薄层色谱显色剂配方.docx

TLC显色剂配比方法薄层显色剂可以分成两大类：一类是检查一般有机化合物的通用显色剂；另一类是根据化合物分类或特殊官能团设计的专属性显色剂。显色剂种类繁多，下面列举一些常用的显色剂。一通用显色剂 硫酸常用的有四种溶液：硫酸-水(1：1)溶液；硫酸-甲醇或乙醇(1：1)溶液；1.5molL硫酸溶液与0.5-1.5molL硫酸铵溶液，喷后110oC烤15min，不同有机化合物显不同颜色。0.5碘的氯仿溶液 对很多化合物显黄棕色。中性0.05高锰酸钾溶液 易还原性化合物在淡红背景上显黄色。碱性高锰酸钾试剂 还原性化合物在淡红色背景上显黄色。溶液I：1高锰酸钾溶液；溶液：5碳酸钠溶液；溶液I和溶液等量混合应用。 酸性高锰酸钾试剂 喷1.6高锰酸钾浓硫酸溶液(溶解时注意防止爆炸)，喷后薄层于180oC加热1520min。酸性重铬酸钾试剂 喷5重铬酸钾浓硫酸溶液，必要时150oC烤薄层。 5磷钼酸乙醇溶液 喷后120oC烘烤，还原性化合物显蓝色，再用氨气薰，则背景变为无色。铁氰化钾-三氯化铁试剂 还原性物质显蓝色，再喷2molL盐酸溶液，则蓝色加深。溶液I：1铁氰化钾溶液；溶液：2三氯化铁溶液；临用前将溶液I和溶液等量混合。二专属性显色剂由于化合物种类繁多，因此专属性显色剂也是很多的，现将在各类化合物中最常用的显色剂列举如下：(1)烃类 硝酸银过氧化氢检出物：卤代烃类。溶液：硝酸银O.1g溶于水lml，加2-苯氧基乙醇lOOml，用丙酮稀释至200ml，再加30过氧化氢1滴。方法：喷后置未过滤的紫外光下照射； 结果：斑点呈暗黑色。荧光素溴检出物：不饱和烃。溶液：I荧光素0.1g溶于乙醇lOOml；5溴的四氯化碳溶液。方法：先喷(I)，然后置含溴蒸气容器内，荧光素转变为四溴荧光素(曙红)，荧光消失，不饱和烃斑点由于溴的加成，阻止生成曙红而保留荧光，多数不饱和烃在粉红色背景上呈黄色。四氯邻苯二甲酸酐检出物：芳香烃。溶液：2四氯邻苯二甲酸酐的丙酮与氯代苯(10：1)的溶液。方法：喷后置紫外光下观察。甲醛硫酸检出物：多环芳烃。溶液：37甲醛溶液O.2ml溶于浓硫酸l0ml。(2)醇类3，5一二硝基苯酰氯检出物：醇类。溶液：I2本品甲苯溶液；0.5氢氧化钠溶液；O.002罗丹明溶液。方法：先喷(I)，在空气中干燥过夜，用蒸气薰2min，将纸或薄层通过试液()30s，喷水洗，趁湿通过()15s，空气干燥，紫外灯下观察。硝酸铈铵检出物：醇类。溶液：I1硝酸铈铵的0.2molL硝酸溶液；N,N-二甲基-对苯二胺盐酸盐1.5g溶于甲醇、水与乙酸(128m1+25m1+15m1)混合液中，用前将(I)与()等量混合。喷板后于105oC加热5min。 香草醛硫酸 检出物：高级醇、酚、甾类及精油。溶液：香草醛1g溶于硫酸lOOml。方法：喷后于120oC加热至呈色最深。二苯基苦基偕肼 检出物：醇类、萜烯、羰基、酯与醚类。溶液：本品15mg溶于氯仿25ml中。方法：喷后于110oC加热5lOmin。结果：紫色背景呈黄色斑点。(3)醛酮类品红亚硫酸检出物：醛基化合物。