免疫球蛋白检测.pptx

第一章第一章 血液标本采集与处理血液标本采集与处理临床免疫学检验技术第十七第十七章章 免疫球蛋白检测免疫球蛋白检测冯珍如目 录第一节 免疫球蛋白的生物学功能第二节 IgG、IgM、IgA测定方法及临床意义第三节 血液IgE和IgD测定方法及临床意义第四节 冷球蛋白测定方法及临床意义第第一一节节 免疫球蛋白生物学功能免疫球蛋白生物学功能重点提示免疫球蛋白异质性的表现类型免疫球蛋白V区和C区功能特点五类免疫球蛋白的不同功能特点一一、免疫球蛋白的异质性、免疫球蛋白的异质性免疫球蛋白的类型免疫球蛋白的多样性免疫球蛋白的血清型二、免疫球蛋白的二、免疫球蛋白的功能功能免疫球蛋白的V区作用免疫球蛋白的C区作用五类免疫球蛋白不同的生物学功能第二节第二节 IgG、IgM、IgA测定方法及临床意义测定方法及临床意义重点提示不同标本类型的IgG、IgM、IgA检测方法血液IgG、IgM、IgA检测方法的比较不同标本类型的IgG、IgM、IgA检测意义IgG亚型检测的临床意义选择性蛋白尿指数白蛋白商值IgG生成指数一、血液一、血液IgG、IgM、IgA测定方法及临床意义测定方法及临床意义测定方法单向免疫扩散试验酶联免疫吸附试验（ELISA）放射免疫试验（RIA）免疫固定电泳免疫比浊法：免疫透射比浊法、免疫散射比浊法测定方法 血液IgG、IgM、IgA检测方法的比较优点点缺陷缺陷单向免疫向免疫扩散散试验操作简便，不需特殊设备耗时长，灵敏度较低，免疫球蛋白在固相中的沉淀环不明，导致结果不准确。酶联免疫吸附免疫吸附试验（ELISA）灵敏度高，特异性好检测时间长，批量检测。放射免疫放射免疫试验（RIA）灵敏度高，特异性好放射性核素污染，试剂有效期短。免疫固定免疫固定电泳泳主要用于M蛋白测定属定性测定免疫透射比免疫透射比浊法法灵敏度比单向免疫扩散试验高510倍，结果准确，操作简单，可使用全自动或简单比色计比浊进行检测，特别适合临床基层单位应用。耗时长，灵敏度较免疫散射比浊法低。免疫散射比免疫散射比浊法法线性范围宽、灵敏度高（最小检测量可达g/L）、准确度高、精密度高、检测时间短（一般在几分钟内即可完成测试）和稳定性好。仪器和试剂较免疫透射比浊法贵，对抗体质量要求高。临床意义年龄的差异：年龄的差异：年龄不同其血液中的免疫球蛋白的含量有一定变化。新生儿可由母体获得通过胎盘转移来的IgG，故血液中含量较高，接近成人水平。婴幼儿体液免疫功能尚不成熟，免疫球蛋白含量低于成人。血液免疫球蛋白随年龄、性别、血型、种族及测定方法不同而有所差别。临床意义多克隆高免疫球蛋白血症多克隆高免疫球蛋白血症：肝脏疾病如慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、隐匿性肝硬化等患者血清中三类免疫球蛋白均可升高。慢性细菌感染如肺结核、麻风、慢性支气管炎等血中IgG可升高。宫内感染时脐血或出生后的新生儿血清中IgM含量可增高。自身免疫病时免疫球蛋白均可升高，如系统性红斑狼疮患者以IgG、IgA升高较多见，类风湿关节炎患者以IgM升高为主。临床意义单克隆免疫球蛋白升高单克隆免疫球蛋白升高：主要是指患者血清中某一类免疫球蛋白含量显著增多，大多在30g/L以上。这种异常增多的免疫球蛋白理化性质十分一致，称为单克隆蛋白（monoclonal protein，MP）即M蛋白。此类异常增多的免疫球蛋白多无免疫活性，故又称副蛋白（paraprotein）。由M蛋白所致的疾病称为免疫增殖性疾病，如：多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、恶性淋巴瘤、重链病、轻链病等。临床意义低免疫球蛋白血症低免疫球蛋白血症：先天性先天性低免疫球蛋白血症：体液免疫缺陷病联合免疫缺陷病获得性获得性低免疫球蛋白血症：患者血清中IgG常小于5g/L，引起的原因较多。大量蛋白丢失：如烧伤、剥脱性皮炎、肾病综合征等淋巴系统肿瘤：如白血病、霍奇金淋巴瘤等感染性疾病：如艾滋病长期使用免疫抑制剂二、血液二、血液IgG亚类测定方法及临床意义亚类测定方法及临床意义测定方法单向免疫扩散试验：最早用于IgG亚类测定，但灵敏度低，检测时间长等缺陷，临床已不用。