流式细胞术在白血病中的应用.pptx

流式细胞术在白血病流式细胞术在白血病流式细胞术在白血病流式细胞术在白血病/淋巴瘤分型和监测中应用淋巴瘤分型和监测中应用淋巴瘤分型和监测中应用淋巴瘤分型和监测中应用流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第1 1页页1世界卫生组织血液肿瘤分类方案（世界卫生组织血液肿瘤分类方案（1999年）年）“新分类方案基本标准是：结合形态学、免疫表型、遗传改变和临床特征来判定疾病真实本质”。“这为世界各国肿瘤学家和病理学家提供了一个全新与令人兴奋合作交流新篇章，必将极大促进人们对血液肿瘤治疗与认识。”（美国临床肿瘤协会，临床肿瘤杂志 17卷3835-3849页，1999年）更主要是提供了疾病分类与治疗选择和预后判断较明确关联性，开启了血液肿瘤靶向性治疗和个性化方案新时代。流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第2 2页页2白血病分子诊疗意义白血病分子诊疗意义系统诊疗系统诊疗白血病初白血病初发发异常标识异常标识准确准确诊疗诊疗准确准确预预后后指指导导治治疗疗科研科研资资料料残留残留监测监测靶向治靶向治疗疗免疫免疫/遗传遗传学靶学靶标标MICM诊疗诊疗流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第3 3页页3WHO血液肿瘤新分类试验技术平台血液肿瘤新分类试验技术平台 实施WHO血液肿瘤新分类方案高度依赖流式细胞、细胞遗传和分子生物学试验技术平台以及掌握这类试验技能并含有专业知识人员。流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第4 4页页4流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第5 5页页5Investigative Tools for MM diagnosis and Management(ASH Education Program Book p298)Patient Evaluation 诊疗诊疗单克隆蛋白数量和特征血清蛋白电泳和免疫球蛋白定量24小时尿蛋白；总蛋白；本周蛋白尿和血清免疫固定血清自由轻链和百分比骨髓检验和骨髓活检Bone marrow aspiration and biopsy组化免疫分型-克隆检定，及经过CD38/CD56/CD19/CD45抗体组合能从90余 例患者正常浆细胞中找到检测残留MM细胞 终末器官损害评价终末器官损害评价 全血细胞计数；生化检验:血清肌酐和骨钙测定 预后评定预后评定球蛋白，betta-2微球蛋白,LDH,CRP骨髓细胞遗传学和FISH t(4;14),t(14;16),del 17p 针对一些特定患者特殊研究针对一些特定患者特殊研究 流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第6 6页页6传统流式细胞术临床应用传统流式细胞术临床应用细胞计数：CD4、CD34DNA含量：多倍数、S期结果是数据、准确性依赖于良好质控传统流式细胞术在白血病免疫表型中应用传统流式细胞术在白血病免疫表型中应用单参“白血病表型”，阳性比率大多数细胞为肿瘤细胞多为形态学/细胞化学后确实认数据由临床医师判断高分辨流式细胞优点高分辨流式细胞优点以多参数正常抗原表示为基础结果类似病理汇报用于原发性诊疗与判别诊疗用于疾病分期，治疗选择疗效监测，预后判断流式细胞术流式细胞术流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第7 7页页7骨髓骨髓-异质性系统中应用异质性系统中应用多系列 Lymphocyte(T,B,NK)Monocyte Neutrophil Eosinophil Basophil Erythrocyte骨髓中各系列细胞处于连续性成熟阶段必须能涵盖全部细胞流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第8 8页页8应该使用何种抗体？应该使用何种抗体？全部抗体必须为标准商业化试剂没有什么“秘密武器”或者专门特异抗体抗体联合应用能使你从有限标本中得到最大化信息量对正常抗原表示正确认识能帮助你有效地判别疾病状态相关改变流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第9 9页页9高高 分分 辨辨 流流 式式 细细 胞胞 术术 能能 够够 鉴鉴 别别 和和 分分 类类 所所 有有 骨骨 髓髓 细细 胞胞可可 以以 对对 每每 一一 个个 细细 胞胞 进进 行行 多多 特特 征征 性性 检检 测测 并并 对对 其其 相相 应应 系系 列列 和和 成成 熟熟 阶阶 段段 进进 行行 分分 类类 至至 少少 检检 测测 一一 万万 个个 细细 胞，胞，分分 辨辨 率率 达达 到到 0.5%流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第1010页页10流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第1111页页11CD45/SSWood()Methods Cell Biology 75:559-576流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第1212页页12正常粒系成熟模式流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第1313页页正常正常 B 系成熟系成熟Wood()Methods Cell Biology 