组织切片染色技术.pptx

组织切片染色技术组织切片染色技术组织切片染色技术1/46学习目标掌握：染色、常规染色概念；掌握：染色、常规染色概念；HE染染色基本步骤。色基本步骤。熟悉：染色目标、原理；惯用染色术熟悉：染色目标、原理；惯用染色术语；染色前后处理；苏木素语；染色前后处理；苏木素-伊红染伊红染色液配制。色液配制。了解：染色注意事项。了解：染色注意事项。组织切片染色技术2/46染色概述第一节组织切片染色技术3/46一、染色概念n n就是利用染料在组织切片上给予颜色，使其与组织或细胞内某种成份发生作用，经过透明后经过光谱吸收和折射，使其各种微细结构能显现不一样颜色，这么在显微镜下就可显示出组织细胞各种成份。n n染色是制片过程中一个主要步骤 组织切片染色技术4/46二、染色目标n n将染料配制成溶液n n将组织切片浸入染色剂内n n经一定时间，组织或细胞及其它异常成份被染上不一样深浅颜色n n对光产生不一样折射率n n便于在光镜下观察。组织切片染色技术5/46u 染色物理作用uu(1(1）毛细管作用及渗透作用）毛细管作用及渗透作用uu染色剂与组织细胞没有牢靠结合染色剂与组织细胞没有牢靠结合uu(2)(2)吸收作用：又称溶解学说。吸收作用：又称溶解学说。uu组织吸收染色剂，牢靠结合。组织吸收染色剂，牢靠结合。uu组织着色与溶液颜色相同。组织着色与溶液颜色相同。三、染色原理组织切片染色技术6/46uu(3)3)吸附作用吸附作用 是固体物质特征，即较大物体能从周围溶液是固体物质特征，即较大物体能从周围溶液(染液染液)中中吸附一些小颗粒吸附一些小颗粒(化合物或离子化合物或离子)到本身特征。到本身特征。细胞中各种蛋白质或胶体有不一样吸附面，所以能选细胞中各种蛋白质或胶体有不一样吸附面，所以能选择性地吸收不一样离子，即某种蛋白质对某种染色剂择性地吸收不一样离子，即某种蛋白质对某种染色剂有吸附作用有吸附作用,而对别种染色剂无吸附作用，这就能够解而对别种染色剂无吸附作用，这就能够解释判别染色现象。释判别染色现象。三、染色原理三、染色原理组织切片染色技术7/46uu 染色化学作用 染色剂按性质可分为酸性、碱性和中性染色剂，染色剂按性质可分为酸性、碱性和中性染色剂，而动、植物细胞内普通也可区分为酸性而动、植物细胞内普通也可区分为酸性(阴离子阴离子)和碱性和碱性(阳离子阳离子)部分。部分。当碱性染色剂溶液中有色部分成为阳离子时，当碱性染色剂溶液中有色部分成为阳离子时，就能与细胞阴离子就能与细胞阴离子(酸件部分酸件部分)较牢靠地结合，较牢靠地结合，当酸性染色剂溶液中有色部分成为阴离子时，当酸性染色剂溶液中有色部分成为阴离子时，就能与细胞内阳离子就能与细胞内阳离子(碱性部分碱性部分)较牢靠地结合。较牢靠地结合。三、染色原理组织切片染色技术8/46 比如，细胞核（尤其是核内染色质）主要由核酸组成，是酸性组成成份，故和碱性染色剂(苏木精)亲和力很强，易于着色。细胞质含碱性物质，故和酸性染色剂(伊红)亲和力很大，易于着色。组织切片染色技术9/46n n进行性染色和退行性染色 n n进行性染色：组织成份着色由浅至深，当到达所进行性染色：组织成份着色由浅至深，当到达所需要强度时，终止染色。需要强度时，终止染色。n n此种方法无需此种方法无需“分化分化”，比如，卡红染色。，比如，卡红染色。