农药残留检测培训讲义.pdf

培 训 讲 义 培 训 讲 义 第一部分 蔬菜农药残留的提取 一 第一部分 蔬菜农药残留的提取 一.分析样品的提取分析样品的提取 1.分析样品的分类分析样品的分类 分析样品是指实验室中，用于分析测定并提供某种样品残留数据的那一部分样品。所以分析的样品要求必须是均匀且具有代表性的。在处理比较陌生的样品，尽可能参考相关文献报道的方法制备，这样可以减少许多困扰。由于样品中的物质和结构的差异，使的样品的提取，尤其是浓缩提取的净化。一般将样品分为三类：1.1 中等和高含水量的样品：1.1.1 根和鳞茎类蔬菜：胡萝卜、洋葱 1.1.2 夜绿素含量最底的蔬菜和水果：仁果、核果、浆果和柑橘 1.1.3 叶绿素含量高的作物：叶菜和豆菜 1.2 干燥品 1.3 油脂类 2.农药残留条件的选择农药残留条件的选择 提取就是将残留在样品中的多种农药，采用合适的有机溶剂和方法，将其分离出来，以供净化后测定，这是农药分析非常关键的一步。提取效果的好坏，一方面决定于溶剂的选择，另一方面和提取的方法也有密切的关系。在选择提取溶剂时，既要注意到溶剂本身的性质，又要结合农药的特性及样品的状况，在选用提取方法时也要考虑上述情况。1.溶剂的选择：在农药分析中几乎不单独采用非极性溶剂，通常是与极性溶剂混合使用或只采用极性溶剂。主要溶剂的极性强弱如下：水水乙腈甲醇醋酸乙醇乙丙醇丙酮二恶烷四氢呋喃甲基乙基甲酮苯酚正丁醇乙酸乙酯乙醚硝基甲烷二氯甲烷氯仿苯甲苯二甲苯四氯化碳二硫化碳环己烷正己烷正庚烷煤油 煤油 在农药分析中应用最广的溶剂为石油醚、丙酮、二氯甲烷和乙酸乙酯等 2.农药的极性：在提取样品中的农药残留时，农药本身的极性以及在提取溶剂中 的溶解度，直接影响提取效果，一般采用和农药极性相仿的提取溶剂，即“相似相溶”原理，选择具有广泛覆盖面的溶剂作为农残提取溶剂。部分有机磷的极性强弱如下：氧化乐果氧化乐果敌百虫敌敌畏马拉流磷倍硫磷甲基对硫磷对硫磷甲拌磷溴硫磷辛 硫磷 辛 硫磷 3.样品的状况：样品的特点和状态，在提取时也必须认真考虑。在 AOAC 中将样品分为脂肪性和非脂肪性两大类。脂肪含量大于 10%为脂肪样品，小于则为非脂肪性样品。#脂肪性大的样品，需要先提取脂肪，而后测定脂肪中的农药残留量。非脂肪性的样品又分为含水样品和干品两大类；前者的水分含量75%，后者为干的或低水分样品。含水分样品又分含糖多少分类：含糖 5%以下，含糖 1530%等几种.如下表示:脂肪 干品 低糖 中糖 状态 非脂肪 含水样品 高糖 不同现状的样品,必须采用不同的提取溶剂。在谷物、茶叶一类水分低的样品中，不同提取溶剂的提取效率的差异最为突出，即便采样极性溶剂也不能完全提取，必须采用含水 2040%的溶剂或预先向试样中加入等量的水之后再行提取。土壤是个比较特殊的样品，是农药污染最大的受害者，许多农药较强的与土壤耦合，比动植物组织的提取更困难。土壤的水分、有机质、极性化合物以及其他因素的不同对农药的结合也不同，一般粘土高沙土低。3农药残留的提取和纯化（净化）3农药残留的提取和纯化（净化）在农药残留分析中，提取溶剂必须适用于具有不同含量的水分、油脂、糖分和物质的基质中，提取出具有各种极性的化合物。为了提供合适的条件，使残留物从样品中转移到提取溶液中。例如土壤、粮食等干燥样品彩一种或多种混合溶剂浸泡，经震荡或索氏提取；中、高含水量的样品，需在高速捣碎机中，在一种或混合溶剂的存在下加以粉碎。在通常情况下，蔬菜和水果用匀浆机或组织捣碎机提取。1 初步提取溶剂的体系 1.1 丙酮提取法：用于含多糖类样品中农药的提取，再用二氯甲烷经液-液分配转入二氯甲烷中。在有机磷和有机氮多残留分析中已经广泛使用。1.2 乙腈提取法：适用于一些农药，但若是水溶的农药时，采用二氯甲烷进行液-液分配。