蜂蜜中氟胺氰菊酯残留量的测定.pdf

刘苋岩，等：蜂蜜中氟胺氰菊酯残留量的测定 4 5 蜂 蜜 中氟胺 氰菊 酯残 留量 的测定 刘芄岩 史文礼 赵孟彬(1 北京锦绣大地检测中心，北京1 0 0 0 3 9：2 河北大学化学与环境科学学院，保定0 7 1 0 0 2)摘要蜂蜜样品经过碱解、溶剂提取、固相 萃取净化处理后，用配有双柱双电子捕获检测器的气相 色谱仪测定 其中氟胺氰菊酯的残留量。利用气相 色谱 一质谱联 用仪验证 了氟胺氰 菊酯的两个旋光异构体的存在：通过 0 0 1、0 1和 0 2 mg k g 3个水平的添加 实验，在 HP一5 0 和 H P一1色谱柱上测 定，回收率分别为 8 6 3 9 5 3 7、8 2 8 3 9 1 4 检 出限分 别 为 0 0 0 7、0 0 0 3 m g k g，R S D 5 (n=3)。关键词 气相 色谱测定蜂 蜜 氟胺氰菊酯残 留 氟胺氰菊酯(fl u v a l i n a t e)化学名 为 一 2 一 氯4一 (三氟甲基)苯基D 一 缬氨酸()一 氰基一(3 一 酚氧 苯基)甲基酯，是一种高效广谱 的拟除虫菊酯类杀 虫、杀螨剂，常用于防治蜂螨。蜂螨吸取蜜蜂身上的 血淋巴，影响蜜蜂的生长，严重时造成蜂群数量剧 减，给养蜂业造成巨大的损失。在用氟胺氰菊酯防 治蜂螨的过程中，使用不当会在蜂蜜中造成残留或 污染，影响出口。目前澳大利亚、欧盟都将蜂蜜中氟 胺氰菊酯的残留作为蜂蜜检测的项 目之一，欧盟规 定蜂蜜中氟胺氰菊酯的最高残留限量为 0 0 2 m r,。有关蜂蜜 中氟胺氰菊酯(以下简称为 F L U)的 残留测定，主要有气相色谱法、气相色谱 一 质谱 法、液相色谱法。气相色谱法用液 一液分配 的提取纯化方法，检出限高，操作步骤多，易造成损 失，而且在以上文献中，均没有将异构体分离出来的 报道。笔者采用碱解、溶剂提取、固相萃取(S P E)净 化的前处理方法，用装有双柱双电子捕获检测器 的 气相色谱 仪(G CE C D)测定蜂 蜜 中 F L U的残 留 量，不仅具有操作简便快捷，检出限低的优势，而且 分离条件也得到了改善，可以将 F L U的两个旋光异 构体很好地分离，满足了进出 口蜂蜜中 F L U残 留的 检测要求。1 实验部分 1 1 主 要 仪 器 与 试 剂 双通道气相色谱仪：H P 6 8 9 0型，配电子捕获检 测器(E C D)，美国安捷伦公司；气相色谱 一 质谱联用仪：H P 6 8 9 0 5 9 7 3 N型，配 有 自动进样器和色谱工作站(R e v A 0 9 0 1)，美 国安捷伦公司；低温高速离心机：3 K 3 0型，美国 S i g m a公司；V I S I P R E P TMD L固相萃取装置：美 国 S u p e l c o公 司：涡旋混合器：北京金北德_ 贸有限公司；丙酮、正己烷：均为色谱纯，美国 M e r c k公司；N a O H：分析纯，北京化学试剂厂；F L U标准储备溶液：5 0 0 g m L。准确吸取 1 0 0 0 g m E F L U标准溶液 0 5 0 m L，用正 己烷(农 业部 环境 监 测 总站)定 容 至 l 0 0 0 m L，储 存 于 一l 8 冰箱中；固相萃取小柱：F l o r i s i l S e pP a k型 S P EF L 柱，内装 1 g 填料，容量为 6 m L，美国 V a r i a n 公司；实验用水为蒸馏水经纯水机(M i l l i p o r e)进一步 纯化的去离子水。1 2 分析条件 1 2 1 G C测定条件 色谱柱：(1)H P一 5 0 柱，固定相为二苯基硅氧 烷 一二甲基硅氧烷(1：1)共聚物，3 0 m 0 2 5 m m i d ，0 2 5 m，(2)H P一1柱，固定相为聚二 甲基硅 氧烷，3 0 m 0 2 5 m m i d ，0 2 5 m；柱温：初始温 度 1 5 0，保持 2 m i n，以 5 m i n的速率 升温 至 2 8 0 C，保持 1 2 m i n；进样 口温度：2 5 0 C；进样方式：分流进样；分流比：2 0：1；检测器温度：3 2 0 C；载气：高纯 N 2；柱 流速：1 0 m L m i n；N 2 补 充气流速：6 0 m L m i n；进样量：1 0 L。1 2 2 G CMS测定条 件 色谱柱：H P一 5 M S型，固定相为二苯基硅氧烷 一二 甲基硅氧烷(5：9 5)共 聚物；柱 温：初始温度 1 5 0，保 持 1 m i n，以 4 m i n 的速 率 升 温 至 2 5 0，保持 1 5 m i n；进样 口温度：2 2 0 C；进样方式：不分 流 进 样；离 子 源 温 度：2 3 0 C；四极 杆 温 度：1 5 0；接 口温度：2 8 0；电子能量：7 0 e V；进样量：收稿日期：2 0 0 4 0 8 1 2 维普资讯 http:/ 化学分析计量 2 0 0 4年，第 1 3卷，第 6期 1 0 f x L。