n n退行性染色：是先把组织浓染过分，超出所需程退行性染色：是先把组织浓染过分，超出所需程度，然后再用一些溶液脱去多出染色剂，以到达度，然后再用一些溶液脱去多出染色剂，以到达适当深度，并使不应着色组织细胞脱色。适当深度，并使不应着色组织细胞脱色。n n这个步骤称为这个步骤称为“分化分化”。三、染色原理组织切片染色技术10/46n n直接染色，间接染色和媒染剂 n n直接染色：染色无需第三种物质参加，染色剂和组织直接染色：染色无需第三种物质参加，染色剂和组织即可直接结合着色。即可直接结合着色。n n间接染色：单独染料本身水溶液或酒精溶液，几乎不间接染色：单独染料本身水溶液或酒精溶液，几乎不能与组织细胞结合或结合能力很弱，必须有第三种成能与组织细胞结合或结合能力很弱，必须有第三种成份份媒染剂参加，才能使染色剂与组织细胞有效地媒染剂参加，才能使染色剂与组织细胞有效地结合起来。结合起来。n n媒染剂：通常是双价或三价金属如铝、铁硫酸盐或氧媒染剂：通常是双价或三价金属如铝、铁硫酸盐或氧化物。媒染剂在染色中起着架桥作用，既能与染料结化物。媒染剂在染色中起着架桥作用，既能与染料结合又能与组织相结合，到达了促进染色效果。合又能与组织相结合，到达了促进染色效果。三、染色原理组织切片染色技术11/46n n促染剂 n n用以加强染料和组织细胞结合能力物质称为促染剂用以加强染料和组织细胞结合能力物质称为促染剂n n促染剂如化学反应中催化剂，少许存在就有显著促染促染剂如化学反应中催化剂，少许存在就有显著促染作用。它们作用机制可能是降低表面张力或是改变了作用。它们作用机制可能是降低表面张力或是改变了染液染液pHpH值。值。三、染色原理组织切片染色技术12/46n n分化剂 n n在退行性染色中，附在组织细胞上多出染色剂需用一在退行性染色中，附在组织细胞上多出染色剂需用一些特定溶液把目标物以外部分脱去，从而使目标物与些特定溶液把目标物以外部分脱去，从而使目标物与周围组织形成鲜明对比，同时使目标物本身色泽也深周围组织形成鲜明对比，同时使目标物本身色泽也深浅适当。浅适当。n n这种选择性地除去多出染色剂过程称为这种选择性地除去多出染色剂过程称为“分化分化”，所，所使用溶液即使用溶液即“分化剂分化剂”。有酸性分化剂。有酸性分化剂 、氧化分化剂、氧化分化剂 、媒染分化剂、媒染分化剂 三、染色原理组织切片染色技术13/46n n变色反应和正色反应 n n变色反应：染色反应最终目标物所展现颜色和染色剂变色反应：染色反应最终目标物所展现颜色和染色剂当初颜色不一样。如：黏液用甲苯胺蓝可染成红色，当初颜色不一样。如：黏液用甲苯胺蓝可染成红色，而其余组织则染成不一样色调蓝色。而其余组织则染成不一样色调蓝色。n n正色反应：染色反应最终目标物所展现颜色和染色剂正色反应：染色反应最终目标物所展现颜色和染色剂颜色相同。如：酸性品红总是将组织染成不一样色调颜色相同。如：酸性品红总是将组织染成不一样色调红色；淡绿染成不一样色调绿色。红色；淡绿染成不一样色调绿色。三、染色原理组织切片染色技术14/46四、染色剂n n（一）染色剂染色化学基础n n染色剂分子能够显示颜色基因，称为染色剂分子能够显示颜色基因，称为发色团发色团。