中华猕猴桃果仁非饱和脂肪酸...胶原蛋白合成抗大鼠肺纤维化_刘理静.pdf

论论著著文文章章编编号号：（）中中华华猕猕猴猴桃桃果果仁仁非非饱饱和和脂脂肪肪酸酸通通过过下下调调 抑抑制制胶胶原原蛋蛋白白合合成成抗抗大大鼠鼠肺肺纤纤维维化化刘刘理理静静，贺贺立立洋洋，魏魏文文婕婕，周周美美玲玲，贺贺彬彬，贺贺兼兼斌斌（长长沙沙民民政政职职业业技技术术学学院院医医学学院院，湖湖南南 长长沙沙 ；湖湖南南医医药药学学院院护护理理学学院院，湖湖南南 怀怀化化 ；怀怀化化市市第第一一人人民民医医院院呼呼吸吸与与危危重重症症医医学学科科，湖湖南南 怀怀化化 ）收收稿稿日日期期：；接接受受日日期期：基基金金项项目目：湖湖南南省省自自然然科科学学基基金金资资助助项项目目（）；怀怀化化市市科科技技计计划划资资助助项项目目（）；湖湖南南省省卫卫生生与与健健康康委委员员会会资资助助科科研研项项目目（）作作者者简简介介：刘刘理理静静（），男男，湖湖南南溆溆浦浦人人，副副主主任任医医师师，医医学学硕硕士士 ：；：通通讯讯作作者者，贺贺兼兼斌斌，：摘摘 要要 目目的的 观观察察结结缔缔组组织织生生长长因因子子（）及及胶胶原原蛋蛋白白合合成成在在果果王王素素（中中华华猕猕猴猴桃桃果果仁仁非非饱饱和和脂脂肪肪酸酸）抗抗大大鼠鼠肺肺纤纤维维化化（）中中的的作作用用。方方法法 雄雄性性 大大鼠鼠，随随机机分分为为对对照照组组、模模型型组组、（、）果果王王素素处处理理组组和和 醋醋酸酸泼泼尼尼松松组组，每每组组 只只。对对照照组组大大鼠鼠以以 氯氯化化钠钠溶溶液液气气管管内内注注射射，后后 组组大大鼠鼠则则气气管管内内注注射射博博莱莱霉霉素素 构构建建 模模型型，建建模模后后次次日日，后后 组组大大鼠鼠分分别别以以（、）果果王王素素和和 醋醋酸酸泼泼尼尼松松灌灌胃胃，而而前前 组组予予 氯氯化化钠钠溶溶液液灌灌胃胃，均均每每天天 次次。处处理理后后第第 天天，处处死死大大鼠鼠取取肺肺组组织织，和和 染染色色评评价价 病病变变程程度度，测测定定羟羟脯脯氨氨酸酸（）含含量量，实实时时荧荧光光定定量量 检检测测 、平平滑滑肌肌肌肌动动蛋蛋白白（）表表达达，法法测测定定 、型型胶胶原原蛋蛋白白（）、的的蛋蛋白白水水平平，免免疫疫组组织织化化学学染染色色分分析析 表表达达情情况况。结结果果 与与模模型型组组相相比比，（、）果果王王素素处处理理组组和和 醋醋酸酸泼泼尼尼松松组组肺肺泡泡炎炎及及 程程度度显显著著减减轻轻，肺肺组组织织 含含量量减减少少，、与与蛋蛋白白表表达达下下调调，、蛋蛋白白水水平平降降低低。上上述述指指标标的的改改变变在在（、）果果王王素素处处理理组组之之间间有有剂剂量量依依赖赖性性。此此外外，（、）果果王王素素处处理理组组上上述述指指标标较较 醋醋酸酸泼泼尼尼松松组组升升高高，而而 果果王王素素处处理理组组与与后后者者相相比比差差异异不不明明显显。结结论论 果果王王素素下下调调肺肺组组织织 表表达达，降降低低 水水平平，进进而而减减少少 、合合成成，发发挥挥抗抗 作作用用。