药物鉴别试验授课专家讲座.pptx

1第二章第二章 药品判别试验药品判别试验药物鉴别试验授课第1页2/45一、判别定义一、判别定义 Identificationn中国药典中国药典年版定义年版定义n判别项下要求试验方法，判别项下要求试验方法，仅仅反应该药品一反应该药品一些物理、化学或生物学等性质些物理、化学或生物学等性质特征特征，不完不完全代表全代表对该药品化学结构对该药品化学结构确证确证。n注意：判别试验方法仅证实贮藏在有注意：判别试验方法仅证实贮藏在有标标签容器中药品是否为其所标示药品签容器中药品是否为其所标示药品，而非，而非对未知物进行定性分析。对未知物进行定性分析。药物鉴别试验授课第2页3/45药品质量检验工作中首项任务药品质量检验工作中首项任务含量测定方法相同，含量测定方法相同，采取中性乙醇溶解供试品后，采取中性乙醇溶解供试品后，用用0.1mol/lNaOH进行滴定，酚酞为指示剂指示进行滴定，酚酞为指示剂指示终点。终点。药物鉴别试验授课第3页4/45二、判别试验项目二、判别试验项目n性状（性状（Description)n普通判别试验普通判别试验（general identification test）n专属判别试验专属判别试验（specific identification test）药物鉴别试验授课第4页5/45（一）性状（一）性状n药品性状（药品性状（description）反应了药品特有物理性）反应了药品特有物理性质，普通包含外观、溶解度和物理常数等。质，普通包含外观、溶解度和物理常数等。1.外观：外观：指药品聚集状态、晶型、色泽以及臭、味指药品聚集状态、晶型、色泽以及臭、味等性质。等性质。2.溶解度：溶解度：药典采取药典采取“极易溶解、易溶、溶解、略极易溶解、易溶、溶解、略溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶溶、微溶、极微溶解、几乎不溶或不溶”来描述来描述药品在不一样溶剂中溶解性能。药品在不一样溶剂中溶解性能。药物鉴别试验授课第5页6/45水杨酸水杨酸阿司匹林阿司匹林外观外观白色细微针状结晶或白色结晶性粉末；无臭或几乎无臭白色结晶或结晶性粉末；无白色结晶或结晶性粉末；无臭或微带醋酸臭臭或微带醋酸臭溶解度溶解度在在乙醇或乙醚中易溶乙醇或乙醚中易溶；在沸水中在沸水中溶解溶解；在三氯甲烷中在三氯甲烷中略溶略溶；在水中在水中微溶微溶在在乙醇中易溶乙醇中易溶；在三氯甲烷或乙醚中在三氯甲烷或乙醚中溶解溶解；在水或无水乙醚中在水或无水乙醚中微溶微溶；在氢氧化钠溶液或碳酸钠溶在氢氧化钠溶液或碳酸钠溶液中液中溶解溶解，但，但同时分解同时分解药物鉴别试验授课第6页7/45（一）性状（一）性状3.物理常数物理常数:不但对药品含有判别意义，也反应了不但对药品含有判别意义，也反应了该药品该药品纯杂程度。纯杂程度。n药典收载物理常数包含：相对密度、馏程、熔点、药典收载物理常数包含：相对密度、馏程、熔点、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、凝点、比旋度、折光率、黏度、酸值、皂化值、羟值、碘值、吸收系数。羟值、碘值、吸收系数。水杨酸水杨酸阿司匹林阿司匹林熔点熔点158-161135-138（1）熔点：固体）熔点：固体液体温度液体温度药物鉴别试验授课第7页8/45（一）性状（一）性状（2）比旋度）比旋度:在一定波长与温度下，偏振光透过长在一定波长与温度下，偏振光透过长1dm且每且每1 ml中含有旋光性物质中含有旋光性物质1g溶液时测得旋溶液时测得旋光度称为比旋度。光度称为比旋度。