胃癌患者的血清miRNA-...平及与临床特征和预后的关系_杨茂省.pdf

癌症进展2022 年 12 月第 20 卷第 24 期ONCOLOGY PROGRESS,Dec 2022 V ol.20,No.24*论著*胃癌患者的血清胃癌患者的血清miRNA-miRNA-9393水平及与临床特征和预后的关系水平及与临床特征和预后的关系杨茂省1#，杨到凤1，李世杰2，刘大宁21濮阳市第二人民医院检验科，河南 濮阳 4570002濮阳市人民医院检验科，河南 濮阳 4570000摘要摘要：目的目的探讨胃癌患者的血清miRNA-93水平及与临床特征和预后的关系。方法方法选取82例胃癌患者和82例胃部良性疾病患者，分别作为恶性组和良性组，比较两组患者的血清miRNA-93水平。采用受试者工作特征（ROC）曲线及曲线下面积（AUC）分析血清miRNA-93水平对胃癌的诊断价值。以血清miRNA-93水平的中位值为界，将胃癌患者分为miRNA-93高表达组和miRNA-93低表达组，比较两组患者的临床特征，采用Spearman相关分析法分析血清miRNA-93水平与胃癌患者临床特征的相关性。随访3年，记录胃癌患者预后，采用Cox比例风险回归模型分析血清miRNA-93水平与胃癌患者预后的关系。结果结果恶性组患者血清miRNA-93水平明显高于良性组（P0.01）。血清miRNA-93水平对胃癌具有中等诊断价值，AUC为0.852。miRNA-93高表达组中肿瘤直径5 cm、低分化、期、有淋巴转移的患者比例均高于miRNA-93低表达组，差异均有统计学意义（P0.05）。血清 miRNA-93 水平与胃癌患者的肿瘤直径、分化程度、TNM 分期、淋巴结转移情况均呈正相关（P0.01）。miRNA-93 高表达组患者预后不良发生率高于 miRNA-93 低表达组患者（P0.05），血清 miRNA-93高表达是胃癌患者预后不良的独立危险因素（OR=2.488，P0.05）。结论结论血清miRNA-93水平对胃癌具有中等诊断价值，其与胃癌患者的临床特征具有相关性，其高表达是胃癌患者预后不良的危险因素。关键词关键词：胃癌；miRNA-93；临床特征；预后中图分类号中图分类号：R R735735.2 2文献标志码文献标志码：AdoiAdoi：10.11877/j.issn.1672-1535.2022.20.24.17Serum level of miRNA-Serum level of miRNA-9393 in gastric cancer patients and its relationship within gastric cancer patients and its relationship withclinical characteristic and prognosisclinical characteristic and prognosisYANG Maosheng1#,YANG Daofeng1,LI Shijie2,LIU Daning21Department of Laboratory,Puyang Second People s Hospital,Puyang 457000,He nan,China2Department of Laboratory,Puyang People s Hospital,Puyang 457000,He nan,ChinaAbstract:ObjectiveAbstract:ObjectiveTo investigate the serum level of miRNA-93 in gastric cancer patients and its relationship withclinical characteristics and prognosis.MethodMethodA total of 82 patients with gastric cancer and 82 patients with benign gas-tric diseases were selected as malignant group and benign group,respectively.The serum miRNA-93 levels were com-pared between the two groups.The receiver operating characteristics(ROC)curve and area under the curve(AUC)wereused to analyze the diagnostic value of serum miRNA-93 level for gastric cancer.Based on the median serum miRNA-93level,gastric cancer patients were divided into miRNA-93 high-expression group and miRNA-93 low-expression group,the clinical characteristics of patients in the two groups were compared.Spearman correlation analysis was used to ana-lyze the correlation between serum miRNA-93 level and the clinical characteristics of gastric cancer patients.Follow-upfor 3 years and documented the prognosis of patients with gastric cancer.The Cox proportional