溶液：I0.01%品红溶液，通入二氧化硫直至无色；0.05molL氯化汞溶液；O.05molL硫酸溶液。方法：将I、以1：1：10混合，用水稀释至l00ml。邻联茴香胺 检出物：醛类、酮类。溶液：本品乙酸饱和溶液。2，4-二硝基苯肼检出物：醛基、酮基及酮糖。溶液：I0.4本品的2molL盐酸溶液； 本品O.1g溶于乙醇l00ml中，加浓盐酸lml。方法：喷溶液I或后，立即喷铁氰化钾的2molL盐酸溶液。结果：饱和酮立即呈蓝色；饱和醛反应慢，呈橄榄绿色；不饱和羰基化合物不显色。绕丹宁检出物：类胡萝卜素醛类。溶液：I1%5%绕丹宁乙醇溶液；25%氢氧化铵或27%氢氧化钠溶液。方法：先喷溶液I，再喷溶液，干燥。(4)有机酸类溴甲酚绿检出物：有机酸类。 溶液：溴甲酚绿0.1g溶于乙醇500ml和0.1mol/L氢氧化钠溶液5ml。方法：浸板。结果：蓝色背景产生黄色斑点。高锰酸钾硫酸检出物：脂肪酸衍生物。溶液：见通用显色剂酸性高锰酸钾。过氧化氢检出物：芳香酸。溶液：0.3%过氧化氢溶液。方法：喷后置紫外光(365nm)下观察。结果：呈强蓝色荧光。2，6-二氯苯酚-靛酚钠检出物：有机酸与酮酸。溶液：0.1%本品的乙醇溶液。方法：喷后微温。结果：蓝色背景呈红色。(5)酚类Emerson 试剂(4-氨基安替比林铁氰化钾()检出物：酚类、芳香胺类及挥发油。溶液：I4-氨基安替比林1g溶于乙醇100ml；铁氰化钾()4g溶于水50ml，用乙醇稀释至100ml。方法：先喷溶液I，在热空气中干燥5min，再喷溶液，再于热空气中干燥5min，然后将板置含有氨蒸气(25氨溶液)的密闭容器中。结果：斑点呈橙-淡红色。挥发油在亮黄色背景下呈红色斑点。Boute 反应检出物：酚类、氯、溴、烷基代酚。方法：将薄层置有NO2蒸气(含浓硝酸)的容器中310min，再用NH2蒸气(浓氨液)处理。氯醌(四氯代对苯醌)检出物：酚类。溶液：1本品的甲苯溶液。DDQ(二氯二氰基苯醌)试剂检出物：酚类。溶液：2本品的甲苯溶液。TCNE (四氰基乙烯)试剂检出物：酚类、芳香碳氢化物、杂环类、芳香胺类。溶液：0.5%1%本品的甲苯溶液。Gibbs(2，6-二溴苯醌氯亚胺)试剂检出物：酚类。溶液：2%本品的甲醇溶液。氯化铁检出物：酚类、羟酰胺酸。溶液：1%5%氯化铁的0.5molL盐酸溶液。结果：酚类呈蓝色、羟酰胺酸呈红色。(6)含氮化合物FCNP(硝普钠铁氰化物)试剂检出物：脂 肪族含氮化物，如氨基氰、胍、脲与硫脲及其衍生物，肌酸及肌酐。溶液：10氢氧化钠溶液、10硝普钠溶液、10铁氰化钾溶液与水按1：1：1：3混合，在室温至少放置20min，冰箱保存数周，用前将混合液与丙酮等体积混合。Dragendorff(碘化铋钾试剂)试剂检出物：芳香族含氮化合物，如生物碱类、抗心律不齐药物。溶液：I碱式硝酸铋0.85g溶于10ml冰醋酸及40ml水中；碘化钾8g溶于水20ml中。 将上述溶液I及等量混合，置棕色瓶中作为储备液，用前取储备液lml、冰醋酸2ml与水l0ml混合。结果：呈橘红色斑点。