细菌类疫苗医学知识专题讲座.pptx

第九章 细菌类疫苗第一节 概述1细菌类疫苗医学知识专题讲座1/60细菌类疫苗o定义：用细菌、支原体、螺旋体或其衍生物制成，进入人体后使机体产生抵抗对应细菌能力生物制品细菌类疫苗o种类：（1）减毒活疫苗（2）灭活疫苗（3）亚单位疫苗或成份疫苗2细菌类疫苗医学知识专题讲座2/60附表：当前用于人群细菌性疫苗o卡介苗o百日咳疫苗o脑膜炎球菌疫苗o伤寒疫苗o精制破伤风疫苗（类毒素）o霍乱弧菌疫苗o痢疾疫苗使用方法：i.d.,s.c.,d.s.,i.m.,p.o.3细菌类疫苗医学知识专题讲座3/60第二节 细菌灭活疫苗o灭活疫苗生产工艺与检定1.菌种检定与制备1）菌种检定：包含 培养特征、血清学特征、毒力试验、抗原性试验、免疫力试验2）菌种制备菌种启开：接种于适宜培养基上，371C一代培养；扩量转种：一代菌种扩量接种，于371C二代培养。4细菌类疫苗医学知识专题讲座4/602.生产方法（1）固体培养法（2）液体通气培养法（大规模生产用）3.细菌采集（1）固体培养法采集时逐瓶检验，污染杂菌者废弃。（2）液体培养法采集时应做纯菌试验，确定无杂菌生长。5细菌类疫苗医学知识专题讲座5/604.杀菌/脱毒 终浓度不超出1%甲醛37或者28处理一定时间杀菌，之后还要进行杀菌检验，接种于适当培养基培养，应无本菌生长。5.原液检定及保留（1）浓度测定（2）镜检（3）凝集试验（4）无菌试验（5）免疫力试验（6）保留6细菌类疫苗医学知识专题讲座6/606.配合稀释及分装 按要求稀释，或与其它疫苗成份按百分比混合后加入吸附剂。7.成品检定 按规程进行7细菌类疫苗医学知识专题讲座7/60o惯用灭活细菌疫苗1.霍乱疫苗（1）霍乱介绍由霍乱弧菌引发烈性肠道传染病，霍乱弧菌在小肠分泌霍乱毒素（cholera toxin），引发腹泻及其它症状。（2）抗原 鞭毛抗原：不耐热，无分型意义，有免疫保护作用。菌体抗原：主要成份为LPS，耐热，依据其抗原决定基 可分为 200多钟血清型，O1和O139为流行血清型。8细菌类疫苗医学知识专题讲座8/60（3）当前最惯用霍乱疫苗口服霍乱灭活全菌体+重组霍乱毒素B亚单位重组霍乱毒素B亚单位（sBS）含有黏膜免疫佐剂特征，该疫苗安全有效且无显著不良反应，保护力持久。9细菌类疫苗医学知识专题讲座9/602.伤寒疫苗（1）概述由伤寒沙门杆菌引发急性全身感染，患者出现高热，胃肠炎，败血症等。含有三类抗原:LPS，荚膜多糖，鞭毛抗原，耐药性比较严重。（2）生产工艺与检定全菌体死疫苗分三种，按杀菌剂不一样可分为丙酮灭活苗，加温加酚灭活苗，甲醛灭活苗。10细菌类疫苗医学知识专题讲座10/60菌株我国现用两个菌株生产疫苗：国际通用Ty2株国内代表株培养基及培养方法采取马丁琼脂、肉汤琼脂或其它经同意培养基，主要采取固体培养法，也可进行发酵生产接种后3537培养1824h。11细菌类疫苗医学知识专题讲座11/60成品检定判别试验、外观、化学检定、无菌试验、异常毒性试验、菌形及纯度检验疫苗规格及使用期每安瓿瓶5ml，每人用剂量含伤寒菌61073108，28避光保留和运输，使用期1.5年。12细菌类疫苗医学知识专题讲座12/60（3）伤寒Vi多糖疫苗早期乙酸处理Vi多糖，抗原性显著降低，经溴化-16-烷基-3-甲基氨处理Vi多糖，得到非变性多糖可显示很好免疫原性，不过对2岁以下儿童无效，且多糖是T淋巴细胞非依赖性抗原，不含有加强免疫记忆作用，蛋白质-Vi多糖结合疫苗正在研制当中。