1.3 丙酮-正已烷混剂：用于非极性化合物，极性有机磷和有机氮农药及其性代谢产物。此外，也有报道采用乙腈-二氯甲烷、乙腈-氯仿、丙酮-二氯甲烷、丙酮-石油醚。对于谷物、秸秤、茶、土壤等干燥样品，添加一倍水量后或用含水溶液提取，提取率比直接用极性溶剂要高得多。2 初步提取液的纯化（净化）2.1 液-液分配净化法：液-液分配是一种常用的净化方法，基本原理是分配规律，根据农药与杂质在不同溶剂中溶解度的差别，常用一种非极性溶剂和极性溶剂对来进行分配，如：丙酮-已烷、乙腈-乙烷（石油醚）、丙酮-二氯甲烷、二甲基甲酰胺-已烷等。农药与脂肪、蜡质、色素等一起被正已烷提取后，再用一种极性溶剂，如乙腈与共同震摇，使农药与脂肪、蜡质、色素完全分开。这样农药大部分被乙腈所提取，经几次提取，农药几乎可以完全与脂肪等杂质分离，从而达到净化的目的。2.2 弗罗里硅土柱层析方法：弗罗里硅土柱层析净化方法在农药残留分析中已有广泛应用，而在多残留分析中常用极性不同的溶剂体系，把各种农药淋洗入不同的洗提馏分中，使农药得到分组分离。MILLS 等提出的淋洗体系为 A、B、C3 种极性依次增大的体系：A 液：二氯甲烷：正已烷（1：4）B 液：二氯甲烷：乙腈：正已烷（50：0.35：49.65）、C液：二氯甲烷：乙腈：正已烷（50：1.5：48.5）THEIR 的用石油醚：二氯甲烷（4：1）石油醚：二氯甲烷（3：3）二氯甲烷：甲醇（19：1）的淋洗体系，分离水果和蔬菜中的一些磷酸酯、有机氯、甲基氨基甲酸酯、苯基氨基甲酸酯和脲类农药。黄士忠等研究采用二氯甲烷：石油醚：丙酮（6：3：1）预淋及二氯甲烷：石油醚：丙酮（6：3.5：0.5）淋洗，分离了土壤和粮食中 10 种有机氮，回收率 81103%。4农药残留的提取操作方法 4农药残留的提取操作方法 1.震荡法：将样品和溶剂装入具塞容器（具塞锥形瓶），放在震荡机上，进行往返震荡或旋转震荡。定时开塞放气。2.组织捣碎提取，将样品和溶剂装入组织捣碎机中，通过高速旋转的刀具掺合，使溶剂侵入样品组织中，与其残留农药充分接触，使残留农药提取出来。本法提取效率高。适用范围广，每次提取时间 35 分钟，提取次数 12 次。3.索氏提取法:将样品装入和提取器匹配的滤纸包好，然后用合适的溶剂反复提取。回流液一定要浸泡整个试样。本方法适用于干品，如谷物、干果、脱水蔬菜、茶叶、干饲料等。4.消化法：酸、碱消化法，条件是农药在酸、碱中稳定。5.其它方法：超志声波法、浸渍法、洗脱法等等 5农药残留的净化技术 5农药残留的净化技术 在样品的提取液中，除了农药残留外，还有色素、油脂或其他天然物质，在测定前须去除这些干扰物质，这就是净化。由于农药种类不同，采用的检测器也不同。各种检测器对净化液程度的要求也不互相间。ECD 放射源易受污染，对净化要求高，FPD 对净化要求不高，采用简单的方法净化就可以了。液-液分配：在一组织不相溶的溶剂对中，溶解某一溶质成分，这种溶质以一定比例分配在溶剂的两相中。在两相溶剂中的分配比称为分配系数。如此反复分配，便可使不同的物质组分得到分离，从而达到净化的目的。分配时溶剂体积及提取次数，必须根据 P 值进行计算。P 值指在一组等容积互不相溶的溶剂对，溶质以一定比例分配在溶剂的两相中，该比值即为该物质对该组溶剂的 P 值。1 乳化的解决：溶液分配过程中，往往会出现乳化现象，如不很好的解决，会影响分析结果的准确性。1.加入饱和硫酸水溶液：由于溶液中有大量的硫酸钠离子存在，盐析作用可以使乳化层破坏，（也可以加入适量的氯化钠）。2.加入 1：的硫酸水溶液，加入量由 10 毫升、20 毫升、30 毫升逐步增加，乳化可以减轻或消除，此法只适用于对酸稳定的农药。3.采用高速离心，破坏乳化层，消化乳化 现象。4.根据样品的情况添加，如蜂蜜和炼乳类，可以加草酸钾，茶叶类的可加入丙酮或甲酸，含糖样品，可以加入丙酮。