不同抗性淀粉含量的小麦品种(系)SBEⅡa-基因启动子序列分析.pdf

Analyes of SBEa Gene Promoter from Spring Wheat Cultivars(Lines)with Different Content of Resistant StarchWANG Haolong1袁HAN Junjie1袁LI Weihua1袁LIU Wei2(1 The Key Laboratory of Oasis Eco-Agriculture of Xinjiang Bingtuan,College of Agronomy Shihezi 832003;2 Key Laboratory ofEducation Ministry of Xinjiang Endemic and Ethnic Disease,Medical College of Shihezi University,Shihezi 832002,China)Abstract:In order to explore the molecular mechanism that different spring wheat cultivars show significantly differences in RS(resistant starch,RS)content,we studied the gene expression profiles of SBEa which is a key gene controlling starch synthesisbetween cultivars and two low RS conent cultivars of spring wheat by quantitative real-time RT-PCR(qRT-PCR)technique.Special primers were designed according the sequence of AY357072.1 deposited in GenBank,and the partial sequence of SBEa gene promoter was cloned using reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)from wheat.The nucleotide sequenceswere blasted by Clustal.W software,and the regulatory elements were predicted by PLACE and PlantCARE,respectively.Theresults showed that the relative expression level of SBEa in high RS spring wheat cultivars was significantly lower than inthe low RS cultivars.The promoter of SBEa gene from ten spring wheat cultivars was 2896 bp,The sequence analysis showedthat the promoter region of SBEa genes from different spring wheat cultivars reached 99.92%similarity with AY357072.1.The results indicated that there were little allelic sites mutation,and only single-base mutation,Indel or insert in a single springwheat cultivar.As a result,the promoter of SBEa gene might not cause the different relative expression level of SBE a gene indifferent spring wheat cultivars.Key words:wheat曰resistant