超高效液相色谱-三重串联四极杆质谱分析氯霉素残留量检测方法.pdf

1 超高效超高效液相色谱液相色谱-三重串联四极三重串联四极杆杆质谱分析质谱分析氯霉素氯霉素残留量检测方法残留量检测方法 薄涛，李建中 氯霉素（Chloramphenicol）是一种广谱抗菌素，过去常用于人及动物各种传染病的治疗，对于多种病原菌有较强的抑制作用。但是，氯霉素存在着严重的副作用，能引起人类再生障碍性贫血、粒状白细胞缺乏症、新生儿灰色综合症等疾病。因此，动物源食品中氯霉素的残留对人类的健康构成了巨大的潜在威胁。世界许多国家都禁止在食用性动物中使用氯霉素。欧盟、美国等国家均在法规中规定氯霉素残留限量标准为“零允许量”（Zero tolerance），即不得检出。我国在 2000 年新版的兽药药典中以将氯霉素删除，禁止其在食用性动物中的食用。目前，欧盟规定氯霉素最低要求执行限量（MRPL）为：0.3 g/kg，即检测方法的检测低限必须不高于 0.3 g/kg。三重串联四极杆质谱是复杂基质中痕量组分定量分析的重要手段，通过多重反应监控模式（MRM）能够提供高选择性和高灵敏度的检测。建立在亚二微米粒径填料基础上的超高效快速液相色谱（RRLC）已得到广泛的应用，和 QQQ 联用能够提供高通量和高灵敏度的分离分析。本文运用UHPLC-QQQ 对动物源性食品中的氯霉素进行定量分析，通过对重复性、线形关系等方法学参数进行考察，所建立的方法能在 2.0 分钟内对氯霉素完成快速、高灵敏度的检测分析。本方法采用 Agilent 6460 QQQ 系统，利用 Jet Stream 鞘流气技术大大提高了去溶剂效果，同时减少了喷雾造成的离子扩散损失，显著的提高了离子化效率，从而大大提高了灵敏度。本方法完全满足了国内外对氯霉素药物日益严格的残留限量监测要求。1 实验部分实验部分 1.1 仪器与试剂仪器与试剂 美国安捷伦公司 6460 QQQ 质谱仪；美国安捷伦公司 1260 UHPLC。1.2 液相和质谱条件液相和质谱条件 液相色谱柱为安捷伦 Zobax Eclipse plus C18（2.1 x 50mm,1.8 um）；流动相 A 为水，B 为乙腈，梯度（B%/min）：30/0，70/1.0，70/2.0；柱温 30oC；进样量 20 L，流速为 0.3 mL/min。QQQ 质谱参数（ESI-模式）：干燥气温度（Gas Temp）350 oC，干燥气流量（Gas Flow）4mL/min，雾化器压力（Nebulizer）40psi，鞘流气温度（Sheath Gas Temp）400 oC，鞘流气流量（Sheath Gas Flow）12mL/min，毛细管电压（Capillary）3500V，喷嘴电压（Nozzle）1800V，MRM 条件：321 152(定量，CE 10eV)；321257(定性，CE 10eV)，安捷伦 MassHunter 软件用于定性（Qualitative）和定量（Quantitative）分析。2 结果与讨论结果与讨论 图 1 为氯霉素的 MRM 和子离子谱图。本文对 MS 和 LC 条件进行优化，对线形关系（R2）、检测限（LOQ）、峰面积重复性（RSD3.0%,n=6）等方法学进行了考察。所建立的 RRLC-QQQ 能够对氯霉素进行高灵敏度和高通量的定量分析。2 图图1.1ng/mL氯霉素的MRM和子离子谱图 图图2.2pg/mL氯霉素信噪比图 图图3.20pg/mL连续6针进样氯霉素叠加谱图 20 ppt:RSD=2.38%(n=6)3 图图4.氯霉素标准曲线图（2ppt,5ppt,20ppt,100ppt,500ppt,1ppb,10ppb,and 50ppb）