2在多残留分析中常用极性不同的溶剂体系，把各种农药淋洗入不同的洗提馏分中，使农药得到分组分离，然后测定。MILLS 等提出的淋洗体系为 A、B、C3 种极性依次增大的体系：A 液：二氯甲烷：甲醇（19：1）的淋洗体系，分离水果和蔬菜中的一些磷酸酯、有机氯、甲基氨基甲酸脂、苯基氨基甲酸脂和脲类农药。黄士忠等研究采用内径 1.5 厘米，长 18 厘米的玻璃层析柱，在柱底部填入少量玻璃棉，先装入 4 克无水硫酸钠，然后再将入 5 克处理过的弗罗里硅土，稍加打实，最上层加 4 克无水硫酸钠。该柱先用 30 毫升二氯甲烷：石油醚：丙酮（6：3：1）预淋，待预淋液面进入上层无水硫酸钠时，将待净化的浓缩液移入柱中，弃去收集的预淋液，待上液面接近上层无水硫酸钠时，先用 50 毫升含 10%乙醚的石油醚淋，再用 120 毫升二氯甲烷：石油醚：丙酮（6：3：1）淋洗，控制流速 34 毫升/分，收集二次淋洗液、浓缩、定容。此法分离了土壤和粮食中10 种有机氮类农药，其回收率为 85101%。3酸净化：是化学处理净化的一种方法，它可以有效去除脂肪、色素和杂质。此法只适用于对酸稳定的农药。4凝结净化法：根据一些有机磷和有机氮农药对净化要求不严格和偏酸性条件下稳定的特点，采用凝结净化法进行净化。在含有 30%丙酮或乙腈提取液中加入 1013 毫升的凝结液（20 克氯化铵和 85%磷酸 40 毫升溶于 400 毫升蒸馏水中配置，再稀释 5 倍）和 1 克助滤剂，振摇 1520 次，静止 5 分钟，过滤，根据杂质和色素的含量，确定凝结的次数。在滤液中加入适用氯化钠（防止乳化），用（50*3）毫升二氯甲烷萃取 3 次，合并有机相，浓缩、定容。5其它：氧化铝层析法、活性炭和混合柱净化法等等 二、一般试剂的要求、纯化、活化和灭活 二、一般试剂的要求、纯化、活化和灭活 1.水：取 100 毫升水，用 10 毫升石油醚提取，取 5 微升石油醚提取液，进行分析，在色谱图上，除石油醚溶剂峰外，无其他杂质峰。2.中性氧化铝（层析用），在 550灼烧 4 小时密封保存，用前于 130烘 5小时，储存于干燥器中备用。3.弗罗里硅土（6080 目）在 600650灼烧 3 小时，用前于 130烘 5 小时，储存于干燥器中备用。弗罗里硅土（Florisil,硅镁吸附剂）是一种合成的硅酸镁，具有很大的表面积，活化 3 小时以上，然后放在干燥器中避光保存。使用前最好再于 130下活化过夜，至少加热 5 小时，用玻璃盖瓶后于 130处保存或者置于干燥器中。如在室温下保存 2 天后，需于 130重新加热。加 2%水降活（按重量计）弗罗里硅土，既使用含有 30%二氯甲烷的已烷液作为淋洗溶剂，可吸附 1 克油或脂肪。如用含有 10%二氯甲烷的已烷淋洗时，甚至可吸附 2 克油或脂肪。弗罗里硅土活性的测定：通常认为，1 克硅酸镁将要吸附 100 毫克分子量为 200 的化合物，则活性比较合适。选用月桂酸作为被吸附的物质。月桂酸分子量在 200 左右，是固体，比较容易提纯，易溶于已烷中、用酸碱滴定法可以直接测定，操作步骤如下：将 2.000 克弗罗里硅土放入 25 毫克标准磨口锥形瓶中，盖上铝箔，在130下加热过夜，加塞后冷却至室温，加 20 毫升月桂酸溶液（内含月桂酸400 毫克），塞好后间歇地振荡 15 分钟。等吸附剂沉下后，吸取上清夜 10.0毫升，移入 125 毫升锥形瓶中。吸取的上清夜中不应带入弗罗里硅土。加入中性酒精 50 毫升和酚酞指示剂 3 滴。用 0.05 氢氧化钠溶液滴定至终点。称取 100200 毫克月桂酸，在相同条件下，用 0.05N 氢氧化钠溶液进行滴定。确定每毫升 0.05N 氢氧化钠溶液所相当的月桂酸毫克数，则每克弗罗里硅土所吸附的月桂酸值按下式计算:每克弗罗里硅圭所吸附的月桂酸的毫克数(月桂酸值)=200-(滴定的0.05N 氢氧化钠的毫升数*每毫升 0.05N 氢氧化钠溶液所相当的月桂酸毫克数)4.