黄油中(残留的)磷酸酶检测.pdf

中心以化工行业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载体，致力于搭建产研结合的桥梁。以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。科标化工分析检测中心致力于推动化工产业发展，欢迎各行同仁前来洽谈、合作。AMAM-AMAM-FSFS-AcAc-18075-18075黄油中黄油中(残留的残留的)磷酸酶磷酸酶检测检测1.1.1.1.试验过程试验过程参见 18-32C在检测和测量牛奶的磷酸酶活性中所涉及的化学原理对于所有的乳制品都是同样的，但不同的乳制品需要改进方法，因为它们的物理性质、结构和尤其是缓冲容量不同。对牛奶和其它流质制品，过程如下:步骤 1分取 1.0ml 样品放入 2 个或 3 个试管中(1 个试管作为对照或空白，最好有两个以上试管进行平行测定)(山羊奶用 3ml 样品)。步骤 2在沸水的带盖的烧杯中加热空白约 1min(整个试管温度必须在 8595)，冷却到室温。逐个同样处理空白和试样。步骤 3加 10.0mlBa 缓冲基质(b)(1)或(2)，塞紧试管，混合(pH10.00.15)。(这个基质对鲜奶，甜脱脂酸奶或干酪乳浆是很满意的。对于长时间或轻微发酸的牛奶，使用由未稀释的缓冲溶液(a)(1)制备的基质;对于巧克力饮料，用由 1/4 体积水稀释的缓冲液制备的基质;对于很酸(pH4.5)的脱脂酸奶，由 2611 缓冲液 18-128A(a)(2)制备基质;而对于山羊奶，由 2711 缓冲液 A(a)(2)制备基质。对未知样品的定量结果，调节 pH 到 l0.010.05。步骤 4加入基质后，立即在 3738水浴上培养 1h，不时地混合或摇动。步骤 5在沸水烧杯中加热约 1min(试管中物质的温度应达到 8590，在另一个同样大小和形状含有同样体积液体的试管中用温度计测定)。在冷水容器中冷却到室温。步骤 6对于鲜奶，甜脱脂酸奶或干酪乳浆飞移取 1.0mlZn 丁 Cu 蛋白质沉淀剂(C)。(对于长时间的或轻微发酸的牛奶或酸化脱脂酸奶，以 1.0m16.0%的 ZnSO47H2O 溶液代替;对巧克力饮料，甩 1.0ml 含 4.5gZnSO47H2O 和 0.1gCuSO45H2O/100ml 溶液;而对山羊奶，中心以化工行业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载体，致力于搭建产研结合的桥梁。以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。科标化工分析检测中心致力于推动化工产业发展，欢迎各行同仁前来洽谈、合作。用1.0m1含7.5gZnSO47H2O和0.1gCuSO45H2O/100ml 的溶液)充分混合(混合物的pH应为 9.09.1)。步骤 7过滤(5cm 漏斗，9cmWhatman42 号或 2 号滤纸，或相当的)并把 5.0ml 滤液收集在试管中，最好用刻度在 5.0 和 10.0ml 的试管。步骤 8加 5.0ml 发色缓冲液(a)(2)(混合物的 pH 应为 9.39.4)。步骤 9加 4 滴 BQC 溶液(d)混合，在室温发色 30min(对只检验不足的巴氏灭菌，仅加2 滴 BQC 溶液)。步骤 10用下列方法之一测定蓝色的强度:(a)用光度计读空白和试液的颜色强度(使用具有最大 T 的大约 6610nm 的滤光片)，从试样读数中减去空白的读数，参考标准曲线(9)(2)，把结果转化为酚当量。使用光度计时，一般不必用 BuOH 萃取;如果按(b)中进行 BuOH萃取，离心 5min破坏乳胶体并除去悬浮在乙醇层中的水。(Babcock 离心瓶对这个目的是适用的用如下制作专用的试管架:从适当直径的橡胶塞上切下 6mm 厚，装迸离心杯的底部，把 2 个适当直径的软木塞粘在一起，通过中心打一个适当大小的洞，以便固定试管，把一对软木塞插入杯中。)