超高效液相色谱-串联质谱同时快速检测生鲜牛乳中的磺胺类和氟喹诺酮类药物.pdf

书书书曲斌，陆桂萍，蒋天梅，等超高效液相色谱 串联质谱同时快速检测生鲜牛乳中的磺胺类和氟喹诺酮类药物 江苏农业科学，（）：超高效液相色谱 串联质谱同时快速检测生鲜牛乳中的磺胺类和氟喹诺酮类药物曲斌，陆桂萍，蒋天梅，耿士伟，朱志谦，吴玲（江苏省畜产品质量检验测试中心，江苏南京 ）摘要：建立了同时、快速检测生鲜牛乳中 种磺胺类药物和 种氟喹诺酮类药物的超高效液相色谱 串联质谱检测方法。生鲜牛乳经 萃取剂提取，提取液经氮气流吹干浓缩后，以超高效液相色谱 串联质谱测定，内标磺胺二甲氧嘧啶 和诺氟沙星 分别定量磺胺类和氟喹诺酮类药物。本方法对磺胺类药物和氟喹诺酮类药物的测定线性范围为 ，在低、中、高（、）个浓度的回收率为 ，批内、批间相对标准偏差（）均小于 。本方法简便、快速、灵敏，适用于生鲜牛乳中磺胺类和氟喹诺酮类药物残留的大批量筛选和定量测定。关键词：超高效液相色谱 串联质谱；氟喹诺酮；磺胺；生鲜牛乳；残留中图分类号：文献标志码：文章编号：（）收稿日期：作者简介：曲斌（），男，辽宁沈阳人，博士，兽医师，研究方向为兽药残留分析。：（）；：。在奶牛的生长过程中，一些抗生素经常会用于牛的保健和治疗感染性疾病。抗生素使用的同时也会造成其在动物的细胞、组织甚至在可食性产品（如牛乳）中的残留，通过食物链传播，同样会引起人类不良反应现象的发生，影响人类健康。磺胺类抗生素和氟喹诺酮类抗生素是常用的抗生素药物，具有抗菌谱广、抗菌作用强、适用于治疗各类感染的特点，但这些药物在牛乳中的残留将对人体构成危害，如磺胺类药物在人体中长期存在会导致细菌对磺胺类药物产生耐药性，而氟喹诺酮类对于孕妇、哺乳期妇女及儿童是禁用药物。这类药物成为相关实验室日常工作中的必检项目，建立灵敏度高、速度快、准确可靠的分析检验方法非常必要。目前，有关测定牛奶中磺胺类和氟喹诺酮类药物的方法很多，有液液萃取法 、固相萃取法 、基质固相分散法 ，分析检测方法有高效液相色谱法 、液相色谱 串联质谱法 ；但同时提取检测生鲜牛乳中这 类药物的方法报道较少 。建立快速、灵敏、简便的检测方法是兽药残留检测工作的重要内容和研究方向。年，等开发了一种快速、简单、便宜、高效、耐用和安全的农产品中农药残留样品处理方法，命名为 。自发布以来，因其简化了以前繁杂的萃取步骤并扩大了所萃取农药残留的范围，被包括 （政府农业化学家协会）在内的多个国际农药残留分析机构广泛采纳，并在农药残留领域获得了大量应用。由于样品基质的不同、兽药和农药的化学性质不同等因素，造成 在兽药残留检测领域的应用还很有限。本研究结合 方法，利用超高效液相色谱（）的快速和串联质谱（）的高灵敏度 大优点，建立了同时分析生鲜牛乳中 种磺胺类药物和 种氟喹诺酮类药物的测定方法，方法简便、快速、灵敏、实用，易于在残留分析实验室推广应用。仪器与试剂 超高效液相色谱系统（含二元高压泵、自动进样器、柱温箱和 数据处理系统）；串联四极杆质量分析器（含 数据处理系统）；氮吹仪（公司）；振荡器（公司）；离心机（公司）。萃取管（，内含硫酸镁、氯化钠、柠檬酸三钠二水结晶盐、柠檬酸氢二钠半水结晶盐）（公司）；陶瓷均质子（公司）；（）针式过滤器（公司）。