关关键键词词 果果王王素素（中中华华猕猕猴猴桃桃果果仁仁非非饱饱和和脂脂肪肪酸酸）；结结缔缔组组织织生生长长因因子子；肺肺纤纤维维化化；平平滑滑肌肌肌肌动动蛋蛋白白（）；型型胶胶原原蛋蛋白白（）；型型胶胶原原蛋蛋白白（）中中图图分分类类号号 ，文文献献标标志志码码 （），；，；，：（）（）（），（，），（）（）细胞与分子免疫学杂志（），（）DOI:10.13423/ki.cjcmi.009479 ，（），（，），（，），（）；（）；（）；（）肺肺纤纤维维化化（，）是是以以过过量量的的胶胶原原蛋蛋白白如如 型型胶胶原原蛋蛋白白（，）和和 积积蓄蓄于于肺肺间间质质内内为为特特征征的的一一种种致致命命性性肺肺疾疾病病，起起病病后后病病情情迅迅速速进进展展，患患者者最最终终因因肺肺功功能能损损毁毁死死于于呼呼吸吸衰衰竭竭 ，至至今今缺缺乏乏针针对对性性的的治治疗疗手手段段。随随着着现现代代医医学学研研究究深深入入，以以 驱驱动动基基因因为为切切入入点点探探索索分分子子靶靶向向治治疗疗新新药药为为 治治疗疗带带来来了了新新途途径径。结结缔缔组组织织生生长长因因子子（，）为为一一种种分分泌泌性性蛋蛋白白，可可诱诱导导细细胞胞外外基基质质（，）大大量量合合成成，是是组组织织重重塑塑和和纤纤维维化化形形成成的的中中心心介介质质，作作为为促促纤纤维维化化因因子子在在 进进程程中中发发挥挥关关键键调调节节作作用用 。因因此此，积积极极寻寻找找调调控控 过过量量分分泌泌的的靶靶向向治治疗疗新新药药对对于于改改善善 预预后后具具有有重重要要价价值值。果果王王素素（）是是从从猕猕猴猴桃桃的的果果仁仁中中经经临临界界 萃萃取取 法法 提提 取取 的的 非非 饱饱 和和 脂脂 肪肪 酸酸，亚亚 麻麻 酸酸（，）为为其其主主要要药药效效成成分分，又又称称为为中中华华猕猕猴猴桃桃果果仁仁油油非非饱饱和和脂脂肪肪酸酸（），具具有有抑抑制制炎炎症症、保保护护细细胞胞活活性性、抗抗氧氧化化应应激激和和抗抗癌癌等等药药理理活活性性 。本本课课题题组组前前期期工工作作发发现现，果果王王素素可可通通过过增增强强大大鼠鼠抗抗氧氧化化损损伤伤能能力力而而抑抑制制 。然然而而，果果王王素素抗抗 作作用用机机制制仍仍不不完完全全明明了了，是是否否通通过过调调控控 表表达达抑抑制制胶胶原原蛋蛋白白合合成成而而起起作作用用，尚尚未未见见报报道道。故故本本研研究究通通过过观观察察不不同同剂剂量量果果王王素素处处理理对对博博莱莱霉霉素素诱诱导导的的 大大鼠鼠肺肺组组织织病病变变、羟羟脯脯氨氨酸酸（，）含含量量及及 、平平滑滑肌肌肌肌动动蛋蛋白白（，）、和和 表表达达的的影影响响，进进一一步步阐阐明明果果王王素素抗抗 的的相相关关分分子子机机制制，旨旨在在为为其其应应用用于于防防治治 提提供供新新的的药药理理学学依依据据。材材料料和和方方法法 材材料料雄雄性性健健康康 周周龄龄 大大鼠鼠 只只，体体质质量量（），来来自自南南华华大大学学实实验验动动物物部部（许许可可证证号号：湘湘 ）。果果王王素素（中中华华猕猕猴猴桃桃果果仁仁非非饱饱和和脂脂肪肪酸酸含含量量 ）呈呈黄黄色色油油性性液液体体，购购自自湘湘西西老老爹爹生生物物有有限限公公司司；博博莱莱霉霉素素 购购自自天天津津太太河河制制药药有有限限公公司司；醋醋酸酸泼泼尼尼松松片片购购自自山山东东鲁鲁抗抗医医药药集集团团有有限限公公司司；兔兔抗抗大大鼠鼠 抗抗体体、兔兔抗抗大大鼠鼠 抗抗体体、兔兔抗抗大大鼠鼠 抗抗体体、兔兔抗抗大大鼠鼠 抗抗体体、兔兔抗抗大大鼠鼠 肌肌动动蛋蛋白白（）多多克克隆隆抗抗体体购购自自 公公司司；二二辛辛可可宁宁酸酸（，）法法蛋蛋白白质质定定量量试试剂剂盒盒、辣辣根根过过氧氧化化物物酶酶（，）标标记记的的山山羊羊抗抗兔兔 和和逆逆转转录录试试剂剂盒盒购购自自 公公司司；二二 氨氨 基基 联联 苯苯 胺胺（，）显显色色剂剂购购自自福福建建迈迈新新生生物物技技术术公公司司；检检测测试试剂剂盒盒购购自自南南京京建建成成生生物物工工程程研研究究所所。