植病研究法.doc

一、填空
1.实验室中常用的灭菌方法：热力灭菌法（干热灭菌法、湿热灭菌法）、过滤灭菌法、化学灭菌法。
2.PDA培养基，从化学成分看，属于半组合培养基；从物理状态看，属于固体培养基；从使用目的看，属于非选择性培养基。
3.植病控制方法：植物检疫、化学方法、物理方法、农业方法、生物方法
4.植病调查分为：一般调查、重点调查、调查研究
5.发病记载方法：直接计数法、分级计数法
6.常用植物组织表面消毒液有：酒精、次氯酸钠、升汞
7.细菌血清学反应包括：凝集反应、沉淀反应、补体结合反应
8.病毒由 核衣壳 和 包膜 构成，烟草花叶病毒和黄瓜花叶病毒的形状分别是 螺旋对称 和
9.病毒的核酸包括： DNA 、 RNA 。
10.植物病毒的外部症状包括：花叶类型、环斑类型、畸形生长、变色、坏死与变质。内部症状主要包括：花叶和条纹症的组织病变、坏死的组织病变、畸形的组织病变、矮化的组织病变、变色的组织病变。
11.介体与所传病毒间的关系：非持久性、半持久性和持久性
12.由种子带菌传染的病害接种方法有拌种法和浸种法，由土壤带菌传染的病害接种方法有土壤接种法和蘸根接种法，由流水和雨水传染的病害的接种方法有喷雾法、喷撒法、涂抹法、注射法、针刺法
二、简答
1.病原物与“病因”的区别：病原物：引起植物病害的生物的统称，现已知道的主要有真菌、细菌（类菌原体）、病毒（类病毒）、线虫和寄生性种子植物。病因：就是导致一种疾病发生的原因。它包括致病因子和条件。
2.病害流行学主要研究内容：它研究在环境条件影响下，寄主群体和病原物群体相互作用导致病害的时空分布及其变化规律，与植物病害生态学关系密切。
3.植物病害的症状学包括什么：症状学：主要描述植物病害的外部症状，典型和非典型，内部症状（病毒病）。对于病害的识别和初步诊断是有意义的。
4.植物病理生理学研究内容：①病原物侵染的生理生化机制②病原物与寄主间的相互识别及其机制③病原物致病因素及其作用过程④病原物与病植物上其他微生物的关系⑤寄主的抵抗反应⑥病害体系中的毒素、酶、生长激素和其他大分子物质的作用⑦病植物的代谢生理⑧植物生理病理学的实验方法等。
5.植物病理学方面的文献：①应用真菌学文献摘要Review of Applied Mycology（R.A.M.）②植物病理学评述Annual Review of Phytopathology③植物病理学高级论述Plant pathology：an Advanced Treatise④植物病害高级论述Plant Disease an Advanced Treatise
6.我国有关植物病理学方面的期刊有哪些:植物病理学报，植物保护学报，微生物学报，真菌学报，病毒学报，线虫学报，植物生理学报，真菌学报，农药学学报、农药、中国农业科学。
7.国外有关植物病理学方面的期刊有哪些：①美国：植物病理学、植物病害、分子植物病理学②英国：应用生物学记录、生理植物病理学、植物病理学③法国：植物病理学记录④日本：日本植物病理学会记录⑤加拿大：加拿大植物病理学杂志⑥印度：印度植物病理学⑦德国：植物病理学杂志
8.参考文献（书、期刊）如何记载:文献常用卡片记载。书：应注明作者、发表年份、书名、版本、页数、有无图表和出版地点。
9.病害调查在植病研究中的意义:植物病害的分布和为害，发生时期和症状的变化，以及栽培和环境条件对植物病害发生的影响，品种在生产中的表现，防治效果等。都要通过调查才能掌握。
11.简述调查研究和室内研究关系:许多植物病害问题，是在调查研究或者是在调查研究的基础上解决的。调查研究与实验研究是互相配合的。调查研究中发现的问题，有些可以通过实验研究得到解决。同时试验研究又为调查研究提出了新的任务，即提出需要进一步调查的项目。通过不断的调查研究和实验研究，才能逐步提高对一种病害的认识。
12.直接记数法和分级记数法的优缺点:
直接计数法：①优点：标准明确；记载一致②缺点：不能反映受害的严重度③适合对象：植株或器官受害程度大致相仿的病害，如病毒病、猝倒病、枯萎病线虫病以及黑穗病和瓜果的腐烂病。
分级计数法：病害发生的轻重，对植物的影响不同。例如叶片病斑多少与穗部病害，对产量的影响显然不同。
①优点：标准明确而具体，可以反映发病程度的差异②缺点：分级的标准需加以说明，所以直接记数不能反映发病程度的差异，要用分级以后再计数的方法。
13.植物病害标本采集的常用工具：标本夹、标本箱、刀、剪、锯、锄、小玻瓶、标本纸、纸袋、标签和记录本等。
14.植物病原真菌组织分离法和稀释（孢子）分离法适用材料及优缺点：
组织分离法适用材料：这种方法适用于大部分病菌的分离
A斑点病病原真菌的分离B维管束组织内病原真菌的分离 C根腐的分离 D肉质组织中病菌的分离F种子内病菌的分离
孢子分离法(稀释分离法)：适用于细菌、土壤菌及产生孢子多的真菌等病原菌的分离
优缺点：