主要主要发色团发色团有：有：N=N，N=O，C=O，C=C 偶氮基偶氮基偶氮基偶氮基 亚硝基亚硝基亚硝基亚硝基 羰基羰基羰基羰基 烯基烯基烯基烯基n n含有发色团苯环化合物，称为含有发色团苯环化合物，称为色原色原。苯苯+发色团发色团=色原色原n n染色剂分子中还需具备促使染色剂与组织细胞相结合染色剂分子中还需具备促使染色剂与组织细胞相结合基因，这么基因又称为基因，这么基因又称为助色团助色团。如如NHNH2 2 COOH OH SO COOH OH SO3 3H H 氨基氨基 羧基羧基 羟基羟基 磺酸基磺酸基组织切片染色技术15/46四、染色剂n n（二）染色剂分类n n1 1按起源分按起源分 n n2 2按主要用途分按主要用途分 n n3 3按染色剂分子中发色团分按染色剂分子中发色团分 n n4 4按染色剂化学性质分按染色剂化学性质分 组织切片染色技术16/46四、染色剂n n1按起源分n n（1 1）天然染色剂：）天然染色剂：苏木素、胭脂红、地衣红和番红花。苏木素、胭脂红、地衣红和番红花。n n（2 2）合成染色剂：）合成染色剂：从煤焦油中提取苯衍生物。从煤焦油中提取苯衍生物。无机化合物，如硝酸银、氯化金、磺、锇酸和高锰酸钾等。无机化合物，如硝酸银、氯化金、磺、锇酸和高锰酸钾等。组织切片染色技术17/46四、染色剂n n2按主要用途分n n（1 1）胞核染色剂：）胞核染色剂：苏木素、胭脂红、甲苯胺蓝、美蓝和孔雀绿等。苏木素、胭脂红、甲苯胺蓝、美蓝和孔雀绿等。n n（2 2）胞质染色剂：）胞质染色剂：伊红、淡绿、橘黄伊红、淡绿、橘黄G G、酸性品红和苦味酸等。、酸性品红和苦味酸等。n n（3 3）脂质染色剂：）脂质染色剂：苏丹苏丹、苏丹、苏丹、苏丹黑、硫酸尼罗蓝和油红等。、苏丹黑、硫酸尼罗蓝和油红等。组织切片染色技术18/46四、染色剂n n3 3按染色剂分子中发色团分按染色剂分子中发色团分n n（1 1）亚硝基类：发色团为亚硝基（）亚硝基类：发色团为亚硝基（-NO)-NO)，如萘酚缘，如萘酚缘-B-B。n n（2 2）硝基染料：发色团是硝基（）硝基染料：发色团是硝基（-NO-NO2 2），如苦味酸。），如苦味酸。n n（3 3）偶氮类：发色团为偶氮基（）偶氮类：发色团为偶氮基（-N=N-N=N-），属于这一类染色剂），属于这一类染色剂 有橘黄有橘黄G G、刚果红、俾士麦棕和许多苏丹类脂质染色剂。、刚果红、俾士麦棕和许多苏丹类脂质染色剂。n n（4 4）醌亚胺类：含有两个发色团，一个是印胺基（）醌亚胺类：含有两个发色团，一个是印胺基（-N=-N=）、一个）、一个是醌型苯环，如硫堇、美蓝、甲苯胺蓝是醌型苯环，如硫堇、美蓝、甲苯胺蓝O O、硫酸尼罗蓝、中性红和、硫酸尼罗蓝、中性红和碱性藏红花碱性藏红花O O、焦油紫等。、焦油紫等。n n（5 5）苯甲烷染料：发色团是醌型苯环，如孔雀缘、浅绿、碱性品）苯甲烷染料：发色团是醌型苯环，如孔雀缘、浅绿、碱性品红、酸性品红、结晶紫和甲基缘等。红、酸性品红、结晶紫和甲基缘等。n n（6 6）山叮染料：发色团是醌型苯环，如派罗宁和伊红）山叮染料：发色团是醌型苯环，如派罗宁和伊红Y Y等。等。n n（7 7）蒽醌染料：这类染色剂含有色原蒽醌，如茜素和胭脂虫酸。）蒽醌染料：这类染色剂含有色原蒽醌，如茜素和胭脂虫酸。