4-甲基伞形酮检出物：含氮杂环化合物。溶液：本品0.02g溶于乙醇35ml，加水至100ml。方法：喷板后置25氨水蒸气的容器中,取出后于紫外灯(365nm)下观察。碘铂酸钾检出物：生物碱类及有机含氮化物。溶液：10六氯铂酸溶液3ml与水97ml混合，加6碘化钾溶液，混匀。临用前配制。硫酸高铈铵硫酸检出物：生物碱及含碘有机化物。溶液：硫酸铈1g混悬于4ml水中，加三氯乙酸1g，煮沸，逐滴加入浓硫酸直至混浊消失。方法：喷后薄层于1l0oC加热数分钟。结果：阿朴吗啡、马钱子碱、秋水仙碱、罂粟碱、毒扁豆碱与有机碘化物均能检出。Ehrlich (对二甲氨基苯甲醛盐酸)试剂检出物：吲哚衍生物及胺类。溶液：1本品的浓盐酸溶液与甲醇按1：1混合。方法：喷后板于50oC加热20min。结果：呈不同颜色的斑点。(7)胺类硝酸乙醇检出物：脂肪族胺类。溶液：50滴65硝酸于乙醇100ml中。方法：需要时120oC加热。2，6-二氯醌氯亚胺检出物：抗氧剂、酰胺(辣椒素)、伯、仲脂肪胺、仲、叔芳香胺、芳香碳氢化物、药物、苯氧基乙酸除草剂等。溶液：新鲜制备的0.52本品乙醇溶液。方法：喷后薄层于110oC加热10min，再用氨蒸气处理。茜素检出物：胺类。溶液：O.1本品的乙醇溶液。丁二酮单肟氯化镍检出物：胺类。溶液：I丁二酮单肟1.2g溶于热水35ml中，加氯化镍095g，冷却后加浓氨水2ml；盐酸羟胺0.12g溶于200ml水中。方法：将溶液I及混合，放置1天，过滤。Pauly (对氨基苯磺酸)试剂检出物：酚类、胺类和能偶合的杂环化合物。溶液：磺酸45g溶于温热的12molL盐酸45ml中，用水稀释至500ml，取lOml于冰中冷却，加45亚硝酸钠冷溶液lOml，于OoC放置15min。用前加等体积10碳酸钠溶液。硫氰酸钴()检出物：生物碱、伯、仲、叔胺类。溶液：硫氰酸铵3g与氯化钴1g溶于水20ml。结果：白色至粉红色背景上呈蓝色斑点，2h后颜色消退。若将薄层喷水或放入饱和水蒸气容器内，可重现色点。1，2-萘醌-4-磺酸钠检出物：芳香胺类。溶液：本品0.5g溶于95ml水，加乙酸5ml，滤去不溶物即得。方法：喷后反应30min显色。葡萄糖磷酸检出物：芳香胺类。溶液：葡萄糖2g溶于85磷酸l0ml与水40ml混合液中，再加乙醇与正丁醇各30ml。方法：喷后于115加热l0min。(8)硝基及亚硝基化合物-萘胺检出物：3，5一二硝基苯甲酸酯、二硝基苯甲酰胺。溶液：IO5-萘胺乙醇溶液；10氢氧化钾甲醇溶液。方法：先喷溶液I，再喷溶液。结果：呈红褐色斑点。二苯胺氯化钯检出物：亚硝胺类。溶液：1.5二苯胺乙醇溶液与0.1g氯化钯的0.2氯化钠溶液lOOml，按5：1混合。方法: 喷后置紫外光(254nm)下观察。结果：显紫色斑点。(9)氨基酸及肽类茚三酮检出物：氨基酸、胺与氨基糖类。溶液：本品O.2g溶于乙醇l00ml中。方法：喷后于110oC加热。结果：呈红紫色斑点。茚三酮乙酸镉检出物：氨基酸及杂环胺类。溶液：茚三酮1g及乙酸镉2.5g溶于l0ml冰醋酸中，用乙醇稀释至500ml。