老年期痴呆药专家讲座.pptx

老年期痴呆药老年期痴呆药第1页一、试验设计医学基础 老年期痴呆主要发生在55岁以上老年人群中，其临床症状以记忆、思维、判断、计算、识别、语言等脑高级功效显著减退，甚至人格变性，但没有意识障碍，发病迟缓，病程长为特 点。据国外统计资料，在65岁以上老年人中，显著痴呆者占2-5，80岁以上者增加 到15-20，如合并轻、中度痴呆进行预计，则将高于上述数字23倍。老年期痴呆主要包含阿尔海默型老年性痴呆(senile dementia ofthe alzheimer tape，DAT)和血管性痴呆(vasculardementia，VD)两型。二者能够单独存在，亦有并存，称混合型。其中alzheimer型最为多见，据国外统计资料，约占老年期痴呆65，占死亡原因第四位。其确切病因尚不清楚。当前有“老年斑学说”，老年斑主要成份为p淀粉样蛋白(pamyloidprotein，Ap)，是由淀粉样前体蛋白(amyloidprecursorprotein，APP)产生；“神经元缺失学说”，主要包括皮层(额叶、颞叶和顶叶)、海马、基底神经节、下丘脑区，其中以基底节胆碱能神经元缺失最为显著；“神经纤维缠结学说”，“神经递质异常学说”，主要表现为胆碱乙酰转移酶(ChAT)活性低下，乙酰胆碱(Ach)含量降低，M胆碱受体密度降低，其它如去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)和许多肽类也常有异常。另外SDAT与遗传和外伤也相关，在SDAT病人亲属中发病危险性高于普通人群，并发觉SDAT组有脑外伤者多于对照组。老年期痴呆药第2页 相关老年期痴呆治疗：痴呆早期，应进行及时对因对症治疗，是能够缓解症状，并能阻止痴呆深入发展成严重痴呆。西医治疗当前常采取“脑代谢活化剂”如：甲氯芬酯(氯酯醒)、都可喜、喜得镇、活脑灵、吡拉西坦(脑复康)、脑活素等。“改进脑血流药品”如桂利嗪(脑益嗪)、氟桂利嗪(西比灵)、尼卡地平、尼莫地平、川芎嗪、曲克芦丁(维脑路通)等。常因疗效不满意，毒副反应大或价格昂贵，患者难以坚持用药。中医学认为，老年期痴呆多由下元虚衰，气血匮乏、肾精不足，髓海空虚，脾虚湿滞痰蕴，气虚血瘀情忧等原因所致。病位在脑，与心、肾、肝、脾虚衰亲密相关，多属本虚标实证。本虚为气虚髓少，致使行血布津不利，标实为血瘀痰阻致神明失养，清窍不利。辨证分型为“气滞血瘀型”、“髓海不足型”、“痰浊阻窍型”、“肝肾亏虚型”、“脾肾亏虚型”、“心肝火旺型”，治宜用补益药、活血药、化痰开窍药等。老年期痴呆药第3页v二、药效学研究试验设计v(一)对痴呆动物模型防治作用试验v 1惯用动物模型 老年期痴呆动物模型惯用大鼠或小鼠。v (1)自然衰老动物模型：动物与人相类似，青年期学习快，记忆牢，中老年时学习与记忆能力逐步下降，有则发生较严重记忆衰退或健忘症。小鼠1周岁，大鼠15周岁应属早老型；小鼠15周岁，大鼠2周岁应属老龄型。用这种动物作试验，其学习记忆能力均比青年鼠、成年鼠低很多。但给药前需要进行筛选，选取学习记忆低下者。此种方法造模轻易，但受喂养条件限制，费时费劲，造价较高。且动物身体情况，脑衰退程度与喂养环境关系亲密。此种模型应用不够广泛。老年期痴呆药第4页 (2)给小鼠长时间吸入高浓度臭氧(O3)致脑衰老动物模型：此模型造模不难，将小鼠放在臭氧发生橱内，每日使其吸臭氧12h以上，连续吸2030日，即可产生脑功效障碍，同时脑组织脂褐质、过氧化脂质含量增加。但在造模期间，小鼠食量下降，体重显著降低。因为需要特殊设备，此模型应用也不够广泛。(3)给小鼠长久注射D半乳糖致衰老模型：采取无菌注射方法，每日给小鼠皮下注射5D半乳糖o.5ml，连续68星期，可致小鼠脑功效衰退且伴有脑组织自由基损伤，使脂褐质、LPO含量升高，B型单胺氧化酶活性增加，此模型造模简单易行，不需要特殊设备，周期不算长，本模型靠近自然衰老过程。(4)加速老化小鼠模型(senescenceacceleratedmouse，SAM)：SAM是日本京都大学老年生物学系从美国杰克森研究所移人AKR系小鼠经过开发成功品种。它含有出现脱毛、被毛粗杂、活动低下、白内障、角膜浑浊、骨质疏松等早期老化特征和寿命缩短特点。老年期痴呆药第5页 2观察方法和指标 (1)学习记忆测定方法与指标：小鼠一次性回避性条件反射法(跳台法与避暗法)：小鼠先进行训练，24h再进行测验。