硅胶(60120 目)6302 小时,冷却至 50603-5%水振摇,密封保存。进柱），柱头顶到头，在拉出 1MM，用手拧上，在用扳手板 1/8 圈。卸下检测器（FPD）死堵，装上螺母和石墨密封垫（柱头尽量朝下，防止碎屑进柱），柱头留 15.3CM，用手拧上，再用板头扳 1/8 圈。老化：连接检测器一端柱头取下，死堵装上。增加新柱用 CHANGE 校正，由于柱子经常被截，需要重新设置长度等参数时用 CALIBRATION 5GC 参数 3 个温度 1 个速度-进样口、柱温、检测器：载气流速 建立方法-GC 配置 进样-进样口温度-柱子气流-炉温-检测器-AUX 辅助设备-信号。设置完毕 APPLY 不能 OK 否则会从当前界面退出，方法存盘；从资源管理器删除。6洗针溶剂：丙酮、甲醇，进行前针可以不用溶剂洗 溶剂不能空，废瓶不能满 7毛细管恒压模式，基线稳定，不会过度漂移。温度上升基经上移，流量降低基线下降，因而基线不变。8 状态 STATUS（机看，电脑看-VIEW 设置），按 instument toolbar 中的 STATUS出现状态柜。9安捷伦 6890N 工作站怎么修改文件的保存路径？Configuration 二样品信息 1.无样品盘，前进样序号从 101 始，后进样序号从 201 始；有样品盘，进样序号从 1 始。2.进样：方法-样品-单针样品信息PREFIX（共 8 位）-序列进样序列参数 SEQUNCE PARATENAUTO，注意 inj/location 表示在 vial?位置上进样？次 3.FPD 扳手试焰，有白雾，不能与其接触，防止静电破坏。点火后须平衡30 分钟。OFFSET 点火补偿值（点火是否成功判定值）一般为 25 4.移进样塔前从工作站退出，关 GC。三数据分析 1.调用图谱 FILEFILELOAD SIGNAL 2.重新绘图 GRAPHICGRAPHIC-SIGNAL OPTIONS（5V）RANGES LAYOUT OVERLAID SCALE ALL THE SAME SCALE 3.积分参数 INTERGRATIONINTERGRATIONINTERGRATION EVENTS SLOPE SE 斜率敏感度 100 PEAK WI 峰宽，尽量保持原始，不要调。AREA RE 面积拒绝 HEIGHRE 峰高拒绝 调出一行或几行及 ON OFF 表示从第几分钟到第几分钟图谱积分或不积分，可以不对溶剂峰积分，按 两次确认，退出；将图谱设置成可输出的结果。4.建立校正（一个方法中只能有一个校正表）调出标准品图谱，根据保留时间定性，峰面积定量（一个峰至少含 15 点，峰宽越细，采集点要多）。5.无水硫酸钠（分析纯），在 700灼烧 4 小时，密封保存。6.脱脂棉，将脱脂棉发入大号索氏提取器中，加 4%丙酮-正已烷，在水浴上回流 4 小时后，在通风橱内让其自行挥发干 7.溶剂：取 300 毫升溶剂，放入旋转蒸发器中浓缩近干（约 1 毫升），取 1微升注入 GC，在色谱图上，除溶剂峰外，无其他杂质峰。提纯方法很复杂，建议直接购买农残级试剂使用。石油醚沸程为 3060主要该 609090120，其主要成分为脂肪族烃类的混合物；丙酮沸程为 5557；乙酸乙酯沸程为 76.577.5；乙腈沸程为 8182，可与水、醇和醚任意混合，毒性很大；二氯甲烷 3941；甲醇 6466 三、提取效果的评价 三、提取效果的评价 在实验室中，一般对提取方法的评价是通过添加回收实验来量化的。一般固定“净化”和“测定”条件，而变换前面的“提取”条件，来比较“提取”效果的。不足的是比真正的提取率要高。还有一种完全提取法，采用与农药极性相似的提取溶剂，长时间索氏提取。