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Trizol法提取RNA
注意：全程戴口罩，手套（PE手套，胶皮手套），离心注意放置方向。
所用所有物品全部为灭RNA酶的。
器材：
试剂：Trizol β—巯基乙醇 氯仿 75%乙醇 DEPC水 TAE Buffer 0.8%琼脂糖凝胶
1. 收集细胞：取对数期藻液 （2 ml ）(2x4x106=8x106个)，2500 r，3 min离心，弃上清。将沉淀转移至研钵中，锡纸包裹，-80 ℃过夜。
2. 将固体藻取出，研磨至细粉末状，加入1 ml Trizol，室温放置5 min。
3. 加入0.2 ml氯仿，涡旋15 sec，（剧烈震荡混匀），室温静置3 min，4 ℃，12000 rpm，15 min离心。样品分三层，取上清至干净离心管。
4. RNA 沉淀：加入0.5 ml异丙醇，上下轻轻混匀，室温放置20 min，4 ℃，12000 rpm，10 min离心。出现凝胶状沉淀
5. RNA 洗涤：弃上清，加入至少1 ml 75 %乙醇，漩涡充分，4 ℃，7500 rpm，5 min离心，弃上清，室温干燥5 min。
6. 重新溶解RNA: 加入50 ul RNase-free水，轻吹几次，溶解，测浓度。跑胶验证，无需点maker。

反转录成cDNA
1. 200 ul PCR管中配制以下体系（25 ul体系）
提取的RNA 2 ug V=2 / CRNA X1000 = ul
Oligo d(T) 0.5 ug ul
add DEPC 水to 12ul
2. 70 ℃保温5 min，立即在冰上冷却2 min。（PCR仪或金属浴）
3. 在管中添加以下试剂
上一步骤中的变性液 12 ul
5 x MLV Buffer 5 ul
dNTP 5 ul
RNA酶抑制剂 0.5 ul
RNase-M-MLV酶 0.5 ul
DEPC 水 2 ul (补充成为25 ul 体系)
共计25 ul
4. 42 ℃保温1 h（若用PCR仪，最后4 ℃延伸）。