蛋白透析复性方法.doc

蛋白透析实验
使用前处理：
1. 把透析袋剪成适当长度（10-20cm）的小段。
2. 在大体积的2%(W/V)碳酸氢钠和 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将透析袋煮沸10分钟。
3. 用蒸馏水彻底清洗透析袋。
4. 放在 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将之煮沸10分钟。
5. 冷却后，存放于4度，必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时起取用透析袋是必须戴手套。
6. 用前在透析袋内装满水然后排出，将之清洗干净。

首先用透析液TGE将样品稀释一倍，将其装入透析袋中，放入500mlTGE中放入4度冰箱即可。每7、8小时换一次透析液，总透析时间从24－48小时不等。
TGE配法如下：
50mM Tris
0.5mM EDTA
50mM Nacl
5%或10％甘油
如果有条件加入1％的甘氨酸或精氨酸和谷胱甘肽会更好些。谷胱甘肽的浓度：氧化型：0.05mM 还原型：0.5mM。调ph值7.9或8.0或其他，根据你的蛋白的等电点来确定，别离等电点太近，否则会出现大量沉淀，甚至目的蛋白全部沉掉，我最大ph用过9.0。