HPLC法检测乳品中对羟基苯甲酸酯类和纳他霉素.pdf

9 2013,Vol.36 No.3 乳业科学与技术 分析检测HPLC法检测乳品中对羟基苯甲酸酯类和纳他霉素万 鹏，赵 贞，李翠枝*，邵建波，王云霞，刘春霞(内蒙古伊利实业集团股份有限公司，内蒙古 呼和浩特 010010)摘 要：建立了乳制品中的对羟基苯甲酸酯类和纳他霉素的高效液相色谱分析方法。样品用甲醇提取后，使用C18反相色谱柱分离，以甲醇-醋酸水溶液为流动相，紫外检测器检测，检测波长256nm和305nm条件下5种防腐剂在35min之内完全分离。在一定条件下各组分的相关系数均大于0.9990，线形范围1100mg/kg，回收率为83.7%103%。关键词：液相色谱法；对羟基苯甲酸酯类；纳他霉素；乳制品Determination of Parabens and Natamycin in Dairy Products by HPLCWAN Peng，ZHAO Zhen，LI Cui-zhi*，SHAO Jian-bo，WANG Yun-xia，LIU Chun-xia(Inner Mongolia Yili Industrial Group Co.Ltd.,Hohhot 010010,China)Abstract：A method for determining parabens and natamycin in dairy products by HPLC is described.Samples were extracted with methanol and separated on a C18 column with methanol-acetic acid solution as mobile phase.UV detection was performed at 256 nm and 305 nm.Complete separation of pimaricin and four parabens,methyl 4-hydroxybenzoate,ethyl 4-hydroxybenzoate,propyl 4-hydroxybenzoate and butyl 4-hydroxybenzoate was achieved within 35 min.Under optimized conditions,the linear ranges for the food antiseptics was 1100 mg/kg with a correlation coefficient greater than 0.9990,and their average recovery rates from blank real samples spiked at three different levels was between 83.7%and 103%.This method was simple,rapid and accurate.Key words：HPLC；parabens；natamycin；dairy product中图分类号：TS252.7 文献标志码：A 文章编号：1671-5187(2013)03-0009-03收稿日期：2013-03-25作者简介：万鹏(1982)，男，工程师，硕士研究生，研究方向为乳制品检验。E-mail：*通信作者：李翠枝(1969)，女，高级工程师，硕士，研究方向为乳制品品质安全监控、产品研发。E-mail：对羟基苯甲酸酯类又称尼泊金酯，是世界上用量较大的防腐剂，广泛用于食品、药品和化妆品等方面1-8。纳他霉素是一种抗菌剂，97年我国卫生部正式批准纳他霉素作为食品防腐剂，主要应用于乳制品、肉制品、发酵酒、饮料果汁，方便食品等的生产和保藏9-18。我国对于以上防腐剂在乳制品中的添加限量有严格规定，因此本实验拟建立一种方法同时测定对羟基苯甲酸酯类和纳他霉素5种防腐剂。1 材料与方法1.1 材料与试剂甲醇、冰乙酸均为色谱纯；纳他霉素、对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯和丁酯标准品 美国Sigma公司。纳他霉素标准贮备液：准确称取0.01g纳他霉素标准品，用甲醇溶解并定容至100mL，质量浓度为100g/mL，冷冻保存。对羟基苯甲酸酯类标准贮备液：分别准确称取0.05g对羟基苯甲酸甲酯、乙酯、丙酯和丁酯，用无水乙醇溶解并定容至50mL，质量浓度为1mg/mL，冷冻保存。三氯乙酸溶液：称取三氯乙酸10g，加水溶解后定容至1000mL容量瓶。