人体解剖生理学实验基本操作1016概述.pptx

人体解剖生理学实验基本操作常用的实验动物常用的实验动物动物的捉持动物的捉持动物的秤重动物的秤重实验动物分组及编号的标记方法实验动物分组及编号的标记方法动物的麻醉动物的麻醉实验动物的给药方法实验动物的给药方法实验动物的取血方法实验动物的取血方法实验动物的处死方法实验动物的处死方法常用的实验动物常用的实验动物小鼠小鼠在哺乳类实验动物中，在哺乳类实验动物中，由于小鼠体小，饲养由于小鼠体小，饲养管理方便，易于控制，管理方便，易于控制，生产繁殖快，研究最生产繁殖快，研究最深，有明确的质量控深，有明确的质量控制标准，已拥有大量制标准，已拥有大量的近交系、突变系和的近交系、突变系和封闭群，因此在各种封闭群，因此在各种实验研究中，用量最实验研究中，用量最大，用途最多。大，用途最多。常用的实验动物大鼠大鼠白化型大鼠在生物医学研白化型大鼠在生物医学研究中占据着重要的地位，究中占据着重要的地位，常用的大鼠近交品系有十常用的大鼠近交品系有十几个如几个如ACIACI、BVFBVF、F344F344、PAPA、M520M520、WABWAB、WACWAC、WKAWKA、SDSD、RFRF等品系。等品系。常用的非近交的纯种大鼠常用的非近交的纯种大鼠有有7 7种，其中以种，其中以WistarWistar大鼠大鼠用得最多，我国医药研究用得最多，我国医药研究中应用也比较广泛。此种中应用也比较广泛。此种大鼠白色，相当于小鼠的大鼠白色，相当于小鼠的瑞士（瑞士（SwissSwiss）种。）种。常用的实验动物豚鼠豚鼠豚鼠对某些药物极为敏豚鼠对某些药物极为敏感，因此它是研究这些感，因此它是研究这些药物的药物的“专门动物专门动物”。例如豚鼠对组织胺极敏例如豚鼠对组织胺极敏感，所以很适合作平喘感，所以很适合作平喘药和抗组织胺药的研究；药和抗组织胺药的研究；豚鼠对人型结核杆菌具豚鼠对人型结核杆菌具有高度的敏感性，因此有高度的敏感性，因此常用作抗结核病药物的常用作抗结核病药物的药理学研究。药理学研究。常用的实验动物家兔家兔家兔体小力弱、胆小怕惊、家兔体小力弱、胆小怕惊、怕热、怕潮，喜欢安静、怕热、怕潮，喜欢安静、清洁、干燥、凉爽的环境，清洁、干燥、凉爽的环境，不能忍受污秽的条件。家不能忍受污秽的条件。家兔对体温变化十分灵敏。兔对体温变化十分灵敏。最易产生发热反应，而且最易产生发热反应，而且发热反应典型、恒定。小发热反应典型、恒定。小鼠、大鼠和豚鼠恒温机能鼠、大鼠和豚鼠恒温机能差。对发热刺激的反应低。差。对发热刺激的反应低。有时热原性物质的刺激时。有时热原性物质的刺激时。体温反应下降。体温反应下降。常用的实验动物犬犬犬在各个方面的研究，犬在各个方面的研究，如心血管外科、脑外广如心血管外科、脑外广泛用于实验外科科、断泛用于实验外科科、断肢再植、器官或组织移肢再植、器官或组织移植等中都比较常用。犬植等中都比较常用。犬是目前基础医学研究和是目前基础医学研究和教学中最常用的动物之教学中最常用的动物之一，尤其在生理、药理、一，尤其在生理、药理、病理生理等实验研究中病理生理等实验研究中起着重要作用。起着重要作用。动物的麻醉挥发性麻醉药挥发性麻醉药乙醚乙醚乙醚麻醉的优点：深度乙醚麻醉的优点：深度易于掌握，比较安全，易于掌握，比较安全，麻醉后恢复比较快。麻醉后恢复比较快。