以训练及测试时小鼠跳台或避暗潜伏期(s)和35min内触电次数为观察指标，进行组间比较。当给药组潜伏期显著延长，错误次数显著降低时，说明药品有增强学习记忆作用。试验也可用大鼠。迷路法：深入分电迷路法和水迷路法。惯用复杂水迷路法：多数水迷路含4个盲端，终点有一高出水面安全区。训练分A、B、C三个起步点进行，每日训练35次，连续3-5日不等。训练24h后进行测试，每只动物训练和测试均纪录抵达终点时间(抵达时间)和进入盲端次数(错误次数)，结果进行组间比较。穿梭箱法：穿梭箱分为两等室，两室端点各安有白炽灯，箱底铜栅能够通电，灯光为条件刺激，电击为非条件刺激，大鼠(或小鼠)每日训练3O-6O次。当大鼠于条件刺激时(无电击)就逃向安全室内为主动回避反应阳性。试验以主动回避反应阳性率为指标，进行组间比较。大鼠操作式条件反射：此方法训练难度较大，应用较少。老年期痴呆药第6页 (2)其它指标测定与观察：脑生化指标测定：可观察全脑(小脑除外)或相关脑区(皮层、海马和基底神经节)与老年期相关活性物质如：神经递质和受体：Ach含量、ChAT活性、M胆碱受体密度；NE，DA含量。老年期痴呆常有中枢胆碱能和去甲肾上腺素能及DA能神经受损，功效低下表现。脑组织自由基损伤程度：老年期痴呆常有相关脑区脑组织神经元细胞膜、亚细胞膜自由基损伤显著，表现为脂褐质、过氧化脂质(LPO)含量增加，而处理自由基酶类，如超氧化歧化酶(SOD)活性降低。脑物质代谢和能量代谢观察：老年期痴呆动物模型常有脑组织蛋白质、核酸代谢低下表现，并有Na+、K+ATPase，Ca2+、Mg2+ATPase活性异常等表现。兴奋性氨基酸及其受体水平估测：兴奋性氨基酸，如谷氨酸、天门冬氨酸含量增加产生细胞毒作用，常可促进脑缺血缺氧病变。老年期痴呆药第7页 神经细胞和末梢内游离钙离子含量测定：Ca2+i超负荷是造成神经细胞损伤关键步骤。Ca2+i超负荷可严重损伤神经组织，破坏脑功效。脑病理切片检验：SDAT最显著病理改变是神经元缺失，神经纤维缠结和淀粉样病变。大脑皮层内大量神经细胞死亡和消失，使神经细胞数量显著降低，可造成脑回萎缩，以额叶(、顶叶、颞叶显著。电镜下可观察到海马和皮层部位神经元纤维缠结成螺旋状或线团状。在神经组织内，脑膜和皮层小动脉内可观察到淀粉样病变。VD则表现为相关脑区出现脑血栓及脑缺血性病理损伤，如水肿或坏死。脑血流量测定：采取多普勒激光血流测定仪或IS型组织血流仪测定缺血区脑血流 量。LTP测定：海马突触传递长时间增强(1Ongtermpotentiation，LTP)效应是记忆巩固过程 中神经元电生理活动客观指标，是长时性记忆基础。当用高频电脉冲刺激传人神经时，则引发该神经通路上突触电位效应显著增强。该效应在停顿刺激后仍保持较长时间。试验证实，动物记忆强度与LTP反应有显著相关性。老年期痴呆药第8页3方法学评价 在神经科学领域中相关老年期痴呆病因病理还未搞清楚，老年期痴呆动物模型建立和药品研究尚不够成熟。在我国相关方面研究刚处于起步阶段，上述动物模型还不够完善，所以给新药研究带来较多困难。中药新药研究首先应依据新药功效主治多项选择取几个模型。如针对SDAT可在前述1-6种模型中选择；针对VD可在后3种模型中选择。学习记忆方法属于行为药理学范围，观察指标不够准确，标准差大，重复性差，应配合其它方法和指标，如脑病理检验，选择适当脑生化指标，脑长时程电位测定，脑血流量等各种方法、各种指标综合评价药品作用。老年期痴呆药第9页(二)阳性对照药 近年来新同意上市防治老年期痴呆中药新药不多，已知有“抗脑衰胶囊”，由唐山市龙山制药厂生产，主要由补益药、活血药组成，另外还含有维生素E和卵磷脂。2OO1年4月新同意上市主治血管性痴呆新药有“九味益脑颗粒”，主要由益气活血药组成。相关西药可选取：“脑代谢活化剂”如：吡拉西坦(piracetam，又名脑复康)，为新型促思维记忆药，可促进大脑对磷脂和氨基酸利用，增加脑血流量，改进脑缺血及脑损伤。吡硫醇(pyritinol，又名脑复新)，能促进脑内葡萄糖和氨基酸代谢，增加脑血流量。都可喜(duxil)，为烯丙哌三嗪3Omg和阿码碱lOmg混合片剂，本品可改进脑组织氧饱和度，使氧分压增高，且有扩张脑血管作用，促进脑组织葡萄糖氧代谢，改进脑缺血症状。他克林(tactine)，为中枢AchE可逆性抑制剂，并能激动M胆碱受体，促进单胺递质释放和更新。烟酸占替诺(脑脉通)，改进大脑新陈代谢，扩张脑血管。另外还有脑活素、喜得镇等。