n n（8 8）噻唑类）噻唑类n n（9 9）喹啉类）喹啉类使用极少使用极少 组织切片染色技术19/46四、染色剂n n4按染色剂化学性质分n n（1 1）酸性染色剂：）酸性染色剂：色原色原-助色团助色团-Na-Na色原色原-助色团助色团+Na+Na+。惯用如伊红、酸性品红、。惯用如伊红、酸性品红、苦味酸、橘黄苦味酸、橘黄G G、刚果红、水溶性苯胺蓝和淡绿等酸性染料惯、刚果红、水溶性苯胺蓝和淡绿等酸性染料惯用以染细胞质等碱性成份。用以染细胞质等碱性成份。n n（2 2）碱性染色剂：）碱性染色剂：色原色原-助色团助色团-ClCl色原色原-助色团助色团+Cl+Cl。惯用如苏木素、卡红、次。惯用如苏木素、卡红、次甲基蓝、甲苯胺蓝、硫堇和美蓝等碱性染料惯用以染细胞核等甲基蓝、甲苯胺蓝、硫堇和美蓝等碱性染料惯用以染细胞核等酸性成份。酸性成份。组织切片染色技术20/46五、惯用染色术语 n n1 1普通染色普通染色n n在组织制片技术中，常规制片最广泛应用是苏木精和伊红染色，在组织制片技术中，常规制片最广泛应用是苏木精和伊红染色，又称为常规染色（又称为常规染色（HEHE染色）。染色）。n n2 2特殊染色特殊染色n n特殊染色就是为了显示特定组织结构或其它特殊成份，是常规染特殊染色就是为了显示特定组织结构或其它特殊成份，是常规染色必要补充，也是染色技术中不可缺乏部分。它在病理诊疗中起色必要补充，也是染色技术中不可缺乏部分。它在病理诊疗中起到辅助作用。到辅助作用。n n3 3单一染色单一染色n n选取一个染料进行染色，如用铁苏木素染睾丸生精细胞等。选取一个染料进行染色，如用铁苏木素染睾丸生精细胞等。n n4 4复染色复染色n n用两种不一样性质染料进行染色方法，如用苏木素和伊红分别使用两种不一样性质染料进行染色方法，如用苏木素和伊红分别使细胞核及胞质染成两种颜色。细胞核及胞质染成两种颜色。n n5 5各种染色各种染色n n选取两种以上染料染色，如选取两种以上染料染色，如MossonMosson三色染色法。三色染色法。组织切片染色技术21/46六、染色前后处理 n n（一）染色前处理n n1脱蜡至水 n n二甲苯二甲苯10min10min，3737n n二甲苯二甲苯10min10min，3737n n无水乙醇无水乙醇 2min2min n n无水乙醇无水乙醇 2min2min n n9595乙醇乙醇 2min2min n n8585乙醇乙醇 2min 2min n n7575乙醇乙醇 2min2min n n流水冲洗流水冲洗组织切片染色技术22/46六、染色前后处理n n2除去汞盐沉淀物 n n对于用升汞固定或含有升汞混合固定液切片，切片脱对于用升汞固定或含有升汞混合固定液切片，切片脱腊后需脱汞（浸入腊后需脱汞（浸入5%5%碘酒精碘酒精1010minmin），脱碘（），脱碘（5%5%硫代硫硫代硫酸钠）酸钠）流水洗流水洗染色。染色。组织切片染色技术23/46六、染色前后处理n n3脱甲醛色素 n n（1 1）浓氨水）浓氨水1ml1ml，75%75%乙醇乙醇200ml200ml。切片脱蜡后置溶液。切片脱蜡后置溶液中中30min30min或较久或较久流水洗流水洗染色。染色。n n（2 2）1%1%氢氧化钾氢氧化钾1ml1ml，80%80%乙醇乙醇100ml100ml。切片脱蜡后置。切片脱蜡后置溶液中溶液中10min10min流水洗流水洗5min80%5min80%乙醇乙醇5min5min蒸馏水洗蒸馏水洗染色。