细胞培养技术练习题.doc

细胞培养技术练习题
选择题1.接种工具灭菌常采用（A） A.灼烧 B.高压 C.过滤 D.熏蒸
2.具有促进愈伤组织生产的物质是（B ） A.维生素PP B.维生素B1 C.维生素B6 D.甘氨酸
3.微量元素母液的配制浓度（ B ） A.10倍 B.100倍 C.1mg/ml D.10mg/ml
4.配制10倍大量元素母液，所需硝酸铵（ C ）mg A.9000 B.3700 C.16500 D.4400
5.配制100倍有机物母液时，所需维生素B1( B )mg A.0.4 B.10 C.100 D.0.1
6.下列哪种不是组织培养常用的维生素（ A ） A.维生素B2 B.维生素B1 C.维生素B6 D.维生素C
7.下列哪种激素不属于生长素类（ C ） A.IAA B.IBA C.6-BA D.NAA
8.下面哪种是MS培养基大量元素所用药剂（A ） A.硫酸镁 B.硫酸亚铁 C.硫酸锌 D.硫酸铜
填空：1、组织块的分离方法有 机械分散法 、 剪切分离法 、 消化分离法 。
2、目前，较常用的消化试剂有 胰蛋白酶 、 胶原酶 、 EDTA消化液 。
3、接种培养瓶的细胞数量一般为 5×105-1×106/ml 。
4、培养细胞的污染一般包括 微生物污染 、 细胞交叉污染 、化学物质的污染。
5、细胞冻存时DMSO常用的浓度为 10%的浓度 。
1. 体外培养的动物细胞其生长方式主要 贴壁生长 和 悬浮生长 两种，分别称为 贴壁型 细胞和悬浮型细胞。体外培养的动物细胞其生长方式以 贴附生长 为主。
2. 贴壁生长的体外培养动物细胞，按形态来分，大体分为 成纤维细胞型 、 上皮细胞型、 游走细胞型、多形细胞型四种类型，最常见的为前两种。
3. 细胞在体外生长时具有一些特点，其中主要是 贴附生长 、 接触抑制 和密度依赖性。
4. 培养细胞生命期可分为 原代培养期 、 传代培养期 、 衰退期 三个阶段。
名词解释1、原代培养：原代培养也叫初代培养，是从供体进行细胞分离之后至第一次传代之前的细胞培养阶段。
2、组织块培养法：组织块培养是将组织剪切成小块后，接种于培养瓶进行培养。组织块培养法是常用的，简便易行的以及成功率较高的原代培养方法。3、消化培养法：消化培养法是采用组织消化分散法将细胞间质包括基质、纤维等妨碍细胞生长的物质去除，使细胞分散，形成悬液，从而易于外界吸收养分和排出代谢产物.
4、细胞生长曲线：细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，是培养细胞生物学特性的基本参数之一。以培养时间为横轴，细胞浓度为纵轴作图，即得生长曲线。
5、传代：细胞由原培养瓶内分离稀释后传到新的培养瓶的过程称之为传代。
问答题：1、如何得到单细胞无性系？ 在细胞培养中，常由分散性较好的愈伤组织或悬浮培养物来制备单细胞，也可以用纤维素酶和果胶酸酶从植物不同组织直接制备单细胞。 由分离的单细胞经看护培养法、微室培养法或平板培养法，即可得到单细胞无性系
2、单细胞培养有哪些方法？各有何含义及特点 单细胞培养：看护培养；微室培养；平板培养
（1）看护培养法是指用一块活跃生长的愈伤组织块来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法。
特点：①简便易行。 ②效果好，易于成功。 ③不能在显微镜下直接观察细胞生长过程。
（2）微室培养：即将细胞培养在很少量的培养基中。
特点：在培养过程中可连续进行显微观察，将一个细胞的生长、分裂和形成细胞团的全部过程记录下来。
（3）平板培养法是把单细胞悬浮液与融化的琼脂培养基均匀混合，平铺一薄层在培养基底上的培养方法。
特点：可以定点观察；分离单细胞系比液体浅层培养容易；培养细胞气体交换不畅。
3、说明每一种单细胞培养方法的要点？
（1）看护培养：①小三角瓶中加1cm厚的固体培养基，灭菌②将1cm大小的愈伤组织块放在培养基中央。③在愈伤组织块上放1cm2无菌滤纸片，培养室中过夜④将单个细胞接种在滤纸上面⑤培养室培养f1个月可见愈伤组织小块，2-3个月得到单细胞无性繁殖系。（2）微室培养：①载玻片和盖玻片火焰上消毒②在载玻片上涂一圈四环素眼膏，放一小段毛细管。滴一小滴细胞悬浮液于凹穴中③盖上盖玻片，使之与悬浮液接触（3）平板培养：①制备单细胞悬浮液：用酶法或机械震荡法将组织器官游离出单细胞。经过滤后的滤液即是。②悬浮液密度的调制：a通过显微镜，观察记数板凹槽中的悬浮液细胞数，并计算其密度。b一般平板培养要求细胞密度为1´103-1´105。③培养基的配制：1）1.4%琼脂培养基; 2)0.7%琼脂的条件培养基。④平板制作：按1:2或1:4混合，制成3mm厚的平板。⑤培养：26°C暗培养21d，计算细胞团数，计算植板率
4、什么是细胞悬浮培养？简述成批培养和连续培养的的特点？ 细胞悬浮培养：是使离体的植物细胞悬浮在液体培养基中进行的无菌培养。（1）成批培养的特点：①细胞生长在固定体积的培养基上，直至养分耗尽②用搅拌的方法使细胞团和细胞均匀分布③细胞数目呈现慢—快—慢—停止生长的变化d必须更换新鲜培养基才能进行下一批培养（2）连续培养的特点：①由于不断加入新鲜培养基，保证了养分的充分供应，不会出现悬浮培养物发生营养不足的现象②可在培养期间使细胞保持在对数生长期中。细胞增殖速度快③适于大规模工业化生产