75:559-576流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第1414页页14表示交叉系列抗原非同时抗原共表示：CD34与CD15、CD11b、CD56、CD14抗原过分表示：早前B-ALL中CD10抗原表示缺失：泛T抗原易位抗原表示：CSF中TdT+淋巴细胞，骨髓中胸腺发育阶段T淋巴细胞光散射异常：FSC和SSC白血病相关免疫表型特点白血病相关免疫表型特点流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第1515页页15AML-M0流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第1616页页16AML-M2流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第1717页页17AML-M3流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第1818页页18AML-M4流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第1919页页19AML-M5流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第2020页页20B-ALL流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第2121页页21Burkitt淋巴瘤/白血病成熟B-ALL流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第2222页页22MAL T+G MAL T+B 流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第2323页页23AUL流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第2424页页24B-CLL/SLL流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第2525页页25HCL流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第2626页页26大B细胞淋巴瘤流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第2727页页27MM流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第2828页页28T-ALL流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第2929页页29NK-LGL流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第3030页页30汇报汇报包含出现或缺乏异常细胞群异常免疫表型相比正常细胞群抗原强度 增强，减弱，缺失定量层面判断相对于全部CD45阳性细胞(WBCs)出现其它细胞群流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第3131页页31流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第3232页页32TCRV克隆克隆流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第3333页页33小结小结流式细胞术有利于血液系统异常疾病诊疗愈加确定诊疗排除其它疾病有利于细分亚型更准确原始细胞区分和定量有利于预后判断治疗后监测快速流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第3434页页34免疫表型分析与FAB分型基于不一样参数对白血病进行分型，二者结果可一致或不一致；对有些病例，尤其是髓系白血病亚型，免疫表型分析并非特异；对于复杂病例，需结合各种检验，如特异性染色体核型分析或融合基因综合判断。流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第3535页页35MRDMRD背景背景当前因为各种化疗药联合应用，使多数白血病患者能够取得形态当前因为各种化疗药联合应用，使多数白血病患者能够取得形态学完全缓解（学完全缓解（CR）。）。但多数患者不能维持长久缓解，仍有相当多患者再次复发。复发但多数患者不能维持长久缓解，仍有相当多患者再次复发。复发主要原因是患者体内存在少许形态学难以识别残余白血病细胞。主要原因是患者体内存在少许形态学难以识别残余白血病细胞。假如能够准确检测患者体内残余白血病状态，能够有放矢地进行假如能够准确检测患者体内残余白血病状态，能够有放矢地进行治疗，使患者防止许多无须要痛苦。治疗，使患者防止许多无须要痛苦。