是反应手性药品特征及其纯度是反应手性药品特征及其纯度主要指标，用于主要指标，用于判别药品、含量测定判别药品、含量测定。附录附录VIE 旋光度测定法旋光度测定法药物鉴别试验授课第8页9/45n已知比旋度，怎样求算物质含量？已知比旋度，怎样求算物质含量？n药品分析试验指导药品分析试验指导P170，葡萄糖含量葡萄糖含量测定测定为比旋度；为比旋度；为为旋光度；旋光度；l为为光程光程长长短（短（dm）；）；c为为每每100ml中含有干燥品物中含有干燥品物质质重量（重量（g）药物鉴别试验授课第9页10/45（一）性状（一）性状（3 3）吸收系数：在给定波长、溶剂和温度等条）吸收系数：在给定波长、溶剂和温度等条件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时件下，吸光物质在单位浓度、单位液层厚度时吸收度称为吸收系数。吸收度称为吸收系数。有两种表示方式：有两种表示方式：摩尔吸收系数和百分吸收系数。摩尔吸收系数和百分吸收系数。后者后者是中国药典收载方法，它是指在一定波长下，溶液浓度是中国药典收载方法，它是指在一定波长下，溶液浓度为为1（W/V)，厚度为，厚度为l cm时吸收度，用时吸收度，用 表示，用于表示，用于考查药品质量，定量分析。考查药品质量，定量分析。药物鉴别试验授课第10页11/45几个常见喹诺酮类药品紫外吸收特征几个常见喹诺酮类药品紫外吸收特征药品介介质质max(nm)诺诺氟沙星氟沙星0.1 mol/L NaOH2731098司帕沙星司帕沙星0.025 mol/L NaOH291691洛美沙星洛美沙星0.1 mol/L HCl287975吡吡哌哌酸酸0.1 mol/L HCl2751630氧氟沙星氧氟沙星0.1 mol/L HCl226；294918甲磺酸培氟沙星甲磺酸培氟沙星0.1 mol/L HCl2771001由吡啶酮酸并联苯环、吡由吡啶酮酸并联苯环、吡啶环或嘧啶环等芳香环组啶环或嘧啶环等芳香环组成化合物成化合物药物鉴别试验授课第11页12/45(二二)普通判别试验普通判别试验（general identification test）n依据某依据某一类药品一类药品化学结构或理化性质特征，经过化学结构或理化性质特征，经过化学反应化学反应来判别药品真伪。来判别药品真伪。n无机药品：无机药品：药品中药品中阴离子和阳离子阴离子和阳离子特殊反应；特殊反应；n有机药品：有机药品：经典经典官能团官能团反应。反应。n普通判别试验普通判别试验只能证实是某一类药品，而不能证只能证实是某一类药品，而不能证实是哪一个药品。实是哪一个药品。通常普通判别试验不适合用于通常普通判别试验不适合用于数种化学药品混合物判别或在有干扰物质存在时数种化学药品混合物判别或在有干扰物质存在时判别。判别。药物鉴别试验授课第12页13/45普通判别试验项目普通判别试验项目n 丙二酰脲类：苯巴比妥丙二酰脲类：苯巴比妥n 芳香第一胺类：对乙酰氨基酚芳香第一胺类：对乙酰氨基酚n 托烷生物碱类：硫酸阿托品托烷生物碱类：硫酸阿托品n 有机酸盐：阿司匹林有机酸盐：阿司匹林n 无机金属盐类：钠盐无机金属盐类：钠盐n 无机酸盐：氯化物无机酸盐：氯化物n 有机氟化物类：氟康唑有机氟化物类：氟康唑药物鉴别试验授课第13页14/45水杨酸盐（水杨酸盐（Salicylates）判别试验）判别试验方法方法1 1：取水杨酸供试品水溶液，加三氯化铁试液：取水杨酸供试品水溶液，加三氯化铁试液1 1滴，即显滴，即显紫色紫色。原理原理 本品在中性或弱酸性条件下，和三氯化本品在中性或弱酸性条件下，和三氯化铁试液生成配位化合物。铁试液生成配位化合物。