缺点：需要专人管理，缺点：需要专人管理，麻醉初期出现强烈的兴麻醉初期出现强烈的兴奋现象，对呼吸道有较奋现象，对呼吸道有较强的刺激性，需在麻醉强的刺激性，需在麻醉前给一定量的吗啡和阿前给一定量的吗啡和阿托品（基础麻醉）。托品（基础麻醉）。非挥发性麻醉药非挥发性麻醉药苯巴比妥钠苯巴比妥钠戊巴比妥钠戊巴比妥钠氨基甲酸乙酯氨基甲酸乙酯水合氯醛水合氯醛实验动物的给药方法实验动物的给药方法皮下注射皮下注射皮内注射皮内注射腹腔注射腹腔注射肌肉注射肌肉注射静脉注射静脉注射灌胃给药法灌胃给药法实验动物的取血方法实验动物的取血方法尾静脉尾静脉眼眶动脉和静脉眼眶动脉和静脉后眼眶静脉丛连续穿刺后眼眶静脉丛连续穿刺断头断头心脏心脏颈静脉颈静脉耳缘静脉耳缘静脉大/小鼠解剖血液凝固【实验目的实验目的】本实验采用兔颈总动脉放血，通过测定各种本实验采用兔颈总动脉放血，通过测定各种条件下的血液凝固时间，了解影响血液凝固的一些因素。条件下的血液凝固时间，了解影响血液凝固的一些因素。【实验原理实验原理】血液凝固可分为内源性凝血系统和外源性凝血液凝固可分为内源性凝血系统和外源性凝血系统。内源性凝血系统是指参与凝血过程的因子全部存血系统。内源性凝血系统是指参与凝血过程的因子全部存在于血浆中，外源性凝血系统是指在组织因子参与的凝血在于血浆中，外源性凝血系统是指在组织因子参与的凝血过程。过程。【实验材料实验材料】家兔家兔兔手术台、哺乳动物手术器、动脉夹、细塑料管、兔手术台、哺乳动物手术器、动脉夹、细塑料管、2020毫升毫升注射器、注射器、25%25%乌拉坦、试管乌拉坦、试管8 8支、小烧杯支、小烧杯2 2个，竹签个，竹签1 1支、冰支、冰块、棉花，石蜡、肝素、草酸钾、生理盐水、肺组织浸液。块、棉花，石蜡、肝素、草酸钾、生理盐水、肺组织浸液。【实验方法实验方法】1 1、用乌拉坦将兔麻醉，仰卧固定于兔手术台上，分离一侧颈总动脉，上、用乌拉坦将兔麻醉，仰卧固定于兔手术台上，分离一侧颈总动脉，上端用线结扎阻断血液，下端夹上动脉夹，在动脉当中剪一小口，插入端用线结扎阻断血液，下端夹上动脉夹，在动脉当中剪一小口，插入细塑料管，结扎插管备取备用。细塑料管，结扎插管备取备用。2 2、将下列试管准备好试验用品后，每管加入血液、将下列试管准备好试验用品后，每管加入血液2 2毫升。毫升。试管试管1 1 内放少许棉花；内放少许棉花；试管试管2 2 用石蜡油润滑整个内表面用石蜡油润滑整个内表面试管试管3 3 不加任何处理不加任何处理试管试管4 4 置于有冰块的小烧杯中置于有冰块的小烧杯中试管试管5 5 内加肝素内加肝素8 8单位单位试管试管6 6 内加草酸钾内加草酸钾1-21-2毫克毫克将多余的血盛于小烧杯中，不断用竹签搅动直至纤维蛋白形成将多余的血盛于小烧杯中，不断用竹签搅动直至纤维蛋白形成3 3、记录凝血时间：每个试管加血、记录凝血时间：每个试管加血2 2毫升后，即可开始计时，每隔毫升后，即可开始计时，每隔1515秒，秒，将试管倾斜一次，观察血液是否凝固。至血液成为凝胶状不再流动为将试管倾斜一次，观察血液是否凝固。至血液成为凝胶状不再流动为止，几下所经时间即凝血时。另一烧杯内加入血液后立即用竹签搅动，止，几下所经时间即凝血时。另一烧杯内加入血液后立即用竹签搅动，去除纤维蛋白。去除纤维蛋白。