ELISA：因抗原特异性较差，检测时间长，临床应用较少。免疫散射比浊法：以检测速度快，灵敏度高，准确性好，自动化程度高等为优点，在临床广泛应用。临床意义年龄年龄：IgG亚类在不同年龄、种族以及不同测定方法的情况下，检测结果都存在差异。IgG亚类的含量随年龄的不同而变化。在儿童时期，男性IgG亚类缺陷比女性常见，其比例为3:1；成年男女的比例为4:2。儿童中IgG2缺陷最常见，成年人IgG1和IgG3缺陷最常见。临床意义IgGIgG亚类缺陷亚类缺陷：临床上可表现为反复呼吸道感染、腹泻、中耳炎、鼻窦炎、支气管扩张以及哮喘等。有些患者IgG亚类异常，但总IgG正常甚至还偏高，因此认为IgG亚类测定比总IgG测定更有价值。IgA缺乏症常伴有IgG2缺陷某些病毒感染时IgG1、IgG2、IgG3显著下降肾病综合征出现低IgG血症时，IgG亚类并非呈比例降低，以IgG1下降为主，而IgG3代偿性增高。糖尿病患者以IgG1下降为主IgG亚类异常增高可见于型超敏反应，如变应原可刺激机体使IgG4含量增加。临床意义IgGIgG4 4相关性相关性疾病疾病：是一组以血清IgG4水平升高、受累组织IgG4阳性浆细胞浸润及纤维化为特征的疾病。该病可累及全身多个组织器官，受累器官因纤维化、慢性炎症等出现增生肿大，从而导致相应压迫阻塞症状或功能障碍，其中胰腺、泪腺和涎腺的受累最为常见。三、尿液免疫球蛋白测定方法及临床意义三、尿液免疫球蛋白测定方法及临床意义测定方法单向免疫扩散试验：临床已基本不用。ELISA：临床应用较少。免疫散射比浊法：临床广泛应用。测定方法选择性蛋白尿指数（selective proteinuria index，SPI）：同时测定尿液和血液中的转铁蛋白（transferrin，TF）及IgG的含量，以此来判断尿液Ig测定的临床意义。SPI计算公式：SPI=(尿IgG/血清IgG)/（尿TF/血清TF）。临床意义当SPI0.1时，表明肾脏高选择性排泌分子量较小的蛋白质：微小病变型肾病。当SPI0.2时，表明肾脏是非选择性排泌分子量较大的蛋白质：膜性肾病、膜增殖性肾炎、肾病综合征。临床意义尿中IgG升高：原发性肾小球肾炎、慢性肾炎尿内IgA：原发性肾小球肾病和慢性肾炎肾病：含量最高 慢性肾炎高血压型及普通型：轻度增高 隐匿性肾炎及急性肾炎：含量很少尿内IgM：慢性肾炎尿游离轻链：轻链病、多发性骨髓瘤等四、脑脊液免疫球蛋白测定方法及临床意义四、脑脊液免疫球蛋白测定方法及临床意义测定方法免疫散射比浊法：正常人脑脊液（CSF）免疫球蛋白含量低，故临床应用灵敏度高的免疫散射比浊法来测定CSF中免疫球蛋白。白蛋白商值：同时测定CSF和血液中的白蛋白（Alb）,计算白蛋白商值（Alb quotient，QAlb）的大小来反映血脑屏障受损程度。QAlb 计算公式：QAlb=(AlbCSF/AlbS)1000测定方法IgG生成指数（IgG index）：通过计算IgG生成指数来反应CSF鞘内免疫球蛋白合成。其计算公式为：IgG生成指数=(IgGCSF/AlbS)/(IgGS/AlbCSF)临床意义血液中免疫球蛋白通过血脑屏障的难易程度与免疫球蛋白分子量大小直接相关。IgG较易通过血脑屏障，而IgA略难，IgM更难。所以IgG、IgA、IgM在CSF中的含量依次递减。当脑组织或脑膜出现病变时，导致血脑屏障发生破坏，通透性增加，或自身病变组织产生的病理性产物进入CSF，使CSF成分发生改变。临床意义QAlb不仅可以检测血脑屏障损伤的程度，还可以提示神经系统发生疾病的类型。QAlb9：提示血脑屏障无明显受损。QAlb 915：急慢性病毒感染、多发性硬化、神经梅毒、带状疱疹性神经节炎、脑萎缩等神经系统疾病。QAlb 1533：急性神经疏螺旋体病、条件致病性脑膜炎、吉兰-巴雷综合征等。QAlb 33100：化脓性脑膜炎、单纯疱疹性脑炎、结核性脑膜炎等严重细菌感染性疾病。QAlb 100为完全破裂。临床意义当IgG生成指数升高时，表明CSF中的IgG主要由中枢神经系统鞘内合成。IgG生成指数升高多见于多发性硬化症。CSF中IgG增高：脑血栓、蛛网膜下腔出血、系统性红斑狼疮脑病、神经梅毒、重症肌无力等。