starch曰SBEa曰promoterDOI：10.13880/ki.65-1174/n.2015.01.012文章编号：1007-7383渊2015冤01-0060-07不同抗性淀粉含量的小麦品种(系)SBEa 基因启动子序列分析王昊龙1，韩俊杰1，李卫华1，刘伟2渊1 石河子大学农学院/新疆兵团绿洲生态农业重点实验室，石河子 832003；2 石河子大学医学院/新疆地方病与民族高发病实验室，石河子 832002冤摘要：为了从分子水平上揭示不同小麦品种（系）间抗性淀粉含量差异的原因，本试验利用 qRT-PCR 技术研究了抗性淀粉含量高和抗性淀粉含量低的小麦品种（系）淀粉合成关键基因 SBEa 表达差异。根据 Genebank 中公布的小麦 SBEa 基因启动子(AY357072.1)基因序列设计特异性引物，利用 RT-PCR 技术克隆 SBEa 基因启动子，利用Clustal.W 对测序结果比对分析，利用数据库 PLACE 和 PlantCARE 对启动子序列中各特征元件进行预测，以发掘影响 SBEa 基因表达量的重要作用元件的等位变异位点。结果显示：抗性淀粉含量高的小麦品种（系）中 SBEa 基因的表达量低于抗性淀粉含量低的品种（系）。克隆了 10 个抗性淀粉含量不同的小麦品种（系）SBEa 基因编码区上游 2896 bp 序列，10 个小麦品种（系）SBEa 基因启动子序列相似性达到了 99.92%，抗性淀粉含量高和抗性淀粉含量低的小麦品种（系）SBEa 基因启动子序列间无规律性差异。推测，SBEa 基因启动子可能不是造成 SBEa 基因表达差异的主要原因。关键词：小麦；抗性淀粉；SBEa；启动子中图分类号：S512.1文献标志码：A收稿日期：2014-12-02基金项目：国家自然科学基金项目（31160279，31260357）作者简介：王昊龙（1988-），男，硕士研究生，专业方向为作物遗传育种，e-mail：。通信作者：李卫华（1968-），女，教授，博士生导师，从事小麦品质改良和分子机理研究，e-mail：lwh_。第 33 卷第 1 期2015 年 2 月石河子大学学报院自然科学版Journal of Shihezi University院Natural ScienceVol.33No.1Feb.2015网络出版时间：2015-03-11 18:17网络出版地址：http:/ 1 期小麦籽粒中的淀粉是由直链淀粉、支链淀粉及少量的抗性淀粉组成。其中，抗性淀粉（Resistantstarch，RS）作为淀粉的一部分，由于其独特的生理功效而吸引了众多研究人员的关注。普通小麦中 RS含量约占总淀粉含量的 1.8%，高 RS 小麦中含量则可以达到 3.5%以上，而低 RS 小麦中含量不足 1.0%1。小麦籽粒中淀粉的生物合成是一个复杂的过程。AGPase（腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶）、SS（蔗糖合成酶）、SBE（淀粉分支酶）、DBE（淀粉脱分支酶）是 4 类主要影响籽粒淀粉含量及直/支链淀粉比例的关键酶。小麦籽粒中 RS 含量与其直链淀粉含量呈明显正相关2-4。淀粉分支酶 SBE（单子叶作物小麦中 SBE 可分为 SBE、SBEa 和 SBEb），可将淀粉中-1，4 糖苷键裂解，然后通过-1，6 糖苷键连接于受体链上5，从而致使籽粒中支链淀粉含量的增加，最终间接影响籽粒中抗性淀粉的含量。Regina 等6研究发现，小麦 A、B、D 基因组中 SBE基因的缺失突变体材料，只可以稍微改变支链淀粉的链长分布，而对籽粒中直/支链淀粉的比值无根本性的影响。在大麦和小麦中，Regina 等通过抑制淀粉分支酶 SBEa/SBEb 的表达，致使直链淀粉含量显著增加，同时抗性淀粉含量也相应提高7-9。本试验前期研究发现抗性淀粉含量高和抗性淀粉含量低的小麦品种（系）淀粉合成关键基因 SBEa 基因 ORF 序列无明显差异，推测其启动子序列中的差异可能会造成了 SBEa表达水平的不同，进而导致了小麦品种（系）间抗性淀粉含量的不同。高等植物中，启动子作为转录水平上重要的顺式元件影响着基因的表达和调控10。启动子是位于结构基因 5 端上游区的 DNA 序列，其区域中存在的各种特征元件，通过同 RNA 聚合酶的识别、结合、诱导、转录过程调控着下游基因的表达时间、空间和表达量。