染色。组织切片染色技术24/46六、染色前后处理n n4除铬从容物 n n组织用含铬组织用含铬ZenkerZenker氏液等固定，有铬沉淀物。除铬从容氏液等固定，有铬沉淀物。除铬从容物可应用盐酸乙醇溶液，或用物可应用盐酸乙醇溶液，或用5%5%碘酒和碘酒和5%5%硫代硫酸钠硫代硫酸钠水溶液处理。水溶液处理。组织切片染色技术25/46六、染色前后处理n n（二）染色后处理 n n1 1脱水脱水 95%95%乙醇乙醇、各各5min100%5min100%乙醇乙醇、各各5min5min。n n2 2透明透明 二甲苯二甲苯、各各5min5min透明。透明。n n3 3封固封固 通惯用中性树胶或加拿大树胶加盖玻片封固。通惯用中性树胶或加拿大树胶加盖玻片封固。组织切片染色技术26/46七、染色注意事项 n n1 1切片脱蜡应彻底。切片脱蜡应彻底。切片脱蜡应彻底。切片脱蜡应彻底。n n2 2常规染色、特殊染色等，组织要进行固定处理，做酶常规染色、特殊染色等，组织要进行固定处理，做酶常规染色、特殊染色等，组织要进行固定处理，做酶常规染色、特殊染色等，组织要进行固定处理，做酶反应组织固定更应严格。凡用含升汞固定液固定组织，切反应组织固定更应严格。凡用含升汞固定液固定组织，切反应组织固定更应严格。凡用含升汞固定液固定组织，切反应组织固定更应严格。凡用含升汞固定液固定组织，切片脱蜡后，应经脱汞处理，同时要慎防切片脱落。片脱蜡后，应经脱汞处理，同时要慎防切片脱落。片脱蜡后，应经脱汞处理，同时要慎防切片脱落。片脱蜡后，应经脱汞处理，同时要慎防切片脱落。n n3 3各种染料试剂普通选取化学纯。各种染料启用新品时各种染料试剂普通选取化学纯。各种染料启用新品时各种染料试剂普通选取化学纯。各种染料启用新品时各种染料试剂普通选取化学纯。各种染料启用新品时应先试染。配成染液、试液应盛于有色试剂瓶内，瓶签应应先试染。配成染液、试液应盛于有色试剂瓶内，瓶签应应先试染。配成染液、试液应盛于有色试剂瓶内，瓶签应应先试染。配成染液、试液应盛于有色试剂瓶内，瓶签应写明名称、含量、配制年月日，次序保留于避光橱中，必写明名称、含量、配制年月日，次序保留于避光橱中，必写明名称、含量、配制年月日，次序保留于避光橱中，必写明名称、含量、配制年月日，次序保留于避光橱中，必要者放冰箱内。凡须临用时配制者，配量应适当。要者放冰箱内。凡须临用时配制者，配量应适当。要者放冰箱内。凡须临用时配制者，配量应适当。要者放冰箱内。凡须临用时配制者，配量应适当。n n4 4染色各步骤所需时间，常受温度、切片厚度等影响，染色各步骤所需时间，常受温度、切片厚度等影响，染色各步骤所需时间，常受温度、切片厚度等影响，染色各步骤所需时间，常受温度、切片厚度等影响，可依据镜下观察所见酌情给予调整。可依据镜下观察所见酌情给予调整。可依据镜下观察所见酌情给予调整。可依据镜下观察所见酌情给予调整。n n5 5染色过程中，勿使切片干燥。染色完成后用显微镜检染色过程中，勿使切片干燥。染色完成后用显微镜检染色过程中，勿使切片干燥。染色完成后用显微镜检染色过程中，勿使切片干燥。染色完成后用显微镜检验染色结果是否符合要求，并查对标本种类、号码、数量验染色结果是否符合要求，并查对标本种类、号码、数量验染色结果是否符合要求，并查对标本种类、号码、数量验染色结果是否符合要求，并查对标本种类、号码、数量是否无误。