老年期痴呆药第10页抗高血压药老年期痴呆药第11页一、试验设计医学基础 高血压是指体循环动脉血压升高。普通认为血压增高主要是因为全身小动脉痉挛硬化，引发周围动脉压力增高所致，血容量和心排出量增加也可能参加高血压形成，但虽经多年研究，对高血压确切发病机制仍无 ，临床用于治疗高血压药品普通有利尿药，中枢a激动剂，节后神经原抑制剂，阻滞剂；钙拮抗剂；阻滞剂；血管担心素转换抑制剂(ACE)；血管扩张剂，N阻断剂。依据中医理论推断，高血压多眩晕、头痛、心悸、脉弦、中风等症，病位多及心、肝、肾，病因病机虽较复杂，归纳起来不外肝阳上亢，气血亏虚，肾精不足，痰湿内阻，气滞血阏等方面，以肝肾阴虚为其根本。中医治疗主要以平肝潜阳，滋补肝肾，补肾温阳，补肾养心被动风通络为主。老年期痴呆药第12页 二、药效学研究试验设计 (一)对高血压动物模型治疗作用试验 1惯用动物模型 (1)自发性高血压大鼠(SHR)：选择血压高于2128kPa(160mmHg)以上大鼠进行同系近亲繁殖，多代繁殖后能够取得自发性高血压大鼠(SHR)，血压普通在266kPa(200mmHg)左右。此种高血压大鼠首先由日本人培育成功，以后又培育成功一些亚种，如脑卒中易感型自发性高血压大鼠，糖尿病型和肥胖型SHR等，另外还有Smirk等培育成功新西兰种高血压大鼠(GHR)，由Bianchi等培育成功米兰高血压种大鼠(MHR)，我国上海高血压病研究所自行繁殖出SHRSP及WKT。Dahi还培育成功盐敏感性高血压大鼠，此种大鼠服用1盐水后形成慢性高血压，盐不敏感性高血压大鼠在饮用盐水后血压不升高，此种大鼠也是研究降压药惯用病理模型。(2)肾血管性高血压大鼠或犬：狭窄肾动脉造成肾缺血，造成肾生成肾素增加，肾素作用于循环血液中血管担心素原，引发血液中血管担心素工和含量增加。血管担心素是体内最强缩血管物质，同时还激活肾上腺皮质分泌醛固酮，引发水盐代谢障碍，造成动物高血压。(3)内分泌型高血压大鼠：因激素药品造成动物内分泌紊乱，使体内醛固酮增加，水钠潴留，血压升高。老年期痴呆药第13页 2观察指标 (1)血压：依据不一样试验分别测定动物正常血压、造模后对照期血压(1星期以上)、用药前及用药后不一样时间血压，依据不一样模型及受试物情况决定给药前后测定血压间隔和次数。测定方法分直接插管测压法和非插管间接测压法，前者可连续观察给药前后MAP，观察血压波型和ECG，心率，多用于各种动物急性试验；非插管间接测压法主要用于大鼠和犬，是惯用测压法，多用于慢性试验。(2)ECG：观察QRS波、T波、ST波、心率和心律。(3)急性降低血压266333kPa(20-25mmHg)剂量，和已知定量比较，若有加紧心率作用，求出加紧心率剂量。(4)血流动力学指标：可在高血压动物模型上测定血流动力学指标，泵血功效主要以CO(心输出量)、CI(心脏指数)代表，收缩功效主要以LVdpdtmax(左室压力上升和下降速率)代表，前负荷以LVEDP(舒张末期压)代表，后负荷以BP(血压)、TPR(总外周阻力)代表，器官血流、脑血流主要以颈内动脉血流为代表，心脏血流以冠状动脉左前支血流为代表，外周血流以股动脉血流为代表，必要时须测肾血流。老年期痴呆药第14页3方法学评价 (1)自发性高血压模型(又称遗传性高血压模型)较靠近人类原发性高血压，是迄今研究人类原发性高血压较为理想且首选动物模型。我国自行繁殖出SHRSP、SHRSR及WKT已成为研究高血压发病机制及筛选降压药品很好动物模型，并应用于中医阴阳虚证学说研究。在各种高血压模型中，国外SHR、DS、MHS应用较广，在我国以SHR、SHRSP应用较多，其余因血压比SHR、SHRSP低，且少见有心血管并发症故少用。自发型高血压动物虽与人类高血压病十分类似，但也存在不少差异，所以在动物体上得到结果推论到人类高血压时应慎重。(2)用狭窄肾动脉方法能形成稳定持久高血压，相当于人肾血管型高血压，能反应受试降压药效力，是主要用于评价降压药药效良好病理模型。狭窄肾血管引发高血压有二肾一夹型，其中一肾功效保持；还有一肾一夹型，切除健康肾，肾脏排水功效受到损害。老年期痴呆药第15页 (3)插管直接测压方法简单，准确，能连续观察给药前后血压和心率、心律、ECG，了解一次给药后药品出现作用和作用消失时间、作用强度，并与已知药比较，作出科学评价。其缺点是不能进行长久慢性试验。(4)间接压法在新药研究中可用于降压药筛选和药品治疗作用规律研究，主要用于大鼠和犬，最惯用方法是大鼠尾动脉袖带加压法，可分别于动物给药前后定时测定，以观察不一样阶段药品作用规律或屡次给药后血压改变情况，可进行长久慢性试验。