孢子分离法
组织分离法
优点
生活力强，容易取得
分离法简便，后代不易发生变异，能保持原菌株的优良特性
缺点
个体小，数量大，计数不方便，容易产生变异
如果菌丝含量极少，则往往用此法不易成功
15.病原真菌培养性状包括什么:①菌落的质地②菌落形凸起的或者有成簇的菌丝体③形成成堆的孢子是干的或粘性的④各种子实体和休眠结构（厚垣孢子、菌核等）的形成和所需时间⑤菌落正面和背面的颜色，有无色素参入培养基中⑥有无特殊气味⑦菌落中有没有部分呈扇状⑧生长率的快慢，如菌落长到一定直径所需的时间。菌落的颜色也要不断的观察，它的颜色是随着时间而改变的。
16.细菌学性状研究包括哪些内容？革兰氏染色原理及成败关键是什么？为什么？
细菌学性状研究包括形态、染色反应、培养性状、生长与营养、生理生化特征、血清学特征、噬菌体特征、遗传和变异以及鉴定和分类学
革兰氏染色原理：这是由于这两类细菌细胞壁的结构和组成不同决定的。G+ 菌：细胞壁厚，肽聚糖含量高，交联度大，当乙醇脱色时，肽聚糖因脱水而孔径缩小，故结晶紫-碘复合物被阻留在细胞内，细胞不能被酒精脱色，仍呈紫色。Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，因其含脂量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，酒精将细胞脱色，细胞无色，沙黄复染后呈红色。
注意事项：①在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀，固定时，不可过热，以载玻片不烫手为宜。②严格掌握脱色程度，是革兰氏染色的关键步骤。如脱色时间太长，阳性菌会误为革兰氏阴性菌，时间不足，革兰氏阴性菌会误为革兰氏阳性菌。③在镜检时，以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。
17.植物病毒的非介体传播方式？:①汁液接触传播②嫁接传播③花粉传播。
18.植物病毒传播介体有？：⑴介体昆虫①刺吸为害的介体昆虫，如蚜虫，叶蝉和飞虱②咀嚼为害的介体昆虫，如甲虫类、殊种蚱蜢、赤腿蝗、烟草天蛾及甘蓝夜蛾的幼虫⑵介体螨类：如郁金香瘤螨、醋栗拟生瘿螨、无花果瘘螨、凸植羽瘿螨⑶介体线虫：如长针线虫属、剑线虫属、毛刺线虫属、拟毛刺线虫属⑷介体菌类：主要是壶菌目和根肿菌目真菌 ⑸介体菟丝子
19.植物寄生性线虫造成的症状有？：植物受线虫为害后，除和真菌、细菌、病毒等病原物引起的相似症状，也有其特有症状与之相区别。主要表现在根部和地上部症状。⑴根部症状：有的根生长点受破坏而停止生长或卷曲，有的根上形成瘤肿或过度分枝而形成发根或须根团。植物根部受害后，地上部生长受到影响而表现植株矮缩，色泽失常和早衰，严重时整株枯死。⑵地上部症状：植株地上部的症状，有顶芽和花芽坏死，茎叶卷曲或组织坏死，形成叶瘿或种瘿等。
20.常见植物寄生性线虫的分离方法有？:⑴贝尔曼漏斗分离法：植物材料和土壤中能游动的活线虫。⑵离心漂浮分离法：土壤中的小型线虫和异皮科线虫的幼虫。⑶培育分离法：土壤中胞囊线虫分离。
21、简述病原菌接种实验在植病研究中的意义？
（1）接种实验对于植物病害病原生物学说的确立具有非常重要意义。
（2）对于柯赫法则的建立奠定了基础：
22、柯赫法则有四条：
①这种微生物经常与某种病害有联系；②从病组织上可以分离到这种微生物的纯培养;③将培养的菌种接种在健全的寄主上，可诱发与原来相同的病害; ④从接种后发病的植物上,能再分离到原来的微生物。22．植物病理学主要包括？①植物症状学②病因学③病害流行学④植物病理生理学及分子植物病理学⑤植物病害的控制等
23.接种方法⑴种子传染病害的接种有拌种法、浸种法⑵土壤传染病害的接种有土壤接种法、蘸根接种法⑶河流和雨水传播病害的接种有喷雾法、喷撒法、涂抹法、注射法、针刺法
24.植物病毒病害的接种？植物病毒的接种方法与它的传染途径有关，已经知道的传染途径有：①机械传染②嫁接传染和茧丝子传染；③昆虫和其他介体传染；④土壤传染；⑤种子和花粉传染。
三.名词解释
发病率：指发病田块、植株或器官等发病的百分率。
严重度：田块植株或器官等的受害程度。
感染指数：分级计数法的级别，有的不是根据百分率分级的，得到的结果是每一级中有多少个体，对于这种情况，用感染指数来表示发病程度，即每一级用一代表数值，用公式计算为：感染指数=Σ（病级株数×代表数值）÷（株数总和×发病最重级的代表数值）×100
局部症状（local symptom）：当病毒侵染寄主植物后，仅在接种的叶片上出现症状的称局部症状。一般是坏死斑，也可以是褪绿斑及褪绿环等。
系统症状（systemic symptom）：病毒侵染寄主植物后，在接种叶片上不出现症状，而是在新长出来的叶片上出现症状的称作系统症状，多数是花叶类型
病原物：引起植物病害的生物的统称，现已知道的主要有真菌、细菌（类菌原体）、病毒（类病毒）、线虫和寄生性种子植物
病因：就是导致一种疾病发生的原因。它包括致病因子和条件
症状学：主要描述植物病害的外部症状，典型和非典型，内部症状（病毒病）
直接计数法：一种较简单的方法，就是计算发病田块、植株或器官的数目，从调查的总数，求发病率。
