒸发干后，导致加热管爆裂。4.3设定工作温度时，应设置其高于环境温度，否则机器不工作。4.4 高温使用仪器时，人体不要接触仪器上部的铁片，以免烫伤。4.5 更换熔丝管，一定要先切断电源。4.6为仪器配备的电源插座的电器额定参数应大于仪器的电器额定参数，并有良好的接地措施。5. 仪器维护5.1水箱应注入洁净自来水或蒸馏水。5.2 每周更换一次水箱内的水，并彻底清除水垢。5.3 若仪器较长时间不使用，将水箱中的水排尽，并用软布擦净、晾干仪器。注意事项：a、切勿锅内无水或水位低于电热管，以防电热管爆损。b、必须使用220V电源。c、必须可靠接地。d、水不可溢入控制箱内，以免发生危险。e、使用结束后，切勿忘记关掉电源。6.真空泵、抽滤装置操作规程1、打开开关前，一定先将出气空胶塞拔开。2、察看抽滤瓶中的干燥剂、浓硫酸，保证连接正确。3、将抽滤漏斗放牢在胶塞上。4、打开真空泵开关，将消煮后的样品缓慢倒入抽滤漏斗（或古氏坩埚）中。5、水洗样品3-4次。6、样品烘干或灼烧，计算。7.电热蒸馏水器操作规程1、注水：将冷却水注入蒸发锅，至水位稍高出玻璃水位镜。2、通电：保证电压相符，接地良好。3、蒸馏：当锅内水沸腾时，调节冷却水流量，由小到大至正常，约需2-3分钟开始出蒸馏水。4、预蒸：由于冷却器为金属材料制成，每次使用前也需要30分钟预蒸后，蒸馏水方可使用。5、防水、清洗：使用完后要将剩水排净，并清洗干净，保持干燥清洁。注意事项：a、必须保证水压稳定，压力不能过大过小b、冷却水流量合适，过小可能沸锅，过大可能造成蒸发锅内水不沸腾c、回水管注水口应对准漏斗进水孔，如有偏差请将回水管拆下调正后再用d、进水管、排水管、蒸馏水管的内径不能小于仪器水咀的内径，保证水流畅通e、排水管、蒸馏水管不易过长，不能将出水管放入水中，避免接触液面特别提醒：新蒸馏水器开始使用时，要经过10-16小时的预蒸，所制取的蒸馏水经检验合格方可使用。8.脂肪提取仪操作规程1、连接好进水管、出水管。2、将烘后的滤纸包（待测样品）放入抽滤瓶中。3、将石油醚倒入抽滤瓶至三分之二处。4、打开水浴锅开关 ，设定所需温度。据石油醚的沸点调节温度一般在6090度。5、调节抽滤速度至每分钟5次为宜。6、约抽滤5个小时左右至流出的石油醚挥发后不留下油污为终点。7、将样品取出，放通风橱中将残留的石油醚蒸发掉。8、烘干，称样，计算。注意事项：a、抽滤完后，一定不要直接放入烘箱中烘干-危险。b、注意水浴锅内的水位-不能太低。9.722型分光光度计操作规程1、预热：打开电源开关，预热15分钟以上。2、放样：第一个比色皿放空白液，其它放待测液。3、调波长：将旋钮调至所需波长处4、调满度：将档位调至透光度“ T”，然后调满度“100”。5、调零：调完满度后，再开盖调“0”。6、调吸光度零：将档位调至吸光度“A”，调“0”。7、测定：拉杆，记数。注意事项 ：a、保持台面平整。b、防尘防震。c、注意散热。d、取放要拿比色皿毛面。 10. pH计的操作规程1. 技术参数2. 适用范围适用于PHS3C型pH计的操作。3. 操作步骤3.1开机前准备a 电极梗旋入电极梗插座，调节电极夹到适当位置。b 复合电极夹在电极夹上拉下电极前端的电极套。c 拉下橡皮套，露出复合电极上端小孔。用蒸馏水清洗电极3.2开机电源线插入电源插座，按下电源开关，电源接通后，预热三十分钟，接着进行标定3.3标定仪器使用前，先要标定。