该法优点是简便、快速，可屡次测定，缺点是受室温、加温温度及时间原因影响较大，血压有波动，常以几次测定平均值代表。(5)对受试降压药，常需做高血压动物治疗试验、清醒高血压动物急性降压试验和流体动力学试验。高血压动物治疗试验普通为慢性试验，主要观察高血压动物用药前后、用药期间血压改变情况以及停药后血压恢复，常给造模动物用药若干疗程，定时观察各项指标。清醒高血压动物急性降压试验主要了解一次用药前后各项指标改变情况，测定方法可采取间接测定和直接测定，尤其以后者为好，可观察药品时效过程。血流动力学试验可选取高血压动物或正常动物为受试对象，但应注意很多降压药对正常动物血压无显著影响。4给药方法 受试药给药方法中最少有一个与临床相同，假如插管影响口服给药，可采取经胃或十二指肠给药。假如受试药为中药提纯物，水溶者可用静注或其它注射方法，如系中药粗制剂普通不宜直接静脉注射。老年期痴呆药第16页(二)其它试验 (1)血流动力学试验：正常动物用药前后血流动力学试验普通用狗，能够同时测定多项指标。在戊巴比妥麻醉下，分离颈总动脉、颈外动脉、股动脉和股静脉。左侧开胸分离冠状动脉左旋支、主动脉上升支。结扎颈外动脉和椎动脉后在颈总动脉、冠状动脉、股动脉和升主动脉上放置电磁流量探头即可分别测定这些血管血流量，以主动脉流量代表心输出量。股动脉插管到腹主动脉，测定中心动脉压。四肢皮下插针型电极，测ECG。从心尖将导管插入左心室测心室收缩压(LVSP)和舒张末期压(LVEOP)。经微分标出左室压力上升和下降速率(LVdpdtmax)。泵血功效主要以CO(心输出量)、CI(心脏指数)代表，收缩功效主要以LVdpdtmax代表，前负荷以LVEDP代表，后负荷以BP、TPR(总外周阻力)代表，器官血流、脑血流主要以颈内动脉压血流为代表，心脏血流以冠状动脉左前支血流为代表，外周血流以股动脉血流为代表(必要时须测肾血流)。麻醉大鼠从右或左颈动脉插管至左心室，也可同时测血压、ECG、LVSP和LVdpdtm。老年期痴呆药第17页 (2)依据中医辨证分型特点，可选择性观察一些相关指标：比如治疗肝阳偏亢高血压药品，可观察垂体肾上腺轴内分泌改变，如儿茶酚胺、17羟皮质固醇等；治疗阴虚阳亢高血压药品，进行交感受体环核苷酸系统功效水平测定，必要时可测血内肾素、血管担心素、cAMPcGMP等。(3)药品作用机制研究，可选做离体血管条试验以观察药品对血管收缩性影响，也可依据情况选做一些对受体、离子通道影响试验。(4)主要脏器血流量(心、脑、肾等)观察。(5)利尿、血容量测定；镇静(针对头痛、眩晕)等作用观察。老年期痴呆药第18页(三)阳性对照药 阳性对照药既能够选西药，也能够选中药，西药作用机制较明确，效果必定，中药在辨证分型治疗方面有独到之处，可依据受试药品药效特点，选择作用功效或机制相近疗效必定中药中成药或西药为阳性对照药，给药剂量与临床用量及受试药剂量相对应(等效量或倍数量)。老年期痴呆药第19页消化性溃疡药老年期痴呆药第20页 一试验设计医学基础 消化性溃疡主要指发生于胃和十二指肠慢性溃疡，临床以上腹部剑突以下，脐以上胃腕部经常发生疼痛为主症。本病属中医“吞酸”、“胃脘痛”之范围。相关消化性溃疡病病因病机还未完全清楚。普通认为溃疡形成主要因为胃、十二指肠黏膜防御原因和攻击原因平衡失调所致。攻击原因主要是指胃酸、胃蛋白酶以及近年提出幽门螺旋杆菌；防御原因则包含粘液碳酸氢盐屏障、胃黏膜血流、胃上皮更新和内生性前列腺素等。任何原因造成攻击原因加强和(或)防御原因减弱时，均可造成溃疡发生。当代医学刘消化性馈疡治疗 般可分为三个方面：抑酸、强化黏膜防卫和抗菌治疗。中医认为本病病因病机主要有情志所伤，饮食劳倦等方面。本病病位在胃，与肝、脾关系最为亲密。在病机转化方面，含有由气及血，由实转虚，寒热转化、化热伤阴之特点，临证多从肝郁、脾虚，胃热、气滞、血淤及胃阴亏损进行辨证，采取疏肝、健脾清热、理气、化瘀，养阴之法。老年期痴呆药第21页二、药效学研究试验依据 (一)对溃疡病模型防治作用试验 1惯用动物模型 (1)应激性胃溃疡模型：经过应激力法引发，如束缚、冷冻、饥饿、烫伤等。(2)幽门结扎法溃疡模型：经过手术结扎幽门方法而形成溃疡。(3)药品性溃疡模型：如利血平溃疡模型、吲哚美辛溃疡模型、阿司匹林溃疡模型均经过对应药品作用而产生溃疡，(4)化学性溃疡模型：慢性乙酸溃疡模型、无水乙醇、盐酸、氢氧化钠溃疡模型，这些模型均为这些物质直接损伤胃黏膜而形成溃疡。