方法：喷后于120oC加热20min。1，2-萘醌-4-磺酸钠检出物：氨基酸。溶液：临用前将本品O.02g溶于5%碳酸钠l00ml中。方法：喷后室温干燥。结果：不同氨基酸呈不同色点。靛红乙酸锌检出物：氨基酸与某些肽类。溶液：靛红1g与乙酸锌1g溶于95异丙醇l00ml中，加热至80oC，冷却后加乙酸1ml，冰箱保存。方法：喷后于8085C加热30min。 茚三酮冰醋酸检出物：二肽及三肽。 溶液：1茚三酮吡啶溶液与冰醋酸按5：1混合。方法：喷后于l00oC加热5min。香草醛检出物：氨基酸及胺类。溶液：I本品1g溶于丙醇50ml中;1molL氢氧化钾溶液lml，用乙醇稀释至lOOml。方法：先喷溶液I后于110oC干燥l0min，再喷溶液，于110oC再干燥l0min，于紫外光(365nm)下观察。(10)甾类香草醛硫酸检出物：甾体激素。溶液：1香草醛浓硫酸溶液。方法：喷后于105加热5min。氯化锰检出物：雌激素类。溶液：氯化锰0.2g溶于含硫酸2ml的甲醇60ml中。方法：喷后置紫外光(365nm)下观察。高氯酸检出物：甾体激素。溶液：5高氯酸甲醇溶液。方法：喷后于110oC加热5min，置紫外光(365nm)下观察。三氯化锑乙酸 检出物：甾类与二萜类。溶液：三氯化锑20g溶于乙酸20ml与氯仿60ml混合液中。方法：喷后于100oC加热5min，紫外光长波下观察。结果：二萜类斑点呈红黄-蓝紫色。对甲苯磺酸检出物：甾族化合物、黄酮类与儿茶酸类。溶液：20本品的氯仿溶液。方法：喷后于100oC加热数分钟，紫外光长波下观察。结果：斑点呈荧光。氯磺酸乙酸检出物：三萜、甾醇与甾族化合物。溶液：氯磺酸5ml在冷却下加乙酸l0ml溶解。方法：喷后于130oC加热5l0min，置紫外光长波下观察。结果；斑点显荧光。(11)糖类茴香胺、邻苯二酸试剂检出物：碳氢化合物。溶液：1.23g茴香胺及1.66g邻苯二酸于l00ml 95乙醇中的溶液。方法：喷雾或浸渍。结果：己糖呈绿色、甲基戊糖呈黄绿色、戊糖呈紫色、糖醛酸呈棕色。四乙酸铅2，7一二氯荧光素检出物：甙类、酚类、糖酸类溶液：I2四乙酸铅的冰醋酸溶液；12，7一二氯荧光素乙醇溶液。 取溶液I、 各5ml混匀，用干燥的苯或甲苯稀释至200ml，试剂溶液只能稳定2h。方法：浸板。邻氨基联苯磷酸检出物：糖类。溶液：O.3g邻氨基联苯加85磷酸5ml与乙醇95ml。方法：喷板后llOoC加热1520min。结果：斑点呈褐色。苯胺二苯胺磷酸检出物：还原糖。溶液：4g二苯胺、4ml苯胺与20ml 85磷酸共溶于200ml丙酮中。方法：喷后于85加热l0min。结果：产生各种颜色。1，4-己醛糖、低聚糖呈蓝色。双甲酮磷酸检出物：酮糖。溶液：双甲酮(5，5-二甲基环己烷-1，3-二酮)10.3g溶于90ml乙醇与l0ml 85磷酸中。方法：喷板后于110oC加热1520min。结果：日光下观察，白色背景上呈黄色斑点，紫外光长波下呈蓝色荧光。联苯胺三氯乙酸检出物：糖类。溶液：0.5g联苯胺溶于l0ml乙酸，再加10ml40三氯乙酸水溶液，用乙醇稀释至l00ml。