丹皮酚自微乳的制备和评价.pdf

最高均为微波提取法;洋金花 3 种提取方法提取物的 TLC 图谱一致，都检出包括阿托品和东莨菪碱在内的 4 个生物碱类斑点;采用微波提取时间最短，溶剂用量最少，提取物得率最高。因此认为微波提取对洋金花生物碱的选择性高，提高了洋金花生物碱及其成分的提取率，而且节能、高效、环保，提取技术明显优于其它两种。这种运用多指标成分进行化学等效性研究及结合其提取效率来综合评价一种新的提取技术能否取代原有技术的研究模式，为其它新技术的应用研究提供一种思路和方法。参考文献:1国家药典委员会 中华人民共和国药典:2010 年版二部S北京:中国医药科技出版社，2010:2502何丽娅，玉梅娟，李映红，等 洋金花总生物碱抗氧化作用的实验研究 J 中药药理与临床，1994，10(3):323陈金汉，刘苏玲，迟国成，等 洋金花制剂麻醉作用的动物试验J 中草药，1996，27(2):101-1024许健 东莨菪碱以及其它胆碱能拮抗剂的中枢抗毒蕈碱样能作用 J 中国药理学报，1983，4(3):156-1625彭健中 脑室注射山莨菪碱、阿托品、樟柳碱和东莨菪碱的中枢作用 J 中国药理学报，1983，4(2):81-876牛争平，刘玉玺 洋金花对电刺激大鼠皮层惊厥阈值及海马神经元形态结构的影响J 中国药物与临床，2005，5(11):846-8497朱月琴，殷放宙，张弦 洋金花总生物碱提取工艺研究J中成药，2000，22(10):788贾元印 谢鸿霞 彭广芳 洋金花生物碱最佳提取酸度研究J 中国中药杂志，1994，19(8):481-4829彭拓华，赵子凤，张少俊，等 洋金花有效成分的微波提取工艺考察 J 广州中医药大学学报，2006，23(3):265-267 10金斌，金蓉鸾，何宏贤 酸性染料比色法测定洋金花药材中总生物碱的含量 J 中国中药杂志，1995，20(11):651 11侯士果，谷学新，王书妍等 HPLC 测定洋金花中东莨菪碱和阿托品的含量J 中国中药杂志，2006，31(13):1065-1067 12黄若干，宾祖焕，梁峰，等 癣灵酊质量标准的研究J 广西医学，2007，29(11):1745-1746丹皮酚自微乳的制备和评价姜素芳，张雪萍，周学军(湖南师范大学医学院，湖南 长沙 410013)收稿日期:2011-10-19基金项目:湖南省教育厅项目(09C630)作者简介:姜素芳(1972)，女，副教授，主要从事药物新型给药系统的研究。E-mail:sufang_jiang sina com摘要:目的制备丹皮酚自微乳，并对其进行质量评价。方法选择对丹皮酚溶解能力较强的油相，通过观察微乳的形成以及绘制伪三元相图比较微乳区域大小来确定最终处方，在此基础上制备自微乳，对所成微乳的粒径大小、分布、形态进行评价，并测定所得体系中丹皮酚的溶解度以及含有量。结果以油酸乙酯(油相)EL(乳化剂)正丁醇(助乳化剂)比例为 3.0 5.6 1.4 时制得的自微乳经水稀释后可形成稳定的微乳，平均粒径为 42.1 nm，丹皮酚在此体系中的溶解度高达 318.4 mg/mL，所得制剂中丹皮酚的质量分数为 30%。结论丹皮酚自微乳制备简单，微乳粒径小，可显著提高丹皮酚的溶解度。关键词:丹皮酚;自微乳;伪三元相图中图分类号:R944文献标志码:A文章编号:1001-1528(2012)05-0835-04Preparation and evaluation of paeonol self-microemulsifying drug delivery systemJIANG Su-fang，ZHANG Xue-ping，ZHOU Xue-jun(Medical College，Hunan Normal University，Changsha 410013，China)KEY WORDS:paeonol;self-microemulsify drug delivery system;pseudo-ternary phase diagram丹皮酚(paeonol，Pae)又称牡丹酚，主要是从毛茛科芍药属植物牡丹、芍药的根皮和萝摩科植物徐长卿干燥根或全草中提取分离出来的活性成分。具有抑菌抗炎、解热镇痛、抗心律失常、改善微循环、保5382012 年 5 月第 34 卷第 5 期中 成 药Chinese Traditional Patent MedicineMay 2012Vol 34No 5护缺血组织、降压利尿、抗凝血、增强免疫功能等作用。同时还具有较强的抗癌活性，在临床上具有广阔的应用前景1-2。