以上溃疡模型，除乙酸溃疡模型外，其余均为急性溃疡模型，前者通常作为观察药品对溃疡愈合作用，后者则作为观察药品对溃疡发生情况从程度影响老年期痴呆药第22页 2观察指标 (1)溃疡愈合情况应足评价新药疗效最主要指标。这通常足对慢性溃疡模型而言。衡量溃疡愈合指标有溃疡疡面积或溃疡体积、溃疡愈合率。哪中表示更为科学，应依据药品作用强度以及溃疡愈合程度而定。(2)溃疡指数及溃疡发生率常作为评价药品对各种溃疡模型作用指标。尤其是对急性溃疡模型。前者常为评价溃疡轻重程度，后者则衡量溃疡发生情况。溃疡指数评定标准与方法视不一样溃疡模型而有所不一样。(3)其它可供分析指标：胃黏膜出血程度，急性溃疡模型如应激溃疡、药品性溃疡、化学致坏死性损伤物质引发胃黏膜损伤常为出血性损伤，其出血程度与胃黏膜损伤程度相关。但因为实际操作上不易测量出血量，能够“+”分级表示轻重程度，作为辅助指标。老年期痴呆药第23页 3方法学评价 上述各种溃疡模型，因为造模方法和发生机制不一样，模型中各有特点。可依据新药功效主治灵活选择。(1)慢性乙酸法溃疡模型：普通认为其溃疡病理形态特点与修复过程类似人类消化溃疡。且溃疡发生率达1OO，溃疡在胃肠任何部位均可造成，溃疡连续时间长，自愈约需6O1OO日，可在较长时间内观察药品治疗效果等，所以，该模型适合用于各种证型药品观察。是评价药品对溃疡愈合作用较为理想溃疡模型。(2)幽门结扎法溃疡模型：其主要发生机制为潴溜胃液对胃消化作用以及因为结扎幽门引发胃血液循环障碍所致。与人类消化性溃疡“本身消化”学说相吻合，与中医气滞血瘀有一定联络。因为操作方法简单易行，溃疡发生率高，几乎达1OO，所以广泛用于抗溃疡药品研究，适合于各类证型抗溃疡药品，尤其是活血化瘀、理气行气类药品抗溃疡作用观察。老年期痴呆药第24页 (3)应激性溃疡模型：与人类应激性溃疡十分相同，此模型发生机制比较复杂，普通认为应激作用使大脑皮层中枢兴奋与抑制过程失调，引发皮层下中枢功效紊乱从而造成自主神经和下丘脑垂体肾上腺皮质轴调整功效紊乱，使胃肌痉挛、胃血液循环障碍，胃分泌增加而造成溃疡形成。人类因为严重创伤、烧伤等可产生急性应激性溃疡，精神过分担心，强烈情绪激动也可造成溃疡发生或复发。与中医肝郁型患者中枢及自主神经系统功效紊乱有一定联络。所以该模型适合于疏肝理气、疏肝清热、活血化瘀类药品观察。(4)利血平溃疡模型：其可能机制是因为其刺激5HT和(或)组胺释放，或激活ACTH甾体类激素释放，引发过多胃液分泌以及胃壁血管运动改变。此模型优点是操作简单、发病率高，缺点是溃疡比较表浅。适合于各类证型，尤其是脾胃虚弱型之益气健脾药品观察。(5)吲哚美辛、阿司匹林溃疡模型：其主要机制是抑制胃黏膜细胞内前列腺素系统，与细胞保护作用减弱相关。它优点是溃疡发生率高，再现性好，缺点是溃疡比较表浅，适合于各种证型药品观察。(6)强酸、强碱、无水乙醇引发溃疡模型：其发生机制为直接损伤胃黏膜而形成溃疡。这类模型较偏重于相关加强胃黏膜防卫作用药品试验。适合用于清热、解郁、益气健脾、益气养阴等类药品观察。老年期痴呆药第25页(二)其它试验 1胃分泌试验 抑酸常是消化性溃疡药品作用步骤之一。可观察药品对胃酸、胃蛋白酶分泌影响，包含胃液分泌量、游离酸度、总酸排出量(单位时间内)、胃蛋白酶排出量。惯用方法有大鼠幽门结扎法搜集胃液进行分析，也能够采取在体胃灌流法等。2胃黏膜血流量 胃黏膜血流不但在胃黏膜防御机制中起着主要作用，而且对溃疡病灶修复也必不可少，所以，测定药品对胃黏膜血流量影响，也可作为药品药效辅助指标之一。胃黏膜血流量测定需要掌握定技术和一定仪器设备。惯用方法有中性红去除法、多普勒激光血流测定法、氢离子廓清法等。老年期痴呆药第26页 3胃黏液测定 胃黏液屏障在胃黏膜抗损伤中起到第一道防线作用，是胃黏膜防卫原因之一。中药治疗消化性溃疡作用之一有可能是经过影响胃鞘液分泌。所以，观察药品对胃黏液含量影响也可作为药效研究辅助指标。通常采取阿利新兰糖蛋白结正当分别测胃壁结合黏液含量以及胃液中游离黏液含量、以胃壁结合黏液较有意义。4抗炎镇痛试验 炎症是消化性溃疡病常见病理特征之一，疼痛往往由炎症引发。含有消炎、止痛作用药品有利于溃疡病灶修复，能够选择一些炎症模型如腹腔毛细血管通透性模型、炎症耳肿胀模型、足肿胀模型；疼痛模型如醋酸扭体、热板法、解痉试验等作为药效辅助指标。5抑制幽门螺旋杆菌试验 幽门螺旋杆菌是消化性溃疡病主要致病原因之。