1.2 仪器与设备1260液相色谱仪(带紫外检测器)美国Agilent 公司；FX-1200GD分析天平 北京中西远大科技有限公司；M305652超声波仪 上海雅鸿自控设备有限公司。1.3 方法1.3.1 测定条件测定波长：256nm条件012min，305nm条件1216min，256nm条件1635min；色谱柱为Welch AQ-C18(250mm4.6mm，5m)；流速1.0mL/min；流动相为：A：800mL水50mL冰乙酸，B甲醇，A:B为 45:55，V/V。分析检测 Journal of Dairy Science and Technology 2013,Vol.36 No.3 10 1.3.2 样品处理液态奶样品：称取约10g(精确至0.1mg)样品于50mL容量瓶中，加入25mL甲醇振荡摇匀后用水定容，超声提取10min，混匀，静置10min，滤纸过滤后经0.45m滤膜过滤，上机测定。奶粉样品：称取约5g样品于50mL容量瓶中，用15mL 4050水溶解，加入8mL三氯乙酸和20mL甲醇振荡摇匀后用水定容，超声提取10min，混匀，静置10min，滤纸过滤后经0.45m滤膜过滤，上机测定。酸奶、冷饮样品：称取约10g样品于50mL容量瓶中，加入8mL三氯乙酸和20mL甲醇振荡摇匀后用水定容，超声提取10min，混匀，静置10min，滤纸过滤，0.45m滤膜过滤，上机测定。1.3.3 含量计算公式mC?VX=式中：X为试样中对羟基苯甲酸酯类或纳他霉素的含量/(g/g)；C为由标准曲线得到样品溶液中对羟基苯甲酸酯类或纳他霉素的含量/(g/mL)；V为样品溶液定容体积/mL；m为称取样品的质量/g。2 结果与分析2.1 标准曲线及谱图纳他霉素、对羟基苯甲酸酯类标准工作液：将标准储备液分别用甲醇和水依次稀释成0.5、1.0、2.0、5.0、10.0g/mL的系列标准溶液，溶液经0.45m滤膜过滤，上机测定。5种防腐剂标准曲线和线性关系见表1，由表1中可以看出5种防腐剂浓度和峰面积之间呈线性关系，相关系数均大于0.9990。表 1 5种防腐剂线性关系Table 1 Linear equations of pimaricin and four parabens名称线性回归方程相关系数对羟基苯甲酸甲酯y=60.37x9.330.9990对羟基苯甲酸乙酯y=63.85x7.560.9990纳他霉素y=60.44x6.990.9991对羟基苯甲酸丙酯y=57.44x6.880.9990对羟基苯甲酸丁酯y=52.58x5.960.99904.3957.13810.59417.79514.81432.246?51015202530354001020304050607080?/minmAU图 1 5种防腐剂标准溶液HPLC色谱图Fig.1 HPLC chromatogram of mixed standard solution of pimaricin and four parabens由图1可以看出5种防腐剂完全分离，保留时间分别为7.138、10.594、14.814、17.795、32.246min；图2表明5种防腐剂无杂质峰干扰，可准确定量检测。10.57614.88217.76132.2227.127?5101520253035400246810?/minmAU图 2 牛奶样品中5种防腐剂的HPLC色谱图Fig.2 HPLC chromatogram of milk sample2.2 回收率和精密度实验在液态奶、酸奶和冷饮的空白样品中加入不同浓度的5种防腐剂，平行测定3次，得出回收率结果见表2。从表2可以得出，本方法测定不同乳制品中纳他霉素回收率为86%103%，相对标准偏差(RSD)为3.29%6.11%；对羟基苯甲酸甲酯回收率为83.8%101%，RSD为3.85%6.29%；对羟基苯甲酸乙酯回收率为83.7%100.8%，RSD为3.06%6.77%；对羟基苯甲酸丙酯回收率为86.0%100.2%，RSD为3.43%6.15%；对羟基苯甲酸丁酯回收率为88.3%100.7%，RSD为3.26%5.92%。5种物质均可达到分析要求。