但是由于丹皮酚的水不溶性及其易升华的特点，对其在体内的吸收速度和程度，治疗效果以及稳定性等都造成一定影响，使其临床应用受到一定的限制3。自微乳药物传递系统(self-microemulsifying drugdelivery system，SMEDDS)是由脂溶性或水难溶性药物、油相、乳化剂和助乳化剂所组成的一种浓缩微乳，该给药系统最主要的特征就是口服后能在胃肠道的体液中借助胃肠道的蠕动而自发形成水包油型微乳，提高药物溶解度，降低表面张力，增加生物膜的穿透性从而增加水不溶性药物的口服生物利用度4-6。近年来，随着环孢素 A 自微乳的成功上市，且由于自微乳制备简单，服用方便、稳定性好、易于工业化生产等优点，使其被用于提高难溶性药物的口服生物利用度的研究倍受关注。相关文献介绍了丹皮酚环糊精包合物7、复乳8、微乳9、脂质体10 等提高丹皮酚生物利用度的方法，但尚未见其自微乳方面的报道。本研究对丹皮酚自微乳的处方进行了初步筛选，意在为开发新制剂提供一定的实验基础。1仪器与试药日本岛津 LG-9A 型高效液相色谱仪(日本岛津公 司);Zataplus-90 激 光 粒 径 测 定 仪(美 国Brookhaven 公司);H-600 透射电子显微镜(日本日立公司);SHA-C 水浴恒温振荡仪(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司);JB-3 型恒温定时磁力搅拌器(上海电磁新泾仪器有限公司)。丹皮酚(苏州宝泽堂医药公司，批号 0108090，纯度98%);油酸乙酯(上海飞祥化工厂);聚氧乙烯蓖麻油(EL，德国 BASF 公司);甲醇为色谱纯;其它均为分析纯。2方法与结果2.1丹皮酚自微乳的制备2.1.1丹皮酚在不同赋型剂中的溶解度为使制剂对药物有最大的增溶能力，必须选择对药物溶解度较大的油、乳化剂和助乳化剂。将适量过量的丹皮酚分别加入到不同的 2 mL 介质中置于带塞离心管中，将混合物在60 水浴中涡旋搅拌以利溶解，然后在25 水浴中平衡 48 h，2 500 r/min离心 10min，上清液用 0.45 m 的微孔滤膜过滤，续滤液用甲醇稀释适宜倍数后按高效液相色谱法测定丹皮酚含有量，计算丹皮酚在不同赋型剂中的溶解度。结果见表 1。结果显示丹皮酚在油酸乙酯和油酸中的溶解度要明显大于其它油相。乳化剂以聚氧乙烯蓖麻油和吐温-20 的溶解效果最好，助乳化剂则在乙醇中的溶解度最大，其次是正丁醇。表 1丹皮酚在不同辅料中的溶解度Tab 1Solubilities of paeonol in different vehicles溶剂溶解度/(mg mL1)溶剂溶解度/(mg mL1)溶剂溶解度/(mg mL1)油酸乙酯153.72聚氧乙烯蓖麻油318.56乙醇211.18大豆油78.25吐温-20306.87正丁醇183.27油酸119.23吐温-8066.29PEG-40071.88橄榄油97.16植物油78.75丙二醇74.642.1.2不同油和乳化剂的配伍以油酸乙酯、油酸、植物油、大豆油为油相，聚氧乙烯蓖麻油、吐温80、吐温 20 作为表面活性剂，油与乳化剂的质量比固定为 6 4。在37 水浴中磁力搅拌均匀，然后加入50 倍量水在50 r/min 磁力搅拌下乳化，分别考察油相与表面活性剂配伍的乳化性能。结果显示油酸乙酯作为油相与聚氧乙烯蓖麻油混合稀释后乳化效果较好，能形成均匀稳定的乳剂，大豆油与任何一种表面活性剂混合后都不能较好的乳化，其他的混合稀释后静置数分钟即分层。因此，综合考虑药物溶解度及乳化效果，选择油酸乙酯为油相，聚氧乙烯蓖麻油为乳化剂，进一步筛选最佳处方。2.1.3助乳化剂的选择在微乳的形成过程中，助乳化剂起重要作用，它不仅能促进微乳形成，增加微乳稳定性，同时也是很重要的助溶剂，能提高微乳的载药量，但若选择不当会导致药物析出。本研究选用乙醇、正丁醇、1，2-丙二醇、PEG-400 为助乳化剂，在聚氧乙烯蓖麻油中分别加入上述助乳化剂混匀，再加入油酸乙酯混匀观察是否有分层现象，再加入水相观察体系状态。结果表明，乙醇和聚氧乙烯蓖麻油混合后加入油酸乙酯即分层，加入水后一直混浊，不能形成微乳。1，2-丙二醇、PEG-400 分别与聚氧乙烯蓖麻油混合加入油酸乙酯，再加入水后，体系变得十分黏稠，体系流动性差，乳化效率低。只有正丁醇与聚氧乙烯蓖麻油和油酸乙酯混合后在较大范围内能够形成澄清透明的微乳溶液，故选用正丁醇作为助表面活性剂。