炙甘草合剂质量标准研究_胡彬.pdf

炙甘草合剂质量标准研究胡彬，昌秦芬*，喻贵英，罗伟，蒋静，洪赟，刘巧容，汪杨(太极集团重庆桐君阁药厂有限公司，重庆401336)摘要:目的建立炙甘草合剂质量标准。方法采用薄层色谱法(TLC)法对处方中的桂枝和甘草进行定性鉴别;采用高效液相色谱(HPLC)法对制剂中甘草酸进行含量测定;采用 pH 值测定法对制剂 pH 值进行检测。结果桂枝、甘草的薄层鉴别斑点清晰，分离度好，专属性强;甘草酸进样量在 0.20444 1.27775 g 范围内与峰面积呈良好线性关系(r=1.0000，n=5);平均回收率为 100.6%，SD=1.47%(n=6)。结论本文建立的 TLC 鉴别、含量测定方法和 pH 值范围，可用于炙甘草合剂的质量控制。关键词:炙甘草合剂;质量标准;薄层色谱法;高效液相色谱法中图分类号:927文献标识码:A文章编号:1006-3765(2023)-02-0042-03作者简介:胡彬，男(1977 )。学历:硕士研究生。职称:高级工程师。研究方向:中药制剂与标准。通讯作者:昌秦芬。Study on Quality Standard of ZhiGanCao MixtureHU Bin，CHANG Qin-fen*，YU Gui-ying，LUO Wei，JIANG Jing，HONG Yun，LIU Qiao-rong，WANG Yang(Taiji Group Chongqing TongJunGe medicinal materials Co，Ltd.Chongqin 401336，China)ABSTACT:OBJECTIVETo establish the quality standard of ZhiGanCao mixture.METHODSCinnamon Ti-wigand licorice in the prescription were qualitatively identifide by thin layer chronmatography(TLC)，and the contentof glycyrrhizic acid in the preparation was determined by high performance liquid chromatogrgphy(HPLC).The pHvalue of the preparation was detected by pH value determination method.ESULTSThe TLC spots of amuluscinnamomi and licorice were clear，the resolution was good and the specificity was strong;The injection amount of gly-cyrrhizic acid showed a good linear relationship with the peak surface in the range of 0.20444 1.27775 g(r=1.0000，n=5);The average recovery was 100.6%，SD=1.47%(n=6).CONCLUSIONThe TLC identifica-tion，content determination and pH value range established in this paper can be used for the quality control of Zhi-GanCao mixture.KEY WODS:ZhiGanCao mixture;Quality standards;Thin layer chromatography;High perfomance liquid chromatography炙甘草合剂的处方是由甘草(蜜炙)、生姜、人参、地黄、桂枝、阿胶、麦冬、黑芝麻、大枣组成，功效为益气滋阴，通阳复脉1。原标准收载于 部颁标准中药成方制剂 第七册，其质量控制指标较少，为更好的控制产品质量，对制剂处方中的桂枝和甘草进行了薄层鉴别研究，对制剂处方中甘草的甘草酸进行了含量测定方法研究，对制剂溶液 pH 值范围进行摸索。建立了桂枝、甘草薄层鉴别方法，甘草酸含量测定方法和 pH值范围标准。1仪器与试药精密电子分析天平 XS205，实验室 pH 计 FE20(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司);电热恒温水浴锅 HWS-24(上海齐欣科学仪器有限公司);KQ-600DE 型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);超纯水机 QYSW-10A(重庆前沿水处理设备有限公司);安捷伦高效液相色谱仪 HP-1260(安捷伦科技有限公司);硅胶 G 板，硅胶 GF254 板(100 mm200 mm、厚 0.20-0.25 mm、青岛海洋化工厂)。