苗红梅等11通过构建小麦 SBEa 基因启动子缺失体发现，SBEa 基因启动子 5 或 3 序列的缺失会使启动子活性明显降低，一些特定序列如：-300 element 因子、G-box 以及 Prolamin box 等作为正调控因子参与其表达，但是在-1579-1210bp 片段中也存在一些负调控因子或固定序列抑制着 SBEa 基因启动子在胚乳特异表达。为揭示不同小麦品种（系）间抗性淀粉含量差异的原因，本试验对不同 RS 含量的小麦品种（系）间淀粉合成酶关键基因 SBEa 启动子进行序列多态性分析，发掘SBEa 基因启动子序列中重要的调控元件中的差异位点，进而分析其对 SBEa 基因在胚乳中表达的影响。同时，也为后期功能标记的开发及小麦抗性淀粉含量辅助选择奠定基础。1材料与方法1.1材料选取 10 份抗性淀粉含量差异较大的小麦品种（系）作为研究材料（表 1），实验材料由石河子大学麦类作物研究所提供。2013 年种植于石河子大学农学实验站，收获后对其籽粒中抗性淀粉含量进行测定。抗 性 淀 粉 含 量 测 定 试 剂 盒（ResistantStarchAssay Kit）为爱 尔兰 Megazyme 公司 产品；CobuddySuper Fidelity DNA Polymerase 为康为世纪（北京）公司产品；琼脂糖凝胶 DNA 回收试剂盒为天根生化科技（北京）有限公司产品；pEASY-blunt 克隆载体为全式金公司产品；限制性内切酶为 Thermo（北京）公司产品；RNA 提取试剂 RNAiso Plus 和 Fruit-mateTMforRNA purification、实时 荧光 定量 PCR 染料 SYBRPremix Ex Taq(Tli RNaseH Plus)及 cDNA 第一链合成试剂盒为宝生物工程(大连)(TAKARA)有限公司产品；引物合成及测序由北京六合华大基因科技股份有限公司完成。表 1供试小麦品种（系）及其 RS 含量Tab.1Different spring wheat cultivarsand the content of RS1.2方法1.2.1小麦籽粒抗性淀粉含量的测定成熟籽粒中的抗性淀粉含量采用试剂盒测定。（）0.9100。上式中，相对于空白试剂的吸光值，从吸光度值到 mg 的转换，0.9 为淀粉与葡萄糖的转换系数，为样品干重（mg）。1.2.2小麦籽粒 RNA、gDNA 的提取取灌浆 15 d 后小麦籽粒，按照总 RNAiso 试剂盒说明书提取总 RNA。经测定其浓度和用 1.2%琼脂糖凝胶电泳检测总 RNA 质量后，对质量较好的RNA 用 cDNA 第一链合成试剂盒进行反转录。对供试小麦品种（系）三叶期幼苗进行暗培养以获得黄化苗，利用 CTAB 法提取总 DNA，经浓度和质量检测后，稀释成工作液作为模板克隆 SBEa 基材料名称 育成地点 RS 含 量/%材料名称 来源 RS 含 量/%M150 墨西哥 4.10 野猫 加拿大 0.86 SD06-5 新疆 3.86 新春19号 新疆 0.63 新春 31 号 新疆 3.75 M190 墨西哥 0.60 波塔姆 埃及 2.26 M65 墨西哥 0.56 新春 12 号 新疆 1.66 阜春 1 号 新疆 0.54 王昊龙，等：不同抗性淀粉含量的小麦品种(系)SBEa 基因启动子序列分析61石河子大学学报：自然科学版第 33 卷因启动子。1.2.3实时荧光定量 PCR（Real-time quantitativePCR）检测根据 NCBI 中公布的小麦 SBEIIa（AF286319.1）和 Actin（AY423548.1）基因序列选择其保守序列，利用 Primer Premier 5.0 设计实时荧光定量 PCR 引物（表 2）。PCR 反应体系：cDNA 1 L，上游引物（10mmol/L）0.2 L，下游引物（10 mmol/L）0.2 L，SYBR Premix Ex Taq 5 L，ddH2O 3.6 L。每个样品及对应的内参反应均进行 3 次。实时荧光定量PCR 结果的计算参考 Livak12。反应程序：95 预变性 2 min；95 变性 15 s，55 退火 30 s，72 30 s，40 个循环。