5 5、6 6号试管，加入血液后，用拇指盖住试管口将管颠号试管，加入血液后，用拇指盖住试管口将管颠倒两次。倒两次。将结果及在各条件下的凝血时间按表将结果及在各条件下的凝血时间按表1 1填写，并进行解释填写，并进行解释表表1 1 各条件下凝血时间各条件下凝血时间实验仪器实验仪器编号编号实验条件实验条件结果及凝结果及凝血时间血时间解释解释试管（放血试管（放血2 2毫升）毫升）1 12 2粗糙面的影响粗糙面的影响预预先先在在试试管管内内放放入少许棉花入少许棉花预预先先用用石石蜡蜡油油润润滑滑整整个个使使馆馆内内表表面面3 34 4温度的影响温度的影响预先置于室温中预先置于室温中试试管管置置有有冰冰块块的的小烧杯中小烧杯中5 56 6试管内先加肝素试管内先加肝素8 8单位单位试管里先加草酸钾试管里先加草酸钾1-21-2毫克毫克小烧杯小烧杯（放血（放血1010毫升）毫升）放放血血于于烧烧杯杯时时用用竹竹签签不不断断搅搅动动，约约2-32-3分分钟钟后后取取出出竹竹签签，用用水水洗洗净净竹竹签签上上的的血血液液，观观察察纤纤维维蛋蛋白白，烧烧杯杯内内为为去去除除纤纤维维蛋蛋白白血血，观察其是否会发生凝血。观察其是否会发生凝血。血红蛋白含量的测定【实验目的实验目的】掌握比色法测定血红蛋白含量的方法。掌握比色法测定血红蛋白含量的方法。【实验原理实验原理】测定血红蛋白含量的方法很多，实验常用比测定血红蛋白含量的方法很多，实验常用比色法。其原理是在一定量的血液中，血红蛋白经少量盐酸色法。其原理是在一定量的血液中，血红蛋白经少量盐酸的作用，使亚铁血红素变成高铁血红素，呈现较稳定的棕的作用，使亚铁血红素变成高铁血红素，呈现较稳定的棕色。用水稀释后与标准色比较，求出每色。用水稀释后与标准色比较，求出每100ml 100ml 血液中所含血液中所含的血红蛋白克数。正常成年男子每的血红蛋白克数。正常成年男子每100ml 100ml 血液平均含血液平均含14.4g14.4g，女子为，女子为13.113.1。【实验材料实验材料】兔血，沙利氏血红蛋白计一套，采血针，玻兔血，沙利氏血红蛋白计一套，采血针，玻璃棒，滴管，璃棒，滴管，75%75%酒精，酒精，95%95%酒精，棉球，蒸馏水，乙醚，酒精，棉球，蒸馏水，乙醚，0.1N0.1N盐酸盐酸【实验方法实验方法】1 1血红蛋白计包括血红蛋白计包括标准比色架，架的两侧镶有两个棕色标准玻璃色柱。标准比色架，架的两侧镶有两个棕色标准玻璃色柱。血红蛋白稀释管，有方形也有圆形的。两侧有刻度，一侧以血红蛋白稀释管，有方形也有圆形的。两侧有刻度，一侧以g g 为计为计数单位，对侧以百分率计。数单位，对侧以百分率计。2 2用滴管加用滴管加0.1mol/LHCl 0.1mol/LHCl 于血红蛋白稀释管内，到刻度于血红蛋白稀释管内，到刻度10 10 处。处。3 3用血红蛋白吸管的尖端吸上个实验中烧杯中的血，吸血至刻度用血红蛋白吸管的尖端吸上个实验中烧杯中的血，吸血至刻度20mm3 20mm3 处（处（0.02ml0.02ml）。）。4 4用滤纸片或棉球擦净吸管口周围的血液，将吸管插入血红蛋白稀释管用滤纸片或棉球擦净吸管口周围的血液，将吸管插入血红蛋白稀释管的盐酸内，轻轻吹出血液至管底部，反复吸入并吹出稀释管内上层的的盐酸内，轻轻吹出血液至管底部，反复吸入并吹出稀释管内上层的盐酸，洗涤吸管多次，使吸管内的血液完全洗入稀释管内。