五、论述
1.如何制定一个完整研究计划
⑴研究计划：
确定研究内容可以为当前的病害已经大量发生或少量发生而可能继续扩大危险性的病害，当地的范围可大可小，地区、省、大区到全国。
⑵研究途径：调查研究和室内研究，二者相辅相成、不能偏废。生产第一线的调查研究提供课题和材料，室内研究的结果得到生产第一线验证；另外设备和经费也是考虑的问题。
⑶整理总结：由浅入深，由表及里的认识事物，进行阶段性总结，可以分析已经解决的问题；还有不妥之处；还需要改进和进一步研究的问题；已经完成的部分，及时报道发表。记录原始调查材料、图片、整理成册，以便保存。
2．当你在田间发现你不熟悉的病害时，将根据田间观察到的哪些情况初步判断它可能是生理、真菌、细菌或病毒病。
首先是看症状类型。通常我们把生病植物变化分成5大类型，就是腐烂、坏死、变色、萎蔫、畸形。由于真菌的种类很多，不同真菌能够造以上5类病状，其中最常见的是坏死和腐烂，如玉米大小斑病、小麦叶枯病、大白菜黑斑病等各种形状的叶斑病，坏死发生在根部或茎杆上就形成枯萎病、根腐病；细菌通常破坏细胞壁，让细胞内的物质外渗或阻塞水和营养物质在植物体内运输，所以主要造成腐烂、萎蔫症状；而病毒侵入植物一般不会立刻杀死植物，主要是改变植物生长发育过程，引起植株颜色或形状的改变，我们叫它变色和畸形。真菌和细菌都可以造成腐烂病，怎样区分它们呢？细菌造成的腐烂往往出水很多，烂成一滩泥，而真菌造成的腐烂有的较干有的湿润，上面常常长出各种颜色的霉层或小黑点、小黑粒。另一个区别是细菌造成的腐烂发出臭味，真菌病害没有臭味，有衣物发霉甚或发酵的香味。 同样是叶斑病，如何区分呢？由于细菌破坏植物的细胞壁、细胞膜，使细胞内物质渗到细胞间，这样就变得透明，所以细菌病害的病斑很像水浸或油浸状，边缘有点透明。湿润条件下，能够在发病部位看到亮黄色小珠子，是细菌的菌脓。真菌病害会长一些霉层或小黑粒，病毒病斑的表面什么东西都不长。由于传播方式的差异，他们在田间的分布也会不同。细菌和水关系密切，细菌病害的分布常与流水、淹水、雨滴飞溅有关；病毒病害常和传毒昆虫的活动有关。观察病害田间分布情况，也可以间接推测植物病毒对寄主的危害，素有“植物癌症”之称，防治上十分困难。病毒在侵染寄主后，不仅与寄主争夺生长所必需的营养成分，而且破坏植物的养分输导，改变寄主植物的某些代谢平衡，使植物的光合作用受到抑制，致使植物生长困难，产生畸形、黄化等症状，严重的造成寄主植物死亡。
生理性病害：由于管理不当和不良环境影响而使植物生长不正常，表现出来的症状称为生理病害。是非生物病害，不具有侵染性，生理性病害的共同特征是病株表面或内部没有任何病征。这类病害明显特点是一般在田间大面积同时发生，不侵染，在同一时间、在植株相同器官和部位，出现基本相同的症状；而侵染性病害在田间发病时，往往先有1个或几个发病中心，然后由发病中心向其周围快速或缓慢地蔓延。温室蔬菜生理性病害常见的有低温障碍、缺素症、激素中毒、肥害及药害所造成的生理性障碍。
真菌性病害：发生真菌性病害的植株上一般都产生白粉层、黑粉层、霜霉层、锈孢子堆、菌核等，若在生病的植株上看见上述特征之一，可先初步判断为真菌性病害。
细菌性病害:细菌通过植株的气孔、伤口等处侵入，发病后的植株一般表现为坏死、腐烂或萎蔫。
3、试述PDA培养基的制作过程
⑴称量: 去皮马铃薯 200g ，葡萄糖 20g ，琼脂15-20g .琼脂加入的量取决于琼脂的质量，质量好的 15g 就够了，质量差的应适当.另外,在夏天气温较高时,适当增加用量。
⑵将马铃薯切成小块，放入锅中，加水1000ml，煮沸30min。用纱布滤去马铃薯残渣。
⑶将马铃薯滤液放回锅中，加入琼脂，加热熔化.在琼脂融化的过程中，需要用玻璃棒不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。
⑷加入葡萄糖。葡萄糖容溶解后，加入适量的水以补充加热过程中损失的水分，定容至1000ml。通常在制作培养基的锅内用红蓝铅笔标记出不同体积的刻度，如1000ml,2000ml等，在定容时直接将水加至已标记的刻度即可。
⑸分装:根据不同的实验目的，可将配制的培养基分装于试管内或三角瓶内。分装试管，其量为管高的1/5，灭菌后制成斜面。分装三角瓶的容量以不超过三角瓶容积之一半为宜。
⑹封口:在管口或瓶口用塑料膜封口。也可以用棉塞，要用未脱脂的经弹松的棉花，棉塞可过滤空气，防止杂菌侵入并可减缓培养基水分的蒸发，故在植物病理学研究工作中普遍使用。
⑺包扎:加塞后，将试管用线绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道线绳扎好。用记号笔注明培养基名称、配制日期、组别、制作人等。
⑻灭菌:将培养基以0.1Mpa，121C , 高压蒸气灭菌20min。
⑼搁置斜面:将灭菌的试管培养基冷至 50C 左右，将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上，搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。 培养基经灭菌后，必须放在37℃温箱培养24h，无菌生长者方可使用