然后与选择的方法对比。如果两种方法的结果相近，则认为所采用的提取方法有效。采用同位素的化学性质一致性的原理，把农药分子中的原子换成放射性同位素，使农药带上标记，此方法有直接了解提取的效果。国内使用不多。1最低检出浓度最低检出浓度：也叫最低检出限，表示用添加法能可靠地实际检测出待测农药的最低含量（以 mg/kg），最低检出溶度必须低于或等 MRL值。以色谱法为例，最低检出浓度与最小检出量、样本溶液定容体积、样本溶液进样体积、称样重量相关，以下式表示。最低检出浓度（mg/kg）=最小检出量（mg）*样本溶液定容体积（ml）样本溶夜进样体积(ul)*称样质量（g）根据检测目的衡量检测方法最低检出浓度是否符合要求，若为了与规定的最高残留量（MRL 值）比较，以判断被检样本残留量是否超标时，一般要求最低检出浓度低于 MRL 值一个数量级（10 倍）即可。若规定的 MRL 很低（小于或等于0.05mg/kg）时，则最低检出浓度小于或等于 MRL 值即符合要求，最低检出浓度与规定的 MRL 值的关系见下表。最低检出浓度（mg/kg）0.001 0.005 0.010.020.020.040.10.1 0.2 0.5 1.0MRL 值（mg/kg）0.001 0.01 0.020.050.10.20.51 2 5 102.回收率2.回收率 用添加法测定回收率，原则不添加浓度以接近待测样本的农药含量为宜。但由于待测样本中的农药残留量是未知的，因此，一般以该样本的最高的残留量（MRL 值）和方法最低检出浓度 10 倍的浓度做添加浓度。若没有 MRL 值与最低检出溶度之间的浓度作为添加浓度，即添加回收率试验必须选 3 个添加浓度。若没有 MRL 值参照时，以最低检出浓度和高于最低检出浓度 10 倍的浓度做添加回收率，每一个浓度进行 3 次以上的重复试验。添加回收率结果应以接近100%为佳，但由于杂质干扰，操作误差等诸多因素的影响，实际结果会有很大偏差，添加回收率 70110%，平均回收率80%为满意结果。不同添加浓度要求回收率范围如下。添加浓度/(mg/kg)回收率/%0.1 80110 0.010.1 70110 0.0010.01 60120 0.001 50120 3.相对标准偏差（RSD）或变异系数：3.相对标准偏差（RSD）或变异系数：是标准偏差在平均测定值中所占的百分率，也叫变异系数。在进行添加回收率实验时，对同一浓度的回收率试验必须进行至少三次重复。平均实验结果偏差与添加浓度相关，添加浓度愈低，允许偏差愈大，不同添加浓度回收率实验所要求的相对标准偏差如下。添加浓度/（mg/kg）相对标准偏差/%110 1025 0.11 2550 0.010.1 50100 相对标准偏差计算公式如下。(检测值-平均检测值)2 相对标准偏差（RSD）相对标准偏差（RSD）=检测次数-1（n-1）100%平均检测值（X）4确证实验：报告检测结果之前应需进行确证实验，以免做出错误结论。对待测农药进行定性定量的方法有以下几种：（1）改变测定条件或方法（如色谱法改用光谱法）；（2）改变检测器；（3）改变色谱柱；（4）薄层析法；（5）衍生化法；（6）气-质或液-质联用技术；（7）生化测定技术（酶抑帛法、酶联免疫法）等，可根据检测目的和待测农药种类以及实验室的仪器条件和技术专长等选择有效的确证方法。第二部分 GC6890N 入门知识 第二部分 GC6890N 入门知识 一硬件设置 1开关机 开：电脑GC工作站（2070AA）关：（前所有温度，不关炉子 ON，否则风扇停止，FPD 关 FLAME）工作站GC电脑 FPD250设置温度到，30MIN 后通空气 100H275，再用 FLAME，然后 APPLY点火。2TCP/IP 电脑、工作站：10.10.10.1 255.255.255.255.0 GC：10.10.10.2 3安装工作站见教材。