一般说来，仪器在连续使用前，每天要标定一次a 在测量电极插座处拔去Q9短路插头b 在测量电极插座处插上复合电极c 如不用复合电极，则在测量电极插座处插上电极转换器在插头，玻璃电极插头插入转换器插座处，参比电极接入参比电极接口处d 把选择开关旋钮调到pH档e 调节温度补偿旋钮，使旋钮白线对准溶液温度值f 把斜率调节旋钮顺时针旋到底（那调到100%位置）g 把用蒸馏水清洗过的电极插入pH6.86的缓冲溶液中h 调节定位调节旋钮、使仪器显示读数与该缓冲溶液当时温度下的pH值相一致（如用混合磷酸盐定位温度为10时，pH6.92）i 用蒸馏水清洗电极、再插入pH4.00（或pH9.18）的标准缓冲溶液中，调节斜率旋钮使仪器显示读数与该缓冲溶液中当时温度下的pH值一致j 重复7-9直至不用再调节定位或斜率两调节旋钮为止k 仪器完成标定。3.4测量pH值经标定过的仪器，即可用来测量被测溶液，被测溶液与标定溶液温度相同与否、测量步骤也有所不同。3.4.1被测溶液与定位溶液温度相同时，测量步骤如下：a 用蒸馏水清洗电极头部，用被测溶液清洗一次b 把电极浸入被测溶液中，用玻璃棒搅拌溶液、使溶液均匀，在显示屏上读了溶液的pH值3.4.2被测溶液和定位溶液温度不同时，测量步骤如下：a 用蒸馏水清洗电极头部，用被测溶液清洗一次b 用温度计测出被测溶液的温度值c 调节“温度”调节旋钮，使白线对准溶液温度值d 把电极插入被测溶液内，和玻璃棒搅拌溶液，使溶液均匀后读出该溶液的pH值。3.5测量电极电位（mV）a 把离子选择电极或金属电极和参比电极夹在电极架上（电极夹选配）b 用蒸馏水清洗电极头部，用被测溶液清洗一次c 把电极转换器的插头插入仪器后部的测量电极插座处，把离子电极的插头插入转换器的插座处d 把参比电极接入仪器后部的参比电极接口处e 把两种电极插在被测溶液内，将溶液搅拌均匀后，即可在显示屏上读出该离子选择电极的电极电位（mV值），还可自动显示极性。f 如果被测信号超出仪器的测量范围，或测量端开路时，显示屏会不亮，作超载报警。g 使用金属电极测量电极电位时，用带夹子的Q9插头，Q9插接入测量电极插座处，夹子与金属电极导线相接，参比电极接入参比电极接口处4注意事项a 经标定后，定位调节旋钮及斜率调节旋钮不应再有变动。标定的缓冲溶液第一次应用pH6.86的溶液，第二次应用接近被测溶液pH值的缓冲液，如被测溶液为酸性时，缓冲溶液应选pH4.00，如被测溶液为碱性时则选pH9.18的缓冲液。一般情况下，在24小时内仪器不需再标定。b 清洗电极，选用清洗剂时，不能用四氯化碳、三氯乙烯、四氢呋喃等能溶解聚碳酸树脂的清洗液，因为电极外壳是用聚碳酸树脂制成的，其溶解后极易污染敏感玻璃球泡，从而使电极失效。也不能用复合电极去测上述溶液。5. 仪器维护 5.1 pH计的维护仪器的经常正确使用与维护，可保证仪器正常、可靠地使用，特别象pH计一类的仪器，它必须具有很高的输入阻抗，而使环境需经常接触化学药品，所以更需全理维护。a 仪器的输入端（测量电极插座）必须保持干燥清洁。仪器不用时，将Q9短路插头插入插座，防止灰尘及水汽浸入。在环境温度较高的场所使用时，应把电极插头用干净纱布擦干。b 带夹子连线的Q9插头及电极转换器专为配用其他电极时使用，平时注意防潮防尘。c 测量时，电极的引入导线应保持静止，否则会引起测量不稳定。d 仪器采用了MOS集成电路，因此，在检修时应保证电烙铁有良好的接地。e 用缓冲溶液标定仪器时，要保证缓冲溶液的可靠性，不能配错缓冲溶液，否则将导致测量结果产生误差。5.2电极的维护a 电极在测量前必须用已知pH值的标准缓冲溶液进行定位标准，其值愈接近被测值愈好。b 取下电极套后，应避免电极的敏感玻璃泡与硬物接触，因为任何破损或擦毛都使电极失效。c 测量后，及时将电极保护套套上，电极套内应放少量内参比补充液以保持电极球泡的湿润。切忌浸泡在蒸馏水中。d 复合电极的内参比补充液为3mol/L氯化钾溶液、补充液可以从电极上端小孔加入。复合电极不使用时，拉上橡皮套，防止补充液干涸。e 电极的引出端必须保持清洁干燥，绝对防止输出两端短路，否则将导致测量失准或失效。