类风湿诊疗和抗CCP抗体检测专家讲座.pptx

类风湿诊疗与抗环瓜氨酸肽抗体（抗CCP抗体）检测anticycliccitrullinatedpeptideantibodyanti-CCPantibody类风湿诊疗和抗CCP抗体检测第1页概述类风湿关节炎（RA）是一个本身免疫性疾病。因为首先本身免疫病理机制决定了这类疾病疑难和复杂；另首先因为这类疾病累及多个系统和器官，临床表现较为复杂。所以RA以往在临床上更多表现为“疑难杂症”。风湿性疾病现实状况能够概括为“四多”，累及脏器多；起病首发表现多；误诊误治多；致残多。从而也引发出另外一多“病人花费多”！因为风湿性疾病早期表现不经典，有些疾病有两种或两种以上表现相互重合；同时，风湿性疾病存在相互转化情形；所以风湿性疾病早期诊疗有一定困难。所以，对风湿性疾病患者随访和定时检验显得尤为主要，这也是验证我们早期诊疗是否正确必由之路。正确早期诊疗是采取规范化治疗、提升患者生活质量、改进预后前提。类风湿诊疗和抗CCP抗体检测第2页美国风湿病学会（美国风湿病学会（ACR）1987分类标分类标准准晨僵晨僵;3个或个或3个以上关节肿胀（软组织）个以上关节肿胀（软组织）;手关节肿胀（近端指间关节，掌指关节或腕关节）手关节肿胀（近端指间关节，掌指关节或腕关节）;对称性肿胀（软组织）对称性肿胀（软组织）;皮下结节皮下结节;血清类风湿因子阳性血清类风湿因子阳性;骨关节骨关节X线片示手或腕关节侵蚀性缺损和（或）线片示手或腕关节侵蚀性缺损和（或）关节周围骨质疏松。关节周围骨质疏松。以上以上14项必须为医师所见，连续项必须为医师所见，连续6周或以上，具周或以上，具备上列备上列7项标准中项标准中4项，即可诊疗类风湿关节炎。项，即可诊疗类风湿关节炎。类风湿诊疗和抗CCP抗体检测第3页ACR和欧洲抗风湿病联盟（EULAR）年RA分类标准和评分系统类风湿关节炎早期诊疗和早期治疗已成为治疗类风湿关节炎迫切需要，以往分类标准不能到达早期诊疗目标，分类标准不等于诊疗标准。临床工作更需要一个可靠疾病缓解标准（包含临床缓解与结构进展等问题）。但实际上制订一个早期类风湿关节炎分类标准很困难，有些人提出了炎性关节炎概念，甚至提出了早期炎性关节炎概念，正是因为这部分患者炎性关节炎不是全部，而是部分发展为类风湿关节炎，在新分类标准中假如判断有可能发展为连续炎性关节炎或破坏性关节炎，这类关节炎就被认为是类风湿关节炎。类风湿诊疗和抗CCP抗体检测第4页年RA分类标准和评分系统必要条件最少一个关节肿痛，并有滑膜炎证据（临床或超声或磁共振成像）在未分化关节炎中需要排除其它疾病引发关节炎症状和体征。类风湿诊疗和抗CCP抗体检测第5页其它条件血清学：抗环瓜氨酸肽抗体（CCP）和类风湿因子（RF）;受累关节种类（小或大关节）和数量;滑膜炎病程;急性血象反应：红细胞沉降率（ESR）和C-反应蛋白（CRP）。类风湿诊疗和抗CCP抗体检测第6页类风湿关节炎诊疗诊疗第一步满足2项必要条件，并有常规经典放射学RA骨破坏改变，可明确诊疗为类风湿关节炎，类风湿诊疗和抗CCP抗体检测第7页类风湿关节炎诊疗诊疗第二步如没有常规经典放射学类风湿关节炎骨破坏改变，需要进入以下分类评分系统，请记住以下分值表中得分。