方法方法2 2：取供试品溶液，加稀盐：取供试品溶液，加稀盐酸，即析出白色水杨酸沉淀；分酸，即析出白色水杨酸沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液中溶解。离，沉淀在醋酸铵试液中溶解。药物鉴别试验授课第14页15/45（三）专属判别试验（三）专属判别试验（specific identification test）n证实某一个药品依据，它是依据每一个药证实某一个药品依据，它是依据每一个药品化学结构差异及其所引发物理化学特征品化学结构差异及其所引发物理化学特征不一样，选取一些不一样，选取一些特有灵敏定性反应，特有灵敏定性反应，来来判别药品真伪。判别药品真伪。n注意与普通判别试验区分注意与普通判别试验区分n共性中找寻个性差异共性中找寻个性差异药物鉴别试验授课第15页16/45n加碳酸钠试液煮沸后放冷，加过量稀硫酸，析出加碳酸钠试液煮沸后放冷，加过量稀硫酸，析出白色白色沉淀沉淀，并有，并有醋酸臭味醋酸臭味+H2SO4CH3COOH药物鉴别试验授课第16页17/45三、判别方法三、判别方法n药品判别方法要求专属性强，重现性好，药品判别方法要求专属性强，重现性好，灵敏度高，以及灵敏度高，以及操作简便、快速操作简便、快速等等n对于化学药品，惯用判别方法有对于化学药品，惯用判别方法有化学法化学法，光谱法光谱法，色谱法色谱法和和生物学法生物学法。n对于中药材及其制剂等，还有显微判别对于中药材及其制剂等，还有显微判别法和特征图谱或指纹图谱。法和特征图谱或指纹图谱。药物鉴别试验授课第17页18/45（一）化学判别法（一）化学判别法n标准：反应快速、现象显著，含有明确原标准：反应快速、现象显著，含有明确原理理n惯用方法：惯用方法：呈色反应判别呈色反应判别沉淀生成反应判别沉淀生成反应判别荧光反应判别荧光反应判别气体生成反应判别气体生成反应判别使试剂褪色判别使试剂褪色判别测生成物熔点测生成物熔点药物鉴别试验授课第18页19/451.呈色反应判别法：呈色反应判别法：n系指供试品溶液中加入适当试剂溶液，在系指供试品溶液中加入适当试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成易于观察有色一定条件下进行反应，生成易于观察有色产物。在判别试验中最为惯用反应类型有：产物。在判别试验中最为惯用反应类型有：n（1 1）三氯化铁呈色三氯化铁呈色反应：普通都含有酚反应：普通都含有酚羟基或水解后产生酚羟基；羟基或水解后产生酚羟基；n（2 2）异羟酸铁异羟酸铁反应：普通多为芳酸及其反应：普通多为芳酸及其脂类、酰胺类；脂类、酰胺类；药物鉴别试验授课第19页20/45n（3 3）茚三酮呈色反应：氨基酸及氨基糖苷；）茚三酮呈色反应：氨基酸及氨基糖苷；n（4 4）重氮化一偶合显色反应：普通都有芳）重氮化一偶合显色反应：普通都有芳伯氨基或能产生芳伯氨基；伯氨基或能产生芳伯氨基；1.呈色反应判别法：呈色反应判别法：药物鉴别试验授课第20页21/452.沉淀生成反应判别法：沉淀生成反应判别法：n系指供试品溶液中加入适当试剂溶液，在一定条系指供试品溶液中加入适当试剂溶液，在一定条件下进行反应，生成不一样颜色和含有特殊形状件下进行反应，生成不一样颜色和含有特殊形状沉淀。惯用沉淀反应有：沉淀。惯用沉淀反应有：n（1 1）与重金属离子沉淀反应：在一定条件下，药）与重金属离子沉淀反应：在一定条件下，药品和重金属离子反应，生成不一样形式沉淀；品和重金属离子反应，生成不一样形式沉淀；n（2 2）与硫氰化铬胺（雷氏盐）沉淀反应：这类药）与硫氰化铬胺（雷氏盐）沉淀反应：这类药品多为生物碱及其盐和含有芳香环有机碱及其盐；品多为生物碱及其盐和含有芳香环有机碱及其盐；药物鉴别试验授课第21页22/453.