1 3 实验 方 法 1 3 1 系列标 准溶液 的配制 用正己烷将 5 0 0 m L F L U标准储备溶液稀 释成 1 0 0 g m L F L U标准溶液，再逐级稀释成浓 度为 0 O 1、0 0 5、0 1、0 2、0 5、1 0 fx g mL的 F L U 系列标准T作溶液。1，3 2 样品的前处理(1)样品的提取 准确称取 1 0 O 0 g 蜂蜜样品于 5 0 m L具塞离心 管中，加入 1 m o l L N a O H溶液 1 0 m L，涡旋混合 1 m i n，加入丙酮 一正己烷(1：2)1 0 m L，涡旋4 0 6 0 s，在室温下，离心 3 m i n 后取出，用移液枪将溶剂层完 全转移至烧杯中，再用 1 0 m L丙酮 一正 己烷(1：2)萃取，合并两次萃取溶液。(2)样品净化 S P EF L柱条件化：先用 5 m L丙酮 一 正 己烷(1：4)冲洗，控制每秒 1 滴的流速，待近干时，加入 5 m L正己烷，使溶剂滴至近干，待用。将上述烧杯 中 的萃取溶液在(5 01)水浴中用氮气吹至近干，加入2 m L正己烷溶解残余物，将此溶解物加到已活 化好 的 S P EF L柱 中，然 后 用 81 0 mL丙 酮 一正 己烷(1：4)分 3次洗涤烧杯，过柱，收集滤液于 1 0 m L离心管中。将滤液在(5 01)的水浴 中用氮 气浓缩，用正己烷定容至 5 0 m L，倒人气相色谱样 品瓶中进样测定，用标准工作曲线法定量。2 结果与讨论 2 1 样品前 处理 方法 蜂蜜中含有丰富的糖类和有机酸，很粘稠，不利 于分析物的提取和分离，因此需要进行碱解，而 F L U 在碱溶液 中易 分解，所 以加 入碱 溶液 后不 易放 置 时 间过长，以免影响提取效率和 回收率。通过不同的 碱液浓度试验发现，当碱液的浓度低于 0 1 m o l L 时，因为碱解不充分，萃取时形成乳化层而影响回收 率。试验结果表明，处理 1 0 O 0 g 蜂蜜样品时，用 1 0 m L 1 m o l L N a O H溶液碱解 1 m i n，回收率较高。2 2色谱 柱的选择 取0 2x g m L的 F L U标准工作溶液 1 0 L，分 别注入 H P一 5 0 和 H P一1 两根不同极性的色谱柱 中，所得色谱图如图 1、图 2所示。F L U的两种异构 体在 H P一 5 0 色谱柱上的保留时间分别为3 5 1 7 7、3 5，5 9 8 m i n，在 H P一1色谱柱上的保 留时间分别为 2 8 3 7 3、2 8 4 8 1 mi n 3 2 3 4 3 6 3 8 3 O tm 1 n 图 I 使用 H P一 5 0 柱氟胺氰菊酯的色谱图 2 6 2 3 0 3 2 t m i n 图 2 使用 H P一 1 柱氟胺氰萄酯的色谱图 F L U的两种异构体在 H P一 5 0 柱上能实现完 全分离，而在 H P一1 柱上的响应值更高。如果分别 测定两种异构体的含量，选择 H P一5 0 色谱柱进行 分析较好，如果将两种异构体作为整体分析，使用 H P一1 柱可以提高分析的灵敏度。2 3 F L U异构体 的辨 别 为了验证 F L U的两种异构体，对 F L U标准溶液 进行 G CM S分析，发现两个色谱峰的质谱图一致，说明是 F L U的两种旋光异构体，这与文献 6 介绍 的情况相符。F L U的总离子流色谱图和质谱图分别 见图 3、图 4、图 5。图 4和 图 5中，m z 5 0 2和 m z 5 0 4分别为分子离子及其同位素离子，特征峰 m z 2 5 0和 m z 2 5 2为氟胺氰菊酯基 O t 碳一碳键断裂生 成的两个碎片离子，m z 2 5 2同时又是 m z 2 5 0的含 氯同位素离子，碎片离子 m z 1 8 1、2 0 9和 2 5 2的丰 度在两个异构体中略有差别。3 6 2 3 -乙 lI 。1 0 1 5 2 O 2 5 3 O 3 5 4 0 r mi n 图 3 氟胺氰菊酯的总离子流色谱图 1 81 2 O 9 s1 4116 1 1 l l I 2 8 l 50 2 L 1 0 1 0 0 1 5 0 2 0 0 2 5 0 30 0 3 5 0 40 0 4 5 0 5 0 0 1 z 图 4 保留时间为 3 6 2 3 l n i n 的色谱峰对应的质潜图 维普资讯 http:/ 刘芄岩，等：蜂蜜中氟胺氰菊酯残 留量的测定 4 7 5 7 1 1 5 1 4 1】J Lt l 山 5 0 l 0 0 l 5 0 3 2 7 2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0 4 0 0 4 5 0 5 0 0 m ：图 5 保 留时 间 为 3 6 6 8 mi n色谱 峰对 应 的质谱 图 2 4标准工作 曲线 将 F L U系列标准溶液进行气相色谱分析，以峰 面积对浓度作图，得到 F L U的标准T作曲线，H P一 5 O 柱对应的线性方程为Y=4 8 4 4 0 1 +1 6 5 1，相关系数为 0 9 9 9 4；H P一1 柱对应的线性方程为 y =3 9 7 7 7 x+3 O 2 6，相关系数为 0 9 9 9 3。