不一样关节受累情况再加上区域区分条件中任何项目，评分大于6分提醒为确定类风湿关节炎类风湿诊疗和抗CCP抗体检测第8页ACR和欧洲抗风湿病联盟（EULAR）年RA分类标准和评分系统受累关节数受累关节数分值（分值（05分）分）1中大关节中大关节0210中大关节中大关节113小关小关节节2410小关节小关节310最少一个为小关节最少一个为小关节5血清学抗体检测血清学抗体检测（03分）分）RF或抗或抗CCP均阴性均阴性0RF或抗或抗CCP最少一项低滴度阳性最少一项低滴度阳性2RF或抗或抗CCP最少一项高滴度阳性最少一项高滴度阳性3滑膜炎连续时间滑膜炎连续时间（01分）分）6周周06周周1急性期反应物急性期反应物（01分）分）CRP或或ESR均正常均正常0CRP或或ESR增高增高16分或以上必定分或以上必定RA诊疗诊疗类风湿诊疗和抗CCP抗体检测第9页类风湿关节炎诊疗诊疗第三步树枝计算法，依据关节受累情况：10个关节（最少1个小关节）;410个小关节;13个小关节;210个中大关节;按图2是或否继续分类。树枝计算法用文字描述：如满足受累关节大于10个关节（最少1个小关节）（5分）同时满足血清学阳性（或滑膜炎病程6周，或ESR/CRP升高），评分6分;如满足410个小关节受累（3分）同时需要满足血清学高滴度阳性，或血清学低滴度阳性+滑膜炎病程6周（或+ESR/CRP升高），评分6分;类风湿诊疗和抗CCP抗体检测第10页类风湿关节炎诊疗如满足13个小关节受累（2分）同时需要满足血清学高滴度阳性+滑膜炎病程6周（或+ESR/CRP升高），或血清学低滴度阳性+滑膜炎病程6周+ESR/CRP升高，评分6分;如满足210个中大关节受累（1分）同时需要满足血清学高滴度阳性+滑膜炎病程6周+ESR/CRP升高，评分6分。所以只要满足以上任何一个情况，即提醒为确定类风湿关节炎。类风湿诊疗和抗CCP抗体检测第11页试验室检验当前临床上对于RA疑似患者所采取初步筛查试验室检测伎俩多为常规风湿四项，为血沉检测（ESR）、C反应蛋白检测（CRP）、类风湿因子检测（RF）、抗“O”检测（ASO）。ESR和CRP与RA活动性相关，其检测结果受多原因影响，故只作为病情活动性参考指标；ASO是一项排除性指标。这三项检测对于RA疑似患者早期诊疗意义不大。RF是当前最为惯用RA诊疗指标，但当前惯用RF检测多为检测IgM型，而IgM-RF在RA诊疗中敏感性只有4070%，特异性只有70%左右，同时尚可见于5%正常老年人、其它本身免疫性疾病、肝炎、结核等疾病。RF阴性并不能排除RA诊疗，约30%早期RA患者RF为阴性。所以单纯依靠常规风湿四项检测对于RA作出早期诊疗并指导临床治疗还远远不够。类风湿诊疗和抗CCP抗体检测第12页试验室检验近年来形成了一些敏感性和特异性都非常高RA诊疗技术，如抗环瓜氨酸肽抗体（CCP）检测、抗角蛋白抗体（AKA）检测、抗RA33/RA36抗体检测、抗Sa抗体检测、抗核周因子抗体检测等。以上抗体中两项同时阳性者RA可能性高达91.3%。其中，抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体检测对早期RA诊疗敏感性和特异性高，是当前最惯用早期诊疗指标。类风湿诊疗和抗CCP抗体检测第13页抗抗CCP抗体定义：抗体定义：一个本身抗体。是类风湿性关节炎特异而敏感早期诊疗指标，可判别侵蚀性、非侵蚀性类风湿性关节炎，阳性者通常出现或易发展为严重关节骨质破坏。抗环瓜氨酸肽抗体（CCP）是环状聚丝蛋白多肽片段，是以IgG型为主抗体，对类风湿性关节炎（RA）含有很好敏感性和特异性，且抗CCP抗体阳性RA病人骨破坏较抗CCP抗体阴性者严重。类风湿诊疗和抗CCP抗体检测第14页研究简史研究简史抗环瓜氨酸肽抗体（CCP）ELISA法是1998年Schellkens等建立起来辅助诊疗RA检测方法，该技术一出现，马上备受关注，现已经有商品供给。按照前丝集蛋白cDNA序列，人工合成可能含有抗原表位919个氨基酸短肽，并经胍氨酸化修饰，经ELISA筛选出含有抗原性片段。