4气路 气路气化（5A 分子筛吸附有机物）、ECD 一定要脱氧管、脱烃类可用于空气气路，气体发生器还要考虑环境空气质量，铜管：溶剂清洗，内壁吹干，两头封闭，待用。每三瓶气后换脱氧管，4-6 个月连接管线要紧固，防止四季温差影响密封性。载气管路压力60100Psi隔垫吹扫，解决鬼峰，2-3ml/min,每台仪器固定的。流量控制模式（填充柱），压力模式（毛细管柱），针尖碰不到玻璃毛，液体在玻璃毛上汽化；*手动进样：按 Prerun、进样、按 START。不分流进样的条件：1.溶剂沸点在所有组分中最低，柱温起始温度小于溶剂沸点 20 2.组分沸点比溶剂高 3.气体不能作不分注流。调整分流放空时间，确保不拖尾，绘制曲线寻找峰面积稳定，溶剂峰与组分峰分开，而且是组分峰最好为 BB。装柱：装柱：挂好柱架，柱子标牌在里面，文字目视方向正常，挂于柱架上；卸下进样口死堵，装上螺母和石墨密封垫（柱头尽量朝下，防止碎屑进柱），柱头留 46cm，用手拧上，再用扳手扳 1/8 圈。卸下检测器（ECD）死堵，装上螺母和石墨密封垫（柱头尽量朝下，防止碎屑）外标法 ESTD 内标法 ISTD 单级校正 CALIBRATON NEW CALIBRATON TABLE AUTO 禁止手动 CALIBRATON SETTING（修改浓度单位 ug/mL 保留时间窗口少用 MINUTES 多用百分比，百分比的设定，最低检测浓度和最高检测浓度分别进几个标样，平均各组分的保留时间，比较同一组分的保留时间的差别，计算百分比，设定时间窗口，此后的同一组分均应落于此时间窗口内，否则异常，须重新处置），在建立校正表时选定参考峰也是解决保留时间漂移的良策。CALIBRATON TABLE 查看校正好的表，按 OK 退出。多级校正 调出标准品图谱，CALIBRATON 同一水平（浓度）取平均 RECALIBRATON 不同一水平（浓度）ADD LEVEL 调出其它 STD 图谱。预览前要看 REPORT 是否为 ESTD 5.报告输出 REPORT SPECIFY REPORT SCREEN SAMPLE 运行结果至荧屏。报告格式 SHORT 经济 DETAIL 含校正曲线和方程 PERFORMAMCE（效率）含塔板数及分离度。ADD CHO 表示打印内容有图谱。CHO SIZE 可以改变图谱大小，节约纸张。四、维护四、维护 1 进样口进样口 进样隔垫，一般 30-50 个进样换一次，新隔垫用手拧紧至 C 形环不跟转，切勿用扳手。衬管，不分流，一般不用玻璃毛，不分流防止碎！一般一个月一次，用手拧，注意螺纹，不用扳手，最后可用扳手适当拧紧。ALS 自动进样用筒形，人工进样为锥形。2衬管衬管 清洗石英衬管可用 5%的稀盐酸浸泡放置超声波清洗机超 20 分钟，然后用脱脂棉通几次即可（注意要用蒸馏水多次冲洗、烘干）。Liner 的去活化方法论 Liner的玻璃管内部，如无水质柄的棉花棒，则一般的塑胶枘的棉花棒则只可用肥皂水中刷洗，最后冲洗干净，干燥后进行去活化的步骤：干燥后 Liner 先用玻璃吸管吸取甲醇冲洗，反覆数次，然后溶剂换成 EA（ethyl acetate 乙酸乙酯），以玻璃吸管吸取冲洗 Liner，最后把溶剂换成 n-hexane（正已烷）重覆前面所述的步骤，要注意的是溶剂使用顺序不可以变动！将二氯二甲基矽烷和甲苯以 1:9 的体积混合，并以表面皿加盖，需注意盛世装这个混合液的玻璃容器，本身也会与前述的衬管示意图，黑条为 O 形圈 混合液反应，故在使用后会有一段时间其容器内部会呈现疏水性质，将前面以n-hexane 洗干净的 liner 放入其中，要注意在 liner 的管壁上绝对不可以出现气泡，当所有的 liner 都放好后，盖上表玻璃，于通风厨中静默 1-2 小时，将反应完成之 liner 取出（每次一支，其余的浸泡在反应剂中，绝对不要一次将所有的 liner拿出来暴露于空气中）。