方方法法 模模型型的的制制备备和和分分组组处处理理 将将雄雄性性 大大鼠鼠 只只，随随机机分分为为对对照照组组、模模型型组组、果果王王素素处处理理组组、果果王王素素处处理理组组、果果王王素素处处理理组组和和 醋醋酸酸泼泼尼尼松松组组（参参照照相相关关文文献献和和前前期期工工作作确确定定药药物物处处理理剂剂量量 ），各各组组 只只。依依据据文文献献报报道道的的方方法法 建建模模，即即先先用用 的的 戊戊巴巴比比妥妥钠钠经经腹腹腔腔注注射射，待待大大鼠鼠完完全全麻麻醉醉后后，将将颈颈正正中中切切开开使使气气管管充充分分暴暴露露，再再向向后后 组组大大鼠鼠气气管管内内注注入入溶溶解解了了 博博莱莱霉霉素素 的的 氯氯化化钠钠溶溶液液 ，构构建建 模模型型。而而对对照照组组则则用用 氯氯化化钠钠溶溶液液替替代代博博莱莱霉霉素素 。建建模模后后，次次日日即即开开始始药药物物处处理理，果果王王素素处处理理组组分分别别予予（、）果果王王素素（用用 氯氯化化钠钠溶溶液液稀稀释释，总总体体积积 ）灌灌细胞与分子免疫学杂志（），（）胃胃，醋醋酸酸泼泼尼尼松松组组予予以以 醋醋酸酸泼泼尼尼松松（溶溶解解于于 氯氯化化钠钠溶溶液液，总总体体积积 ）灌灌胃胃，而而前前 组组则则用用 氯氯化化钠钠溶溶液液 灌灌胃胃，每每天天均均 次次。全全部部大大鼠鼠于于用用药药后后第第 天天处处死死，剖剖胸胸并并截截取取左左肺肺组组织织，立立即即放放入入液液氮氮中中冻冻存存，用用于于 含含量量和和 、表表达达检检测测。然然后后用用 中中性性甲甲醛醛溶溶液液通通过过主主支支气气管管向向右右肺肺内内注注入入，充充分分展展开开胸胸膜膜后后，迅迅速速固固定定于于 中中性性甲甲醛醛溶溶液液中中 以以上上，用用于于肺肺组组织织病病理理学学检检查查。染染色色和和 染染色色观观察察肺肺组组织织病病变变情情况况将将石石蜡蜡包包埋埋后后的的右右肺肺组组织织行行 厚厚切切片片，再再常常规规 染染色色和和 染染色色，在在光光镜镜下下使使用用 图图像像分分析析软软件件评评价价肺肺组组织织肺肺泡泡炎炎症症（染染色色）和和 病病变变程程度度（染染色色），评评分分方方法法依依据据文文献献 ：无无肺肺泡泡炎炎和和 ，计计 分分；肺肺泡泡炎炎与与 的的面面积积未未超超出出 ，计计 分分；肺肺泡泡炎炎与与 的的面面积积超超出出 ，但但未未超超出出 ，计计 分分；肺肺泡泡炎炎与与 的的面面积积超超出出 ，计计 分分。采采用用试试剂剂盒盒检检测测肺肺组组织织 含含量量 用用无无菌菌眼眼科科剪剪充充分分剪剪碎碎左左肺肺组组织织，然然后后以以碱碱水水解解液液进进行行匀匀浆浆，离离心心并并提提取取上上清清液液，利利用用检检测测试试剂剂盒盒提提供供的的方方法法，对对上上清清液液中中 含含量量进进行行测测定定。实实时时荧荧光光定定量量 检检测测肺肺组组织织 、水水平平 取取适适量量左左肺肺组组织织，利利用用 试试剂剂提提取取样样本本中中总总 ，再再将将 按按照照逆逆转转录录试试剂剂盒盒说说明明书书的的操操作作步步骤骤反反转转录录为为 ，进进行行 扩扩增增。