13细菌类疫苗医学知识专题讲座13/60（4）伤寒Ty21a口服减毒活疫苗德国学者将野生型菌株Ty2经化学突变剂亚硝基胍处理而取得突变株，在提供较高免疫保力同时含有很高安全性。14细菌类疫苗医学知识专题讲座14/603.百日咳疫苗1）概述由百日咳杆菌引发急性呼吸道传染病，主要侵犯婴幼儿，全病程较长，可连续几个月，故名百日咳。百日咳菌可分四种相变：相菌毒力最强，有免疫原性；相毒力消失，无免疫原性；、相菌介于、之间。15细菌类疫苗医学知识专题讲座15/6016细菌类疫苗医学知识专题讲座16/602）百日咳死疫苗生产工艺与检定菌种生产用菌种采取百日咳相含1型、2型、和3型凝集原菌株。培养方法固体培养采取半综合碳琼脂培养基，也可发酵生产。17细菌类疫苗医学知识专题讲座17/60原液检定浓度测定、镜检、血清学试验、无菌试验、特异性毒性试验、效价测定。原液保留28，使用期3年配合稀释及分装按原液中含有1、2和3型菌株配比混合，也可制成百白破三联疫苗（百日咳、白喉、破伤风）18细菌类疫苗医学知识专题讲座18/60第三节 细菌减毒活疫苗一、生产工艺与检定19细菌类疫苗医学知识专题讲座19/6020细菌类疫苗医学知识专题讲座20/60二、惯用细菌减毒活疫苗o炭疽疫苗o结核疫苗o鼠疫疫苗21细菌类疫苗医学知识专题讲座21/601、炭疽疫苗1）概述：定义：由炭疽杆菌引发人畜共患一个急性传染病。特点：潜伏期3-5d。临床表现为皮肤、肺部、脑膜和肠道等处急性感染。临床分型：体表感染型 消化道感染型 呼吸道感染型22细菌类疫苗医学知识专题讲座22/60 2）炭疽菌病原学革兰氏阳性，个体最大杆菌之一，呈竹节状，无鞭毛，在机体内或特殊培养条件下能形成荚膜。营养要求不严，需氧，最适温度3437炭疽杆菌营养细胞抵抗力不强，芽孢抵抗力强，过氧乙酸、高锰酸钾、和甲醛对芽孢杀灭力较强。23细菌类疫苗医学知识专题讲座23/60抗原菌体抗原：多糖组分，耐热性强。荚膜抗原：由质粒决定，能够抵抗细胞吞噬作用，引发感染，对动物没有免疫保护力，不能作为疫苗。毒素抗原：水肿因子（EF）；致死因子（LF）；保护性抗原（PA）；单独组分无毒性，成对结合才能取得毒素活性。24细菌类疫苗医学知识专题讲座24/603）炭疽疫苗（1）当前人用炭疽疫苗减毒活疫苗铝胶培养上清液疫苗（2）炭疽疫苗生产工艺与检定生产用菌株人、兽用炭疽活疫苗生产均采取无荚膜具毒素（cap-tox+）菌株，我国采取A16R菌种均由药品生物制品检定所分发。25细菌类疫苗医学知识专题讲座25/60培养及收获生产用培养基采取牛肉汁琼脂或其它同意培养基半成品配置及分装用灭菌50%甘油将原液稀释成每ml含菌数4109成品检定判别试验、外观、纯菌试验、特异性毒性试验活菌数测定、浓度测定、效力测定26细菌类疫苗医学知识专题讲座26/60疫苗规格及使用期安瓿瓶装，10人份含菌2109，28避光保留运输，使用期两年。（3）当前人用炭疽疫苗缺点毒力不稳定采取划痕接种，免疫效果不均一副反应较大免疫保护力连续时间比较短27细菌类疫苗医学知识专题讲座27/602、结核疫苗病原菌为结核杆菌，能引发人畜共患结核病（1）流行概况全世界约1/3人口感染；每年约1600万人患病，其中300多万人死于结核病。中国治疗难题：发觉率低；无法接收正规治疗或没钱治疗；耐药性28细菌类疫苗医学知识专题讲座28/60（2）传染与传输方式主要由呼吸道传染，少数由消化道和皮肤粘膜损伤处侵入。