有条件也能够观察药品对该茵抑制作用。老年期痴呆药第27页(三)阳性对照药 阳性对照药既能够选西药，电能够选取中药。西药作用较明确，效果较必定。惯用有U2妥体抽抗剂如西咪替丁、雷尼替丁、法莫替1等；加强胃黏膜防卫功效有生冒酮、硫糖铝等。中成药品种较多，般应选择疗效较旨定主治功效相同中成药作为对照药，对照组应是药典记载。对照药剂量应与受试药剂量相呼应(等效量或给药倍数相等)，以资比较。老年期痴呆药第28页 糖尿病药老年期痴呆药第29页 一、试验设计医学基础 糖尿病是一组全身性内分泌代谢性疾病，主要表现为高血糖症。人类糖尿病分型主要有：1型(以往称胰岛素依赖型)糖尿病，是因为胰岛细胞破坏，胰岛素分泌降低(绝对缺乏胰岛素)所致体内糖、脂肪、蛋白质及水盐等代谢紊乱；2型(以往称非胰岛素依赖型)糖尿病，是以胰岛功效缺点，即胰岛细胞胰岛素分泌缺点，及胰岛素作用缺点，即胰岛素抵抗为病理生理基础所造成体内代谢紊乱。1型和2型糖尿病在病因和发病机制上虽不相同，但都是因为遗传原因和环境原因共同作用而发病。在综合治疗办法中，1型患者必须应用胰岛素，2型患者除部分人需用胰岛素外，多数人用口服抗糖尿病药治疗。近，对糖尿病病因、病理生理等研究深度和广度都有很大进展，所以，口服抗糖尿病药品也有对应发展，除原有刺激胰岛素分泌作用(如磺酰脲类)及加强外周糖利用(如双胍类)降血糖药品外，不停有新类型药品问世，或正在临床试用。如胰岛素增敏剂、糖苷酶抑制剂、醛 糖还原酶抑制剂及糖化蛋白抑制剂等。老年期痴呆药第30页 消渴病是中医学病名，消渴病临床表现和西医糖尿病相当一致，中医认为消渴病为热盛阴伤之病，因为燥热偏盛，阴津亏耗，燥热能够伤阴，阴伤又能够加重燥热，二者恶化后造成消渴病发生。病程发展特点是，早期为阴虚热盛，中期为气阴两虚，后期为阴阳两虚。中医治疗消渴病治则是，滋阴清热，益气养阴。重视补肾、健脾及活血化瘀等。近年来，经过中药药效学及临床研究证实，多数中药直接降血糖作用不及西药，起效也不如西药快，但中药依据上述治则组方，可发挥中药综合作用，也可起到标本兼顾主动治疗作用。参考近年对糖尿病患者含有胰岛素抵抗综合征特点，及高血糖诱发体内糖基化蛋白水平升高及多元醇代谢路径活跃等造成糖尿病并发症新观点，发掘消渴中药药效特点，从而找到中西医在防治糖尿病(消渴病)契合点，是探讨和促进中西医结合，防治糖尿病，含有广 阔前景有效路径。老年期痴呆药第31页 二、药效学研究试验设计 、(一)糖尿病动物模型 为了研制各种类型新药需要，国内外已经或正在建立对应动物模型。按人类糖尿病分型，大致可分为类似1型和2型糖尿病动物模型及糖尿病并发症动物模型。以下做一简明介绍。1类似1型糖尿病动物模型 (1)化学物质特异破坏胰岛细胞：惯用链佐星(链脲菌素streptozotocin，简称STZ)或四氧嘧啶(alloxan)诱发动物高血糖。因为方法简便，形成率高，是最惯用动物模型。但有刺 激胰岛素分泌作用药品及胰岛素增敏剂对此模型无降糖反应。(2)自发性糖尿病动物：这种动物有自家免疫病因参加，胰岛细胞受损，因而胰岛素缺乏，血糖升高。惯用于研究1型糖尿病病因及病理生理等。如中国地鼠、BB大鼠及NOD小鼠等。有尚需国外进口，这类动物要求较严格培育和喂养条件。老年期痴呆药第32页2类似2型糖尿病动物模型 (1)试验性肥胖及糖尿病大鼠模型：给木鼠注射小剂量STZ，造成胰岛细胞轻度损伤，使多数动物产生糖耐量异常，在此基础上，给动物喂高热量饲料，10星期以后，动物可有肥胖，并伴有高血脂、高胰岛素血症及胰岛素抵抗。此模型形成率约，为70。胰岛素增敏剂显示阳性结果。(2)胰岛素抵抗型自发性糖尿病动物：这类动物多数肥胖，有高胰岛素血症，类似人类 2型糖尿病特点。女口dbdb、obob、TKK、Yellowlcd(、NZOJ、鼠、ObeseZucker、GotoKak，izaki(GK)、SHRNcp、OtsukaLongEvansTokushimaFatty(OLETF)大鼠等。国外开发口服抗糖尿病及并发症新药多项选择取这类动物。多数动物需从国外引进，因为喂养条件要求高，动物价格昂贵，尚难被广泛应用。(3)MSG肥胖大鼠：以大剂量L谷氨酸钠(MSG)给新生大鼠皮下注射，损伤下丘脑，引发肥胖，由此诱发高血脂、高胰岛素血症及胰岛素抵抗。胰岛素增敏剂显示阳性结果。老年期痴呆药第33页 3高血糖、高血脂金黄地鼠模型 金黄地鼠脂质代谢与人有许多相同之处。