CSF中IgG、IgA均增高：化脓性脑膜炎及结核性脑膜炎。CSF中IgA和IgM升高：神经系统肿瘤。CSF中IgG和IgM明显升高：精神分裂症。第三节第三节 血液血液IgE和和IgD测定方法及临床意义测定方法及临床意义重点提示血液IgE检测方法血液IgE检测的临床意义血液IgE水平的影响因素一、血液一、血液IgE测定方法及临床意义测定方法及临床意义测定方法ELISA荧光酶免疫试验（FEIA）化学发光免疫试验（CLIA）三种方法在临床均常用。相比ELISA，FEIA 和CLIA因检测速度快，自动化程度高等优点在临床应用更为广泛。临床意义型超敏反应：血清IgE升高。婴儿：高水平的IgE预测未来有超敏反应的可能寄生虫病：IgE水平明显升高。某些非超敏反应：IgE水平升高还可见于其它一些非超敏反应，如感染性疾病、IgE型骨髓瘤、高IgE综合征、嗜酸性粒细胞增多症、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎等。其它：原发性无丙种球蛋白血症、肿瘤及化疗药物应用后IgE可下降。临床意义影响IgE水平的因素：年龄：新生儿IgE水平非常低，随着年龄的增长，IgE的水平随之增高，学龄前儿童IgE可接近成人水平，青春期水平最高，30岁后逐渐下降，老年人IgE水平处于较低的水平，这可能与老年人Th细胞功能低下，Ts细胞功能相对较高有关。性别：男性高于女性，其机制尚不清楚。种族：混血人种的IgE比白人高34倍，黑人水平更高，黄种人水平也较高。这可能受遗传的影响。二、血液二、血液IgD测定方法及临床应用测定方法及临床应用因IgD生物学功能尚不清楚，血液IgD定量检测临床基本不做。血液IgD的定性检测有免疫固定电泳等，见第二十四章。血液中IgD升高主要见于IgD型骨髓瘤等免疫增值性疾病。第四节第四节 冷球蛋白冷球蛋白测定及临床意义测定及临床意义重点提示冷球蛋白的特点冷球蛋白检测流程保温的重要性冷球蛋白分型的意义测定方法冷球蛋白的测定方法有两种：定性测定：血细胞比容管法定量测定：分光光度法在冷球蛋白的测定中样本采集及处理的保温过程是保证检测结果准确的关键。临床意义冷球蛋白可分为型、型、型，各型具有不同的临床意义。型：为单克隆冷球蛋白，由IgM、IgG、IgA或本-周蛋白组成，大约25%的冷球蛋白属于此类型。临床上多见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病等疾病。临床意义冷球蛋白可分为型、型、型，各型具有不同的临床意义。型：为单克隆混合冷球蛋白，由单克隆免疫球蛋白和自身IgG组成，分为IgM-IgG、IgG-IgG、IgA-IgG，大约25%的冷球蛋白属于此类型。临床上见于类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、血管炎、干燥综合征等疾病。临床意义冷球蛋白可分为型、型、型，各型具有不同的临床意义。型：为多克隆混合冷球蛋白，由两类或两类以上的多克隆免疫球蛋白组成，即抗原和抗体都是多克隆的，大约50%的冷球蛋白属于此类型。临床上见于传染性单核细胞增多症、急性病毒性肝炎、链球菌感染后肾小球肾炎、原发性胆汁性肝硬化、感染性心内膜炎等疾病。本章小结免疫球蛋白具有明显的异质性，不仅可分为五类和两型，而且包含多种亚类；免疫球蛋白血清型有同种型、同种异型和独特型；免疫球蛋白功能与其结构密切相关；五类免疫球蛋白具有各自不同的生物学功能。本章小结IgG亚类测定对研究免疫缺陷病、超敏反应和IgG4相关性疾病有重要价值。免疫球蛋白定量测定在临床上常用免疫散射比浊法来测定。本章小结通过选择性蛋白尿指数来评估肾小球滤过膜破坏程度及观察治疗和预后效果。测定尿液免疫球蛋白含量，来对肾小球疾病类型鉴别。测定脑脊液蛋白质，对判断CSF中蛋白质的来源，区分中枢神经系统疾病类别有重要意义。临床上常通过白蛋白商值和脑脊液IgG生成指数来反映血脑屏障受损程度和脑脊液鞘内免疫球蛋白合成的状态。本章小结在冷球蛋白的测定中标本采集及处理的保温过程是保证检测结果准确的关键。冷球蛋白的准确结果对免疫增值性疾病、自身免疫病等辅助诊断有意义。THANK YOU!THANK YOU!