是否无误。是否无误。是否无误。组织切片染色技术27/46常规染色第二节组织切片染色技术28/46一、常规染色概念 n n在组织制片技术中，常规制片最广泛应用是苏木精和伊红染色，称为常规染色（HE染色），又称普通染色。组织切片染色技术29/46二、苏木素-伊红染色液配制 n n（一）苏木素染液配制方法惯用有：（一）苏木素染液配制方法惯用有：（一）苏木素染液配制方法惯用有：（一）苏木素染液配制方法惯用有：n n1.1.哈瑞氏（哈瑞氏（哈瑞氏（哈瑞氏（harrisharris）苏木素染液）苏木素染液）苏木素染液）苏木素染液最常应用染色时间为最常应用染色时间为最常应用染色时间为最常应用染色时间为5min5min10min10min配制配制配制配制 蒸馏水蒸馏水蒸馏水蒸馏水 1000ml 1000ml 苏木素苏木素苏木素苏木素 3g3g5g5g 碘酸钠碘酸钠碘酸钠碘酸钠 1g1g 钾明矾钾明矾钾明矾钾明矾 50g50g80g80g 水醋酸水醋酸水醋酸水醋酸 20ml20ml其优点是：配后即可应用染色力较强。其优点是：配后即可应用染色力较强。其优点是：配后即可应用染色力较强。其优点是：配后即可应用染色力较强。其缺点是：极易产生金属膜沉淀。其缺点是：极易产生金属膜沉淀。其缺点是：极易产生金属膜沉淀。其缺点是：极易产生金属膜沉淀。组织切片染色技术30/46二、苏木素-伊红染色液配制n n2.2.埃利希（埃利希（埃利希（埃利希（EhrlichEhrlich），苏木素染液），苏木素染液），苏木素染液），苏木素染液 配制配制配制配制 无水乙醇无水乙醇无水乙醇无水乙醇 100ml100ml 甘油甘油甘油甘油 100ml100ml 苏木精苏木精苏木精苏木精 2g2g 钾明矾钾明矾钾明矾钾明矾 2g2g3g3g 醋酸醋酸醋酸醋酸 5ml5ml10ml10ml置于阳光下自然氧化置于阳光下自然氧化置于阳光下自然氧化置于阳光下自然氧化3 3个月左右成熟。个月左右成熟。个月左右成熟。个月左右成熟。其优点是：其优点是：其优点是：其优点是：染色结果甚佳，贮存愈久染色愈强，而且不需染色结果甚佳，贮存愈久染色愈强，而且不需染色结果甚佳，贮存愈久染色愈强，而且不需染色结果甚佳，贮存愈久染色愈强，而且不需分色。分色。分色。分色。组织切片染色技术31/46二、苏木素-伊红染色液配制n n（二）分化液 1 1盐酸酒精，是最惯用分化液。盐酸酒精，是最惯用分化液。盐酸酒精，是最惯用分化液。盐酸酒精，是最惯用分化液。配方：配方：配方：配方：7070酒精酒精酒精酒精 99ml99ml 浓盐酸浓盐酸浓盐酸浓盐酸 1ml1ml组织切片染色技术32/46二、苏木素-伊红染色液配制n n（三）还原液 1 1氢氧化氨液：氢氧化氨液：氢氧化氨液：氢氧化氨液：配方：浓氨水配方：浓氨水配方：浓氨水配方：浓氨水 1ml 1ml 蒸馏水蒸馏水蒸馏水蒸馏水 99ml99ml 2 2饱和碳酸锂液：饱和碳酸锂液：饱和碳酸锂液：饱和碳酸锂液：配制：碳酸锂配制：碳酸锂配制：碳酸锂配制：碳酸锂 1g1g 蒸馏水（冷）蒸馏水（冷）蒸馏水（冷）蒸馏水（冷）78ml78ml 3 3流水冲洗还原。流水冲洗还原。流水冲洗还原。流水冲洗还原。