表 2SBEa 基因片段实时荧光定量 PCR 扩增引物Tab.2The qRT-PCR amplification primersof SBEa genes segments1.2.4SBEa 基因启动子的克隆根据 GenBank 中公布的小麦 SBEa 基因启动子(AY357072.1)基因序列，利用 Primer5.0 设计 PCR扩增引物（上游引物 5-GCAGTTTTCCTCAGCATCTT-CTTGG-3，下游引物 5-CGTAGTGATTGAGTCAGCC-AGTCGC-3）。PCR 扩增体系（20 L）:DNA 和上、下游引物（10mol/L）各 1L，Buff er4L，dNTP1.6L，CobuddySuperFidelityDNAPolymerase（2U/L）酶 0.2 L，ddH2O 11.2 L。扩增程序：98预变性 3 min;98 变性 10 s，67 退火 30 s，72 延伸 1.5 min，共 35 个循环；72 延伸 7 min。PCR 扩增产物经 1.2%的琼脂糖凝胶电泳检测后分别回收目的条带，然后分别连接到 pEASY-blunt克隆载体上，转化大肠杆菌 DH5。菌液 PCR 阳性菌落提取质粒酶切验证正确后送北京六合华大基因科技股份有限公司进行测序。1.2.5SBEa 基因启动子生物信息分析启动子区甲基化 CpG 岛预测采用 EMBOSS（http:/www.ebi.ac.uk/Tools/seqstats/);启动子区转录因子结合位 点 预 测:NeuralNetworkPromoterPrediction(http:/www.fruit fly.org/seq_tools/promoter.html);利用 CLustal.W 在线软件比对抗性淀粉含量不同的小麦品种（系）SBEa 基因启动子序列的差异。利用数据库 PLACE（http:/www.dna.affrc.go.jp/PLACE/signalscan.html）和 PlantCARE（http:/bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/plantcare/html/）对于启动子顺式元件进行预测，发掘影响 SBEa 基因表达的重要顺式元件中的等位变异位点。2结果与分析2.1高 RS 与低 RS 含量品种（系）SBEa基因相对表达量对 2 个抗性淀粉含量高和 2 个抗性淀粉含量低的小麦品种（系）SBEa 基因的相对表达量检测结果（图 1）显示，SD06-5（RS 含量 3.86）和 M150（RS含量 4.10）SBEa 基因的表达量远远低于 M190（RS含量 0.60）和新春 19 号（RS 含量 0.63）的表达量，说明 SBEa 基因的表达量与抗性淀粉的含量呈现显著的负相关。同时也说明，不同小麦品种（系）中 SBEa 基因内部序列的差异或是启动子中调控元件的差异可能导致了 SBEa 基因表达量的不同，最终致使籽粒中抗性淀粉含量的不同。品种（系）SD06-5 RS 含量 3.86；M150 RS 含量 4.10；新春 19 号 RS 含量 0.63；M190 RS 含量 0.60图 1SBEa 基因在小麦籽粒中的相对表达量Fig.1The relative expression of SBEain wheat grains2.2SBEa 基因启动子片段的克隆由图 2 可见：SBEa 基因启动子 PCR 扩增结果在琼脂糖凝胶中显示电泳条带单一，且与预期大小一致（图 2A）。切胶回收后分别与 pEASY-blunt 载体连接、转化大肠杆菌 DH5。菌液 PCR 阳性菌落用碱裂解法提取质粒，然后对质粒做酶切验证，酶切条带大小与预期条带相符（图 2B）。测序结果显示：克隆片段大小为 2896 bp，与 NCBI 中 公 布 的 小 麦 SBE a基 因 启 动 子(AY357072.1)同源性均高于 99.9%。引物名称 引物序列组成（5-3)SBEIIa 上游 GCAGAACTGCGGTCGTGT SBEIIa 下游 TCCCAGTCATGGCGCTTA Actin 上游 TGTGCTTGATTCTGGTGATGGTGTG Actin 下游 CGATTTCCCGCTCAGCAGTTGT 62第 1 期2.3SBEa 基因启动子区甲基化 CpG岛和转录因子结合位点2.3.1启动子区甲基化 CpG 岛SBEa 基因启动子区有 3 个 CpG 岛，分别位于序列的 734-961 bp 处，跨越 228、1353-1593 bp处，跨越 241 和 2519-2853 bp 处，跨越 335 bp（图3A）。