hazards regression modelwas used to analyze the relationship between serum miRNA-93 level and the prognosis of gastric cancer patients.ResultResultThe serum miRNA-93 level in the malignant group was significantly higher than that in the benign group(P0.01).Se-rum miRNA-93 level had moderate diagnostic value for gastric cancer,with AUC of 0.852.The proportion of patientswith tumor diameter5 cm,poorly differentiated,stage III-IV,and lymphatic metastasis in the miRNA-93 high-expres-sion group were higher than those in the miRNA-93 low-expression group,and the differences were statistically signifi-cant(P0.05).Serum miRNA-93 level was positive correlated with tumor diameter,degree of differentiation,TNM stage,and lymph node metastasis of gastric cancer patients(P0.01).The incidence of poor prognosis in the miRNA-93 high-ex-pression group was higher than that in the miRNA-93 low-expression group(P0.05).Serum miRNA-93 high expressionwas an independent risk factor for poor prognosis in patients with gastric cancer(OR=2.488,P0.05).ConclusionConclusionSe-rum miRNA-93 level has moderate diagnostic value for gastric cancer.The expression level of miRNA-93 is correlatedwith the clinical characteristics of gastric cancer patients,and its high expression is a risk factor for poor prognosis.Key words:Key words:gastric cancer;miRNA-93;clinical characteristic;prognosisOncol Prog,2022,20(24)#通信作者（corresponding author），邮箱：2545癌症进展2022年12月第20卷第24期胃癌是消化系统中常见且高发的恶性肿瘤，全球范围内胃癌的病死率居全部恶性肿瘤第2位1-3。近年来中国胃癌的发病率呈逐年升高趋势4-5。随着中国全民健康意识和胃癌治疗水平的不断提高，中国胃癌的病死率得到有效控制，但中国欠发达地区的胃癌发病率和病死率仍然较高。早期胃癌多无典型症状，易与胃部良性疾病混淆，因此容易漏诊或误诊。微小RNA（microRNA，miRNA）是一类非编码RNA，具有2023个核苷酸序列，通过与靶mRNA的互补配对在转录后水平对基因的表达进行负调控6-8。miRNA在细胞的生长、分化等过程中具有重要作用，可影响多种恶性肿瘤细胞的增殖、浸润及转移。miRNA-93是miRNA家族成员之一，其高表达可促进胃癌细胞、食管癌细胞、骨肉瘤细胞、鼻咽癌细胞等多种恶性肿瘤细胞的增殖。miRNA-93 高表达还与诸多恶性肿瘤的远处转移密切相关。本研究探讨胃癌患者的血清miRNA-93水平及与临床特征和预后的关系，现报道如下。1 1资料与方法资料与方法1 1.1 1 一般资料一般资料选取2017年1月至2019年6月濮阳市第二人民医院收治的胃癌患者。纳入标准：符合第8版外科学9和 胃癌病理分型和诊断标准的建议10中胃癌的诊断标准；经胃镜病理或手术病理确诊为胃癌；临床资料完整。排除标准：合并其他恶性肿瘤；留存血样时处于感染性疾病急性期、心脑血管疾病急性期、重大外伤后14天以内；合并血液系统疾病；入院前3个月内有放化疗等抗肿瘤治疗史；复发胃癌；出现远处转移；失访；确诊后放弃治疗。依据纳入和排除标准，本研究共纳入82例胃癌患者，作为恶性组。选取同期接受治疗的82例胃部良性疾病患者，作为良性组。恶性组中，男56例，女26例；年龄4576岁，平均（59.218.12）岁。良性组中，男49例，女33例；年龄4673岁，平均（58.967.74）岁；疾病类型：慢性萎缩性胃炎47例，胃溃疡31例，反流性胃炎4例。两组患者的性别、年龄比较，差异均无统计学意义（P0.05），具有可比性。本研究经医院伦理委员会审批通过，所有患者均知情同意并签署知情同意书。1 1.2 2 检测方法检测方法采 集 两 组 患 者 的 静 脉 血，3000 r/min 离 心10 min，获得血清，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（quantitative reverse transcription-poly-merase chain reaction，qRT-PCR）检 测 miRNA-93相对表达量。