LC-MS液质联用方法开发 Waters.pdf

LC-MS液质联用方法开发2004 Waters CorporationLC-MS配置液相色谱仪和进样器液相色谱仪和进样器色谱柱色谱柱分流器分流器废液或馏分收集器废液或馏分收集器探头探头2004 Waters Corporation基质干扰基质干扰:Loop 进样进样In MethanolIn Tomato Juice2004 Waters Corporation基质干扰:用色谱柱将基质和分析物分离In MethanolIn Tomato Juice2004 Waters Corporation正离子方式或负离子方式正离子方式或负离子方式?碱性化合物碱性化合物(-NH2)(M+H)+酸性化合物酸性化合物(-CO2H,-OH)(M-H)-NHNOClClOCH3CH3OOHCH3CH3CH3Linuron 利谷隆+ve ionIbuprofen布洛芬-ve ion2004 Waters CorporationpH 值的影响值的影响正离子方式 分析碱性化合物用有机酸调整 pH 值如：甲酸或乙酸负离子方式 分析酸性化合物用碱调整 pH 值如：氢氧化铵/氨水2004 Waters CorporationpH 值的影响值的影响2004 Waters CorporationpH 值的影响2004 Waters Corporation一般所用溶剂和缓冲盐溶剂溶剂水乙腈水乙腈缓冲盐缓冲盐甲酸甲酸乙酸氢氧化胺乙酸胺乙酸氢氧化胺乙酸胺*甲醇甲醇异丙醇异丙醇*缓冲盐浓度应不超过缓冲盐浓度应不超过10 mM。2004 Waters Corporation溶剂和添加剂的选择 TFA（三氟乙酸）-用于分析蛋白和多肽 它能抑制ESI+电离至少 0.1%。它将很大程度上抑制ESI-电离。TEA（三乙胺）有丰富的m/z 102离子存在（三乙胺加质子的峰）。抑制弱碱性化合物的ESI+电离，但能提高弱碱性化合物的ESI-电离。THF（四氢呋喃）100%的四氢呋喃可能会着火。当喷雾气是空气时，在APCI电离方式，不能用四氢呋喃。腐蚀PEEK管2004 Waters Corporation不恰当的溶剂和缓冲盐 不挥发性缓冲盐(磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐等)堵塞管路和探头 表面活性剂抑制电离 无机酸(硫酸、磷酸等)腐蚀2004 Waters Corporation用PEEK管时注意溶剂的使用 溶胀 PEEK DMSO THF CH2Cl2 腐蚀 PEEK HNO3 H2SO42004 Waters Corporation溶样的溶剂溶样的溶剂 乙腈水乙腈水利谷隆利谷隆2004 Waters Corporation溶样的溶剂溶样的溶剂 甲醇水甲醇水2004 Waters Corporation溶剂的选择2004 Waters Corporation用同位素模型算同位素峰用同位素模型算同位素峰2004 Waters Corporation两种不同有机溶剂的比较两种不同有机溶剂的比较2004 Waters CorporationHPLC等度和梯度方法比较等度等度 LC梯度梯度 LC2004 Waters Corporation流速对大气压电离的影响00.51.01.52.050100Relative intensityAPCIPneumatically assisted ESIPure ESI流速流速(ml/min)(50/50 ACN/H20)2004 Waters Corporation质谱能适应的流动相流速质谱能适应的流动相流速APCI0.2-1 ml/min(不用分流不用分流)ESI1-300 l/min(需要分流，约需要分流，约 250 l 进入质谱进入质谱)2004 Waters Corporation分流器的连接分流器的连接死体积为零的三通PEEK 管PEEK 管电雾喷探头废液池或溜分收集器分析色谱柱2004 Waters CorporationLC流速对质谱的影响2004 Waters Corporation2004 Waters CorporationHPLC色谱柱的选择LC流速一般根据色谱柱规格和电离方式来确定流速一般根据色谱柱规格和电离方式来确定0.5-2 ml/min3.9-4.6 mm i.d.0.1-0.3 ml/min2.1 mm i.d.40-50 l/min1 mm i.d.10 l/minCapillary columnAPcI0.2-2 ml/minESI 5-300 l/min routinely(1 ml/min possible)2004 Waters CorporationHPLC色谱柱的影响