线性范 围均为 01 O g mL。2 5加 标 回收 试 验 准确称取 1 O 0 0 g 样品，分别加入相 当于测试 样品中含 F L U 0 O 1、0 1 0和 0 2 0 m g k g水平 的 F L U标准溶液，混合均匀，按上述方法进行提取、净 化和测定，每个添加水平重复 3次，在不同极性的两 根色谱柱上均得到了比较理想 的回收率，测定结果 的相对标准偏差低于 5 ，测试结果列于表 1。信噪 比为 3时，最 低检 出限 在色 谱 柱 H P一5 0 上 为 0 0 0 7 mg k g，在 H P一1上为 0 0 0 3 mg k g。3 结 论 用现行的标准方法 进行实验，用正己烷饱和 过的乙腈萃取代替 S P E F L柱净化步骤，回收率只 能达到 7 0 左右，检出限仅达到 0 0 1 m g k g，而且 操作过程繁琐。通过对提取纯化方法的改进和仪器 分离条件的探索，分辨率得到提高。通过对 8 O个蜂 蜜样品的测定，证 明此方法适用于蜂蜜中F L U 残留 表 1 蜂蜜中氟胺氰菊酯回收率(1 1=3】HP一5 0 柱 H P一1柱 加入量 m g k g。F L U 平均回收 R S D F L U 平均回收 R S D 室 率 F LU l 86 3 4 56 F LU l+O Ol 8 2 83 3 6l F LU 一2 87 2 7 4 1 2 FL U 一2 F LU l 9 5 2 3 7 6 F LUl+O l 91 4 0 2 7 3 Fl U 一2 9 5 3 7 3 3 l FL U 一2 FL U l 90 2 3 3 2l F LU l+O 2 8 6 63 O 9 3 F LU 一2 88 2 3 2 0 4 FI U 一2 的检测，它具有较好的回收率、良好的重现性、较低 的检出限(O o 0 3 IT Ig k g)，因此，能够满足国内市场 蜂蜜产品的检测和进出 口蜂蜜的检测要求，也可 以 作为 日常的例行分析。两种异构体中几个特征离子 的丰度差异有待于进一步研究。参 考 文 献 1 Me nk i s s o g l eS p i r o un di UDl a ma nt i d i s G CGe o r g i o u V Ee t a 1 De t e r tni n a t i o n o f ma l a t h i o n，Co u ma ph o s，a n d flu v a l i n a t e r e s i d u e s i n h o n e y b y g a s c h r o ma t o g r a ph wi t h n i t r o g e n p h o s ph o r u s o r e l e c t r o n c a p t u r e d e t e c t o r s J o u rna l o fA OA C I n t e rna t i o n a l，2 0 0 0 8 3(1)：1 7 8 2 S N 0 6 9 1 1 9 9 7 出口产品中氟胺氰菊酯残留量检验方法 3 J i m r n e z B e r n a l L C h a r a c t e r i z a t i o n o f ti m ra l in a t e r e s i d u e s i n h o n e y b y g a s c h r o ma t o gra p h y a t o mi c e mi s s i o n de t e c t i o n a n d g a s c h r 0 ma t o g r a p h y ma s s s p e c t r o m e t r y J o u rna l o f Hi g h R e s o l u t i o n C h r o ma t o gra p h y，1 99 5 1 8：3 6 7 4 Ma r t e l A CZe g g a n e SDe t e r mi n a t i o n o f a c a r i c i d e s i n h o n e),b y h i g h p e rf o r ma nc e l i qu i d c h r o ma t o gra ph y wi t h p h o t o d i o d e a r r a y d e t e e-t i o n J o u rna l o f C h roma t o gra p h y，2 0 0 2 A 9 5 4：7 3 5 Ko na E，Ba k k a li A，Be r r u e