2.1.4伪三元相图的绘制以油酸乙酯为油相，聚氧乙烯蓖麻油为乳化剂，正丁醇为助乳化剂，分别按乳化剂和助乳化剂比例即 Km 值1 1、2 1、4 1、6 1(w/w)，混合均匀作为混合乳化剂，再将各混合乳化剂与油相按 9 1，8 2，7 3，6 4，5 5，4 6，3 7，2 8，6382012 年 5 月第 34 卷第 5 期中 成 药Chinese Traditional Patent MedicineMay 2012Vol 34No 51 9的比例加入到三角瓶中、于37 水浴中搅拌混匀，缓慢滴加蒸馏水，记录系统状态变化情况及形成微乳时各组分的量，把相应的点绘制在伪三元相图上。以混合乳化剂、油相和水分别作为三个顶点，用Origin 8.0 软件绘制伪三元相图，结果见图 1。图 1不同 Km 值的伪三元相图Fig 1Pseudo-ternary phase diagram of different KmKm=1 1Km=21Km=41Km=61实验过程中观察到，自乳化体系滴加少量的水可形成油包水型微乳，表现为一种透明的油状液体，继续滴加水至一定量可出现白色玻璃状的凝胶态，再加水至一定比例时又澄清，凝胶态消失，体系黏度减小，流动性良好，且带有淡蓝色乳光，此时认为形成了水包油型微乳。由相图可以看出，不论何种Km 值，只有当混合乳化剂与油相的比例较大时，才能形成微乳。当 Km 值为 4 1时，形成的微乳区(图中灰色区域)面积最大，因此选择 Km=4 1，混合乳化剂与油相的比值为 7 3为最佳比值，此时形成的微乳澄清透明，并略带蓝色乳光。2.1.5含药自微乳的制备按上述处方，取 3.0 份油酸乙酯，5.6 份聚氧乙烯蓖麻油，1.4 份正丁醇，于37 水浴中温和搅拌混合均匀，加入丹皮酚搅拌使完全溶解，制备含药 30%的丹皮酚自微乳。2.2丹皮酚自微乳制剂的质量评价2.2.1外观和形态所得丹皮酚自微乳为澄清透明的液体，将其加入 50 倍量的蒸馏水稀释，取适量用 2%磷钨酸负染，于透射电镜下观察，可以看到微乳呈球形，大小较均匀，如图 2 所示。2.2.2粒径取适量丹皮酚自微乳，加入 50 倍量的蒸馏水，50 r/min 搅拌使形成微乳，用激光散射粒径仪进行测定，微乳的粒度分布见图 3。测定结果表明，丹皮酚微乳的平均粒径为 42.1 nm，如图 3。2.2.3溶解度将过量丹皮酚加入水和自微乳介质中涡旋混匀，置37 水浴振荡 48 h 后取出，2 500r/min 离心 10 min，上清液用 0.45 m 的微孔滤膜过滤，续滤液用流动相稀释适宜倍数后按高效液相色谱法测定丹皮酚含有量，测得丹皮酚在水和自微乳中的溶解度分别为 0.336 和 318.4 mg/mL。图 2丹皮酚微乳电镜照片Fig 2TEM of paeonol microemulsion图 3丹皮酚微乳的粒径分布Fig 3Particle size distribution of paeonol microemulsion2.3自微乳体系中药物含量的测定2.3.1色谱条件C-18 柱(250 mm 4.6 mm，5m);流动相为甲醇-水(6 4);体积流量 1.0 ml/min;检测波长 278 nm;柱温30。在此条件下，自微乳体系中的赋形剂对药物的测定没有干扰，且药物的峰形较好，见图 4。2.3.2标准曲线的制备精密称取丹皮酚对照品10 mg 置于 50 mL 量瓶中，加甲醇溶解后定容，摇匀，得丹皮酚储备液，精密量取贮备液 0.5，1.0，2.0，3.0，4.0 mL 置于 10 mL 量瓶中，以甲醇定容，分别进样 20 L，注入液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积 A 为纵坐标，标准液的质量浓度 C(g/mL)为横坐标，绘制标准曲线，求得回归方程为:A=7382012 年 5 月第 34 卷第 5 期中 成 药Chinese Traditional Patent MedicineMay 2012Vol 34No 5图 4空白自微乳(A)、丹皮酚自微乳(B)、丹皮酚对照品(C)HPLC 色谱图Fig 4HPLC chromatograms of blank SMEDDS(A)，paeonol SMEDDS(B)and paeonol(C)4 144.14C 7 629.1，r=0.999 8，表明峰面积与质量浓度在 10 80 g/mL 范围内线性关系良好。2.3.3进样精密度实验精密量取丹皮酚贮备液2.0 mL 于 10 mL 量瓶中，以甲醇定容，得质量浓度为 40 g/mL 的对照品溶液。连续进样 6 次，RSD为 1.28%。2.3.4自微乳中药物质量分数的测定制备 3 批丹皮酚自微乳(批号:102601，102602，102603)，分别称取适量加甲醇溶解并稀释，进样测定，由标准曲线计算质量分数，结果 3 批样品的质量分数分别为30.47%，30.15%，29.95%。