f 电极应与输入阻抗较高的pH计（1012）配套，以使其保持良好的特性。g 电极应避免长期浸在蒸馏水、蛋白质溶液和酸性氟化物溶液中。h 电极避免与有机硅油接触。i 电极经长期使用后，如发现斜率略有降低，则可把电极下端浸泡在4%HF（氢氟酸）中3-5秒钟，用蒸馏水洗净，然后在0.1mol/L盐酸溶液中浸泡，使之复新。j 被测溶液中如含有易污染敏感球泡或堵塞液接界的物质而使电极钝化，会出现斜率降低现象，显示读数不准。如发生该现象，则应根据污染物质的性质，用适当溶液清洗，使电极复新。5.3缓冲溶液用完后可按下列方法自行配制a pH4.00溶液：用GR邻苯二甲酸氢钾10.12g，溶解于1000ml的高纯去离子水中。b pH6.86溶液：用GR磷酸二氢钾3.388 g、GR磷酸氢二钠3.533 g，溶解于1000 ml的高纯去离子水中。c pH9.18溶液：用GR硼砂3.80 g，溶解于1000 ml的高纯去离子水中。注意：配制2、3溶液所用的水，应预先煮沸15-30min，除去溶解的二氧化碳。在冷却过程中应避免与空气接触，以防止二氧化碳的污染。5.4污染物质和清洗剂参考表：污染物清洗剂无机金属氧化物低于1mol/L稀酸有机油脂类物质稀洗涤剂（弱碱性）树脂高分子物质酒精、丙酮、乙醚蛋白质血球沉淀物酸性酶溶液（如食母生）颜料类物质稀漂白液、过氧化氢5.5常见故障及其处理故障原因及处理电源接通，数字乱跳仪器输入端开路。应插入短路插或电极插头定位能调6.86pH但调不到4.0电极失效，更换电极二、实验操作规程1.饲料中水分和其他挥发性物质含量的测定1 适用范围本方法适用于动物饲料，但以下情况除外：1.1 奶制品；1.2 矿物质；1.3 含有相当数量的奶制品和矿物质的混合物，如代乳品；1.4 含有保湿剂（如丙二醇）的动物饲料；1.5 下列单一动物饲料：1.5.1动植物油脂；1.5.2油料籽实；1.5.3油料籽实饼粕；1.5.4谷物，不包括玉米及谷类产品；1.5.5玉米2 原理根据样品性质的不同，在特定条件下对样品进行干燥所损失的质量在试样中所占的比例。3 仪器设备3.1 分析天平：感量1 mg3.2 称量瓶：由耐腐蚀金属或玻璃制成，带盖。其表面积能使样品铺开约0.3g/cm2。3.3电热鼓风干燥箱：温度可控制在1032。3.4 干燥器：具有干燥剂。3.5 电热真空干燥箱：温度可控制在802，真空度可达13kPa。应备有通入干燥空气导入装置或以氧化钙（CaO）为干燥剂的装置。（20个样品需300g氧化钙）。4 测定步骤4.1 试样准备将称量瓶放入103 干燥箱中干燥30 min1 min 后取出，放在干燥器中冷却至室温。称量其质量，准确至1mg。4.2 配合饲料、浓缩饲料、饲料原料的水分测定称取2g（精确到0.0002g）试样于称量瓶中，准确至1mg，并摊匀（样品铺盖在称量瓶底的厚度要低于4mm）。将称量瓶盖放在下面或边上与称量瓶一同放入103 干燥箱中。当干燥箱温度达103 后，干燥4h0.1h。将盖盖上，从干燥箱中取出，在干燥器中冷却至室温。称量，准确至1mg。4.3 油脂、糖蜜（含脂肪量高或者含糖量高的原料）的水分测定4.3.1真空干燥法称取2g样品（精确到0.0002g）与称量瓶中。将称量瓶盖放在下面或边上与称量瓶一同放入80 的真空干燥箱中，减压至13 kPa以下。通入干燥空气或放置干燥剂干燥试样。在放置干燥剂的情况下，当达到设定的压力后断开真空泵。在干燥过程中保持所设定的压力。当干燥箱温度达到80 后，加热4h0.1h。小心地将干燥箱恢复至常压。打开干燥箱，立即将称量瓶盖盖上，从干燥箱中取出，放入干燥器中冷却至室温称量（精确到0.0002g）。将试样再次放入80的真空干燥箱中干燥30min1min，直至连续两次干燥质量变化之差小于其质量的0.2。