上上游游引引物物为为 ，下下 游游 引引 物物 为为 ；上上 游游 引引 物物 为为 ，下下游游引引物物为为 ；上上游游引引物物为为 ，下下游游引引物物为为 。反反应应体体系系为为：、上上游游引引物物（）、下下游游引引物物（）、，总总体体积积 。反反应应程程序序：预预变变性性 ，（变变性性 ，退退火火 ，延延伸伸 ）个个循循环环。在在实实时时荧荧光光定定量量 仪仪上上，使使用用 操操作作方方法法行行 反反应应。通通过过 法法，以以 为为内内参参照照定定量量 、表表达达量量。法法检检测测肺肺组组织织 、和和 蛋蛋白白水水平平 制制备备 ，取取适适量量左左肺肺组组织织，用用 裂裂解解液液提提取取样样本本中中蛋蛋白白质质；法法定定量量并并统统一一上上样样量量，凝凝胶胶电电泳泳 ，转转 膜膜。脱脱脂脂牛牛奶奶室室温温下下封封闭闭，分分别别滴滴加加兔兔抗抗大大鼠鼠 抗抗体体（）、兔兔抗抗大大鼠鼠 抗抗体体（）、兔兔抗抗大大鼠鼠 抗抗体体（）、兔兔抗抗大大鼠鼠 抗抗 体体（）和和 兔兔 抗抗 大大 鼠鼠 抗抗 体体（），孵孵育育过过夜夜；洗洗涤涤后后，加加入入 标标记记的的山山羊羊抗抗兔兔 （），反反应应 ；再再次次冲冲洗洗 膜膜，化化学学发发光光法法显显影影并并于于暗暗室室曝曝光光，通通过过凝凝胶胶图图像像分分析析系系统统（软软件件）对对所所得得胶胶片片进进行行扫扫描描后后，得得出出 、蛋蛋白白相相对对表表达达量量。免免疫疫组组织织化化学学染染色色法法检检测测肺肺组组织织 蛋蛋白白表表达达 依依据据链链霉霉亲亲和和素素 过过氧氧化化物物酶酶（，）试试剂剂盒盒提提供供的的方方法法，对对肺肺组组织织切切片片进进行行检检测测。将将切切片片进进行行脱脱蜡蜡及及水水化化后后，放放入入 的的枸枸橼橼酸酸缓缓冲冲液液中中煮煮沸沸修修复复 ，滴滴加加 过过氧氧化化氢氢室室温温下下处处理理 ，冲冲洗洗切切片片，再再用用正正常常山山羊羊血血清清室室温温封封闭闭 ，然然后后滴滴加加兔兔抗抗大大鼠鼠 多多克克隆隆抗抗体体（），冰冰箱箱孵孵育育过过夜夜；洗洗涤涤后后，加加生生物物素素标标记记的的山山羊羊抗抗兔兔 （），室室温温下下反反应应 ；再再次次冲冲洗洗切切片片后后，加加入入过过氧氧化化物物酶酶标标记记的的链链霉霉亲亲和和素素工工作作液液室室温温下下孵孵育育 ，洗洗涤涤后后，显显色色，苏苏木木精精复复染染，常常规规脱脱水水、透透明明，最最后后封封片片。其其中中以以 替替代代一一抗抗作作为为阴阴性性对对照照。参参照照 等等 的的方方法法，在在光光镜镜下下利利用用 图图像像分分析析软软件件测测定定 蛋蛋白白表表达达，判判定定阳阳性性表表达达的的标标准准为为胞胞质质及及胞胞膜膜中中呈呈现现清清晰晰的的棕棕黄黄色色颗颗粒粒，再再计计算算其其平平均均吸吸光光度度（）值值，阳阳性性表表达达量量与与 值值呈呈正正相相关关。统统计计学学分分析析 实实验验数数据据以以 表表示示，在在 软软件件上上行行数数据据分分析析，使使用用单单因因素素方方差差分分析析或或 检检验验比比较较多多组组间间均均数数，为为差差异异有有统统计计学学意意义义。结结果果 果果王王素素降降低低 大大鼠鼠肺肺组组织织病病变变及及 含含量量药药物物处处理理后后第第 天天，所所有有大大鼠鼠无无死死亡亡。