依据 miRNeasy Serum/Plasma Kit 试剂盒说明书提取总 RNA，使用分光光度仪测定总RNA浓度及纯度。按照逆转录试剂盒miScript RT Kit说明书步骤完成逆转录合成cDNA。使用 miScript SYBR Green PCR Kit 试剂盒进行实时定量聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）。反 应 条 件：95 10 min，95 10 s，60 1 min，共 45 个循环。miRNA-93 上游引物5-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3，下游引物5-ACGUGACACGUUCGGAGAAATT-3；U6 上 游引 物 5-TGCGGGTGCTCGCTTCGGCAGC-3，下游 引 物 5-CCAGTGCAGGGTCCGAGGT-3。以U6 为 内 参，采 用 2-Ct法 计 算 血 清 miRNA-93水平。1 1.3 3 观察指标观察指标比较良性组和恶性组患者的血清miRNA-93水平，分析其对胃癌的诊断价值。以血清miRNA-93水平的中位值为界，将胃癌患者分为miRNA-93高表达组和miRNA-93低表达组，比较两组患者的临床特征，分析血清miRNA-93水平与胃癌患者临床特征的相关性。随访3年，记录胃癌患者预后，以病情未进展为预后良好，病情进展或死亡为预后不良，分析血清miRNA-93水平与胃癌患者预后的关系。1 1.4 4 统计学方法统计学方法采用SPSS 25.0软件对数据进行统计分析，采用K-S检验分析计量资料的分布状态，符合正态分布的计量资料以均数标准差（x-s）表示，组间比较采用t检验。计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用2检验。采用受试者工作特征（receiv-er operating characteristic，ROC）曲线及曲线下面积（area under the curve，AUC）分析miRNA-93对胃癌的诊断价值，AUC0.9 为较高诊断价值，0.7AUC0.9 为中等诊断价值，0.5AUC0.7 为较低诊断价值，AUC0.5为基本无诊断价值。相关性分析采用 Spearman 相关分析，以|r|0.3 为具有相关性，越接近 1，相关性越显著。采用 Cox 比例风险回归模型分析血清 miRNA-93 水平与胃癌患者预后的关系，OR1为危险因素，OR1为保护因素。以P0.05为差异有统计学意义。2 2结果结果2 2.1 1 血清血清miRNA-miRNA-9393水平的比较水平的比较恶性组患者的血清 miRNA-93 水平为（3.781.32），明显高于良性组患者的（2.100.42），差异有统计学意义（t=10.948，P0.01）。2 2.2 2 血清血清miRNA-miRNA-9393水平对胃癌的诊断价值水平对胃癌的诊断价值血清 miRNA-93 水平对胃癌具有中等诊断价值，AUC 为 0.852（95%CI：0.7810.923），其诊断胃癌的cut-off值为2.985，灵敏度为76.83%，特异度为95.12%。（图1）2546ONCOLOGY PROGRESS,Dec 2022 V ol.20 No.242 2.3 3 miRNA-miRNA-9393高表达组和高表达组和miRNA-miRNA-9393低表达组胃低表达组胃癌患者临床特征的比较癌患者临床特征的比较82 例胃癌患者的血清 miRNA-93 水平中位值为 4.055，据此划分为 miRNA-93 高表达组 40 例和miRNA-93低表达组42例。两组患者的年龄、性别比较，差异均无统计学意义（P0.05）；miRNA-93高表达组中肿瘤直径5 cm、低分化、期、有淋巴转移的患者比例均高于miRNA-93低表达组，差异均有统计学意义（P0.05）。（表1）2 2.4 4 血清血清 miRNA-miRNA-9393 水平与胃癌患者临床特征的水平与胃癌患者临床特征的相关性相关性血清miRNA-93水平与胃癌患者的肿瘤直径、分化程度、TNM分期、淋巴结转移情况均呈正相关（r=0.557、0.609、0.610、0.655，P0.01）。2 2.5 5 血清血清miRNA-miRNA-9393水平与胃癌患者预后的关系水平与胃癌患者预后的关系胃癌患者中预后不良39例，miRNA-93高表达组患者预后不良发生率为 60.00%（24/40），高于miRNA-93低表达组患者的35.71%（15/42），差异有统计学意义（2=4.845，P=0.028）。Cox比例风险回归分析显示，血清miRNA-93高表达是胃癌患者预后不良的独立危险因素（OR=2.488，95%CI：1.7173.604，P0.05）。3 3讨论讨论胃癌以中老年人为主要发病群体，起病隐匿，早期多无典型表现，因此早期诊断率有待提高。近年来中国胃癌的治疗水平不断提高，早期和中期胃癌患者多可通过规范化手术治疗获得理想预后，早诊断、早治疗对提高胃癌患者生存率具有重要意义。病理检查是胃癌诊断的金标准，但取材难度高，重复性不佳，适用范围受到一定限制。因此，寻找一种易于操作，灵敏度、特异度和准确度均较高的诊断方式对胃癌的诊断和治疗具有重要意义。研究表明，miRNA参与恶性肿瘤细胞的生长、分化和侵袭过程11-12。由于miRNA是一类广泛存在于机体中的小片段非编码RNA，在血清中具有较高的稳定性，不易被酶降解，亦不易受外界因素的干扰，因此，血清miRNA可作为多种恶性肿瘤诊断与病情判断的分子标志物13-15。临床上已有诸多miRNA作为各种恶性肿瘤早期诊断、病情判断及预后评估的分子标志物16-18。