4.3.2快速法（适合于油脂） 称取2g（精确到0.0002g） 试样于称量瓶中，准确至1mg，并摊匀（样品铺盖在称量瓶底的厚度要低于4mm）。将称量瓶盖放在下面或边上与称量瓶一同放入103 干燥箱中。当干燥箱温度达103 后，干燥1.5h0.1h。将盖盖上，从干燥箱中取出，在干燥器中冷却至室温。称量，准确至1mg。4.4 测定次数同一试样进行两个平行测定。5 测定结果的计算和表述 数值以计，按下式计算： 式中：m0 称量瓶（包括盖）的质量，g； m1称量瓶（包括盖）和干燥后试样的质量，g； m2 试样的质量，g。6 重复性两个平行样的测定值相差不得超过0.2%。否则重做。7 注意事项7.1 称量时要保证称量皿冷却至室温，防止称量误差和损害天平。7.2 从烘箱中拿称量皿时要戴厚棉手套，防止烫伤。7.3 每次实验完成后应马上将称样皿清洗干净。放在烘箱中烘干，置于干燥器内保存，待用。8 结果准确度的保证8.1 天平必须经过校正。8.2 控温要准，烘箱温度要以温度计的温度为准。8.3 快速法必须以国标法进行比对，结果在允许偏差之内时方可使用。8.4 玻璃干燥器中的硅胶需要经常更换，使之保持为蓝色。8.5 统一在鼓风状态下，置于烘箱内温度计周围烘网上，间隙均匀；利于散热。烘箱里不能放大量有碍箱内空气流动的物品。8.6 称取样时戴手套。8.7 称量瓶要洗干净，放入烘箱时要敞开盖，离开烘箱立即用匹配的称量皿盖盖住。8.8 称样前要混合均匀，以确保平行样分析结果在国标允许的0.2%的范围内。2.饲料中粗灰分的测定1、适用范围本方法适用于饲料中粗灰分的测定。2、原理试样中的有机质经灼烧分解，对所得的灰分称量。3、仪器与设备3.1 实验室用样品粉碎机或研钵；3.2高温炉：电加热，可控制温度，带高温计，在550时温差不超过20；3.3分析天平：感量为0.0001g；3.4干燥箱：温度控制在（1032）；3.5电炉3.6坩埚 ：可耐600以上高温。3.7 干燥器：盛有有效的干燥剂。4、测定步骤 将坩埚放入高温炉中，于550下灼烧至少30min。移入干燥器冷却至室温，称量（精确至0.0002g）。称取约35g试样（精确至0.0002g，过40目）于坩埚中。将盛有试样的坩埚放在电炉上小心加热至试样炭化，转入预先加热到550的高温炉中灼烧3h，观察坩埚中是否有炭粒，如无炭粒，继续于高温炉中灼烧1h，如果有炭粒或怀疑有炭粒,将坩埚冷却并用蒸馏水润湿，在（1032）的干燥箱中仔细蒸发至干，再将坩埚置于高温炉中灼烧1h。灼烧完毕，待炉温降至200以下，移入干燥器内冷却，称重，准确至0.0001g。 对同一试样取两份试料进行平行测定。5、分析结果计算和表述粗灰分含量()按下式计算： 粗灰分（%）=式中：m0恒质空坩埚质量，g； m1灰化后坩埚加灰分的质量，g。 m试样的质量所得结果应表示至0.01%。6、重复性和再现性 粗灰分含量在5%以上，允许相对偏差为1%；粗灰分含量在5%以下，允许相对偏差为5%。7、注意事项7.1马弗炉高温，放取坩埚时用坩埚钳。7.2样品碳化时要在通风橱中进行。7.3含糖量较高的样品灰化时要加几滴豆油或棕榈油，防止样品膨胀溢出坩埚。8、准确度的保证8.1保证整个实验过程中的仪器准确度。马弗炉的温度要保证在55020之间8.2灰化不全，有黑点结果偏高，应该重新灼烧。8.3每次做完实验坩埚洗净后，先放入烘箱中将水分烘干，再放入550-600的马弗炉灼烧30分钟，放入干燥器内保存，以备待用。坩埚长久未用应重新恒重。8.4灼烧时间要准。干燥器内干燥剂要经常更换、烘干。8.5试样必须先碳化，不能直接放入高温马弗炉中。3.饲料中粗蛋白的测定1 适用范围本方法适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料中粗蛋白含量的测定。