表 2 液态奶、酸奶和冷饮中羟基苯甲酸酯类和纳他霉素添加回收率结果Table 2 Average recovery rates of pimaricin and four parabens from spiked liquid milk,yogurt and ice cream目标物添加量/(mg/kg)纯牛奶红枣酸奶火炬冰淇淋回收率/%RSD/%回收率/%RSD/%回收率/%RSD/%对羟基苯甲酸甲酯187.75.8583.83.8788.74.41597.74.6196.03.8591.35.50101016.2994.74.9389.54.59对羟基苯甲酸乙酯190.54.0987.33.7283.73.27592.56.77100.83.0692.33.271097.25.9894.34.6395.24.36纳他霉素0.586.03.2989.74.0389.74.03297.74.5096.35.6194.05.4451035.9396.86.1198.24.71对羟基苯甲酸丙酯187.74.9786.04.5686.74.18597.36.1593.53.7392.84.881092.35.47963.58100.23.43对羟基苯甲酸丁酯193.84.6288.35.2891.25.63593.04.8693.54.3791.55.681099.25.3198.73.26100.75.92对纯牛奶加标样品8次平行测定(表3)，得出各防腐剂的RSD值分别为3.69%、2.14%、2.50%、3.07%和4.22%。11 2013,Vol.36 No.3 乳业科学与技术 分析检测表 3 液态奶中对羟基苯甲醇酯类和纳他霉素检测精密度结果(n=8)Table 3 Precision of the method(n=8)检测项目测定值/(mg/kg)RSD/%对羟基苯甲酸甲酯2.1152.0482.0232.0933.691.8862.0692.0161.957对羟基苯甲酸乙酯2.1582.1432.2032.0852.142.1372.1352.2172.096对羟基苯甲酸丙酯2.2752.3872.3072.2312.502.2382.2092.2642.313对羟基苯甲酸丁酯2.0121.9452.1342.0393.072.0281.9652.0342.097纳他霉素1.2411.2591.1971.1444.221.2961.2241.1571.2442.3 线性范围和检出限本方法对羟基苯甲酸酯类定量检出限为1mg/kg，线性范围1100mg/kg，纳他霉素定量检出限为0.5mg/kg，线性范围0.5100mg/kg。3 结 论在本方法的实验条件中，5种防腐剂与其他干扰杂质峰完全分离，方法准确、快速，回收率和重复性符合要求，结果可靠，适合乳制品中防腐剂的检测监控。参考文献：1 王卫华,徐锐锋,张雯迪,等.高效液相色谱法测定化妆品中对羟基苯甲酸酯类防腐剂J.中国卫生检验杂志,2010,20(12):3183-3184.2 张群林,刘毅,李俊,等.食品和药品中对羟基苯甲酸酯类防腐剂色谱分析法的研究进展J.安徽医药,2006,10(4):241-243.3 刑晓慧,张淑玲,刘庆斌,等.高效液相色谱法测定食品中的对羟基苯甲酸酯类J.中国调味品,2013,38(2):87-88.4 陈建文,厉华明,周荣荣.食品中对羟基苯甲酸酯类的应用现状与检测方法J.中国酿造,2008,185(8):4-55 潘媛,李波,祝红昆,等.超快速液相色谱测定食品中对羟基苯甲酸酯类J.食品研究与开发,2011,32(2):105-107.6 高鹤娟,朱风兰,王天竺,等.GB/T5009.312003食品中对羟基苯甲酸酯类的检测S.中华人民共和国卫生部,中国国家标准化管理委员会,2003:251-254.7 SHEN H Y,JIANG H L,MAO H L,et al.Simultaneous determination of seven phthalates and four parabens in cosmetic products using HPLC-DAD and GC-MS methodsJ.Journal of Separation Science,2007,30(1):48-54.8 MARQUEZ-SILLERO I,AGUILERA-HERRADOR E,CARDENAS S,et al.Determination of parabens in cosmetic products using multi-walled carbon nanotubes as solid phase extraction sorbent and corona-charged aerosol detection systemJ.Journal of 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