染染色色可可见见对对照照组组肺肺组组织织无无肺肺泡泡炎炎（图图 ），而而模模型型组组肺肺泡泡结结构构大大多多数数已已被被破破坏坏，内内见见炎炎性性细细胞胞多多量量浸浸润润和和成成纤纤维维细细胞胞大大量量增增殖殖，肺肺泡泡间间隔隔明明显显变变宽宽增增厚厚（图图 ）；染染 色色 显显 示示 对对 照照 组组 无无 病病 变变（图图 ），但但模模型型组组出出现现广广泛泛 ，肺肺间间质质内内见见大大量量聚聚积积的的致致密密蓝蓝色色胶胶原原（图图 ）；（、）果果王王 期 刘理静，等 中华猕猴桃果仁非饱和脂肪酸通过下调 抑制胶原蛋白合成抗大鼠肺纤维化素素处处理理组组及及 醋醋酸酸泼泼尼尼松松组组 病病理理改改变变较较模模型型组组明明显显减减轻轻，尤尤以以 果果王王素素处处理理组组和和 醋醋酸酸泼泼尼尼松松组组最最显显著著（图图 、）。肺肺泡泡炎炎与与 评评分分及及 定定量量分分析析显显示示（表表），各各剂剂量量果果王王素素处处理理组组和和醋醋酸酸泼泼尼尼松松组组的的评评分分及及 含含量量均均显显著著低低于于模模型型组组（），并并且且，（、）果果王王素素处处理理组组之之间间上上述述指指标标比比较较均均有有显显著著差差异异（）。此此外外，（、）果果王王素素处处理理组组上上述述指指标标相相比比 醋醋酸酸泼泼尼尼松松组组增增高高（），但但后后者者相相比比 果果王王素素处处理理组组无无差差异异（）。：大大鼠鼠肺肺组组织织形形态态变变化化（染染色色，）；：大大鼠鼠肺肺组组织织胶胶原原沉沉积积（染染色色，）：对对照照组组；：模模型型组组；：果果王王素素处处理理组组；：果果王王素素处处理理组组；：果果王王素素处处理理组组；：醋醋酸酸泼泼尼尼松松组组 图图 大大鼠鼠肺肺组组织织形形态态和和胶胶原原沉沉积积情情况况表表 肺肺泡泡炎炎和和 评评分分及及 含含量量比比较较（，）组组别别肺肺泡泡炎炎（分分）肺肺纤纤维维化化（分分）（）对对照照组组 模模型型组组 果果王王素素处处理理组组 果果王王素素处处理理组组 果果王王素素处处理理组组 醋醋酸酸泼泼尼尼松松组组 对对照照组组；模模型型组组；果果王王素素处处理理组组；果果王王素素处处理理组组 果果王王素素降降低低 大大鼠鼠肺肺组组织织 表表达达相相比比对对照照组组，模模型型组组肺肺组组织织 和和蛋蛋白白表表达达水水平平明明显显升升高高（），但但与与模模型型组组比比较较，各各剂剂量量果果王王素素处处理理组组和和醋醋酸酸泼泼尼尼松松组组 和和蛋蛋 白白 水水 平平 降降 低低（）。并并 且且（、）果果王王素素处处理理组组之之间间 和和蛋蛋白白水水平平 相相 比比 均均 有有 差差 异异（）。此此 外外，（、）果果王王素素处处理理组组 和和蛋蛋白白水水平平高高于于 醋醋酸酸泼泼尼尼松松组组（），而而 果果王王素素处处理理组组相相较较后后者者却却无无差差别别（，图图）。：实实时时定定量量 检检测测肺肺组组织织 表表达达；：法法检检测测肺肺组组织织 蛋蛋白白表表达达；：肺肺组组织织 蛋蛋白白水水平平的的半半定定量量分分析析 ：对对照照组组；：模模型型组组；：果果王王素素处处理理组组；：果果王王素素处处理理组组；：果果王王素素处处理理组组；：醋醋酸酸泼泼尼尼松松组组 ；图图 果果王王素素对对 大大鼠鼠肺肺组组织织 和和蛋蛋白白表表达达的的影影响响 果果王王素素抑抑制制 大大鼠鼠肺肺组组织织 和和 表表达达 结结果果所所示示，相相比比于于对对照照组组，模模型型组组 、蛋蛋白白表表达达显显著著增增高高（），经经各各剂剂量量果果王王素素和和醋醋酸酸泼泼尼尼松松治治疗疗后后，肺肺组组织织 、表表达达显显著著低低于于模模型型组组（，图图 ），同同时时，（、）果果王王素素处处理理组组之之间间上上述述指指标标相相比比均均有有明明显显差差异异（）。