t a L A，e t a 1 S t u d y o f s e mi-a u t o ma t e d s o l i d-p ha s e e x t r a c t i o n f o r t h e d e t e r mi n a t i o n o f a c a r i c i d e r e s i d e s i n h o n e y b y l i q u i d c h rom a t o gra p h y J o u rna l o f C h r o ma t o g r a p h y，2 0 0 1 A 9 3 0：21 6 冯建跃，陈关喜，吴清洲 等 氟胺氰菊酯定性定量分析 分析化 学，2 0 0 1 2 9(1 1)：1 2 9 2 DETEI D ATI oN oF FLUVALD ATE RES)UE I N HoNEY BY GAS CHRoM AToGRAPHY L i u P e n g y a n。一S h i We n l i Z h a o Me n g b i n (1 B e ij i n g G l o ri o u s L a n d A n a l y t i c a l C e n t e r，B e i j i n g 1 0 0 0 3 9 C h i n a；2 C o l l e g e o f C h e mi s t a n d E n v i r o n me n t a l S c i e n c e，He b e i Un i v e r s i t y B a o d i n g 0 7 1 0 0 2C h i n a)AB S T RACT F l u v a l i n a t e r e s i d u e i n h o n e y w a s d e t e r mi n e d b y g a s c h r o ma t o g r a p h y(G C)w i t h t w i n c o l u mn s a n d t w i n e l e c t r o n c a p t u r e d e t e c t o r s(E C D)a f t e r h o n e y s a mp l e w a s p r e p a r e d b y a l k a l i z i n g w i t h 1 mo l L N a O H s o l u t i o n e x t r a c t i n g w i t h a c e t o n e h e x a n e (1：2)，a n d c l e a n i n g u p w i t h a F l o r i s i l s o l i dp h a s e e x t r a c t i o n(S P E)c a a r i d g e T w o o p t i c a l i s o me r s o f fl u v a l i n a t e w e r e s e p a r a t e d c o mp l e t e l y wi t h HP一5 0 a n d HP一5 MS c o l u mn s a n d c o n fi rm e d b y g a s c h r o ma t o g r a p h yma s s s p e c t r o me t r y Re c o v e r)e x p e rime n t s we r e c a i e d o u t a t t h r e e l e v e l s 0 01 0 1 a n d 0 2 n l g k g Av e r a g e r e c o v e rie s w e r e i n t h e r a n g e o f 8 6 3 一 9 5 3 7 a n d 8 2 8 3 91 4 r e s p e c t i v e l y f o r t h e HP一5 0 a n d l t Pl c o l u mn T h e l i l n i t s o f d e t e c t i o n we r e 0 0 0 7 mg Z k g a n d 0 0 0 3 m k g r e s p e c t i v e l y T h e r e l a t i x，e s t a n d a r d d e v i a t i o n c o e ffic i e n t o f v a ri a t i o n(R S D)w a s l e s s t h a n 5 (H=3)KEYW ORDS g a s c h r o ma t o g r a p h y，d e t e rm i n a t i o n，h o n e),，flu v a l i n a t e r e s i d u e 维普资讯 http:/