离心后，用顶部带橡皮球的移液管，除去几乎全部 BuOH。渗入光度计池中，用具有最大 T 约 650nm 滤光片读数。(b)用目视标准对于产生大于5 个颜色单位的样品，将试管中的颜色与酚标准水溶液(g)(2)的颜色比较。对于边界情况的定量结果(即试样产生 0.55颜色单位)，用 BuOH(f)萃取。加 5.0mlBuOH 并慢慢颠倒试管几次;如果必须提高乙醇层的清晰度，可按(a)中离心，与经同样处理的酚标准液(g)(2)的颜色比较。步骤 11发色中，观察到强烈的阳性试验中(即20 单位)，用 4 滴 BQC 可能不足以与所有酚结合，移取适量部分到另一管中用稀发色缓冲液(a)(3)稀释到 10.0ml，再加 2 滴的 BQC中心以化工行业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载体，致力于搭建产研结合的桥梁。以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。科标化工分析检测中心致力于推动化工产业发展，欢迎各行同仁前来洽谈、合作。溶液。对于每个试验都稀释而且同样处理空白。如果稀样品试验仍是很强的阳性，再用同样方法稀释直到最终颜色在目视标样或光度标样曲线范围之内。在最后一次加入 BQC 后，进行最后读数前，使其发色 30min。为校正稀溶液的读数，对于 5+5 稀溶液乘以 2，对于 1+9 稀溶液乘以 10，对于 2+8 稀释后又 1+9 稀释溶液乘以 50，等等。步骤 12用 1.0ml 样品加 11.0ml 试剂(总液体12.0ml，用 5.0ml 滤液)时:用读数值乘以 1.2 转变为酚当量/0.5ml 样品。(如果愿意也可以乘 2.4 将结果变为酚当量/1ml 样品)在鲜奶、巧克力饮料、脱脂酸奶和奶酪乳浆中，酚当量大于 2/0.5ml 表明消毒不够，山羊奶中酚量大于 1/1.5ml 表明消毒不足。注意:为试验浓缩的奶制品，用 H2O 重新制成原有牛奶固体含量的制品，并且用原产品规定方法进行试验。，用干净的小刀或刮刀，从紧靠表面下面取样，并如下列步骤进行测定:步骤 1在约 2.5cm 见方的蜡纸片上称 1.0g 样品(最好是双份)，并把有样品的纸放入管中。同样称另一样品放大管中作为对照或空白。步骤 2在沸水烧杯中，加热空白约 1min，到 8590(以便盖上整个管子，加热到8590)，冷却到室温。同样处理空白和试样。步骤 3加 10.0ml 按 18-32A(b)制备的缓冲基质，只是把 Na2C6H6PO4溶于 100ml未稀释的，18gBa(OH)28H2O 和 8gH3BO3/L 制成的硼酸氢氧化钡缓冲液中。塞住管子混合。步骤 4加入基质后，立即在 3738水浴中培养 1h，混合或不时摇动;步骤 5在沸水烧杯中加热近 1min到 8590(在另一个同样大小和形状，装有同样体积液体的管中，使用温度计测量)，在冷水容器中冷却到室温。步骤 6移入 1ml 6.0%ZnSO47H2O 溶液，充分混合(混合物 pH 应为 9.09.1)。步骤 7过滤(5cm 漏斗，建议使用 9cm Whatman42 号或 2 号滤纸)，最好在 5.0 和中心以化工行业技术需求和科技进步为导向，以资源整合、技术共享为基础，分析测试、技术咨询为载体，致力于搭建产研结合的桥梁。以“专心、专业、专注“为宗旨，致力于实现研究和应用的对接，从而推动化工行业的发展。科标化工分析检测中心致力于推动化工产业发展，欢迎各行同仁前来洽谈、合作。10.0ml 刻度管中收集 5.0ml 滤液。步骤 811按 18-43C称 100g 样品放入 250ml 容量瓶，加 100ml H2O 和 2mlH2SO4(1+1)混合，避免剧烈摇动。加 15ml 10%Na2WO42H2O 溶液，稀释到刻度，混匀，用快速滤纸过滤。把 150ml 滤液转到蒸馏瓶中进行蒸馏，色谱分离。进行。步骤12用1.0g黄油加11.0ml液体时，用1.1乘以读数值，将结果转变成酚当量/0.5g黄油(数值大于 2 当量/0.5g，表示巴氏灭菌不足)。