3 个 CpG 岛 GC 含量分别为：52.63%、53.53%和 65.07%。在线网站 EMBOSS isochore 对 SBEa基因启动子全长 GC 含量分析（图 3B），预测结果表明，2519-2853 bp CpG 岛可能是调控 SBEa 基因表达的 1 个重要调控元件。M：DNA 标准分子量A：SBEa 启动子 PCR 扩增产物（2896 bp）B：pEASY-B-A EcoR限制性酶切图 2SBEa 基因启动子 PCR 扩增及 pEASY-B-A 质粒酶切电泳图Fig.2The PCR amplification products of promoter of SBEa and the digestion of pEASY-B-A plasmidsby agarose gel electrophoresisAB碱基对200，GC%50.0%，观察值/预测值0.6图 3SBEa 启动子序列 CpG 岛预测图谱及等容线预测Fig.3 CpG island and Isochore Predict of promoter region of SBEa表 3SBEa 转录起始位点预测Tab.3Prediction of the transcription start sites of SBEa起点 终点 评分 启动子序列 起点 终点 评分 启动子序列-2845-2795 0.96 TAAAGAAGTGTATATACGGAGTAC CATAGGCCAGCGAAATGCTTTTTTTA-1424-1374 0.82 GACGCTAAGATAACTCGGCCGGCCGG TCCCTCCCTCCGTCGTCCGCCAGT-2850-2700 0.82 TGGCATAAATATATACACAACAAAAA GGCCAAGGTGGGCGAAAACCCCTA-1114-1064 0.91 GGCCCTGCTTTACAAAAGGCTCAACCA GTCCAAAACGTCTGCTAGGATCA-1720-1680 0.84 ATGGCCCTGTTTTTAAACAGCAGCTTT TCTTGTTAACCGAAGTAATACAT-422-372 0.97 TAAATACTTATAAACGAGGGTACTAGA GGCCGCTAACGGCATGGCCAGGT M123M1234M300 bp4500 bp1200 bp500 bp6000 bp1000 bp王昊龙，等：不同抗性淀粉含量的小麦品种(系)SBEa 基因启动子序列分析2.3.2启动子区转录因子结合位点应用 Neural Network Promoter Prediction（NNPP）对 SBEa 启动子进行分析，预测结果（表 3）表明：SBEa 启动子序列中存在 6 个转录起始点，且评分均在 0.8 以上，转录起止于-2845-372 bp。但是，我们预测 SBEa 转录起始位点为 A，位于起始密码子上游-381bp 处（起始密码子 ATG 中A 计+1）。63石河子大学学报：自然科学版第 33 卷表 4序列调控元件在线预测Tab.4 Online prediction of cis-acting element of the obtained promoter sequence图 4SBEa 启动子序列中突变位点Fig.4The mutant sites of promoter region of SBEa元件名称 固定序列 位 置 功能-300CORE TGTAAAG 476（+）、1806（-）胚乳或种子特异表达-300element TGHAAARK 1337（+）、1854（+）胚乳或种子特异表达 G 盒 CAGACGTGGCA 1210（-）胚乳或种子特异表达 醇溶蛋白盒 TGCAAAG 1854（+）、237（-）胚乳或种子特异表达 GCN4-motif TGTGTCA 552（-）、1477（-）胚乳或种子特异表达 RY-element CATGCA 1082（+）、2054（+）、2124（+）、2168（+）、2184（+）、2743（+）、666（-）胚乳或种子特异表达 胚乳盒 GCAAAG 1055（-）胚乳或种子特异表达 AACA-element AACAAAC 1425（-）胚乳或种子特异表达 DPBF ACACCNNG 