2 原理 各种饲料的有机物质在还原性催化剂(如CuSO4，K2SO4或Na2SO4或Se粉)的帮助下，用浓硫酸进行消化作用，使蛋白质和其它有机态氮（在一定处理下也包括硝酸态氨）都转变成NH4+并与H2SO4化合成（NH4）2SO4，而非含氮物质，则以CO 2 ，H2O，SO 2状态逸出。消化液在浓碱的作用下进行蒸馏，释放出的铵态氮，用硼酸溶液吸收并与之结合成为四硼酸铵，然后以甲基红溴甲酚绿作指示剂，用HCl标准溶液（ 0.1mol/L）滴定，求出氮的含量，根据不同的饲料再乘以一定的系数（通常用6.25系数计算），即为粗蛋白质的含量。其主要化学反应如下：1、2NH4（CH2）2COOH+13H2SO4（NH4）2SO4+6CO2+12SO2+16H2（丙氨酸）2、（NH4）2SO4 +2NaOH2NH 3+3H2O+2Na2SO43、4H3BO3+ NH 3NH4HB4O7+5H2O4、NH4HB4O7+HCl+5H2ONH4C1+4H3BO3本法不能区别蛋白氮和非蛋白氮，只能部分回收硝酸盐和亚硝酸盐等含氮化合物。在测定结果中除蛋白质外，还有氨基酸、酰胺、铵盐和部分硝酸盐、亚硝酸盐等，故以粗蛋白质表示之。3 试剂3.1 硫酸：化学纯，含量为98%，无氮；3.2 混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水，6g硫酸钾或硫酸钠，均为化学纯，磨碎混匀；3.3 氢氧化钠：化学纯，40%水溶液（m/V）；3.4 硼酸：化学纯，2%水溶液（m/V）；3.5 混合指示剂：甲基红0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿0.5%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月；3.6. 盐酸标准溶液：0.1mol/L；3.7 蔗糖：分析纯；3.8 硫酸铵：分析纯，干燥；3.9 硼酸吸收液：1硼酸水溶液1000mL，加入0.1溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1甲基红乙醇溶液7mL，4氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月(全自动程序用)。4 仪器设备4.1 实验室用样品粉碎机或研钵；4.2 分样筛：孔径0.45 mm(40目)；4.3 分析天平：感量0.0001 g；4.4 消煮炉；4.5 滴定管：酸式，10、25 mL；4.6 凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸气蒸馏式；4.7 锥形瓶：150、250 mL；4.8 消煮管：250 mL；4.9 定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动、全自动蛋白质测定仪。5 分析步骤5.1 全量法5.1.1试样的消煮称取试样0.20.5g（玉米、小麦称0.71.0g；豆粕称0.4g；鱼粉、羽毛粉称0.3g），精确至0.0002g，放入消化管中，加2片消化片（硒粉和硫酸钾混合物，市场上有成品）或6.4g混合催化剂，13 ml浓硫酸，于420下在消化炉上消化至消化管内呈现蓝色时继续消化40min。取出冷却后加入30 ml蒸馏水。5.1.2 氨的蒸馏采用全自动定氮仪时，按仪器本身常量程序进行测定。采用半自动定氮仪时，将带消化液的消化管插在蒸馏装置上，以30 mL硼酸为吸收液，加入2滴混合指示剂，蒸馏装置的冷凝管末端要浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消化管中加入约50 mL氢氧化钠溶液至消化管内液体呈黑色，进行蒸馏。