传输方式：飞沫传染 痰液传染 食物传染 接触传染29细菌类疫苗医学知识专题讲座29/60（3）结核杆菌潜伏和复燃结核杆菌类脂质等成份能反抗溶酶体中酶破坏作用，使细菌在巨噬细胞内繁殖，造成巨噬细胞裂解死亡，病状扩散至邻近淋巴结，形成原发感染灶，当机体抗感染力较强时，淋巴结病灶逐步纤维化和钙化，此时病灶内结核杆菌处于休眠期，并潜伏下来，几年或十几年后，结合杆菌可以重新复燃，引发成年人肺结核。30细菌类疫苗医学知识专题讲座30/60（4）结合杆菌抗药性伴伴随结核病回升另外一个问题是抗药性产生，多重抗药性发生率也越来越高，研制和开发有效结合新疫苗势在必行。31细菌类疫苗医学知识专题讲座31/602）结核杆菌病原学革兰氏阳性，含分枝酸，含有抗酸性，胞壁含大量脂质，有较强抵抗力灭菌方法含有免疫佐剂活性32细菌类疫苗医学知识专题讲座32/603）结核疫苗卡介苗生产工艺与检定卡介苗（BCG）是牛型结合杆菌经培养后，收集菌体，加入稳定剂冻干后制成，用于预防结核病菌种卡介菌D2PB302菌株培养和搜集生产用培养基采取苏通马铃薯培养基、胆汁马铃薯培样基或液体苏通培养基，搜集菌膜压干，低温研磨，加入稳定剂，制成原液。33细菌类疫苗医学知识专题讲座33/60半成品配置及冻干用特定保护剂稀释成半成品，无菌分装到安瓿瓶内成品检定判别试验、外观、溶解时间、水分、纯菌试验、无有毒分枝杆菌试验、活菌计数、效力测定疫苗规格及使用期10人份含卡介菌0.40.6mg，28避光保留运输，使用期一年。34细菌类疫苗医学知识专题讲座34/60（4）新型结核疫苗研究方向以BCG为载体基因工程结核疫苗营养缺点型结核减毒活疫苗（牛型/人型）结核亚单位疫苗结核DNA疫苗35细菌类疫苗医学知识专题讲座35/603、鼠疫疫苗（1）概述：鼠疫是由鼠疫杆菌引发自然疫源性烈性传染病。主要以“鼠蚤人”为主要传输方式。36细菌类疫苗医学知识专题讲座36/60（2）鼠疫杆菌病原学鼠疫杆菌属肠杆菌科，耶尔森氏菌属。革兰染色阴性短小杆菌。有荚膜，无鞭毛，无芽胞。抗原和免疫原性37细菌类疫苗医学知识专题讲座37/60（3）鼠疫疫苗生产工艺与检定菌种：采取鼠疫杆菌弱毒菌株EV株培养及收获：培养基：厚金格尔琼脂培养基（pH6.87.2）肉眼检验及纯菌试验合格方可收获。半成品配制及冻干细菌比浊标准调整原液浓度，加冻干保护剂，分装。成品检定：判别试验、理化试验、纯菌试验、特异性毒性试验、活菌数测定、浓度测定、菌形检验、效力测定疫苗规格及效期10人份含菌8109，28避光保留运输，使用期一年。38细菌类疫苗医学知识专题讲座38/60第四节 类毒素疫苗一、概述类毒素是一个主动免疫制剂，用于细菌毒素性疾病预防。39细菌类疫苗医学知识专题讲座39/601.相关毒素几个概念细菌毒素：致病细菌产生特异性毒性物质外毒素：细菌在生长过程中产生，可扩散或自溶后释放到菌体外内毒素：菌体细胞壁结组成份，生存时不释放，死亡后释放至外界类毒素：外毒素经处理后去除毒性但仍保留免疫原性40细菌类疫苗医学知识专题讲座40/602.细菌外毒素特征1）毒性强2）亲组织性3）抗原性4）双组分结构蛋白质41细菌类疫苗医学知识专题讲座41/603.类毒素生产1）产毒人工培养产毒细菌取得毒素菌种产毒力强、稳定产毒培养基42细菌类疫苗医学知识专题讲座42/60培养基应符合下面几个方面要求（1）能提供产毒必要成份（2）能调整影响产毒诸原因平衡（3）能缓解对产毒有害物质作用（4）能保护已经产生毒素（5）不能含有对人有害或引发过敏反应物质43细菌类疫苗医学知识专题讲座43/60培养方法依据菌种特征与详细试验来决定2）脱毒影响原因：温度、pH、甲醛浓度、毒素3）精制适合用于规模化生产，条件温和，防止反抗原损伤44细菌类疫苗医学知识专题讲座44/604.