2310（-）、1366（-）、946（-）、788（-）、234（-）胚乳或种子特异表达 SEF4 结合位点 RTTTTTR 1190（+）、1009（-）、200（-）胚乳或种子特异表达 E 盒 CANNTG 231（-）、362（-）、409（-）、518（-）、659（-）、747（-）、831（-）、1122（-）、1636（-）、1850（-）、1964（-）、2007（-）、2122（-）、2238（-）、2445（-）、胚乳或种子特异表达（CA）n 因子 CNAACAC 2118（+）富含 AT CWWWWWW WWG(W=A/T)增强子 2.3.3SBEa 基因启动子元件分析PLACE 和 PlantCARE 软件预测结果表明：SBEa 基 因 启 动 子 序 列 中 含 有 启 动 子 基 本 元 件，TATA-box（6 个）和 CAAT-box（15 个）；此外，序列中出现了大量胚乳或种子特异表达所需的特殊调控元件（表 4），例如：-300CORE（2 个）、-300element（2个）、G 盒（1 个）、醇溶蛋白盒（2 个）、GCN4-motif（2个）、RY-element（7 个）、AACA-element（1 个）、DPBF（5 个）、SEF4 结合位点（3 个）、E 盒（16 个）和胚乳盒（1 个）等；另外，SBEa 基因启动子含有大量胁迫响应元件，如光响应因子：3-AF1、ACE、AE-box、Box-I、CATT-motif、skn-1-motif、CG-motif、GA-motif、GT1-motif、I-box、Sp1；脱落酸诱导响应因子 ABRE；赤霉素诱导响应因子 P-box；热激响应因子 CCAAT；低温响应 LTR；干旱诱导响应因子 MBS；MeJA 因子相 关 的 CGTCA-motif；GC-motif；TC-richrepeats 等；序列中多次出现的 AT-rich 序列，对特异表达也起到一定的增强作用。2.4SBEa 基因启动子序列多态性分析通过比对高 RS 和低 RS 含量的 10 个小麦品种（系）SBEa 基因启动子序列发现：其同源性达到了 99.92%。序列差异位点(图 4)只发生在某一品种（系）中的单碱基突变（5 个）、缺失（1 个）或插入（4个）。SD06-5 在 877 位点的碱基由 C 突变为 T；新春18 号在 979 位点碱基由 A 突变为 T；M150 在 1124位点发生由 G 变异为 A 的单碱基突变；野猫在 1582位点的碱基由 G 突变为 C;M190 在 2569 位点上却由 C 变异成 T；E28、新春 18 号、新春 19 号在 1321位点相比于其他品种（系）有 1 个单碱基的 T 插入；波塔姆在 1731 发生了 1 个 T 碱基缺失，同时 M190在此位点却又有 1 个 T 插入。但是，这些变异位点出现的位置均在启动子调控元件之外的序列中。因此，启动子可能不是造成 SBEa 基因差异表达的原因。64第 1 期王昊龙，等：不同抗性淀粉含量的小麦品种(系)SBEa 基因启动子序列分析3讨论SBE 是淀粉合成过程中的关键酶，尤其在支链淀粉合成过程中起到了重要作用，然而总淀粉中直/支链淀粉比例直接影响到抗性淀粉的含量。目前关于小麦 SBEa 基因的研究主要集中在启动子结构元件的功能及 SBEa 基因自身沉默情况下对支链淀粉合成的影响，而对其启动子序列、内部核苷酸序列多态性的变异是否会造成支、直链淀粉、RS 含量的差异尚未见相关报道。同时，基于 SBEa 基因序列核苷酸差异位点开发的功能标记也无成功的应用实例。因此，本试验进行了不同小麦品种（系）间SBEa 基因序列的多态性分析，旨在为进一步的功能标记的开发提供一定的理论依据。1）本研究从转录水平上检测了 SBEa 基因在抗性淀粉含量差异较大的小麦籽粒中的表达水平。结果显示，SBEa 基因在抗性淀粉含量高的小麦品种（系）中的表达量下显著低于抗性淀粉含量低的小麦品种（系）。SBEa 基因在不同小麦品种（系）的差异性表达说明，在其序列中可能存在着某些对SBEa 基因表达起关键作用的序列发生了变异，导致 SBEa 基因在胚乳中的表达量产生差异，从而影响到抗性淀粉含量的不同。本试验通过比对不同品种 SBEa 基因序列发现，在其启动子序列、ORF 序列（未发表）中均没有发现影响籽粒抗性淀粉含量的相关变异序列。