荧光反应判别法荧光反应判别法n惯用荧光发射形式有以下类型：惯用荧光发射形式有以下类型：（1 1）药品本身）药品本身 （2 2）药品溶液加硫酸使呈酸性后）药品溶液加硫酸使呈酸性后 （3 3）药品和溴反应后）药品和溴反应后（4 4）药品和间苯二酚反应后在可见光下发射）药品和间苯二酚反应后在可见光下发射荧光；荧光；药物鉴别试验授课第22页23/454.气体生成反应判别法气体生成反应判别法n胺类药品、酰脲类药品以及一些酰胺类药胺类药品、酰脲类药品以及一些酰胺类药品品：经强碱处理后，加热，产生氨气；：经强碱处理后，加热，产生氨气；n含硫药品含硫药品：可经强酸处理后，加热，发生：可经强酸处理后，加热，发生硫化氢气体；硫化氢气体；n含碘有机药品含碘有机药品：经直火加热，可生成紫色：经直火加热，可生成紫色碘蒸气；碘蒸气；n含醋酸酯和乙酰胺类药品含醋酸酯和乙酰胺类药品：经硫酸水解后，：经硫酸水解后，加乙醇可产生醋酸乙酯香味。加乙醇可产生醋酸乙酯香味。药物鉴别试验授课第23页24/45例：葡萄糖判别例：葡萄糖判别呈色反应呈色反应取本品约取本品约0.2g，加水，加水5ml溶解后，缓缓滴入微温溶解后，缓缓滴入微温碱性酒石酸铜试液中，碱性酒石酸铜试液中，即生成氧化亚铜红色沉即生成氧化亚铜红色沉淀淀药物鉴别试验授课第24页25/45（二）光谱判别法（二）光谱判别法n1.红外光谱法红外光谱法n专属性强、应用较广专属性强、应用较广（固体、液体、气体（固体、液体、气体样品）样品）n主要用于主要用于组分单一、结构明确原料药，组分单一、结构明确原料药，尤尤其适合于其适合于结构复杂、细微差异同类药品，结构复杂、细微差异同类药品，如磺胺类、甾体激素类和抗生素类药品。如磺胺类、甾体激素类和抗生素类药品。n判别方法：判别方法：中国药典和中国药典和BP均采取标准图谱均采取标准图谱对照法对照法；USP采取对照品法。采取对照品法。药物鉴别试验授课第25页26/45药物鉴别试验授课第26页27/45n试样制备方法试样制备方法压片法、糊法、膜法、溶液法压片法、糊法、膜法、溶液法n应用光谱图对照时应注意问题：应用光谱图对照时应注意问题：（1）固体药品晶型）固体药品晶型（2）供试片制备条件）供试片制备条件（3）CO2和水汽等大气干扰和水汽等大气干扰（4）仪器间分辨率及操作条件影响）仪器间分辨率及操作条件影响（5）多组分药品与多晶型现象）多组分药品与多晶型现象（6）制剂判别制剂判别2.红外光谱法红外光谱法药物鉴别试验授课第27页28/452.紫外光谱法紫外光谱法n光谱简单，光谱简单，专属性差。专属性差。n惯用方法有：惯用方法有：（1）测定最大吸收波长或同时测定最小吸收波长；）测定最大吸收波长或同时测定最小吸收波长；（2）要求一定浓度供试液在最大吸收波优点吸收度；）要求一定浓度供试液在最大吸收波优点吸收度；（3）要求吸收波长和吸收系数法；）要求吸收波长和吸收系数法；（4）要求吸收波长和吸收度比值法；）要求吸收波长和吸收度比值法；（5）经化学处理后，测定其反应产物吸收光谱特征。）经化学处理后，测定其反应产物吸收光谱特征。以上方法能够单个应用，也可几个结合起来使用，以上方法能够单个应用，也可几个结合起来使用，以提升方法专属性。以提升方法专属性。药物鉴别试验授课第28页29/45 示示例例一一 取取色色甘甘酸酸钠钠，加加磷磷酸酸盐盐缓缓冲冲液液（pH7.4）溶溶解解并并稀稀释释成成每每1ml中中约约含含10g溶溶液液，照照紫紫外外-可可见见分分光光光光度度法法（附附录录IV A）测定，在测定，在238nm与与326nm波优点有最大吸收。