然然而而，（、）果果王王素素处处理理组组 和和 表表达达较较 醋醋酸酸泼泼尼尼松松细胞与分子免疫学杂志（），（）组组增增加加（），但但后后者者与与 果果王王素素处处理理组组比比较较差差异异无无显显著著性性（，图图 ）。：法法检检测测肺肺组组织织 、蛋蛋白白表表达达；：肺肺组组织织 、蛋蛋白白水水平平的的半半定定量量分分析析 ：对对照照组组；：模模型型组组；：果果王王素素处处理理组组；：果果王王素素处处理理组组；：果果王王素素处处理理组组；：醋醋酸酸泼泼尼尼松松组组 ；图图 果果王王素素对对 大大鼠鼠肺肺组组织织 和和 表表达达的的影影响响 果果王王素素下下调调 大大鼠鼠肺肺组组织织 和和蛋蛋白白水水平平实实时时荧荧光光定定量量 和和 法法检检测测结结果果发发现现（图图 ），模模型型组组肺肺组组织织 和和蛋蛋白白水水平平较较对对照照组组显显著著上上调调（），予予以以不不同同剂剂量量果果王王素素及及醋醋酸酸泼泼尼尼松松处处理理后后，肺肺组组织织 和和蛋蛋白白水水平平较较模模型型组组明明显显下下调调（）。同同时时，（、）果果王王素素处处理理组组之之间间 和和蛋蛋白白水水平平相相比比均均有有显显著著差差异异（）。并并且且（、）果果王王素素处处理理组组 和和蛋蛋白白水水平平比比 醋醋酸酸泼泼尼尼松松组组上上升升（），但但 果果 王王 素素 处处 理理 组组 与与 后后 者者 比比 较较 无无 差差 异异（）。免免疫疫组组织织化化学学染染色色和和定定量量分分析析显显示示（图图 、），呈呈棕棕黄黄色色的的 阳阳性性颗颗粒粒在在对对照照组组肺肺组组织织中中表表达达较较少少，以以细细胞胞质质及及胞胞膜膜为为甚甚，平平均均吸吸光光度度值值较较低低。而而模模型型组组可可见见大大量量棕棕黄黄色色阳阳性性细细胞胞，呈呈高高表表达达，平平均均吸吸光光度度值值显显著著高高于于对对照照组组，经经各各剂剂量量果果王王素素及及醋醋酸酸泼泼尼尼松松处处理理后后，肺肺组组织织内内 阳阳性性细细胞胞表表达达及及平平均均吸吸光光度度值值显显著著降降低低（），并并且且（、）果果王王素素处处理理组组之之间间上上述述指指标标比比较较，差差异异 均均 有有 统统 计计 学学 意意 义义（）。而而（、）果果王王素素处处理理组组上上述述指指标标相相比比，醋醋酸酸泼泼尼尼松松组组升升高高，但但 果果王王素素处处理理组组较较后后者者无无明明显显变变化化，差差异异无无统统计计学学意意义义（），呈呈现现出出与与 法法相相同同的的趋趋势势。