磺胺醋酰（，）、磺胺甲噻二唑（，）、磺胺二甲异唑（，）、磺胺氯哒嗪（，）、磺胺嘧啶（，）、磺胺甲基异唑（，）、磺胺噻唑（，）、磺胺 甲氧嘧啶（，）、磺胺甲基嘧啶（，）、磺胺邻二甲氧嘧啶（，）、磺胺吡啶（，）、磺胺对甲氧嘧啶（，）、磺胺甲氧哒嗪（，）、磺胺二甲嘧啶（，）、磺胺苯吡唑（，）、磺 胺 间 二 甲 氧 嘧 啶（，）、磺胺喹啉（，）、磺胺二甲异嘧啶（，）、磺胺唑（，）和内标磺胺间二甲氧嘧啶 （）均购自北京振翔科技公司。诺氟沙星（，）、氧氟沙星（，）、环丙沙星（，）、恩诺沙星（，）、沙拉沙星（，）、培氟沙星（，）、双江苏农业科学 年第 卷第 期氟沙星（，）和内标诺氟沙星（）均购自北京振翔科技公司。甲醇，色谱纯（公司）；乙腈，分析纯（南京化学试剂有限公司）；甲酸，色谱纯（公司）；水为纯净水。标准溶液配制 标准储备液配制分别适量、精密称取上述 种磺胺类和氟喹诺酮类药物对照品，用甲醇溶解并制得分别含 的储备液。称取磺胺二甲氧嘧啶 和诺氟沙星 对照品适量，精密称定，用甲醇溶解，制得含 的内标储备液。工作液配制精密量取上述储备液各适量，置于同一量瓶中，经甲醇稀释，制得分别含各种磺胺类和氟喹诺酮类药物 的混合工作液。精密量取磺胺二甲氧嘧啶 和诺氟沙星 储备液适量，用甲醇稀释，制得含 的内标工作液。样品处理称取生鲜牛乳试样，置于 萃取管中，加入内标工作液 、陶瓷均质子 枚和乙腈 ，涡旋使之充分混合，振荡提取 ，下 离心 ，精密量取上清液 ，下氮气流吹干，加入 甲酸水溶液 甲醇（）溶解残渣，滤膜过滤至进样瓶中，测定。分析 超高效液相色谱条件色谱柱：，；流动相 ：甲酸水溶液；流动相 ：甲酸甲醇溶液；梯度洗脱：，流速 ；柱温：；进样量：。质谱条件电喷雾离子化，正离子检测，喷雾电压：，离子传输管温度：，鞘气流速：，辅助气流速：，碰撞气：氩气（），定性、定量选择性离子监测见表 。结果与分析 专属性分析空白牛乳的色谱图见图 ，种磺胺类药物和 种氟喹诺酮类药物及其相应内标的空白牛乳阳性添加（）的色谱图见图 。由图 可知，空白牛乳中不含有干扰测定的物质，种磺胺类药物和 种氟喹诺酮类药物及其内标分布在 之内，分离良好。标准曲线、线性范围及检出限、定量限精密量取 种磺胺类药物和 种氟喹诺酮类药物混合工作液适量，添加到 空白牛乳中，制得目标药物含量分别为 、的系列空白添加试样，按“”的样品处理步骤，依次经 分析测表 种磺胺类和 种氟喹诺酮类药物的色谱保留时间和定性定量离子参数药物名称保留时间（）定性、定量离子（）碰撞能量（）磺胺醋酰（）磺胺嘧啶（）磺胺二甲异嘧啶（）磺胺噻唑（）磺胺吡啶（）磺胺甲基嘧啶（）磺胺二甲嘧啶（）磺胺对甲氧嘧啶（）磺胺甲噻二唑（）磺胺甲氧哒嗪（）磺胺氯哒嗪（）磺胺甲基异唑（）磺胺 甲氧嘧啶（）磺胺邻二甲氧嘧啶（）磺胺二甲异唑（）磺胺苯吡唑（）磺胺间二甲氧嘧啶（）磺胺喹啉（）磺胺间二甲氧嘧啶 （）诺氟沙星（）环丙沙星（）培氟沙星（）恩诺沙星（）氧氟沙星（）沙拉沙星（）双氟沙星（）诺氟沙星 （）注：表示定量离子。