波优点有最大吸收。对比吸收光谱对比吸收光谱对比吸收光谱对比吸收光谱特征参数特征参数特征参数特征参数药物鉴别试验授课第29页30/45示示例例二二 取取对对氨氨基基水水杨杨酸酸钠钠250mg，加加1mol/L氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液3ml，溶溶解解后后转转移移至至500ml量量瓶瓶中中，用用水水稀稀释释至至刻刻度度，混混匀匀。精精密密吸吸收收5ml溶溶液液置置于于内内含含pH 7磷磷酸酸盐盐缓缓冲冲液液12.5ml250ml量量瓶瓶中中，用用水水稀稀释释至至刻刻度度，混混匀匀，即即为为供供试试品品溶溶液液。另另配配制制相相同同浓浓度度缓缓冲冲溶溶液液空空白白对对照照液液。于于265 2nm和和295 2nm波波优优点点测测定定吸吸收收度度A265和和A295，要求要求A265/A295值应在值应在1.501.56之间。之间。对比要求吸收波对比要求吸收波对比要求吸收波对比要求吸收波长吸收度比值长吸收度比值长吸收度比值长吸收度比值药物鉴别试验授课第30页31/45 示示例例三三 USP(30)USP(30)采采取取对对照照品品法法，将将样样品品与与对对照照品品按按同同法法处处理理，在在200200 400nm400nm波波长长范范围围内内扫扫描描两两溶溶液液，要要求求在在相相同同波波优优点点有有最最大大吸吸收收、最最小小吸吸收收和和相同吸收系数，或吸收比在要求程度内。相同吸收系数，或吸收比在要求程度内。阿阿替替洛洛尔尔紫紫外外光光谱谱判判别别：“本本品品5050g/mlg/ml甲甲醇醇溶溶液液显显示示紫紫外外光光谱谱图图与与相相同同条条件件下下测测得得USPUSP阿阿替替洛洛尔尔参参考考标标准准品品紫紫外光谱图一致外光谱图一致”对比吸收光谱一致性对比吸收光谱一致性对比吸收光谱一致性对比吸收光谱一致性药物鉴别试验授课第31页32/45（三）色谱判别法（三）色谱判别法n利用不一样物质在不一样色谱条件下，产利用不一样物质在不一样色谱条件下，产生各自生各自特征色谱行为（特征色谱行为（Rf值或保留时间）值或保留时间）进行判别试验。进行判别试验。n采取与采取与对照品对照品（或经确证已知药品）在相（或经确证已知药品）在相同条件下进行色谱分离，并进行比较判别。同条件下进行色谱分离，并进行比较判别。药物鉴别试验授课第32页33/451.薄层色谱法薄层色谱法nChP中对中对TLC判别法要求判别法要求对照品对照品 供试品供试品对照品混合供试品对照品混合供试品供试品供试品 结构类似品结构类似品供试品混合结构类似品供试品混合结构类似品比移值比移值+颜色综合考虑一致性颜色综合考虑一致性试验中考虑：供试品试验中考虑：供试品/对照品；对照品；薄层板；展开剂；显色剂薄层板；展开剂；显色剂药物鉴别试验授课第33页34/452.HPLC和和GC法法n普通要求按供试品含量测定项下色谱条件普通要求按供试品含量测定项下色谱条件进行试验。要求进行试验。要求供试品和对照品色谱峰保供试品和对照品色谱峰保留时间应一致。留时间应一致。内标法时，要求药品与内标物峰保留时内标法时，要求药品与内标物峰保留时间比值也应相同。间比值也应相同。