四、分析题
1、用A、B两种药剂防治番茄灰霉病，调查结果：
病级
发病程度
代表数值
A药处理
B药处理
A、B对照
1
无病
0
20
10

2
至少25%叶子死亡
1
40
10

3
26%--50%叶死亡
2
20
20

4
51%--75%叶死
3
10
25

5
76%---100%
4
10
35

合计

100
100

⑴分别计算A、B两药处理区发病率和病情指数
感染指数= Σ（病级株数×代表数值）/ (株数总和×发病最重级的代表数值 )x100
A药发病率：（40+20+10+10）/100=80%
B药发病率：（10+20+25+35）/100=90%
感染指数：A药：（1*40+2*20+3*10+4*10）/(100*4)*100=37.5
B药：（1*10+2*20+3*25+4*35）/(100*4)*100=66.25
⑵判断哪种药好：A药的防治效果好
2.接种环采用酒精灯火焰灭菌法，按无菌操作法，用接种环从纯培养的试管中转接9支斜面，有3支不长菌，3支污染杂菌，3支长纯菌，分析造成这些差异的原因。
3.甲、乙、丙在不同时期分别观察同一病害，正常情况下，在叶子上锁形成的病斑，结果三个描述的病斑大小、颜色等不同，原因是什么？
4.根据小麦产量比较的试验结果列表：年（05、06、07），地区（运城和大同），品种（玉皮和2419）
①主要表示不同年份产量变化绘表
1）不同年份产量的变化绘图

运城
大同
玉皮
2419
玉皮
2419
2005

2006

2007

⑵同一品种在不同地点产量的变化绘表
同一品种不同地点产量绘图

玉皮
2419
2005
2006
2007
2005
2006
2007
运城

大同

⑶不同品种在同一地点产量的变化绘表。

运城
大同
2005
2006
2007
2005
2006
2007
玉皮

2419

10.以小麦病害为例，设计一个一般调查表格
小麦病害调查记载
调查地点 调查日期 调查人
病害名称
发病率
第一田
第二田
第三田
第四田
第五田
平均
散黑穗病
腥黑穗病
全蚀病
黄矮病
丛矮病
杆黑粉病
条锈病
叶锈病
秆锈病
其他