吸收液体积达到150 mL时，停止蒸馏，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。5.1.3 滴定用0.1 mol/L的标准盐酸溶液滴定吸收液，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。6 空白测定称取蔗糖0.5g，代替试样，进行空白测定，消耗0.1 mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.2 mL。7 分析结果的计算和表述计算见下式：蛋白质（%）= 式中：V2滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL； V1滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL； c盐酸标准溶液浓度，mol/L； m试样质量，g 0.0140与1.00 mL盐酸标准液c(HCl)=1.000 mol/L相当的、以克表示的氮的质量。 6.25氮换算成蛋白质的平均系数。8 重复性当粗蛋白质含量在25%以上时，允许相对偏差为1%。当粗蛋白质含量在10%25%之间时，允许相对偏差为2%。当粗蛋白质含量在10%以下时，允许相对偏差为3%。9 注意事项9.1消化要在通风橱中进行。9.2定氮仪不能漏气。10 结果准确度的保证和评价10.1 结果准确度的保证10.1.1如果是新的可调节电炉可适当调节其温度，消化时间据实际情况而定。10.1.2每次做空白试验较正装置。10.1.3定期做测定回收率实验具体方法：精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，用全量法“氨的蒸馏”中的步骤进行操作，测得硫酸铵含氮量为21.190.2%，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确。10.1.4蒸馏后的液体不能放置太长时间，要及时滴定。10.1.5消化温度应控制在400420内。消化器控温器应良好，电阻丝应使用专用配套电阻丝，拉伸应均匀，使炉内温度均匀。10.1.6蒸馏完毕应先取下接受瓶，然后在关闭电源，以免酸液倒流。10.2 准确度的评价10.2.1测定回收率10.2.1.1加硫酸铵检测回收率，如果合格，说明蒸馏装置不漏气和盐酸标准溶液溶液标定正确。具体方法见10.1.3定期测回收率实验。10.2.1.2用已知含氮量的样品标准物（如含氮量在1.30%1.40%之间的玉米粉）用半微量法或推荐法测定其含氮量，和标准物质含氮量进行比对，要求测定结果在要求范围之内。此方法可以评价整个过程的准确度。10.2.2实验室比对和国家认证的实验进行同样品实验数据比对。此方法可以评价整个过程的准确度。分公司对饲料中粗蛋白数据可疑样品应送集团质检中心复测。4.饲料中钙的测定 乙二胺四乙酸二钠（EDTA）络合滴定法1 原理将试样中有机物破坏，钙变成溶于水的离子，用三乙醇胺、乙二胺、盐酸羟胺和淀粉溶液消除干扰离子的影响，在碱性溶液中以钙黄绿素为指示剂，用乙二胺四乙酸二钠标准溶液络合滴定钙，可快速测定钙的含量。