与人类类似，其肝VLDL只含有APOBlOO，血浆中有胆固醇酯转移蛋白活性。给金黄地鼠饲以高脂饲料引发冠状动脉损伤，在病理学上与人类动脉粥样硬化形成早期相同。以小剂量STZ给金黄地鼠注射，可使血糖、血脂同时高。形成糖尿病动物兼有脂肪代谢异常模型。4糖尿病并发症动物模型 糖尿病慢性并发症是严重影响患者生命质量及致残致死原因，其主要病理改变是微血管和大血管病变，前者包括糖尿病性神经、肾及眼病变；后者包括心脑血管系统并发症。近年来，依据研制防治糖尿病并发症药品需要，国内外学者建立了对应动物模型。主要是应用上述类似1、2型糖尿病动物在较长病程中发展为并发症，以微血管为主。如以STZ诱发高血糖大鼠神经、肾及眼底病变；以蔗糖诱发SHRNcp大鼠肾病；以半乳糖形成大鼠糖性白内障等。建立糖尿病并发症动物模型需时长，如形成动物眼底病变需时12年或更长，所以动物应在特定条件下培育与喂养。老年期痴呆药第34页(二)非特异性动物模型 1高血脂动物模型 在评价降血糖药降血脂作用时，可选取惯用高血脂动物模型。用高胆固醇乳剂给小鼠或大鼠灌胃，连续1星期可使动物血胆固醇升高。也可将胆固醇与食物相混，给家兔喂食，引发家兔血胆固醇及三酰甘油(甘油三酯)升高，这类模型文件报道很多。2正常动物 在评价含有刺激胰岛细胞分泌胰岛素作用药品，用类似1型糖尿病动物模型，会得到阴性结果，但这类药品可使正常动物血糖降低，故选取正常成年动物(大鼠或小鼠)，禁食2-3h，即可进行试验。老年期痴呆药第35页(三)观察指标 2型糖尿病及其慢性并发症发病机制非常复杂，抗糖尿病药品作用机制也异。所以可依据所试药品作用机制或特点，选择适当指标以说明试药抗糖尿病作用。1相关糖代谢指标 (1)降血糖作用量效和时效关系测定：在一定范围内，药品剂量大小与降血糖作用强弱成正比。剂量太小往往无效，剂量过大可能会出现低血糖休克等。量效关系测定可定量地分析说明药品剂量与降血糖效应之间规律。普通试验设计为给药组(3个剂量)、阳性对照药组、对照组。依据试药作用特点，选取正常动物或高血糖动物，在阳性对照药选择上尽可能选取与试药作用相近上市药品，对照组给等体积水或赋形剂；给药后一定时间采血样测定血糖(惯用葡萄糖氧化酶法)水平。药品进入机体产生降血糖效应受多方面原因影响，如药品本身、给药路径、给药时间、药品体内过程等，以致药品在药效作用出现快慢、药效作用维持时间等方面不一样。时效关系测定可定量地分析药效动态改变。普通试验设给药组、阳性对照药组、对照组。在给药后不一样间隔时间采血样，测定血糖水平。以血糖改变为纵坐标，时间为横坐标可绘出时效曲线。老年期痴呆药第36页 (2)糖耐量测定：糖耐量包含单糖、双糖、多糖耐量，可依据试药作用特点，选取肯适动物模型及糖种类，普通用葡萄糖(腹腔注射152Ogkg，口服2O25gkg)，如试药含有抑制。葡萄糖苷酶活性作用，可用淀粉(口服3O-5Ogkg)和或蔗糖(口服3O-5.Ogkg)。试验设计先取禁食动物血样为零时，给糖负荷后不一样间隔时间(如3O、6O、12Omin)采血测定血糖值或计算血糖曲线下面积(AUC)。给药及给糖时间可依据试药特点而定。(3)糖化蛋白水平：蛋白质在高糖环境中发生非酶糖基化形成糖化蛋白，继而引发一系列病理改变，这是糖尿病一些慢性并发症发生发展主要步骤之一。糖化蛋白普通指糖化血红蛋白和糖化血清白蛋白(果糖胺)，其含量与血糖浓度成正比。依据白蛋白半衰期(2星期左右)和红细胞寿命(2-3个月)，果糖胺和糖化血红蛋白含量可反应近2-3星期和近23个月左右血糖水平，其含量测定不受血糖暂时波动影响。糖化血红蛋白测定原理随测定方法不一样而异，其测定方法有比色法、亲和色谱法、离子交换色谱法、电泳法和高效液相法等。老年期痴呆药第37页(4)糖原合成和糖异生：糖原是由许多葡萄糖组成带分支多糖。人体血液里葡萄糖除氧化供能和转化成其它化合物以满足机体正常需要外，多出葡萄糖在一系列酶作用下合成糖原，储存于肝脏、肌肉，以备在血糖下降时动用来维持血糖相对稳定。糖尿病时，机体内糖原合成过程中一些酶活性低下，糖原合成降低而造成血糖升高。一些抗糖尿病药品可经过改进或增强糖原合成使血糖降低。糖原合成测定方法惯用葸酮法，普通测定肝糖原含量，也可测定肌肉中肌糖原含量。由非糖物质如氨基酸、乳酸、甘油和丙酮酸转变为葡萄糖和糖原过程称为糖异生。其生理意义是在饥饿状态下，确保血糖浓度相对稳定。糖尿病时，三大代谢紊乱，血中非糖物质增多而糖异生增强，使血糖水平处于较高水平，一些降血糖药品能抑制糖异生过程使血糖下降。