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初级检验技师考试

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2．细胞因子测定方法及应用
测定方法：
（1）生物学检测法：
又称生物活性检测，是根据细胞因子特定的生物活性而设计的检测法。生物活性检测法又可分为：
① 细胞增殖法；
② 靶细胞杀伤法；
③ 细胞因子诱导的产物分析法；
④ 细胞病变抑制法。
（2）免疫学检测法：
细胞因子均为蛋白或多肽，具有较强的抗原性。可利用抗原抗体特异性反应的特性，用免疫学技术定量检测细胞因子。常见的方法包括ELISA、RIA及免疫印迹法。
（3）分子生物学方法：
当前公认的细胞因子的基因均已克隆化，较容易地得到某一细胞因子cDNA探针或根据已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探针。常使用斑点杂交、Northernblot、逆转录PCR，细胞或组织原位杂交等。具有灵敏、快速等优点，甚至从l～10个细胞中就可检出其中的特异mRNA。
临床应用：
细胞因子测定可作为特定疾病诊断的辅助指标，用来评估机体的免疫状态、判断治疗及预后，用于临床治疗应用时的监测等。
（十六）细胞黏附分子的测定技术
同学们应重点掌握：1．细胞表面黏附分子的测定：2．可溶性黏附因子的测定：3．了解临床应用
白细胞和血管内皮细胞、巨噬细胞和上皮细胞等以及血液中均存在细胞粘附分子。
按其结构特点，分有钙离子依赖性家族、整合素家族、免疫球蛋白超家族和选择素家族四大类。
1．细胞表面粘附分子的检测
（1）放射免疫测定法：
一般见抗细胞粘附分子抗体包被载体，加受检样品后，继加相应单克隆抗体和同位素标记的二抗作非竞争性固相放射免疫测定法。
（2）荧光免疫测定法：
用不同激发波长的荧光素着染色受检细胞，在FACS仪上可同时检测有两种不同的细胞粘附分子。
（3）酶免疫测定法：
主要为双抗体夹心ELISA，本法应用最广，但仅能检出一群细胞的表面粘附分子数量，而不能反映单个细胞粘附分子数量的变化。
（4）其它方法：
如酶免疫组织化学测定、流式细胞仪分析、时间分辨荧光免疫测定等。
例题：下列哪一种测定方法不属于细胞表面黏附分子的检测方法：
A．酶免疫测定法
B.放射免疫测定法
C.流式细胞仪分析
D.PCR
E．荧光免疫测定法
答案：D
2．可溶性粘附分子的检测：
多采用双抗体夹心ELISA，研究最多的选择素家族和免疫球蛋白超家族。前者有E、L、P三型，均可见血液中。对于P、L、E选择素在临床中的应用也需要掌握，哪些疾病出现这三种选择素升高现象。
3．临床应用：
了解。
（十七）免疫球蛋白检测及应用
同学们应重点掌握：1．熟练掌握免疫球蛋白（Ig）的概述2．掌握Ig测定及临床意义
3．掌握M蛋白的检测及意义4．掌握冷球蛋白测定
1．免疫球蛋白的概述
（1）免疫球蛋白(Ig)：
是由浆细胞产生，存在于血液和体液（包括组织液和外分泌液）中，也可作为抗原受体表示于B细胞表面。多数Ig具有抗体活性，能够特异性识别和结合抗原。抗体是机体在抗原刺激下，由浆细胞合成分泌产生的具有与相应抗原发生特异性结合的球蛋白，即具有免疫功能的球蛋白。所有的抗体均是免疫球蛋白，但并非所有免疫球蛋白都是抗体。
（2）化学结构
①Ig的基本结构：
Ig分子由4条肽链借链间二硫键连接组成，即2条相同的重链(H)和2条相同的轻链(L)和几对二硫键连接成一个基本单位，称为单体。IgG、IgE、IgD及多数血清型IgA皆为单体，分泌型IgA为双体，IgM为五聚体。免疫球蛋白分子H链（VH和CH），L链分（VL和CL）。
②功能区：
Ig分子的H链与L链各区段可经过链内二硫键折叠成彼此相似球状结构，担负特定免疫学功能，称为功能区。L链有两个功能区，称为VL、CL。