先以 n-hexane 是要洗掉未反应的二氯二甲基矽烷，而最后的甲醇是要和在已经和玻璃表面反应的二氯二甲基矽烷，另外的确一个 CI 基反应（end cap），所以如果顺序搞错的话是很凄惨的事情上面的步骤结束后，可以将 liner 置于高温烘箱中，在 300 度下烘一个晚上！隔天早上取出时，须于干燥皿或烘箱中降温，而不要于空气中，这样你的 liner 会很快速的开始吸收水气，最后将 liner 置放于防潮箱中保存，反应的副产物是气态 HCL，要全程在抽气厨中操作，二氯二甲基矽烷会与空气中的水分反应，注意存放的条件。衬管填放硅烷化玻璃棉的作用及填放方法。作用：防止样品吸附，减小死体积。对极性样品特别有效，也可以防止注射器针尖的歧视现象，加速样品气化，还可以避免颗粒物质堵塞色谱柱，即一是样品汽化均匀；一是防止进样垫的残渣堵塞色谱柱。一般要放在衬管的中间。这样用棉签，刚好扎在玻璃棉的上方，不可用针，防止划破硅烷化层。调换不同厂家和型号的进样针时，玻璃棉可以放下一点。人工进样和自动进样选用的衬管也不一样，可心查 Agilent 易耗品手册。分流平板：棉球粘溶剂擦。注射针：每 2-3 天溶剂浸泡超声波清洗一次。3老化老化 正常使用前，使用后，比使用温度高 30，1HR；新柱子使用前老化要长，基线稳定。44 检测器 检测器 检测器中ELECROMETRE 放大镜不能关，FPD 点火时不插管，点火后插管，防止水损坏 FPD，用毕，取下。五、应用经验 五、应用经验 1.浓缩时爆沸，可以调整真空度。水浴温度需考虑溶剂沸点。2.定容后，离心去除固形物，不影响结果。3.进样垫更换前一般会发生漏气（压力下降），标准样出现杂峰。4.衬管更换前一般会发生标准样峰丢失。5.日常测试：a：GC 每日使用，则不必关机。检测器 150，不点火。b.使用标准混合溶液进样，结果与前期比较，无误后，开始进样检测。6.助剂（活性炭、硅胶、硅藻土等）回收率：先将每个单品称重填入使用的层析柱中（约 56cm），单独计算回收率；然后按实际使用要求，填充助剂，再作回收率实验。回收率可以不要求大于某个值，但一定要稳定。A 300 克活性炭加 1 升盐酸（1mol/L）煮沸 4 小时抽滤，用无 C1 离子水洗至无 C1 离子，然后 120烘干备用。每批助剂使用前要做添加回收试验（90%以上且稳定）。7.进样口温度与农药沸点和稳定性有关。8.载气恒流结果稳定性好。9.开发方法，一定要 3 个梯度浓度比较，观察是否出峰及杂峰。10.FPD 尾吹气调整对溶剂峰 1 分钟附近的峰有影响。11.ECD 基线 200 FPD 20 正常。12.晚间进样口 100，FPD 不点火。ECD 正常。13.HP-5 可做磷氯，做氯的柱子小。14.层析柱0.8-10 15.磷 丙酮洗针对 氯正已烷洗针 16.每日进样：高于程序升温 30，运行 30 分钟-溶剂-1 标样-2 标样-溶剂-样品-溶剂-1 标样-2 标样 峰面积相关5%（变异数2%）表示机器正常。计算：取两针结果最近的谱图，建立比较依据，NEW CALIBRATION 及 ADD LEVEL 17.新手做样：样品 2 分 添标回收 2 分 已知样品 1 分 18.使用一段时日后，峰消瘦或分离欠佳#进样口端截去 20cm#更换衬管#在柱子最高温度处保持 30 分钟烘烤。19.层析柱：#前期洗液至填充物表面#加样液，流至填充物表面，#加 23 次 ml洗液，流至填充物表面，#加足够多洗液，流至填充物表面。20.进样针每周清洗 1-2 次，放假前取下清洗。21.装卸进样针 22.柱子长度调整与实际一致，可调整载气实际流量。23.溶剂验证：将 25ml 溶剂浓缩，定容 1ml。