：实实时时定定量量 检检测测肺肺组组织织 表表达达；：法法检检测测肺肺组组织织 蛋蛋白白表表达达；：肺肺组组织织 蛋蛋白白水水平平的的半半定定量量分分析析；：肺肺组组织织 表表达达（免免疫疫组组织织化化学学染染色色，）；：肺肺组组织织 表表达达量量的的半半定定量量分分析析 ：对对照照组组；：模模型型组组；：果果王王素素处处理理组组；：果果王王素素处处理理组组；：果果王王素素处处理理组组；：醋醋酸酸泼泼尼尼松松组组 ；图图 果果王王素素对对 大大鼠鼠肺肺组组织织 和和蛋蛋白白表表达达的的影影响响 期 刘理静，等 中华猕猴桃果仁非饱和脂肪酸通过下调 抑制胶原蛋白合成抗大鼠肺纤维化 讨讨论论 是是各各种种急急、慢慢性性肺肺间间质质疾疾病病的的共共同同转转归归，发发病病机机制制迄迄今今不不清清楚楚，该该病病诊诊断断后后生生存存期期短短，致致死死率率高高，预预后后极极差差，是是公公认认为为比比癌癌症症更更凶凶险险的的一一种种“类类肿肿瘤瘤疾疾病病”，临临床床上上除除肺肺移移植植外外，尚尚无无有有效效治治疗疗药药物物。近近年年来来，随随着着祖祖国国传传统统医医学学不不断断发发展展，新新技技术术广广泛泛应应用用，从从中中药药和和植植物物里里提提取取有有效效的的生生物物活活性性成成分分已已成成为为治治疗疗 的的新新措措施施。研研究究表表明明，人人参参总总皂皂甙甙、靛靛玉玉红红等等中中药药与与植植物物的的提提取取物物能能抗抗 。果果王王素素作作为为从从中中华华猕猕猴猴桃桃果果仁仁中中提提取取的的果果仁仁油油，主主要要药药理理活活性性成成分分是是非非饱饱和和脂脂肪肪酸酸即即 ，其其已已被被证证实实具具有有抗抗脏脏器器纤纤维维化化的的作作用用 。课课题题组组前前期期研研究究报报道道，果果王王素素能能抑抑制制 的的进进展展 。本本研研究究结结果果显显示示，模模型型组组大大鼠鼠发发生生严严重重的的 ，肺肺组组织织 （为为胶胶原原蛋蛋白白特特有有，常常用用作作评评价价胶胶原原蛋蛋白白含含量量的的重重要要指指标标 ）含含量量增增高高，而而不不同同剂剂量量果果王王素素和和醋醋酸酸泼泼尼尼松松处处理理明明显显降降低低大大鼠鼠肺肺泡泡炎炎和和 程程度度及及评评分分，减减少少 含含量量，并并且且，（、）果果王王素素处处理理组组间间上上述述指指标标相相比比差差异异均均显显著著，尤尤以以 果果王王素素的的疗疗效效最最强强，且且与与 醋醋酸酸泼泼尼尼松松的的效效果果相相当当，说说明明果果王王素素对对 大大鼠鼠具具有有良良好好的的治治疗疗效效果果，并并与与剂剂量量呈呈正正相相关关。和和 是是由由成成纤纤维维细细胞胞（，）以以及及转转型型后后的的肌肌纤纤维维母母细细胞胞（，）合合成成与与分分泌泌，二二者者为为 的的主主要要构构成成成成分分。当当各各种种致致病病因因素素作作用用于于肺肺组组织织时时，生生成成的的级级联联反反应应被被启启动动，肺肺 被被激激活活后后大大量量增增殖殖并并转转型型为为 （后后者者分分化化标标志志为为 高高表表达达，它它分分泌泌 的的能能力力比比肺肺 高高 倍倍），导导致致 、合合成成增增加加，引引起起肺肺组组织织中中 不不 断断 蓄蓄 积积，造造 成成 肺肺 实实 质质 广广 泛泛 重重 塑塑，触触 发发 。研研究究报报道道，异异黄黄酮酮、野野黄黄芩芩素素和和姜姜黄黄素素通通过过下下调调肺肺组组织织 表表达达，减减少少 、生生成成而而抗抗大大小小鼠鼠 。本本研研究究发发现现，果果王王素素治治疗疗能能明明显显降降低低 大大鼠鼠肺肺组组织织 水水平平，下下调调 、表表达达，并并具具有有剂剂量量依依耐耐性性，即即果果王王素素治治疗疗剂剂量量越越高高，下下降降越越显显著著。提提示示果果王王素素抗抗 的的作作用用机机制制与与抑抑制制 生生成成，下下调调 表表达达，减减少少 、合合成成，降降低低肺肺组组织织 沉沉积积有有关关。