摇匀或用盐酸，洗涤吸管多次，使吸管内的血液完全洗入稀释管内。摇匀或用小玻璃棒搅匀后，放置小玻璃棒搅匀后，放置10min10min，使盐酸与血红蛋白充分作用。，使盐酸与血红蛋白充分作用。5 5把稀释管插入标准比色架两色柱中央的空格中，使无刻度的两侧面位把稀释管插入标准比色架两色柱中央的空格中，使无刻度的两侧面位于空格的前后方，便于透光和比色。于空格的前后方，便于透光和比色。6 6用滴管向稀释管内逐滴加入蒸馏水（每加一滴要搅拌），边滴边观察用滴管向稀释管内逐滴加入蒸馏水（每加一滴要搅拌），边滴边观察颜色，直至颜色与标准玻璃色柱相同为止。稀释管上液面的刻度读数颜色，直至颜色与标准玻璃色柱相同为止。稀释管上液面的刻度读数即为每即为每100ml 100ml 血液血红蛋白的克数。血液血红蛋白的克数。家兔动脉血压的神经、体液调节家兔动脉血压的神经、体液调节【实验目的实验目的】1 1掌握测定动脉血压直接法及动脉插管方法。掌握测定动脉血压直接法及动脉插管方法。2 2了解温血动物的麻醉、固定及手术方法。了解温血动物的麻醉、固定及手术方法。3 3观察心血管活动的某些影响因素。观察心血管活动的某些影响因素。【实验原理实验原理】心脏受交感神经和迷走神经支配。心交感神经兴奋，对心脏产生正性变时、变力、心脏受交感神经和迷走神经支配。心交感神经兴奋，对心脏产生正性变时、变力、变传导作用，从而使心输出量增加。心迷走神经兴奋，对心脏产生负性变时、变变传导作用，从而使心输出量增加。心迷走神经兴奋，对心脏产生负性变时、变力、变传导作用，从而使心输出量减少。支配血管的植物神经主要是交感缩血管力、变传导作用，从而使心输出量减少。支配血管的植物神经主要是交感缩血管神经，其兴奋时主要引起缩血管效应，外周阻力增加。中枢通过反射活动调节心神经，其兴奋时主要引起缩血管效应，外周阻力增加。中枢通过反射活动调节心血管的活动，改变心输出量及外周阻力，从而调节动脉血压。心血管活动尚受体血管的活动，改变心输出量及外周阻力，从而调节动脉血压。心血管活动尚受体液因素的调节。其中主要有肾上腺素和去甲肾上腺素。本实验是以动脉血压为指液因素的调节。其中主要有肾上腺素和去甲肾上腺素。本实验是以动脉血压为指标，在整体条件下，施加某些因素，观察神经、体液因素对心、血管的调节作用。标，在整体条件下，施加某些因素，观察神经、体液因素对心、血管的调节作用。【实验材料实验材料】家兔家兔多道生理记录仪、血压换能器、动脉插管、三通管。兔手术台、哺乳类手术多道生理记录仪、血压换能器、动脉插管、三通管。兔手术台、哺乳类手术器破、注射器、有色丝线、纱布、棉花。器破、注射器、有色丝线、纱布、棉花。2525氨基甲酸乙酯、氨基甲酸乙酯、1 1肝素。生理肝素。生理盐水、盐水、l l万去甲肾上腺素。万去甲肾上腺素。【实验方法实验方法】1.1.麻醉和动物固定：兔称重后，按麻醉和动物固定：兔称重后，按1g1gkgkg体重的剂量由兔耳体重的剂量由兔耳缘静脉缓慢注入缘静脉缓慢注入2525氨基甲酸乙酯溶液将动物麻醉。注射过氨基甲酸乙酯溶液将动物麻醉。注射过程中注意观察动物的肌张力、呼吸频率及角膜反射的变化，程中注意观察动物的肌张力、呼吸频率及角膜反射的变化，防止麻醉过深。麻醉好的动物仰卧固定于手术台上，注意颈防止麻醉过深。