普通试验设计为，动物禁食较长时间(1O-12h)后，给予非糖物质，经糖异生作用动物血糖将升高，经过测定动物血糖改变，可观察糖异生作用强弱。如用雄性昆明小鼠禁食12h后，腹腔注射L丙氨酸(2gKg)，测定O、6Omin血糖。糖原合成及糖异生也可用离体肝细胞进行测定。老年期痴呆药第38页 (5)血胰岛素水平：测定血清或血浆中胰岛素含量有利于判断试药治疗糖尿病主要作用机制，如磺酰脲类降血糖药，因为刺激胰岛细胞分泌胰岛素而使血胰岛素水平升高；双胍类降血糖药主要作用于外周组织，所以对血胰岛素几乎无影响；胰岛素增敏剂类抗糖尿病药品，因为主要在于改进组织细胞对胰岛素敏感性而使血糖降低，可使含有胰岛素抗性动物高胰岛素水平下降。血胰岛素水平测定惯用竞争放射免疫分析法(试剂盒)；近年也有用ELISA法，价格较贵。(6)血乳酸水平：乳酸是葡萄糖代谢中间产物，由丙酮酸还原生成。血浆乳酸浓度取决于糖酵解速度以及乳酸被利用快慢。一些降血糖药品可增加糖无氧酵解使血乳酸浓度升高，在有些情况下，可造成乳酸性酸中毒。血乳酸水平测定可用乳酸脱氢酶法或比色法，其原理分别为，利用乳酸在乳酸脱氢酶作用下，辅酶工量改变间接测定乳酸量；乳酸与浓硫酸共热使乳酸变成乙醛，然后在铜离子存在下，与对羟基联苯起反应生成紫红色后进行比色测定。老年期痴呆药第39页2、对胰岛素反应性 机体对胰岛素反应性低下或对胰岛素不敏感称为胰岛素抵抗。伴随对2型糖尿病发病机制研究深入，胰岛素抵抗是其主要病理基础。近年来，针对2型糖尿病发病机制，寻找增加机体对胰岛素敏感性药品成为抗糖尿病药品研究 热点，当前已经有胰岛素增敏剂噻唑烷二酮类衍生物罗格列酮、匹格列酮等在一些国家上市。所以，在开发抗糖尿病药品研究中，测定机体对胰岛素反应性含有主要意义，试验应选取含有胰岛素抗性动物。(1)胰岛素耐量试验：主要测定动物对外源性胰岛素敏感性。试验设模型对照组、试药组、正常动物组，动物禁食23h后取血样(零时)，皮下注射一定剂量胰岛素，于注射后一定间隔时间(如4Omin、9Omin、15Omin)采血，测血糖值。以血糖值或血糖改变百分数为纵坐标，时间为横坐标作图，并可计算血糖曲线下面积，判断试药是否能改进动物对外源性胰岛素反应性。(2)血糖钳法：血糖钳技术被公认为是评价机体胰岛素抵抗金指标，其原理是输注胰岛素以使血胰岛素维持在一个高水平，以抑制内源胰岛素分泌。同时输注葡萄糖以维持血糖水平在基础线上，因为输注高胰岛素使血糖不停代谢，要维持血糖在基础水平，须不停调整葡萄糖输注速率，当输注速率与代谢速率到达平衡时，葡萄糖输注速率就等于体内组织在外源胰岛素作用下摄取代谢葡萄糖速率。所以，血糖钳葡萄糖输注速率(GIR)反应组织对外源性胰岛素敏感性，GIR值低，敏感性就低，不然反之。老年期痴呆药第40页 3对血脂影响 不论1型或2型糖尿病患者，往往出现脂质代谢异常。所以测定血脂或肝脂含量可判断试药是否在改进糖代谢异常同时，对脂质代谢也有改进作用。当前有商品试剂盒可用于血胆固醇、肝或血三酰甘油(甘油三酯)、高密度及低密度脂蛋白含量 测定。(1)血胆固醇水平。(2)肝或血三酰甘油(甘油三酯)水平。(3)高密度及低密度脂蛋白。老年期痴呆药第41页4醛糖还愿酶活性测定 醛糖还原酶是多元醇路径限速酶，对葡萄糖Km值较高(7OmmolL)，故血糖正常时其活性非常低，但在糖尿病血糖异常升高时，一些不依赖胰岛素进行糖摄取组织中，醛糖还原酶活性被激活。多年研究认为，醛糖还原酶活性增高在糖尿病慢性并发症发生发展过程中起了非常主要作用。所以，用该酶可测定各种醛糖还原酶抑制剂离体作用。醛糖还原酶可从牛、大鼠等晶状体提取，以DL甘油醛为底物，因为反应中用NADPH，所以酶活性以34OnmOD值改变来表示.测定不一样浓度试药抑制百分率，并计算出IC5o值。也能够用半乳糖大鼠或链佐星糖尿病大鼠，给予醛糖还原酶抑制剂治疗后，晶状体中醛糖还原酶、NADPH、NADP含量与对照组比较，可评价醛糖还原酶抑制剂作用，酶活性以每分钟NM)PH氧化nM表示。老年期痴呆药第42页 5葡萄糖苷酶活性测定 。葡萄糖苷酶存在于小肠黏膜绒毛刷状缘。碳水化合物进入小肠后，必须在该酶作用下水解为单糖才能被吸收，表现为餐后血糖快速升高，这种现象对糖尿病病人是不利。自2O世纪6O年代起，不少学者依据糖尿病控制饮食治疗标准，研究碳水化合物消化酶抑制剂，当前已经有。葡萄糖苷酶抑制剂在临床上得到广泛应用。普通用大鼠、犬或猪上段小肠黏膜制备。葡萄糖苷酶，然后与不一