方法：喷后置紫外光下照射15min。结果：斑点呈灰棕-红褐色。对二甲氨基苯甲醛乙酰丙酮检出物：氨基糖类。溶液：I. 5ml 50氢氧化钾溶液与20ml乙醇混匀，取此溶液0.5ml，加乙酰丙酮0.5ml与正丁醇50ml的混合液l0ml，此两种溶液均需新鲜配制，临用前混合；. 1g对二甲氨基苯甲醛溶于30ml乙醇中，再加30ml浓盐酸，需要时此溶液可用正丁醇180ml稀释。 方法：先喷I后于105oC加热5min，再喷，然后于90干燥5min。结果：斑点呈红色。(12)杀虫剂甲基黄检出物：氯化杀虫剂及抗菌化合物。溶液：O.1g甲基黄于70ml乙醇中，加25ml水并用乙醇稀释至l00ml。方法：喷板后于室温干燥，并在无滤光片紫外光下照射5min。结果：黄色背景上呈红色斑点。溴四氯化碳 检出物：有机磷杀虫剂。溶液：10溴的四氯化碳溶液。方法：薰溴蒸气。锰水杨醛检出物：有机硫代磷杀虫剂。溶液：I100mg氯化锰溶于100ml 80乙醇；溶解1.3g 2-肼喹啉于小量热乙醇中，溶1g水杨醛于5ml乙醇并加12滴冰醋酸，合并两溶液并回流30min，冷却后析出水杨-2-醛-2-喹啉腙沉淀，并用乙醇重结晶。用50mg此衍生物溶于100ml乙醇中。方法：等量溶液I及混合后，喷板。二苯胺氯化锌检出物：氯化杀虫剂(DDT、CPCA、氯-DDT、克菌丹、甲氧氯、毒杀芬)。溶液：二苯胺及氯化锌各0.5g溶于100ml丙酮中。方法：喷后200oC加热5min。溴荧光素硝酸银检出物：杀虫剂。溶液；I5溴的四氯化碳溶液；1ml 0.25荧光素的二甲基甲酰胺溶液，用乙醇稀释至50ml；1.7g硝酸银溶于5ml水中，加2-苯氧基乙醇，用丙酮稀释至200ml。方法：展开后的薄层置试液I容器中薰30s，取出先喷溶液，再喷溶液，再置紫外光下7min。(13)黄酮类 乙醇胺二苯硼酸盐检出物：黄酮类。溶液：I. 1乙醇胺二苯硼酸盐的甲醇溶液；. 5聚乙二醇的乙醇溶液。方法：先喷溶液I，再喷溶液使荧光稳定，再在紫外光长波下照射2min。结果：紫外灯下观察荧光。三氯化锑检出物：黄酮类。溶液：10三氯化锑的氯仿溶液。方法：喷板。结果：紫外光长波下呈荧光。三氯化铝 检出物：黄酮类。溶液：1三氯化铝乙醇溶液。方法：喷板。结果：紫外光长波下显黄色荧光。Benedict(硫酸铜枸橼酸钠)试剂检出物：含邻二羟基的黄酮类及香豆精类。溶液：1.73g 硫酸铜(CuS045H20)：17.3g 枸橼酸钠及10g 无水碳酸钠溶于水并稀释至1 00ml。方法：喷板。结果：紫外光长波下观察，含邻二羟基的化合物，斑点荧光减弱或猝灭。 (14)含硫化合物硝普钠检出物：巯基-SH基(半胱氨酸)、双硫化物、-s-s-基(胱氨酸)及精氨酸。溶液：I. 1.5g 硝普钠溶于5ml 2molL盐酸溶液及95ml甲醇中，加10ml 25氢氧化铵溶液，过滤，即得；. 2g氰化钠溶于5ml水，用甲醇稀释至100ml。方法：先喷溶液I、再喷溶液。结果：巯基化合物呈红色；精氨酸由橙变为灰蓝色；双硫化物在黄色背景上显红色。