24.定容技巧：将浓缩吹干的烧瓶，移入一定量的溶剂，荡洗，进样。25.升温慢，分离度大，流速慢，分离度大。26.磷 DB-210 升温 120（2）-35/-180（0）-10/-220（3）POST RUN 后运行，用来吹扫柱子，防止柱子吸附干扰物。氯 DB-1 升温 120（2）-26/-160-80/-180（5）-20/-240（9）27.BEEP 打开，方法改变发出警告音。28.工作站安装：A 备份数据与方法 B 删除 C 初始文件 WIN.INI 删除PCS保存退出 D 装入光盘按 ADD 选 G2070AA E 写上 license 按 ADD 按 INSTALL F 完毕后按 Configur 找设备配置 G 通讯方式选 LAN/IP H SAVE AS 存盘，否则只能作数据处理 I 安装认证 I.Q 29.RUN TIME 样品瓶 3ml，装 1ml，也可调整针位置，0 位，针与瓶底 3mm 冷柱头进样慢，其他均快 30.仪器上先作补偿再进样，工作站相反。31.峰宽 0.04 意为峰宽（1/4*0.04）0.010.08(2*0.04)积分范围，处于此峰宽的峰约占 80%。32.PERFORMANCE 报告含进样量的膨胀系数。PERFORMANCE+NOISE 计算信噪比。REPORT-SYSTEM SUITABLE TIME 33.METHOD 界面中的 HELP 可以使用动画。CALIBRATION SETTING 时间窗口有绝对值和百分比。同一浓度的样进行 CALIBRATION 选用 RECALIBRATION 升级CALIBRATION，使用 ADD LEVEL 34.序列进样，INTERVAL 间隙意为每隔几瓶，进该样品。35.请教正反相色谱柱填料键合相极性与流动相极性分的。正相色谱的柱子键合相是极性，就是相对于流动相而言是极性的，而反相色谱柱子的键合相就是非极性的，就是比流动相的极性弱。这个答案满意么？根据相似相溶的原理，正相色谱分析中弱极性物质随流动相先跑出，强极性的物质后流出，反相色谱，则顺序相反！36.Agilent6890N 仪器检测限测定步骤：1、点击桌面上图标“instrument offline”2、从“method and run control“data analysis”中点击 data analysis”选项 3、点击菜单中“report 选项，选择“system suitability”，并填写若干基线平稳时间段后点击“OK”4、再一次点击“report”选择“specify report”，在 report style 下拉菜单选择“performance+noise”选项，点击“ok”5、稀释分析物标准工作液浓度并进样，至报告中signal/noise 比值为 3 时，可认为此时进样分析物标液之浓度为在当前仪器状态下的检测限。其中“当前仪器状态”包含了以下因素：色谱条件、载气质量、柱类型柱规格及使用时间、衬管洁净度及惰性程度、石英棉填充量及洁净度与惰性程度、柱头污染程序等。其中色谱条件包括（检测器以 ECD 为例）：柱流量、进样口柱及检测器温度、尾吹气流量、进样模式、分流出口流量（此为间接影响因素，当衬管洁净度不够时此流量因影响衬管洁净度而影响基线信号值大小）37.对某一确定的样品，怎样确定炉温汽化室和检测器的温度比如对甲醇和 DMF的条件有什么不同？单一的物质，可以看它的沸点是多少进样口应尽可能高于它的沸点，如 250 度而炉温应低于进样口，如 280 度。以上所说为检测单体物质，恒温。另外还可以用程序升温，如 50 度2 度/分钟250 度保持10 分钟 38.当改变空气与氢气比例时，比如将氢气流量调大，会对实验有什么影响？一般：氢气与空气比为 1/8 与 1/2 之间，否则灵敏度会下降。