大肠杆菌非中断杂交开放实验注意事项.docx

<p><span id="_baidu_bookmark_start_0" style="display: none; line-height: 0px;">‍</span>大家好，大肠杆菌非中断最后的点菌实验这学期我们尝试改为开放实验，我总结了下以往发生的问题，希望大家能够注意下，预祝实验顺利：

1、点菌：
4人一组，有五个A板（三个涂未稀释的，两个涂十倍稀释的），正常的话上面应该长有超过200个单菌落，点菌的就是要把A板上的点（单菌落）转移到B-G板上，其中，B-G板每组两套，相当于2个人点一套B-G的平皿。
点菌的操作，是用一根牙签轻沾一下A板上的菌点，然后依次在B-G板上轻点一下。注意，牙签轻轻地在平板上碰一下就可以了，千万不要戳，要不然第二天就不易分清是长出来的菌苔还是戳的痕迹了（同时这样牙签插的深的话会造成前面的平皿菌苔大，后面的小影响判断），请大家相信菌的生长能力，手下留情。最忌的错误：A板上取了一个点，然后在比如B板上点了十几甚至二十几下。每点完一个菌，换一根牙签，牙签最后统一放在后面要回收清洗。
每人至少点50个菌（相当于一组4人总共在2套平皿上点200个以上的菌，每套平皿平均在100个菌以上）。如果本组平皿的菌落实在不给力不足200，可用别组的菌点，但是千万不要为了凑数把自己平板上的菌点重复点！当然，确实不足的话总数少一些也是可以的。

2、数菌：点菌完成之后，平板倒置放在37度培养箱里一天，第二天助教会帮助取出，同组同学一起来计数。4人中最少来2个人，这样可以减小由于人为判断造成的误差，并在看了实验结果基本合理的情况后再清掉平皿。

附注：
1、平板准备：点菌当天上午（具体时间请见网络学堂通知或课上通知）我会把B-G板准备好（具体位置我会再通知），大家每两个人取一套，注意一定不要拿乱了。另外，拿到平板之后马上在上下面做好标记（包括B-G板和你们自己的记号，在平皿盖子和底部都做标记，避免意外），因为原来的Marker笔迹极其容易被抹掉，到最后就分不清楚了。如果需要重新再拿板子，请大家务必提前联系我。点完菌之后统一放在筐里（晚七点之前完成），然后我会替大家转移到培养箱培养。

2、平板计数：平板培养一天之后，我会统一取出。周三班3号、周四班4号可来实验室准备计数（最好在当天完成，要不然平板放在常温容易长杂菌）。计数完之后请大家一定要清理用完的平板（包括之前点菌时候的A板），将琼脂挑出，然后用酒精擦掉平板上的Marker笔标记，放在水槽中。

最后，请大家这几天一定及时查看网络学堂通知，有任何情况，助教都会及时发布通知。</p>