FCNP(硝普钠铁氰化物)试剂检出物：脂肪族含硫化台物，如氨基氰、硫脲及其衍生物。溶液：10氢氧化钠溶液、10硝普钠溶液，10铁氰化钾溶液与水按1：1：1：3混合，用前与等体积丙酮混合，用时新鲜配制。3氯化铁磺基水杨酸检出物：硫代磷酸酯类。溶液：I1氯化铁的80乙醇溶液；1磺基水杨酸的80乙醇溶液，方法：薄层先置溴蒸气中10min后，喷溶液I，干燥15min，再喷溶液。结果：紫色背景上呈白色。 叠氮化碘检出物：含硫氨基酸、硫化物与青霉素。溶液：叠氮碘溶液-叠氮钠3g 溶乎100ml 0.05molL碘溶液中(新鲜配制，固体叠氮碘有爆炸性)。靛红硫酸检出物：噻吩衍生物。溶液；0.4g靛红溶于100ml浓硫酸中。方法：喷板后120oC加热。结果：呈不同颜色。(15)类脂化合物磷钼酸检出物：胆酸、类脂化物、脂肪酸及甾类。溶液：250mg 磷钼酸于50ml乙醇中。方法：唆后予120oC加热。罗丹明6G检出物；类脂化物。溶液：lg 罗丹明6G溶于100ml丙酮中方法：喷后置紫外光长波下观察。溴百里酚蓝检出物：类脂化物。溶液：O04g溴百里酚蓝溶于100ml O01molL氢氧化钠溶液中。(16)阳离子 双硫腙检出物：金属离子。溶液：20mg双硫腙溶于100ml丙酮中，置棕色瓶中于冰箱内保存。方法：上述溶液喷板后再喷25氢氧化铵溶液。红氨酸 (二硫代草酰胺)检出物：重金属离子。溶液：0.5红氨酸乙醇溶液。方法：先喷上述溶液，稍干后置薄层于氨蒸气中。茜素检出物：众多阳离子、稀土及铀。溶液：茜素乙醇饱和溶液。方法：喷板后直接放入氨蒸气中。亚铁氰化钾检出物：Fe3+、Cu2+、Cl、Mo、V、W离子。溶液：新配制的2亚铁氰化钾溶液。二苯卡巴肼检出物：Ag+、pb2+、Hg2+、Cu2+、Sn2+、Mn2+、Zn2+、Ni2+、Co2+及Ca2+离子。溶液：I12二苯卡巴肼乙醇溶液；25氢氧化铵溶液。方法：先喷溶液I，再喷溶液。结果：Ni2+呈蓝色、Co2+呈橙褐色、Zn2+呈红紫色，Ag+、pb2+、Cu2+、Sn2+、Mn2+呈褐色、乙酸汞加成物于80oC加热片刻，斑点呈蓝色。(17)阴离子硝酸银检出物：含硫阴离子、砷酸盐、亚砷酸盐磷酸盐、亚磷酸盐及除氟外的卤素。 溶液：0.10.5molL硝酸银溶液中加氨水直至沉淀溶解。临用前配制、储存会形成易爆物质。方法：喷后于110120oC加热l0min，必要时置紫外光下l0min。硝酸银氢氧化铵荧光素检出物：卤素离子。溶液：I1g硝酸银溶于l00ml O.5molL氢氧化铵溶液中； 1g荧光索溶于l00ml乙醇中。方法：先喷溶液I，稍干，再喷溶液。钼酸铵亚硫酸钠检出物：硫化物、硫代硫酸盐与磷酸盐。 溶液：I5钼酸铵的lmolL硫酸溶液； 5亚硫酸钠溶液。方法：先喷溶液I，再喷溶液，于105加热30min。结果：硫化物及硫代硫酸盐呈深蓝色，磷酸盐呈蓝灰色。番木鳖碱检出物：溴酸盐、硝酸盐、氯酸盐。溶液：I0.02番木鳖碱的lmolL硫酸溶液； 2molL氢氧化钠溶液。方法：先喷溶液I，再喷溶液。结果：溴酸盐、氯酸盐呈血红色，硝酸盐呈橙黄色。