江苏农业科学 年第 卷第 期江苏农业科学 年第 卷第 期江苏农业科学 年第 卷第 期定，以药物浓度为横坐标，各药物峰面积对内标峰面积的比值为纵坐标绘制标准曲线，计算回归方程和相关系数。种磺胺类药物和 种氟喹诺酮类药物在 范围内线性关系良好，各药物的回归方程及相关系数见表 。试验采用在空白牛乳中添加目标组分的方法，依据定性、定量离子色谱峰的信噪比（）大于 为检出限（），大于 为定量限（），得出各药 物 的 为 ，为 。表 牛乳中 种磺胺类药物和 种氟喹诺酮类药物的标准曲线药物名称标准曲线方程磺胺醋酰（）磺胺嘧啶（）磺胺二甲异嘧啶（）磺胺噻唑（）磺胺吡啶（）磺胺甲基嘧啶（）磺胺二甲嘧啶（）磺胺对甲氧嘧啶（）磺胺甲噻二唑（）磺胺甲氧哒嗪（）磺胺氯哒嗪（）磺胺甲基异唑（）磺胺 甲氧嘧啶（）磺胺邻二甲氧嘧啶（）磺胺二甲异唑（）磺胺苯吡唑（）磺胺间二甲氧嘧啶（）磺胺喹啉（）诺氟沙星（）环丙沙星（）培氟沙星（）恩诺沙星（）氧氟沙星（）沙拉沙星（）双氟沙星（）注：标准曲线方程中，“”为药物峰面积对内标峰面积的比值，“”为药物浓度（）。精密度试验取 、的阳性添加试样，按照“”的样品处理步骤操作，每一浓度进行个平行试验，分别考察，以相对标准偏差（）计算批内和批间精密度，结果见表 ：批内和批间 均小于 。回收率试验按“”的样品处理操作，以实测浓度与理论添加浓度之比计算各个被测物质的方法回收率，结果见表 。实际样品的分析对江苏省畜产品质量检验测试中心阳性样品基质库中的份牛乳样品（、）进行了测试，结果 份样品中含有氧氟沙星。经标准曲线计算，结果见表 ，典型色谱图见图 。同时参照国家标准 和 对此 份样品进行了测试，结果同见表 。说明此方法能够实现牛奶中氟喹诺酮类药物的残留检测。表 磺胺类和氟喹诺酮类药物的精密度测定结果药物名称 （）（）磺胺醋酰（）磺胺嘧啶（）磺胺二甲异嘧啶（）磺胺噻唑（）磺胺吡啶（）磺胺甲基嘧啶（）磺胺二甲嘧啶（）磺胺对甲氧嘧啶（）磺胺甲噻二唑（）磺胺甲氧哒嗪（）磺胺氯哒嗪（）磺胺甲基异唑（）磺胺 甲氧嘧啶（）磺胺邻二甲氧嘧啶（）磺胺二甲异唑（）磺胺苯吡唑（）磺胺间二甲氧嘧啶（）磺胺喹啉（）诺氟沙星（）环丙沙星（）培氟沙星（）恩诺沙星（）氧氟沙星（）沙拉沙星（）双氟沙星（）表 磺胺类和氟喹诺酮类药物的方法回收率药物名称方法回收率（）磺胺醋酰（）磺胺嘧啶（）磺胺二甲异嘧啶（）磺胺噻唑（）磺胺吡啶（）磺胺甲基嘧啶（）磺胺二甲嘧啶（）磺胺对甲氧嘧啶（）磺胺甲噻二唑（）磺胺甲氧哒嗪（）磺胺氯哒嗪（）磺胺甲基异唑（）磺胺 甲氧嘧啶（）磺胺邻二甲氧嘧啶（）磺胺二甲异唑（）磺胺苯酰（）磺胺苯吡唑（）磺胺间二甲氧嘧啶（）磺胺喹啉（）诺氟沙星（）环丙沙星（）培氟沙星（）恩诺沙星（）氧氟沙星（）沙拉沙星（）双氟沙星（）江苏农业科学 年第 卷第 期江苏农业科学 年第 卷第 期表 含氧氟沙星牛乳样品分析结果样品氧氟沙星测定结果（）本方法 结论超高效液相色谱 串联质谱技术以其超快速和特有的选择性离子监测模式，特别适用于在复杂基质和背景下对目标化合物的快速、批量筛选，在提供化合物定性信息的同时，也可提供准确的定量分析结果。本研究采用 萃取剂，将磺胺类和氟喹诺酮类药物同时提取，进入有机溶剂乙腈中，利用萃取剂中的无水硫酸镁和氯化钠吸附牛乳中的水分，同时乙腈使得牛乳中的蛋白质和脂肪变性，在离心后形成沉淀物。