2 试剂和溶液2.1 盐酸羟胺，分析纯；2.2 三乙醇胺，1+1；2.3 乙二胺，1+1；2.4 盐酸水溶液：1+3；2.5 硝酸溶液：1+1；2.6 高氯酸，70%72%；2.7 氢氧化钾溶液（200 g/L）：称取20 g氢氧化钾溶于100 mL水中；2.8 淀粉溶液（10 g/L）：称取1 g可溶性淀粉入200 mL烧杯中，加5 mL水润湿，加95 mL沸水搅拌，煮沸，冷却备用（现用现配）；2.9 钙黄绿素甲基百里香草酚蓝指示剂：0.10 g钙黄绿素、0.10 g甲基麝香草酚蓝、0.03 g百里香酚酞与5 g氯化钾研细混匀，贮存于磨口瓶中备用；2.10 钙标准溶液（0.001 g/mL）：称取2.4974 g于105110干燥为3 h的基准物碳酸钙，溶于40 mL盐酸（2.4）中，加热赶除二氧化碳，冷却，用水移至1000 mL容量瓶中，稀释至刻度；2.11 乙二胺四乙酸二钠（EDTA）标准滴定溶液。3 仪器和设备3.1 实验室用样品粉碎机或研钵；3.2 分样筛：孔径0.42 mm（40目）；3.3 分析天平：感量0.0001g；3.4 高温炉：电加热，可控温度在（55020）；3.5 坩埚：瓷质；3.6 容量瓶：100 mL；3.7 滴定管：酸式，25 mL或50 mL；3.8 玻璃漏斗：6 cm直径；3.9 定量滤纸：中速，7 cm9 cm；3.10移液管：10，20 mL；3.11烧杯：200 mL；3.12凯氏烧瓶：250 mL或500 mL；4 测定步骤4.1 试样分解4.1.1干法（推荐法）称取试样25 g（精确至0.0002 g）于坩埚中，在电炉上小心炭化，再放入高温炉于550下灼烧3 h(或测定粗灰分后连续进行)，在坩埚中加入盐酸溶液10 mL和浓硝酸3滴，小心煮沸，将此溶液转入100ml容量瓶，冷却至室温，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。4.1.2湿法（用于无机物或液体饲料）称取试样25 g于凯氏烧瓶中，精确至0.0002 g，加入硝酸（2.5）10 mL，加热煮沸，至二氧化氮黄烟逸尽，冷却后加入7072高氯酸10 mL，小心煮沸至溶液无色，不得蒸干，冷却后加蒸馏水50 mL，且煮沸驱逐二氧化氮，冷却后转入容量瓶，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。4.2 测定准确移取试样分解液5 mL20 mL（蛋鸡饲料10mL，肉禽饲料20mL）。加水50ml，加淀粉溶液10ml、三乙醇胺2ml、乙二胺1ml、氢氧化钾溶液15ml，加0.1g盐酸羟胺（每加一种试剂都须摇匀），加钙黄绿素少许，在黑色背景下立即用EDTA标准溶液滴定至绿色荧光消失呈现紫红色为滴定终点。同时做空白实验。5 测定结果的表示与计算测定结果按下式计算：式中：X以质量分数表示的钙含量，%；TEDTA 标准滴定溶液对钙的滴定度，g/mL；V0试样分解液的总体积，mL；V1分取试样分解液的体积，mL；V2分取试样分解液消耗EDTA 标准滴定溶液的体积，ml；V3空白消耗EDTA 标准滴定溶液的体积，ml；m试样的质量，g。6 允许差含钙量在10%以上，允许相对偏差2%；含钙量在5%10%时，允许相对偏差3%；含钙量1%5%时，允许相对偏差5%；含钙量1%以下，允许相对偏差10%。7 注意事项7.1 三乙醇胺、乙二胺、氢氧化钾能腐蚀皮肤刺激眼睛，使用的时候要避免接触皮肤，如果接触皮肤则应该先用湿抹布擦干净，然后在用大量的水冲洗接触处。 7.2消化时不论是用干法消化还是湿法消化，必须要在通风橱处进行。采用湿法消化时要带上防毒面具。8 结果准确度的保证和评价8.1 结果准确度的保证8.1.1掩蔽剂（如乙二胺、三乙醇胺等）是在一定条件下才能起到它的掩蔽作用，要按固定的操作流程顺序进行操作，三乙醇胺掩蔽Fe3+；乙二胺掩蔽Cu2+、Mn3+、Zn2+。8.1.2配制备用的淀粉溶液不可超过一周，室温高时淀粉溶液呈混浊或有异味时不可使用，需重新配制。可以在配置时每升淀粉溶液加3g硼酸。8.1.3定期配置一次钙标液对EDTA标定。8.1.4钙黄绿素指示剂加入要适量。8.1.5本实验所有仪器都不能用清洗粉洗刷。8.2