药物鉴别试验授课第34页35/45阿司匹林和阿司匹林片阿司匹林和阿司匹林片n阿司匹林阿司匹林-原料药原料药n判别：酚羟基显色判别：酚羟基显色/酯键水解酯键水解/红外光谱红外光谱n阿司匹林片阿司匹林片-制剂制剂n判别：判别：药物鉴别试验授课第35页36/45（四）显微判别法（四）显微判别法n主要用于中药及其制剂判别主要用于中药及其制剂判别n综合药用植物学与生药学知识实现综合药用植物学与生药学知识实现（五）生物学法（五）生物学法n主要用于抗生素、生化药品及中药判别主要用于抗生素、生化药品及中药判别n利用药效学和分子生物学等相关技术来判利用药效学和分子生物学等相关技术来判定药品品质一个方法定药品品质一个方法药物鉴别试验授课第36页37/45（六）指纹图谱与特征图谱判别法（六）指纹图谱与特征图谱判别法n经过对所得到能够表达中药整体特征图谱识别，经过对所得到能够表达中药整体特征图谱识别，提供一个能够比较全方面控制中药质量方法，提供一个能够比较全方面控制中药质量方法，从化学物质基础角度确保中药制剂稳定和可靠从化学物质基础角度确保中药制剂稳定和可靠n分析方法建立分析方法建立指纹图谱认证指纹图谱认证方法验证方法验证数数据处理与分析据处理与分析药物鉴别试验授课第37页38/45虎杖药材对照指纹图谱虎杖药材对照指纹图谱药物鉴别试验授课第38页39/4522批不一样起源虎杖样品经校正后匹配图批不一样起源虎杖样品经校正后匹配图 药物鉴别试验授课第39页40/45四、判别试验条件及方法验证四、判别试验条件及方法验证n溶液浓度溶液浓度n溶液温度溶液温度n溶液酸碱度溶液酸碱度n干扰成份存在干扰成份存在n试验时间试验时间药物鉴别试验授课第40页41/45方法验证方法验证n专属性：专属性：在其它成份存在情况下，采取在其它成份存在情况下，采取判别方法能否正确判别出被测物质特征；判别方法能否正确判别出被测物质特征；普通选择采取普通选择采取两种以上不一样类型方法两种以上不一样类型方法n耐用性：耐用性：测定条件发生微小变动时，测测定条件发生微小变动时，测定结果受到影响程度定结果受到影响程度药物鉴别试验授课第41页42/45例：复方硝酸咪康唑与盐酸小檗碱软膏剂例：复方硝酸咪康唑与盐酸小檗碱软膏剂判别项（判别项（TLC法）法）n两个主药，硝酸咪康唑两个主药，硝酸咪康唑/盐酸小檗碱盐酸小檗碱n简单角度：一个展开系统完成二者判别，简单角度：一个展开系统完成二者判别，一块薄层板上点样四个点一块薄层板上点样四个点n验证专属性：结构类似物分离验证专属性：结构类似物分离n耐用性：展开剂百分比调整耐用性：展开剂百分比调整药物鉴别试验授课第42页43/45小结小结n判别定义判别定义n判别试验项目判别试验项目性状性状普通判别试验普通判别试验专属判别试验专属判别试验n判别方法判别方法化学化学/光谱光谱/色谱色谱/显微显微/生物学生物学/指纹图谱指纹图谱n判别条件与方法验证判别条件与方法验证专属性专属性/耐用性耐用性药物鉴别试验授课第43页44/45练习题练习题1.在判别试验项目中能够反应药品纯度，又能够用于药品判别中在判别试验项目中能够反应药品纯度，又能够用于药品判别中药指标是药指标是A 溶解度溶解度B 专属性反应专属性反应C 物理常数物理常数D 沉淀反应沉淀反应E 外观外观2.中国药典采取红外光谱法判别药品时，普通采取中国药典采取红外光谱法判别药品时，普通采取A 峰面积法峰面积法B 峰高法峰高法C 光谱解析法光谱解析法D 内标法内标法E 标准图谱对照法标准图谱对照法3.以下哪种判别方法专属性最强以下哪种判别方法专属性最强A UVB IRC HPLCD TLCE GC4.芳香第一胺类药品判别试验使用试剂有（多项选择）芳香第一胺类药品判别试验使用试剂有（多项选择）A 稀盐酸稀盐酸B 稀硝酸稀硝酸C 亚硝酸钠亚硝酸钠D-萘酚酚E 硝酸银硝酸银药物鉴别试验授课第44页45/45思索题思索题n普通判别试验与专属判别试验区分？普通判别试验与专属判别试验区分？n惯用光谱分析法与色谱分析法应用注意点惯用光谱分析法与色谱分析法应用注意点？药物鉴别试验授课第45页