流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第3636页页36MRDOutline of Leukemic DiagnosisMorphology:1-5%,Cytogenetics:1-5%,Flow cytometry:0.1-0.01%,RT-PCR:0.01-0.001%CRPrimary leukemiaOSChemotherapiesAuto SCTAllo SCTInductionLeukemic cells1012 1010 109 108 107 106100%1%0.1%0.01 0.001 流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第3737页页37流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第3838页页38Molecular Measurements of Treatment ResponseClinical Application(ASH Education Program Book p367)Application Action 检测治疗早期反应佳检测治疗早期反应佳 加强治疗加强治疗 检测治疗早期反应差检测治疗早期反应差 无需加强治疗无需加强治疗 检测复发检测复发加强治疗，准备加强治疗，准备HSCT HSCT前前MRD 评定评定 优化优化HSCT时间时间 HSCT后后MRD评定评定 调整免疫抑制治疗时间，等调整免疫抑制治疗时间，等 临床试验结束时临床试验结束时MRD评定评定 评价新抗评价新抗ALL药品或治疗结果药品或治疗结果流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第3939页页39MRD与预后当残余白血病细胞10-2，3年复发率为76-94%10-3残余白血病细胞10-2,3年复发率为37-53%残余白血病细胞10-3,3年复发率为8-20%残余白血病细胞 95%儿童ALL 90-95%成人 ALLAML 85%儿童 AML80-95%成人 AML流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第4343页页43汇报模板汇报模板流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第4444页页44病例一病例一 AML病例资料：病例资料：女，3岁，.6 初发初发FCMFCM印象印象：在CD45/SSC点图上设门分析，原始细胞分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞26%，主要表示HLA-DR、CD13、CD15、CD33、CD34、CD38、CD117，（CD19+2.27%）。淋巴细胞百分比降低。提醒：急性髓系细胞白血病（AML-M2可能）。基因基因：AML1/ETO 阳性。流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第4545页页45病例一（续病例一（续1）.7 化疗 D33D33：FCMFCM：可见残留，CD33+CD19+细胞约占0.04%。基因基因：AML1/ETO 阳性。流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第4646页页46.9 D70D70：FCMFCM：未做。基因基因：AML1/ETO 阴性。.3 D245D245：FCMFCM：未见免疫表型显著异常细胞。基因基因：AML1/ETO 阴性。病例一（续病例一（续2）流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第4747页页47病例二病例二 B-ALL病例资料：病例资料：男，3岁，.3 初发初发FCMFCM印象印象：在CD45/SSC点图上设门分析，CD45弱表示分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞45%，表示HLA-DR、CD10、CD19、CD22、CD34、CD38、Gly-A、cCD79a、TdT。提醒：急性B淋巴细胞白血病（普通型B-ALL）。基因基因：BCR/ABL阴性。流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第4848页页48.11 化疗 第第2020个月个月：FCMFCM：未见显著表型异常残留白血病细胞。（未附图）基因基因：未做。.09 化疗 第第3030个月个月：FCMFCM：可见残留，在CD45dim/-区域可见约1.87%CD10+CD19+CD20-细胞和约1.55%HLA-DR+CD19+CD34+细胞，考虑为残留白血病细胞。（见右图）基因基因：未做。病例二（续病例二（续1）流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第4949页页49病例二（续病例二（续2）.03 化疗+DC-CIK 第第3636个月个月：FCMFCM印象印象：在CD45/SSC点图上设门分析，CD45阴性略向原始延伸分布区域可见异常细胞群体，与有核红细胞无分界，共约占有核细胞89%，主要表示HLA-DR、CD10、CD15、CD19、CD20、CD22、CD34、CD38、cCD79a、TdT。提醒：结合病史，考虑急性B淋巴细胞白血病（普通型B-ALL）复发。基因基因：ALL基因筛查示TSL/ERG阳性，其余均阴性。流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第5050页页50病例三病例三 T-ALL病例资料：病例资料：女，3岁，.10 初发初发FCMFCM印象印象：在CD45/SSC点图上设门分析，原始细胞分布区域可见异常细胞群体，约占有核细胞59%，与淋巴细胞分界不清，表示HLA-DR、CD5、CD7、CD33、CD34、CD38、cCD3。提醒：急性T淋巴细胞白血病 。基因基因：E2A、MLL、TEL、BCR融合基因均阴性。流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第5151页页51病例三病例三（续（续1）.05 化疗 第第7 7个月个月：FCMFCM印象印象：存在CD33+CD5+HLA-DR+（0.01%）、CD34+cCD3+（0.11%）、CD7+CD117+（0.07%）等免疫表型显著异常T淋巴细胞，考虑为残留白血病细胞。基因基因：未做。流式细胞术在白血病中的应用流式细胞术在白血病中的应用第第5252页页