因此，我们下一步工作将从基因组水平上发掘不同品种（系）SBEa 基因可能的差异位点。2）表观遗传学（epigenetics）是研究在 DNA 序列没有发生变异的情况下，基因功能发生改变，且这种改变又可随细胞的有丝分裂或减数分裂遗传下去的现象14，通常这种变异主要通过对 DNA 和组蛋白的甲基化、乙酰化、磷酸化等共价修饰以及染色体结构变化实现。高等植物中，胞嘧啶甲基化多存在于 CG 序列、CHG 和 CHH 的甲基化15（A，C 或T），拟南芥中 CG、CHG 和 CHH 的甲基化程度分别为 24、6.7和 1.716。Cao 等17发现植物 SET 家族蛋白可以使 H3K27 发生甲基化，从而抑制染色质重塑和基因的表达。张珂18分析玉米品种 B72 中伸长节间和未伸长节间组织中的 甲基化差异表明，启动子区的甲基化与基因表达负相关，启动子区甲基化升高，抑制基因表达效果明显。启动子去甲基化则基因表达增强。本试验通过对 SBEa基因启动子生物信息学分析显示，SBEa 基因启动子中存在 3 个 CpG 岛，在-52-386 bp 处的 CpG 岛GC 含量达到了 65.07%，因此，我们推测是否在某些小麦品种（系）中在 DNA 甲基化转移酶（DNMTs）的作用下使 CpG 二核苷酸 5-端的胞嘧啶转变为 5-甲基胞嘧啶，从而抑制了 SBEa 基因的表达。同时SBE a 基 因 启 动 子 序 列 中 的 GC-motif、TC-richrepeats、（CA）n 因子等调控元件是否也会发生甲基化有待下一步试验的证实。4结论本实验通过实时荧光定量 PCR 检测 SBEa 基因相对表达量显示，SBEa 基因表达量与籽粒中抗性淀粉的含量具有显著负相关。比对不同小麦品种（系）SBEa 基因启动子序列后显示，不同品种（系）的启动子序列中未发现影响 SBEa 基因表达的候选差异序列或位点。这说明 SBEa 基因启动子部位不是造成 SBEa 基因差异表达的主要原因。参考文献：1王琳，银永安，李卫华，等.抗性淀粉及其在春小麦种质资源中含量的测定J.石河子大学学报:自然科学版，2008，26（2）:190-194.WANFLin，YINYongan，WANGXuemei，etal.Resistantstarch and the determine of its content in spring wheatgermplasm resourcesJ.Journal of Shihezi University(Natu-ral Science)，2008，26(2):190-194.2庞欢，王琳，李卫华，等.小麦抗性淀粉含量的遗传分析J.遗传，2010，32（2）：170-176.PANG Huan，WANG Lin，Li Weihua.Inheritance analysis ofresistant starch content in kernels of wheat J.Hereditas，2010，32（2）：170-176.3杨光，杨波，丁霄霖，等.直链淀粉和支链淀粉对抗性淀粉形成的影响J.食品工业科技，2008，29（9）：165-167YANGGang，YANGBo，DINGXiaolin，etal.Effectsofamybse and amylopectin on formation of RSJ.Science andTechnology of Food Industry，2008，29（9）：165-1674顾振宇，樊镇棣，黄赣辉，等.直链淀粉含量检测方法与抗性淀粉增抗效应研究J.食品科学，2008，29（1）：74-77GU Zhenyu，FAN Zhendi，HUANG Ganhui，et al.Study onamylose content determination and resistant starch resista-nceboosting effectsJ.Science of Food，2008，29（1）：74-775高松洁，郭天财，吴雪峰，等.小麦淀粉合成关键酶与淀粉主要理化特性研究进展J.河南农业大学学报，2002，36(4):313-318.GAO Songjie，GUO Tiancai，WU Xuefeng，et al.Advances ofstudies on 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