王丹等19研究表明，血清miRNA-187-3p可作为肝细胞癌早期诊断、预后评估的生物标志物。王静等20研究发现，血清miRNA-223 可为胃癌的临床诊断提供重要参考。但目前临床上关于诊断胃癌的血清miRNA标志物尚无统一定论。miRNA-93是miRNA-106b-25簇的一个重要成员，在消化系统恶性肿瘤中异常表达，其表达水平可能与胃癌患者的临床特征和预后有关。miRNA-93 作为肿瘤基因可促进恶性肿瘤细胞生长。miRNA-93是一种致癌基因，可通过促进B细胞淋巴瘤-2等抗肿瘤细胞凋亡蛋白的合成发挥促进肿瘤生长、侵袭及肿瘤新生血管生成等作用。因此，抑制miRNA-93的表达能够促进肿瘤细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖、迁移。本研究结果表明，胃癌患者血清miRNA-93水平明显高于胃部良性疾病患者，提示miRNA-93在胃癌的发生发展过程中发挥重要作用。本研究结果显示，血清miRNA-93水平对胃癌具有中等诊断价值，AUC 为 0.852（95%CI：0.7810.923），其诊断胃癌的cut-off值为2.985，灵敏度为76.83%，特异度为 95.12%。miRNA-93 高表达组中肿瘤直径5 cm、低分化、期、有淋巴转移的患者比例均高于 miRNA-93 低表达组，差异均有统计学意义（P0.05），提示血清 miRNA-93 高表达胃癌患者的肿瘤较大、分化程度较低、临床分期较高且易出现淋巴结转移。相关性分析结果显示，血清miRNA-93 水平与胃癌患者的肿瘤直径、分化程度、TNM 分期、淋巴结转移情况均呈正相关（P0.01），提示检测胃癌患者的血清miRNA-93水平能表表1 1miRNA-miRNA-9393高表达组和高表达组和miRNA-miRNA-9393低表达组胃癌患者低表达组胃癌患者临床特征的比较临床特征的比较临床特征年龄（岁）6565性别男女肿瘤直径（cm）55分化程度高中分化低分化TNM分期淋巴结转移无有miRNA-93高表达组n=40，n（%）23（57.50）17（42.50）31（77.50）9（22.50）14（35.00）26（65.00）7（17.50）33（82.50）22（55.00）18（45.00）18（45.00）22（55.00）miRNA-93低表达组n=42，n（%）20（47.62）22（52.38）25（59.52）17（40.48）6（14.29）36（85.71）18（42.86）24（57.14）34（80.95）8（19.05）32（76.19）10（23.81）2值0.8023.0574.7676.2166.3738.376P值0.3700.0800.0290.0130.0120.004图图1 1血清血清miRNA-miRNA-9393水平诊断胃癌的水平诊断胃癌的ROCROC曲线曲线灵敏度0.20.40.60.81.001-特异度0.40.81.0miRNA-93参考线0.200.62547癌症进展2022年12月第20卷第24期够为评估患者临床特征提供必要参考。随访3年，miRNA-93 高表达组患者预后不良发生率高于miRNA-93低表达组患者（P0.05）；Cox比例风险回归分析显示，血清miRNA-93高表达是胃癌患者预后不良的独立危险因素（OR=2.488，95%CI：1.7173.604，P0.05）。说明血清 miRNA-93 异常升高可提示胃癌患者预后不良，为临床治疗方案的选择提供重要参考。综上所述，血清miRNA-93水平对胃癌具有中等诊断价值，其与胃癌患者的临床特征具有相关性，其高表达是胃癌患者预后不良的危险因素。因此，临床上对于血清miRNA-93高表达的胃癌患者应根据其具体情况给予规范化综合治疗，以最大限度地改善患者预后，延长患者生存期。参参 考考 文文 献献1 Jafari N,Abediankenari S,Hosseini-Khah Z,et al.Expres-sion patterns of seven key genes,including-catenin,Notch1,GATA6,CDX2,miR-34a,miR-181a and miR-93in gastric cancerJ.Sci Rep,2020,10(1):12342.2 Sun J,Yong J,Zhang H.microRNA-93,upregulated in se-rum of nasopharyngeal carcinoma patients,promotes tumorcell proliferation by targeting PDCD4J.Exp Ther Med,2020,19(4):2579-2587.3 Yang W,Bai J,Liu D,et al.MiR-93-5p up-regulation is in-volved in non-small cell lung cancer cells proliferation andmigration and poor prognosisJ.Gene,2018,20(647):13-20.4 杨洁,彭志红,吴宏博.miR-93表达与内镜黏膜下剥离术治疗老年早期胃癌预后的关系及其靶向抑癌基因的生物信息学分析J.中国内镜杂志,2020,26(9):11-18.5 路明,李艳丽,高峰,等.胃癌患者淋巴转移与RacGAP1及MCRS1在组织中表达的关系及意义J.中国实验诊断学,2018,22(1):63-66.6 李林,郭红艳,孙晓杰,等.miR-4485-3p和miR-1469在胃癌患者血清中的表达及临床意义J.中国临床药理学杂志,2021,37(18):2401-2404.7 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