类风湿诊疗和抗CCP抗体检测第15页检测方法检测方法现有ELISA法、增强化学发光法、胶体金法当前国内已经有许多厂家有商品试剂盒供给。类风湿诊疗和抗CCP抗体检测第16页ELISA检测原理应用双抗体夹心酶标免疫分析法测定标本中CCP水平。用纯化抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗微孔中依次加入CCP抗原、生物素化抗人CCP抗体、HRP标识亲和素，经过彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶催化下转化成蓝色，并在酸作用下转化成最终黄色。颜色深浅和样品中CCP呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。检测范围：3.9ng/ml-250ng/ml类风湿诊疗和抗CCP抗体检测第17页增强化学发光法原理利用抗原抗体特异性结合及酶底物Luminol发光体系定量检测CCP。1灵敏度：10U/ml2特异性：与1mg/ml脂蛋白、25mg/ml球蛋白、0.1mg/ml血红蛋白、0.1g/ml透明质酸、2mg/ml粘蛋白、0.05mg/ml2-微球蛋白不发生交叉反应。3精密度：批内CV值小于10%、批间CV值小于15%。4线性范围：0160U/ml类风湿诊疗和抗CCP抗体检测第18页胶体金法原理采取胶体金免疫层析技术，以间接法检测血清中本身抗体。检测结果：阴性、阳性类风湿诊疗和抗CCP抗体检测第19页标本采集及保留1.细胞培养物上清：请离心后搜集上清，并将标本保留于-20，且应防止重复冻融。2.血清：标本请于室温放置2小时或4过夜后于1000 xg离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20保留，但应防止重复冻融。3.血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8C1000 xg离心15分钟，或将标本放于-20保留，但应防止重复冻融。类风湿诊疗和抗CCP抗体检测第20页ELISA操作注意事项1.洗涤过程非常主要，不充分洗涤易造成假阳性。2.一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。3.请每次测定同时做标准曲线，最好做复孔。4.如标本中待测物质含量过高，请先稀释后再测定，计算时请最终乘以稀释倍数。5.在配制标准品、检测溶液工作液时，请以对应稀释液配制，不能混同。6.底物请避光保留类风湿诊疗和抗CCP抗体检测第21页临床应用1敏感性和特异性：抗CCP抗体与RF含有相同敏感性（抗CCP抗体：80，RF：79），但特异性更高（抗CCP抗体：96，RF：63）。2可应用于早期诊疗：研究发觉抗抗体与早期强相关，在79早期患者中可检出抗CCP抗体，阳性预测值为84%。3区分RA和其它风湿性疾病：(系统性红斑狼疮)和在早期,有时候都会出现小关节侵蚀性病变,研究发觉抗抗体在区分早期和早期侵蚀性小关节病变时有很主要价值。4抗抗体对预后价值：抗抗体阳性是侵蚀性关节损害一个主要标志及危险原因，抗CCP抗体阳性患者比抗CCP抗体阴性患者更轻易发展成可经过放射性方法检测到关节损害。抗CCP抗体ELISA适合RA早期诊疗，这也是及时开始恰当治疗和预防关节受到深入损害关键。检测抗CCP抗体还可区分RA和其它风湿性疾病。诊疗RA时，在检测RF同时再检测抗CCP抗体可增加RA诊疗血清学命中率。类风湿诊疗和抗CCP抗体检测第22页