4实验五化学因素对微生物生长的影响.pptx

实验五实验五 化学因素对微生物化学因素对微生物生长的影响生长的影响 一、实验目的一、实验目的 了解化学药剂的杀菌和消毒作用，掌握消毒了解化学药剂的杀菌和消毒作用，掌握消毒剂的浓度和使用方法。剂的浓度和使用方法。二、实验原理二、实验原理 一些化学药剂对微生物的生长有抑制或杀死作用。一些化学药剂对微生物的生长有抑制或杀死作用。因此，在实验室内和生产生活中常利用某些药剂因此，在实验室内和生产生活中常利用某些药剂进行杀菌或消毒。不同的药剂或同一药剂对不同进行杀菌或消毒。不同的药剂或同一药剂对不同微生物的杀菌能力不同。此外，药剂微生物的杀菌能力不同。此外，药剂浓度浓度、作用、作用时间时间及及环境条件环境条件不同，其效果也不同。不同，其效果也不同。常用的化学药剂有常用的化学药剂有重金属及其盐类、有机溶剂重金属及其盐类、有机溶剂（醇、酚、醛等）、卤族元素及其化合物、染料和（醇、酚、醛等）、卤族元素及其化合物、染料和表面活性剂表面活性剂等。等。重金属离子重金属离子汞、铜、银汞、铜、银等等 机制：机制：与菌体蛋白质结合使之变性与菌体蛋白质结合使之变性 某些酶蛋白的巯基相结合而使酶失活，某些酶蛋白的巯基相结合而使酶失活，蛋白质沉淀蛋白质沉淀 鳌合作用鳌合作用有机溶剂有机溶剂酚、醇、醛酚、醇、醛 机制：可使蛋白质或核酸变性，也可破坏细胞膜机制：可使蛋白质或核酸变性，也可破坏细胞膜通透性使内含物外溢通透性使内含物外溢卤族元素卤族元素碘可与蛋白质酪氨酸残基不可逆结碘可与蛋白质酪氨酸残基不可逆结合而使蛋白质失活，氯气与水发生反应产生的强合而使蛋白质失活，氯气与水发生反应产生的强氧化剂也具有杀菌作用氧化剂也具有杀菌作用 染料染料在低浓度条件下可抑制细菌生长，革兰氏阳在低浓度条件下可抑制细菌生长，革兰氏阳性菌比革兰氏阴性菌更敏感性菌比革兰氏阴性菌更敏感 表面活性剂表面活性剂能降低溶液表面张力，可改变微生物能降低溶液表面张力，可改变微生物细胞膜的通透性，也能使蛋白质变性细胞膜的通透性，也能使蛋白质变性 实验器材实验器材菌种：菌种：大肠杆菌（大肠杆菌（E.coli）、枯草杆菌）、枯草杆菌（Bvacillus subtilis）。）。培养基培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶液或试剂溶液或试剂：2.5%碘酒、碘酒、5%石炭酸、石炭酸、75%乙乙醇、醇、100%乙醇、乙醇、0.005%龙胆紫、龙胆紫、0.05%龙胆龙胆紫、紫、0.1AgNO3。实验步骤实验步骤1、制平板、制平板：取无菌平皿：取无菌平皿4个个，将已熔化并冷却至，将已熔化并冷却至50左右的牛肉膏蛋白胨培养基按无菌操作左右的牛肉膏蛋白胨培养基按无菌操作法倒入平皿中，水平放置待凝固。法倒入平皿中，水平放置待凝固。2、制备菌悬液、制备菌悬液：取无菌水试管：取无菌水试管2支支，用接种环分，用接种环分别取大肠杆菌、枯草杆菌别取大肠杆菌、枯草杆菌各各12环环接入无菌接入无菌水中，充分混匀，制成菌悬液。水中，充分混匀，制成菌悬液。3、接种、接种：用：用微量移液器微量移液器分别吸取已制好的菌悬分别吸取已制好的菌悬液液0.1ml接种于平板上，用无菌玻璃涂布棒接种于平板上，用无菌玻璃涂布棒涂均匀。涂均匀。4、加药剂、加药剂：将已涂布好的平板底皿划分为：将已涂布好的平板底皿划分为46等份等份，每一等份注明一种消毒剂的名称。用无菌打孔器每一等份注明一种消毒剂的名称。用无菌打孔器打孔，注入打孔，注入10微升抑菌剂。用微量移液器加入等微升抑菌剂。用微量移液器加入等量消毒剂。量消毒剂。平板中间小孔加无菌水为作对照平板中间小孔加无菌水为作对照。5、培养、培养：将平皿倒置放入：将平皿倒置放入37培养箱中，培养箱中，24h后取出后取出观察抑（杀）菌圈的大小。观察抑（杀）菌圈的大小。实验结果和实验报告测量、记录抑菌圈直径大小。测量、记录抑菌圈直径大小。比较分析不同消毒剂的杀菌能力，三种比较分析不同消毒剂的杀菌能力，三种菌对同种消毒剂的耐受力菌对同种消毒剂的耐受力完成思考题完成思考题1、2。消毒剂消毒剂抑（杀）菌圈直径抑（杀）菌圈直径（mm）消毒剂消毒剂抑（杀）菌圈直径抑（杀）菌圈直径（mm）2.5%碘酒碘酒0.25%新洁尔灭5%石炭酸石炭酸0.005%龙胆紫龙胆紫75%乙醇乙醇0.05%龙胆紫龙胆紫100%乙醇乙醇0.1AgNO3测量、记录抑菌圈直径大小。测量、记录抑菌圈直径大小。比较分析不同消毒剂的杀菌能力，三种菌对同种比较分析不同消毒剂的杀菌能力，三种菌对同种消毒剂的耐受力消毒剂的耐受力完成思考题完成思考题1、2。实验结果和实验报告预备下周实验每组包扎每组包扎1ml、10ml移液管各移液管各1支，支，100ml量量筒一个，灭菌筒一个，灭菌每组配制每组配制三倍乳糖胆盐蛋白胨培养基三倍乳糖胆盐蛋白胨培养基200ml，分装，分装2个个50ml锥形瓶，锥形瓶，10支支5ml试管（试管（加倒加倒置的杜氏小管置的杜氏小管），），115灭菌灭菌15min；灭菌；灭菌配置配置100ml牛肉膏蛋白胨琼脂培养基牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。