毒性逆转及其相关原因毒素类毒化后仍有毒性逆转可能，与毒性逆转相关原因有：稀释脱毒条件小分子物质影响45细菌类疫苗医学知识专题讲座45/60二、惯用细菌类毒素疫苗1.白喉类毒素1）概述由白喉杆菌引发急性呼吸道传染病，产生外毒素引发局部炎症及组织坏死46细菌类疫苗医学知识专题讲座46/602）白喉杆菌病原学（1）形态及生活习性：革兰氏阳性棒状杆菌，需氧或兼性厌氧，抵抗力较弱（2）分型：重型、中间型、轻型，流行中多为轻型，引发症状最轻（3）白喉毒素（Diphtheria toxin）分子结构及致病机制47细菌类疫苗医学知识专题讲座47/60Diphtheriatoxin:modeofactionandstructure.CollierRJ.BacteriolRev.1975March;39(1):5485.48细菌类疫苗医学知识专题讲座48/603）白喉类毒素生产工艺与检定（1）生产工艺菌株：PW8或由其筛选得到产毒培养基：氮源、能源、生长因子、无机离子培养：严格控制杂菌污染精制：硫酸铵、活性炭分段盐析法或其它适宜方法脱毒：甲醛脱毒后进行脱毒检验吸附精制白喉类毒素：以Al（OH）3吸附剂为免疫佐剂49细菌类疫苗医学知识专题讲座49/60（2）白喉类毒素检定判别试验外观化学检定安全试验保护力试验50细菌类疫苗医学知识专题讲座50/602.破伤风类毒素1）概述破伤风梭菌兼性厌氧，营养型菌抵抗力不强，芽孢含有强大抵抗力，产生溶血素和神经毒素两种毒素，最毒生物毒素之一，每mg可杀死2亿只小白鼠51细菌类疫苗医学知识专题讲座51/602）破伤风类毒素生产（1）菌株毒力高、抗原性好、稳定（2）培养基厌氧培养基，含有丰富营养和刺激产毒成份（3）深层静止培养法培养（4）甲醛脱毒（5）精制（6）Al（OH）3佐剂吸附52细菌类疫苗医学知识专题讲座52/60第五节 细菌多糖疫苗引发人类疾病并带有荚膜多糖细菌主要有：b型流感嗜血杆菌（Hib）肺炎球菌 流行性脑膜炎双球菌（流脑）伤寒杆菌53细菌类疫苗医学知识专题讲座53/60o荚膜多糖是细菌细胞壁主要成份，是一个强毒力因子。其致病力来自于荚膜多糖抗吞噬作用。o依据荚膜多糖化学结构和免疫学特征可将细菌分为不一样血清型。54细菌类疫苗医学知识专题讲座54/60A群脑膜炎球菌多糖疫苗生产工艺：一、菌种生产用菌种为A群脑膜炎奈瑟菌CMCC29201（A4）菌株。二、培养及收获生产用培养基采取改良半综合液体培养基或其它适宜培养基，采取培养罐液体培养。55细菌类疫苗医学知识专题讲座55/60三、培养物搜集和杀菌于对数生长久后期或静止期前期中止培养，取样进行菌液浓度测定及纯菌检验，合格后加甲醇杀菌或56度加热10min杀菌。56细菌类疫苗医学知识专题讲座56/60四、多糖提纯和精制全过程应在(85)低温室内进行。1、去核酸2、沉淀多糖3、多糖精制冷酚提取法57细菌类疫苗医学知识专题讲座57/60五、半成品配制将多糖原液加入无菌无热原质乳糖，并用灭菌注射用水稀释，使每人用剂量疫苗含多糖30g，乳糖2.53mg58细菌类疫苗医学知识专题讲座58/60六、分装及冻干按生物制品分装和冻干规程进行59细菌类疫苗医学知识专题讲座59/60七、成品检定1、判别试验2、外观3、化学检定4、核酸含量5、O-乙酰基含量6、唾液酸含量7、特异性试验60细菌类疫苗医学知识专题讲座60/60