③Ig的水解片段：
Ig分子可被许多蛋白酶水解，产生不同的片段。
（3）免疫球蛋白的血清型
①同种型；
类和亚类：
根据Ig重链恒定区的结构不同和抗原特异性的不同分类。
型和亚型：
根据轻链恒定区肽链抗原特异性的不同，分两型。
例题：免疫球蛋白的型及亚型分类依据是
A．VH抗原性的不同
B．CL抗原性的不同
C．CH抗原性的不同
D．VL抗原性的不同
E．CV抗原性的不同
答案：B
②同种异型；
③独特型：
抗原决定簇可在异种、同种异体以及自体内诱导产生相对应的抗体，称为抗独特型抗体。独特型和抗独特型抗体将整个抗体组成一个网络，称独特型网络。
（4）免疫球蛋白的生物学活性
抗体是具有双功能分子，它既可特异性结合抗原，又可独立诱发或执行一系列生物学效应，由抗体分子不同部位分别执行。
① 与抗原结合作用：
具有特异性结合。
② 补体活化作用：
补体C1q与游离Ig分子结合非常微弱，而与免疫复合物中的IgG或IgM（经典途径）或凝聚Ig（替代途径）结合则很强。
例题：能够激活补体替代途径的免疫球蛋白是
A．IgG2
B．IgM
C．IgG3
D．凝聚Ig
E．IgG1
答案：D
③ 亲细胞作用：
IgG分子能与细胞表面的Fc受体结合。
④调理作用；
⑤膜传递作用。
（5）免疫球蛋白的特点：IgG、IgM、IgA、IgD、IgE五种前面已讲过。
2．免疫球蛋白的测定及临床意义
（1）IgG、IgA、IgM的测定：
有单向琼脂扩散法、速率散射比浊法等。
临床上Ig降低：
见于各种先天性或获得性免疫缺陷病。继发性常与免疫抑制剂应用、射线、蛋白质丢失、营养不良等有关。也可见于细胞毒药物治疗后。
临床上Ig升高：
多克隆性增高见于各种慢性感染、慢性肝病、某些自身免疫病等；也见于寄生虫疾病、结节病等。单克隆性增高又称M蛋白增高，主要见于免疫增殖性疾病，如多发性骨髓瘤、重链病、轻链病，原发性巨球蛋白血症等。
（2）IgD的测定方法：
有单向琼脂扩散法、ELISA等。临床上其增高可见于多发性骨髓瘤等。
（3）IgE的测定方法：
ELISA、间接血凝试验、放射免疫法、化学发光免疫分析、免疫荧光测定法等。
临床上IgE增高：
见于IgE型多发性骨髓瘤、特应性哮喘、特应性皮炎、过敏性鼻炎、寄生虫感染、热带嗜酸粒细胞增多症、SLE、RA及某些霉菌病等。
临床上IgE减低：
一般无意义。可见于原发性无丙种球蛋白血症、恶性肿瘤及细胞毒药物治疗后。
3．单克隆免疫球蛋白的检测及意义
（1）单克隆免疫球蛋白又称M蛋白，是B细胞或浆细胞单克隆异常产生的一种在氨基酸组成及顺序上十分均一的异常免疫球蛋白。
（2）方法：
①血清蛋白区带电泳：
血清(或尿液)标本中不同性质的蛋白质可明显分开形成不同的区带，患者的血清蛋白区带电泳图谱上有一浓缩的集中带，即M区带。
②免疫球蛋白可分为IgM、IgA、IgE、lgG；κ和λ轻链的鉴定则利用电泳或免疫扩散。
③免疫电泳：
将区带电泳和免疫扩散结合起来的一种免疫学分析法，可将M蛋白的免疫球蛋白类型和其轻链型加以鉴定。
① 免疫固定电泳：
类似免疫电泳，可判断单克隆免疫球蛋白的轻链和重链型别。
例题：最常见于M蛋白的分型与鉴定，也用于尿液中本周蛋白的检测及κ、λ分型的电泳技术是
A．对流免疫电泳
B．火箭免疫电泳
C．免疫电泳
D．免疫固定电泳
E．交叉免疫电泳
答案：D
（3）临床意义：M蛋白的增高可见于免疫增殖性疾病等。
4．冷球蛋白的检测及临床意义
（1）特性：
是一种异常免疫球蛋白，当温度降至4℃时，发生沉淀，故称之为冷球蛋白。
（2）临床意义：
阳性见于：
①骨髓瘤，原发性巨球蛋白血症，慢性淋巴细胞白血病；
②类风湿关节炎，系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病，传染性单核细胞增多症，恶性肿瘤等。