电镜制样(自己整理).docx

SPI-PON 812常规电镜制样流程
实验前准备：
青霉素瓶、枪头、移液枪、量筒、注射器、吸管、滤纸、牙签、包埋模具、烧杯、废液缸、玻璃棒（除一次性耗材外，均需严格洗涤干净，烘干后备用）。
实验步骤（包埋前步骤均在4°C冰箱中进行）：
A．取材及固定：用锋利刀片将样品切成1 mm3的小块，取材后尽快放入预冷的戊二醛固定液中，抽真空后，换新鲜的固定液于4°C冰箱中固定24 h（根据材料不同，固定时间不一致）。
B．漂洗：用0.1 M的PB缓冲液漂洗三次，每次30 min。
C．后固定：用1%四氧化锇，于4°C冰箱后固定4 h（根据材料不同，固定时间不一致）。
D．漂洗：用0.1 M的PB（pH=7.2）缓冲液漂洗三次，每次20 min。
E．梯度丙酮脱水：每次20 min。
F．渗透：丙酮：SPI-PON 812=3:1；丙酮：SPI-PON 812=1:1；丙酮：SPI-PON 812=1:3；纯SPI-PON 812。每次12 h。
G．包埋及聚合：将纯树脂小心灌至包埋模具内（每个孔0.3 ml），防止产生气泡，影响聚合。用牙签将组织样品小心挑出，置于包埋模具内，调整好方向，做好标记，于45°C烘箱过夜，次日烘箱温度调至60°C，聚合2 d（注：在包埋前将包埋所需牙签、滤纸、包埋模具等37°C烘箱中干燥6 h）。