炙甘草合剂由太极集团重庆桐君阁药厂有限公司提供(批号:20120001，21010001，21040002);肉桂酸对照品(批号:110786-201604)，甘草对照药材(批号:120904-202021)，甘草酸铵对照品(批号:110731-202021)，均为中国食品药品检定研究院购进;甲醇为色谱纯，水为一级纯化水，乙醚、正己烷、石油醚(30 60)，甲酸乙酯，三氯甲烷，正丁醇，冰醋酸，三乙胺等试剂均为分析纯。2方法和结果鉴于制剂药液上层浮有黑芝麻脂肪油，为了避免脂肪油对薄层鉴别检测的干扰，所有检测样品均分取药液水层进行试验。2.1定性鉴别2.1.1桂枝 TLC 鉴别:分取制剂药液水层 20 mL，每次加乙醚 20 mL，振摇提取 2 次，合并乙醚液，挥干，残渣加正己烷 1mL 使溶解，作为供试品溶液。另取缺桂枝的阴性样品药液20 mL，同法制成缺桂枝阴性供试品溶液。另取肉桂酸对照品，加正己烷制成每 1 mL 含 1 mg 的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各 5 L，分别点于同24海峡药学2023 年第 35 卷 第 2 期一硅胶 GF254 板薄层板上，以石油醚(30 60)-正己烷-甲酸乙酯-甲酸(1030151)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯 254 nm 下检视。供试品的色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同暗颜色的斑点;阴品无干扰，结果见图 1。2.1.2甘草 TLC 鉴别:分取制剂药液水层 15 mL，每次加乙醚 20 mL，振摇提取 2 次，弃去乙醚液，加水饱和的正丁醇 20mL，振摇提取 2 次，合并正丁醇液，水浴蒸干，残渣加甲醇 2mL 溶解，作为供试品溶液。另取缺甘草的阴性样品 15 mL，同法制成缺甘草阴性供试品溶液。取甘草对照药材 1 g，加水30 mL，煎煮 30 min，滤过，滤液加乙醚 20 mL 萃取 1 次，弃去乙醚液，分取药液水层 15 mL，同法制成甘草对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各 5 L，分别点于同一硅胶 G 薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(653510)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，105 加热至斑点清晰。供试品色谱中，在与甘草对照药材色谱相应的位置上，显相同黄色的斑点;阴品无干扰，结果见图 2。图 1炙甘草合剂中桂枝药材 TLC1.阴性对照;2.供试品;3.肉桂酸对照品图 2炙甘草合剂中甘草药材 TLC1.阴性对照;2，4，5.供试品;3.甘草对照药材2.2含量测定2.2.1色谱条件与系统适应性试验:采用资生堂 C18(250mm 4.6 mm，5 m)色谱柱测定;以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(653510.3)为流动相;流速为 1.0 mLmin1;检测波长为250 nm;柱温:30;进样量为 10 L。结果理论板数按甘草酸铵峰计算均不低于 3000，阴品无干扰。阴性样品溶液、对照品溶液及供试品溶液的 HPLC 色谱图(见图 3-5)。2.2.2对照品溶液的制备:取甘草酸铵对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成每1 mL 含50 g 的溶液，即得，(其中:甘草酸=甘草酸铵 1.0207)。2.2.3供试品溶液的制备:精密量取制剂药液水层 1 mL，置25 mL 容量瓶中，加 70%乙醇 20 mL，密塞，超声(250 W 40kHZ)处理 10 min，放冷，用 70%乙醇稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得。2.2.4阴性样品溶液的制备:按照本品处方及制法，制备缺甘草的阴性样品，按“2.2.3”项下方法制成缺甘草阴性样品溶液。图 3缺甘草阴性样品图图 4甘草酸对照图图 5炙甘草合剂样品图2.2.5线性关系考察:取浓度为 51.11 gmL1的甘草酸对照品溶液，按“2.2.1”项下方法，注入高相液相色谱仪，进样体积分别为 4 L、6 L、8 L、10 L、15 L、20 L、25 L，以进样量(g)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得线性回归方程式为:Y=925.680264X+0.7585972(相关系数为 1.0000)，结果表明甘草酸进样量在 0.20444 1.27775 g34Strait Pharmaceutical Journal Vol.35 No.2 2023的范围内线性关系良好。