2.3.5加样回收率实验取以上 3 批制剂，分别用甲醇稀释 100 倍后，各取 0.2 mL 置于 25 mL 量瓶中，分别精密加入丹皮酚贮备液 0.5，2.0，5.0 mL，甲醇定容至刻度。进样 20 L。结果 3 批样品的平均加样回收率分别为 101.71%、99.46%、98.08%，RSD 分别为 1.12%、0.80%、1.38%。3讨论在自微乳的处方筛选中，油相和乳化剂的选择至关重要。油相首先应能以较少的用量溶解处方中的药物，以确保在由此而产生的分散系统中对药物有足够的溶解度。同时应与乳化剂分子之间保持渗透和联系，容易形成界面膜，遇水后容易被乳化剂所乳化。乳化剂通常为具有较高 HLB 值的非离子表面活性剂，最佳 HLB 值在 11 15 之间11，浓度也应适中，这样形成的乳滴粒径较小。本实验选择油酸乙酯为油相，聚氧乙烯蓖麻油为乳化剂，它们对丹皮酚都有着较好的溶解能力，且乳化效果好。助表面活性剂乳化能力一般很弱或无乳化能力，但可协助表面活性剂降低界面张力，使表面活性剂在油与水界面有较多的吸附12。常用的助表面活性剂有短链醇、有机氨、烷基羧酸、单双烷基酸甘油酯等。实验中发现，正丁醇助乳化效果明显优于乙醇、丙二醇、PEG400，形成的微乳更为透明，粒径也更小。另外，处方中各辅料的比例也决定了是否能形成自微乳，综合考虑微乳的黏度、粒径以及表面活性剂用量最少的原则，结合比较伪三元相图中微乳区域的大小，最终确定空白自微乳处方中油、乳化剂、助乳化剂的比例为 3.0 5.6 1.4。考虑到在此系统中丹皮酚的溶解度高达 31.8%，故最终将药物加入量确定为略低于其溶解度 30%，所得自微乳经水稀释后能形成淡蓝色的微乳，且无药物析出。参考文献:1胡春弟，张杰 丹皮酚的药理作用及合成研究进展J 化学与生物工程，2009，26(8):16-182王晓光，康健 丹皮酚诱导肿瘤细胞凋亡的研究进展J医学综述，2008，14(19):3001-30033文宗河，李萍，王建华，等 丹皮酚-环糊精包合物的制备研究 J 中国药业，2005，14(4):51-524Constantinides P P Lipid microemlsions for improving drug dis-solution and oral absorption:physical and biopharmaceutical as-pects J Pharm Res，1995，12(11):1561-15725Lawrencem J，Rees G D Microemulsion-based media as noveldrug delivery systems J Adv Drug Deliv Rev，2000，45(1):89-1216钱一鑫，唐景玲，孙进，等 口服自乳化释药系统及其在中药制剂中的应用 J 中草药，2006，37(10):1441-14457王铮，任天池，乔淑珍 丹皮酚-环糊精包合物的研究J 中国药学杂志，1989，24(7):410-4138姜洪芳，汪国华 丹皮酚复乳型凝胶的制备J 中成药，2001，23(3):173-1759韩盈，刘继勇，李凤前，等 丹皮酚微乳的制备及经皮吸收研究 J 中国医药工业杂志，2009，40(9):671-675 10姜素芳，姚瑶，盛习锋，等 丹皮酚脂质体的制备J;湖南师范大学学报(医学版)，2006，3(3):48-51 11Khoo S M，Humberstone A J，Porter C J H，et al Formulation de-sign and bioavailability assessment of lipidic self-emulsifying for-mulations of halofantrine J Int J Pharm，1998，167(1-2):155-164 12Pouton C W Lipid formulation for oral administration of drug:non-emulsifying，self-emulsifying and self-microemulsifying drugdelivery systems J Eur J Pharm Sci，2001，11(Supp 12):S93-S988382012 年 5 月第 34 卷第 5 期中 成 药Chinese Traditional Patent MedicineMay 2012Vol 34No 5