麻醉好的动物仰卧固定于手术台上，注意颈部必须放正拉直。部必须放正拉直。2.2.分离颈部血管和神经：用弯剪刀剪去颈部的毛，作长分离颈部血管和神经：用弯剪刀剪去颈部的毛，作长5 57 7厘米的正中切口，钝性分离皮下组织和肌肉，即可见到气管，厘米的正中切口，钝性分离皮下组织和肌肉，即可见到气管，将气管两旁的肌肉拉开，便可在气管两侧的深部找到颈动脉将气管两旁的肌肉拉开，便可在气管两侧的深部找到颈动脉鞘，内有颈总动脉、迷走神经、减压神经和交感神经。仔细鞘，内有颈总动脉、迷走神经、减压神经和交感神经。仔细辨认并小心分离，在左侧减压神经和交感神经下穿不同颜色辨认并小心分离，在左侧减压神经和交感神经下穿不同颜色湿丝线备用然后分离双侧的迷走神经和颈总动脉，穿线备湿丝线备用然后分离双侧的迷走神经和颈总动脉，穿线备用。用。3.3.动脉插管：分离右侧颈总动脉动脉插管：分离右侧颈总动脉3 3厘米左右，近心端用动脉厘米左右，近心端用动脉夹夹闭，远心端用线结扎耳缘静脉注入肝素夹夹闭，远心端用线结扎耳缘静脉注入肝素1ml1ml，然后在，然后在结扎的近端剪一斜口，向心脏方向插入动脉插管，用线将插结扎的近端剪一斜口，向心脏方向插入动脉插管，用线将插管与动脉扎紧，防止滑脱。放开动脉夹，记录动脉血压。管与动脉扎紧，防止滑脱。放开动脉夹，记录动脉血压。观察项目观察项目 1 1、观察正常血压曲线。、观察正常血压曲线。2 2、用动脉夹夹闭左侧颈总动脉、用动脉夹夹闭左侧颈总动脉5 51010秒，观察血压变化。秒，观察血压变化。3 3、刺激减压神经：以中等强度，频率为、刺激减压神经：以中等强度，频率为10-1510-15次次/秒，波宽秒，波宽2 2毫米的连续电脉冲。刺激一次减压神经，观察血压有何变毫米的连续电脉冲。刺激一次减压神经，观察血压有何变化？然后用两根丝线在该神经中部两处接扎，并在两结扎化？然后用两根丝线在该神经中部两处接扎，并在两结扎间将神经切断，分别刺激切断后的神经中枢端和外周端，间将神经切断，分别刺激切断后的神经中枢端和外周端，观察对血压影响有何不同？观察对血压影响有何不同？4 4、刺激迷走神经：结扎并剪断双侧迷走神经，观察血压变、刺激迷走神经：结扎并剪断双侧迷走神经，观察血压变化刺激右侧外周端，观察血压变化。化刺激右侧外周端，观察血压变化。5 5、静脉注射去甲肾上腺素：由耳缘静脉注入、静脉注射去甲肾上腺素：由耳缘静脉注入1 1万去甲肾上万去甲肾上腺素腺素0.3 ml0.3 ml，观察血压变化。，观察血压变化。6 6、刺激交感神经：结扎并剪断左侧交感神经，观察左侧耳、刺激交感神经：结扎并剪断左侧交感神经，观察左侧耳都血管的变化，然后用中等强度电流连续刺激其头端，观都血管的变化，然后用中等强度电流连续刺激其头端，观察左侧耳部血管变化。察左侧耳部血管变化。尿生成的影响因素尿生成的影响因素【实验目的】1学习输尿管插管技术。2观察影响尿量的几种因素。【实验原理】尿的生成过程包括：肾小球的过滤作用；肾小管与集合管的重吸收作用；肾小管与集合管的分泌作用。在整体内，这3个过程往往受到生理性的调节。凡影响这些过程的因素，都可影响尿的生成而引起尿量的改变。【实验材料】家兔、手术台、常用手术器械、或细塑料管、刻度试管、2ml及20ml注射器、25%氨基甲酸乙酯溶液、20%葡萄糖注射液、生理盐水、垂体后叶素（5单位/ml）【实验方法】1.