本方法简便、快速，方法的定量限满足低含量样品的测定，适用于大批量样品的快速筛选和定量测定。参考文献：孙晶玮，赵新淮牛奶中多种磺胺类抗生素残留的 快速分析 食品科学，（）：岳振峰，谢丽琪，陈小霞，等牛奶中 种喹诺酮类药物残留量的高效液相色谱 串联质谱法测定 分析测试学报，（）：吴银良，赵莉，刘勇军，等 固相萃取 高效液相色谱法同时测定牛奶中残留的 种磺胺类药物 色谱，（）：焦豪妍，许风国，田媛，等固相萃取 测定牛奶中氟喹诺酮类药物残留 中国药科大学学报，（）：乔凤霞，孙汉文，刘广宇，等基质固相分散 牛奶、蜂蜜中喹诺酮的多残留分析 河北大学学报：自然科学版，（）：胡海燕，徐倩，孙雷，等猪肉和牛奶中 种磺胺类药物残留检测超高效液相色谱法研究 中国兽药杂志，（）：曾延波，赵弟海，李蕾，等吡啶离子液体双水相 高效液相色谱法同时测定牛奶中 种喹诺酮药物残留 高等学校化学学报，（）：佘永新，刘佳佳，王 静，等超高效液相色谱 串联四极杆质谱法对牛奶中 种磺胺类药物残留的检测 分析测试学报，（）：孙雷，朱馨乐，张骊，等牛奶中七种氟喹诺酮类药物残留检测高效液相色谱 串联质谱法研究 中国兽药杂志，（）：包晓丽，任一平，张虹超高效液相色谱 电喷雾串联四极杆质谱法检测牛奶中 种喹诺酮类抗菌素 分析化学，（）：邬晨阳，韩小江 法同时测定牛奶中 种磺胺类药物和 种氟喹诺酮类兽药 中国卫生检验杂志，（）：，（）：动物源产品中喹诺酮类残留量的测定液相色谱 串联质谱法 动物源性食品中 种喹诺酮药物残留检测方法液相色谱 质谱 质谱法 櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄（上接第 页）的质量安全控制和追溯体系，提出了编码规则、数据交换格式等设计规范。在试点城市实际运行效果显示，该方案不仅为政府实现了依据各自权限对属地农产品质量进行动态监管，为企业构筑了质量控制信息平台，并且以网络、智能终端等多种形式为消费者提供服务，有效实现了对农产品质量信息的跟踪和溯源，满足了老百姓“明白消费、放心消费”的基本诉求，同时给畜牧、水产等其他类别的农产品建立质量安全可追溯系统提供了借鉴和参考。参考文献：焦林，郑纪业我国农村信息化发展现状与对策 中国农村科技，（）：涂传清，王爱虎我国农产品质量安全追溯体系建设中存在的问题与对策 农机化研究，（）：王清辉，俞彤面向服务的农产品质量控制与追溯系统架构研究 江苏农业科学，（）：殷大朋，王瑞农产品质量追溯技术和体系建设进展研究 绿色科技，（）：武尔维，郜鲁涛，杨林楠，等基于 智能终端的农产品安全追溯系统架构设计 云南大学学报：自然科学版，（增刊 ）：孙传恒，杨信廷，李文勇，等基于监管的分布式水产品追溯系统设计与实现 农业工程学报，（）：陈松，陈琼，陈永峰，等厦门市农产品质量安全追溯模式研究 现代农业科技，（）：，余华，吴振华农产品追溯码的编码研究 中国农业科学，（）：王永红基于农产品质量安全追溯的 编码应用与实现 湖北农业科学，（）：尚明华，秦磊磊，王风云，等 基于 智能手机的小麦生产风险信息采集系统 农业工程学报，（）：江苏农业科学 年第 卷第 期