形形成成与与促促纤纤维维化化因因子子异异常常表表达达所所致致的的 代代谢谢失失衡衡关关系系密密切切。是是一一种种含含 个个氨氨基基酸酸的的富富含含半半胱胱氨氨酸酸的的分分泌泌性性蛋蛋白白，广广泛泛表表达达于于肺肺脏脏、心心脏脏、肾肾脏脏等等组组织织脏脏器器中中，经经 、上上皮皮细细胞胞等等合合成成分分泌泌后后，调调控控细细胞胞增增殖殖、转转分分化化和和迁迁移移，刺刺激激 生生成成，从从而而参参与与调调控控组组织织纤纤维维化化、肿肿瘤瘤生生长长、创创伤伤愈愈合合等等多多种种病病理理过过程程 。研研究究证证实实，高高表表达达能能促促进进肺肺 增增殖殖、分分化化与与积积聚聚，可可通通过过上上皮皮细细胞胞 间间充充质质转转化化过过程程诱诱导导 向向 转转型型，进进而而合合成成分分泌泌过过量量的的 、等等 成成分分，并并抑抑制制其其分分解解，致致使使肺肺组组织织持持续续损损伤伤修修复复，诱诱发发 。等等 报报道道，川川芎芎嗪嗪通通过过下下调调肺肺组组织织中中 表表达达，降降低低 、和和 水水平平而而减减轻轻大大鼠鼠 。为为了了证证实实果果王王素素抑抑制制 生生成成是是否否与与调调控控 有有关关，本本研研究究检检测测了了肺肺组组织织 和和蛋蛋白白表表达达，结结果果发发现现，果果王王素素呈呈剂剂量量依依耐耐性性下下调调 大大鼠鼠肺肺组组织织 和和蛋蛋白白水水平平，其其中中 果果王王素素的的效效果果最最强强。此此外外，免免疫疫组组织织化化学学法法检检测测结结果果也也显显示示，果果王王素素处处理理能能显显著著降降低低肺肺组组织织 阳阳性性蛋蛋白白表表达达，且且处处理理剂剂量量越越大大，下下调调越越强强，与与 法法检检测测结结果果相相一一致致。表表明明下下调调 表表达达可可能能是是果果王王素素抑抑制制肺肺组组织织中中 、合合成成的的重重要要机机制制。综综上上所所述述，果果王王素素可可呈呈剂剂量量依依耐耐性性下下调调 表表达达，降降低低 水水平平，使使肺肺组组织织 、合合成成减减少少，从从而而发发挥挥抗抗大大鼠鼠 作作用用。这这为为果果王王素素临临床床应应用用于于防防治治 这这种种难难治治性性疾疾病病奠奠定定了了一一定定的的基基础础。参参考考文文献献：，（）：，（）：，（）：，（）：，：，（）：，：刘刘理理静静，周周美美玲玲，陈陈智智魁魁，等等 中中华华猕猕猴猴桃桃果果仁仁油油非非饱饱和和脂脂肪肪酸酸（果果王王素素）上上调调含含 结结构构域域蛋蛋白白（）抑抑制制肺肺腺腺癌癌小小鼠鼠移移植植瘤瘤生生长长和和转转移移 细细胞胞与与分分子子免免疫疫学学杂杂志志，（）：细胞与分子免疫学杂志（），（），（），（）：刘刘理理静静，钱钱红红，尹尹辉辉明明，等等 中中华华猕猕猴猴桃桃果果仁仁非非饱饱和和脂脂肪肪酸酸通通过过激激活活 信信号号通通路路增增强强肺肺纤纤维维化化大大鼠鼠抗抗氧氧化化能能力力 细细胞胞与与分分子子免免疫疫学学杂杂志志，（）：，（）：，（）：，（）：，（），（）：，：，：，（）：，（）：，（）：，：，（）：，：，：，（）：，：，（），：，：，：汪汪沙沙，段段华华，黄黄俊俊花花，等等 结结缔缔组组织织生生长长因因子子与与器器官官纤纤维维化化的的研研究究进进展展 医医学学综综述述，（）：，（）：，（）：期 刘理静，等 中华猕猴桃果仁非饱和脂肪酸通过下调 抑制胶原蛋白合成抗大鼠肺纤维化