麻醉：家兔一只，用25%氨基甲酸乙酯（1g/kg）耳缘静脉注射，麻醉后，仰位固定于手术台上。2.插管：导尿管直接由实验动物的尿道插入，实验动物应选择雄性，插导尿管时用液体石蜡浸润后顺尿道轻轻插入膀胱。插管是若遇阻力，不可强插，应拔出重插。依次进行下列项目实验。注意：每项实验前都要记录尿量作为对照。实验观察待尿流量稳定后，即可进行下列各项实验观察。每项实验开始时，都应先记录一段尿量曲线作为对照；然后进行注射或刺激，并连续记录和观察至效应明显和恢复过程。（组间对照、自身前后对照）（1）自耳缘静脉注射的生理盐水20ml，观察尿量的变化。（2）自耳缘静脉注射20%葡萄糖液15ml，观察其变化。（3）自耳缘静脉注射垂体后叶素0.2ml，观察和记录其变化20min。(4)自耳缘静脉注射呋塞米0.2ml，观察和记录其变化20min。结果：记录兔尿量并观察其变化。小白鼠破坏小脑引起的共济失调小白鼠破坏小脑引起的共济失调【实验目的实验目的】一侧小脑损伤后的动物，躯体运动表现异常，通过对异常一侧小脑损伤后的动物，躯体运动表现异常，通过对异常运动的观察，了解小脑的机能。运动的观察，了解小脑的机能。【实验原理实验原理】小脑具有维持身体平衡，调节肌紧张和协调肌肉运动等机小脑具有维持身体平衡，调节肌紧张和协调肌肉运动等机能。当小脑损伤后，随着破坏程度的不同，可表现出不同能。当小脑损伤后，随着破坏程度的不同，可表现出不同程度的肌紧张失调及平衡失调。程度的肌紧张失调及平衡失调。绒球小结叶绒球小结叶古小脑古小脑前庭小脑前庭小脑调节肌紧张，维调节肌紧张，维持身体平衡持身体平衡小脑前叶小脑前叶旧小脑旧小脑脊髓小脑脊髓小脑控制肌肉的张力和控制肌肉的张力和协调协调小脑后叶小脑后叶新小脑新小脑大脑小脑大脑小脑影响运动的起始、影响运动的起始、计划和协调，包括确定运动的力量、方向和范围计划和协调，包括确定运动的力量、方向和范围【实验材料实验材料】小白鼠小白鼠4 4只、探针。只、探针。【实验方法实验方法】1.1.观察正常小鼠的活动情况。观察正常小鼠的活动情况。2.2.用探针破坏某一侧小脑，切勿损伤中脑，用探针破坏某一侧小脑，切勿损伤中脑，然后迅速取出探针。然后迅速取出探针。3.3.放开缚线观察小白鼠的活动情况。放开缚线观察小白鼠的活动情况。4.4.根据切除小脑的小白鼠活动情况讨论小根据切除小脑的小白鼠活动情况讨论小脑的功能。脑的功能。血脑屏障通透性实验血脑屏障通透性实验【实验目的实验目的】证实血脑屏障的存在，血液中的细菌和某些药物不易轻易证实血脑屏障的存在，血液中的细菌和某些药物不易轻易进入脑组织。进入脑组织。【实验原理实验原理】血液中某些物质部易透入脑脊液。血液中某些物质部易透入脑脊液。【实验材料实验材料】小白鼠、注射器、针头、剪刀、镊子、小白鼠、注射器、针头、剪刀、镊子、1%1%台盼兰溶液台盼兰溶液【实验方法实验方法】取小白鼠，腹腔注射取小白鼠，腹腔注射1%1%台盼兰溶液台盼兰溶液0.30.3毫升。另一只小鼠毫升。另一只小鼠腹腔注射生理盐水腹腔注射生理盐水0.30.3毫升。毫升。3030分钟后将动物处死，做全身分钟后将动物处死，做全身解剖，观察脑、脊髓与其它脏器的颜色区别？解剖，观察脑、脊髓与其它脏器的颜色区别？结果：说明这一现象产生的原因及生理意义。结果：说明这一现象产生的原因及生理意义。