组织切片染色技术33/46二、苏木素-伊红染色液配制n n（四）伊红染液 配方：伊红配方：伊红配方：伊红配方：伊红Y Y（水溶）（水溶）（水溶）（水溶）0.5g0.5glglg 蒸馏水蒸馏水蒸馏水蒸馏水 99ml99ml 若取用伊红若取用伊红若取用伊红若取用伊红Y Y（醇溶性）应溶于（醇溶性）应溶于（醇溶性）应溶于（醇溶性）应溶于99ml 7599ml 75或或或或9595乙乙乙乙醇中。醇中。醇中。醇中。若在伊红液中加入若在伊红液中加入若在伊红液中加入若在伊红液中加入0.50.5毫升冰醋酸，可加速其染色过毫升冰醋酸，可加速其染色过毫升冰醋酸，可加速其染色过毫升冰醋酸，可加速其染色过程，并使胞质色泽更为艳丽。程，并使胞质色泽更为艳丽。程，并使胞质色泽更为艳丽。程，并使胞质色泽更为艳丽。组织切片染色技术34/46三、染色方法苏木精苏木精伊伊 红红嗜碱性结构：嗜碱性结构：细胞核粗面内质网游离核糖体等嗜酸性结构：嗜酸性结构：细胞质基质溶酶体、线粒体等细胞器胶原纤维等组织切片染色技术35/46常规脱蜡常规脱蜡苏木素染色（苏木素染色（5-15min），水洗），水洗盐酸乙醇溶液分化（盐酸乙醇溶液分化（30s），水洗），水洗伊红染色（伊红染色（1-3min），水洗），水洗氨水反蓝（氨水反蓝（30s），水洗），水洗90%乙醇（乙醇（5min）80%乙醇乙醇（30s）100%乙醇（乙醇（2次次10min）二甲苯（二甲苯（3次次5min）封片封片染色脱水透明封片脱蜡 染色时间，应依据室温，及组织详细情况来确定，做之染色时间，应依据室温，及组织详细情况来确定，做之前做预试验。前做预试验。组织切片染色技术36/46组织切片染色技术37/46 在染色后，重新进入酒精和二甲苯，最终用在染色后，重新进入酒精和二甲苯，最终用中性树胶中性树胶封片封片，方便长久保留。，方便长久保留。*切片切片:固定固定梯度酒精上行梯度酒精上行二甲苯二甲苯石蜡。石蜡。*染色染色:石蜡石蜡二甲苯二甲苯梯度酒精下行梯度酒精下行水。水。*保留保留:水水梯度酒精梯度酒精二甲苯二甲苯中性树胶。中性树胶。组织切片染色技术38/46*苏木素是苏木素是碱性碱性染料，染料，蓝紫色蓝紫色，能够使细胞核等着色。被苏木，能够使细胞核等着色。被苏木素着色结构本身为素着色结构本身为酸性酸性，含有，含有嗜碱性嗜碱性。组织切片染色技术39/46*伊红是伊红是酸性染料酸性染料，粉红色粉红色。能够将大多数细胞细胞质染成。能够将大多数细胞细胞质染成红色。红色。被伊红着色结构本身为被伊红着色结构本身为碱性碱性，含有，含有嗜酸性嗜酸性。*不易被苏木素和伊红着色结构含有不易被苏木素和伊红着色结构含有嗜中性嗜中性。组织切片染色技术40/46石蜡切片石蜡切片&HE染色染色组织切片染色技术41/46组织切片染色技术42/46四、染色注意事项四、染色注意事项n n1组织切片脱蜡应彻底n n2苏木素染液使用一段时间后应及时更换新液n n3染色时间长短需依据染色剂对组织染色作用、室温条件、切片厚薄、固定液类别和染液新旧而进行对应调整。组织切片染色技术43/46n n4分化十分主要。n n5还原液不宜过浓 n n6伊红宜淡染，复染过深胞核会不清楚，影响镜检。n n7脱水、透明宜彻底 组织切片染色技术44/46n n8要将组织四面污染物去掉n n9封固剂要适量 n n10染好切片标签贴牢，编号清楚，避光保留组织切片染色技术45/46组织切片染色技术46/46