2.2.6精密度试验:取浓度为 51.11 gmL1的甘草酸对照品溶液，按“2.2.1”项下方法，注入高相液相色谱仪，连续同法进样 5 次，每次进样量为 10 L，测得峰面积的 SD 为0.29%，结果显示仪器精密度良好。2.2.7稳定性试验:取同一供试品溶液，按“2.2.1”项下方法分别在 0 h，3 h，6 h，9 h，12 h，15 h，18 h，21 h，24 h 进行测定，各时间段同一供试品溶液的峰面积 SD 为 0.36%，结果表明样品溶液 24 h 内稳定性良好。2.2.8重复性试验:制剂按“2.2.3”项下供试品溶液制备方法平行制备 6 份供试品溶液，按“2.2.1”项下方法进行测定，样品中甘草酸含量的平均值为 1.348 mgmL1，SD 为0.66%，重复性良好。2.2.9加样回收试验:精密量取已知含量为 1.390 mgmL1的制剂药液 1 mL 各 6 份，置于 25 mL 容量瓶中，分别精密加入甘草酸对照品溶液(溶度为170.4)10 mL，加70%乙醇10 mL，密塞，超声(250 W，40 kHZ)处理10 min，放冷，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，照“2.2.1”项下液相色谱方法进行测定，计算回收率，平均回收率为 100.6%，SD为 1.47%，结果表明回收率良好(见表 1)。表 1加样回收试验结果表样品号已知量(mg)加入对照品量(mg)测得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)SD(%)11.3901.7043.07398.821.3901.7043.09099.831.3901.7043.08499.4100.61.4741.3901.7043.120101.951.3901.7043.130102.161.3901.7043.120101.92.2.10样品测定结果:取 3 批样品(批号为:20120001，21010001，21040002)照“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.1”项下液相方法进样，计算制剂中甘草酸含量(见表2)。鉴于生产批次较少，数据不充足，暂定含量限度为“每 1mL 含炙甘草以甘草酸计，不得少于 1.0 mg”。表 2样品含量测定结果表样品编号检测结果(mgmL1)201200011.384210100011.302210400021.3982.3pH 值按照 中国药典pH 值测定法2对生产的 3 批炙甘草合剂样品进行了检测，结果见表 3，初步确定该产品pH 值范围为“应为 4.0 6.0”。表 3样品 pH 值结果表样品编号检测结果201200014.90210100015.02210400024.903讨论3.1经研究分别建立了炙甘草合剂中桂枝和甘草的薄层鉴别方法，方法具有良好的专属性、可操作性和重现性。3.2对炙甘草合剂制剂中甘草的甘草酸的提取，对比提取溶剂 50%甲醇和 70%乙醇，结果显示以 70%乙醇为提取溶剂时，制剂中甘草酸提取充分，含量更高，故提取溶剂最终确定为 70%乙醇。3.3建立的炙甘草合剂中甘草酸的含量测定方法，通过方法学验证，各试验结果 SD 值均在 2%以内，符合药品质量标准分析方法验证指导原则的要求，该方法准确可靠。同时制定了制剂 pH 值范围标准。3.4与炙甘草合剂原标准相比，新增了桂枝、甘草薄层鉴别，甘草酸含量测定，pH 值范围。为国家标准和行业标准的制定提供了实验依据，对保证其临床的安全有效具有重要意义。参考文献1 李萍，何筱毅，周佳.炙甘草合剂中甘草酸含量测定 J.现代医药卫生，2009，25(10):1451-1452.2 国家药典委员会编.中国药典(四部)S.北京:中国医药科技出版社，2020:84.作者简介:徐志贫，男。学历:硕士。职称:助理工程师。研究方向:从事药品质量检验研究。通讯作者:张贵民，男。职称:研究员。非那雄胺片中十二烷基硫酸钠(SDS)残留量 HPLC-CAD 检测方法的建立徐志贫，刘发贵，张丽，郭红丽，刘思光，李铁健，张贵民*(国家手性制药工程技术研究中心，山东临沂273400)摘要:目的建立非那雄胺片中十二烷基硫酸钠(SDS)残留量的高效液相色谱-电喷雾检测器(HPLC-CAD)检测方法。方法采用 WatersSymmetry C18(150 mm 4.6 mm，3.5 m)色谱柱，流动相采用0.1 molL1甲酸铵水溶液乙腈=5050，等度洗脱15 min，流速1.0 mLmin1，检测器:CAD 检测器(模式:high，50)。结果在选定的色谱条件下，非那雄胺片中 SDS 的分离度达到9.07，在0.0020 0.1229 mgmL1(r=0.9994)浓度范围内与峰面积呈现良好线性关系。SDS 的定量下限为 2.048 gmL1，平均回收率(n=9)为 99.39%，回收率 SD=2.50%。44海峡药学2023 年第 35 卷 第 2 期